酿酒酵母载体质粒

天净沙系列CAT#:12-198低温运输和-80℃保存酿酒酵母EBY100 Saccharomyces cerevisiae EBY100使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司北京市海淀区上地信息路26号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址：；电话：400-6765278；电邮：order@产品及特点EBY100是酿酒酵母菌株，属于真核细胞，具有氨苄和卡那霉素抗性。

质粒转化条件为电转化，应用于酵母表面展示。

此菌株必须生长在营养丰富的培养基中，例如YPD培养基，无法在minimal media中生长。

在GAL1启动子的作用下，此菌株能够表达AGA1基因。

EBY100的配套载体是pYD1载体。

此菌株的基因型如下：MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)。

规格及成分成份编号热封袋包装酿酒酵母EBY100 12-198 1 mL使用手册1份运输及保存低温运输，-80℃保存，有效期一年。

自备试剂YPD培养基、TE缓冲液（pH 7.5）、乙酸锂、DTT、山梨醇、超纯水等使用方法本手册提供一个质粒转化酵母的电转化方法，供参考。

一、感受态细胞制备1.挑一环酵母菌接种于5 mL YPD培养基中，30℃、250-300 rpm培养过夜；2.取适量的过夜培养液分别接种于两瓶50 mL YPD培养基中，30℃、250-300 rpm培养约16-18小时（OD：1.3-1.5）；3.于4℃，4000 g离心收集菌体，用25 mL冰浴的无菌水洗涤一次后，细胞用10 mL冰浴的无菌水重悬，可换成较小的离心管；4.加入1 mL的10×TE缓冲液（pH 7.5），摇晃均匀，再加入1 mL 10×乙酸锂，旋转摇匀，于30℃轻轻摇动45分钟；5.再加入0.4 mL 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于30℃轻轻摇动15分钟；6.于4℃，4000-6000 g离心，弃上清（用枪吸），再用25 mL冰浴的无菌水洗涤后4℃离心，收集菌体；7.用2.5 mL冰冷的1 mol/L山梨醇重悬细胞，离心收集菌体，弃上清（用枪吸）；8.每管用100 uL 1 mol/L的山梨醇溶解，分装于EP管中（80 uL/管），于-70℃冰箱保存。

delta位点酿酒酵母
酿酒酵母的delta位点是一种基因组重复率较高的区域，通常包含多个反向重复序列。

这些重复序列可以转录为RNA，并被逆转录酶识别和逆转录为双链DNA拷贝，插入到靶位点。

在酿酒酵母中，delta位点的高拷贝插入可以提高外源基因的表达量。

具体来说，delta位点可以被视为一种载体，用于构建多拷贝表达型整合型表达质粒。

通过将外源基因插入到delta位点高拷贝插入的细胞中，可以实现外源基因的高效表达。

这为代谢工程、合成生物学和基因治疗等领域提供了新的工具和策略。

然而，值得注意的是，酿酒酵母的delta位点也存在一些潜在的风险和限制。

例如，由于delta位点的重复序列结构，可能会导致染色体不稳定性和重组率增加。

此外，由于delta位点的插入会导致基因组扩增，可能会对细胞的生长和代谢产生负面影响。

因此，在使用酿酒酵母的delta位点进行基因表达时，需要综合考虑各种因素，并进行充分的实验验证和安全性评估。

同时，对于delta位点的应用和潜在风险，还需要进一步的研究和探索。

酿酒酵母ARS304及其侧翼序列重组质粒的构建与鉴定摘要：采用PCR扩增酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）Ⅲ号染色体ARS304序列（S1）及以ARS304为核心上下游延伸1 kb的侧翼序列（S2），并将目的片段分别构建到酵母整合载体pRS405中，获得重组质粒pRS1和pRS2。

质粒电转化试验发现重组质粒pRS2的转化率大于pRS1，说明ARS304侧翼序列能显著提高ARS304在酿酒酵母中自主复制的能力。

关键词：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）；自主复制序列（ARS）；重组质粒；复制起始活性Construction and Identification of Recombinant Plasmids of Saccharomyces cerevisiae ARS304 and Its Flank SequenceAbstract：ARS304 gene（S1）and its flank sequence（S2）of Saccharomyces cerevisiae were cloned by PCR，and then connected into the shuttle vector pRS405. Recombinant plasmids pRS1 and pRS2 were successfully constructed and used for electroporation of S. cerevisiae. Results showed that the electricity transformation rate of pRS2 was higher than that of pRS1，indicating that flank sequence could improve the autonomously replicating activity of ARS304 in S. cerevisiae.Key words：Saccharomyces cerevisiae；autonomously replicating sequence （ARS）；recombinant plasmids；replication origins activity复制起始的调控涉及细胞周期的调控、基因扩增、肿瘤发生等重大生物学问题，是真核生物基因表达调控的重要内容。

酿酒酵母转化实验报告摘要本文介绍了酿酒酵母转化实验的实验步骤和实验结果。

首先，介绍了实验所使用的材料和器材，以及实验的准备步骤，包括菌株的提取、培养基的种植和抗生素的添加等。

其次，介绍了质粒转化的步骤，包括提取质粒、构建质粒等。

最后，介绍了实验结果，包括质粒转化后酵母菌株的抗性检测和质粒转化效率的估算等。

关键词：酿酒酵母，质粒转化，抗性检测，质粒转化效率1. 实验简介酿酒酵母转化实验是一种常用的基因工程实验，它是将外源基因转入酿酒酵母中，以改变酵母的生理特性和功能的一种方法。

通过质粒转化，可以将外源基因转入酿酒酵母，从而改变酵母的生理特性和功能，为酿酒酵母的改良和研究提供了便利。

2. 实验材料和器材（1）材料：酿酒酵母菌株，质粒，抗生素，营养培养基，细胞溶解剂；（2）器材：离心机，离心管，烧杯，热水浴，烧杯架，离心瓶，烧杯支架，温度控制器，离心管支架，摇床，培养箱等。

3. 实验步骤（1）菌株提取：将酿酒酵母菌株放入营养培养基中，摇床培养24小时，然后用离心机离心提取菌液；（2）培养基种植：将菌液滴入营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（3）抗生素添加：将抗生素添加到营养培养基中，放入培养箱培养24小时；（4）质粒提取：将质粒放入烧杯中，加入细胞溶解剂，热水浴溶解，然后用离心机离心；（5）构建质粒：将质粒和菌液混合，放入烧杯中，加入CaCl2，放入热水浴37℃反应30min，然后用离心机离心；（6）质粒转化：将离心后的质粒液滴入培养基中，放入培养箱培养24小时；（7）抗性检测：将质粒转化后的酵母菌株放入营养培养基中，添加抗生素，放入培养箱培养24小时，观察菌株是否有抗性。

4. 实验结果（1）质粒转化后酵母菌株具有抗性：质粒转化后的酵母菌株在抗生素的作用下仍能够正常生长，表明质粒转化后的酵母菌株具有抗性。

（2）质粒转化效率估算：通过对质粒转化后的酵母菌株的抗性检测，估算出质粒转化的效率为85%。

5. 结论通过本实验，我们可以得出结论：酿酒酵母质粒转化实验成功，质粒转化后的酵母菌株具有抗性，质粒转化效率估算为85%。

木糖醇脱氢酶基因高拷贝表达载体构建及在酿酒酵母中的表达摘要：木质纤维素的主要组分是纤维素（20％-30％），其次是半纤维素（20％一30％）和木质素（10％-25％），其中木糖是半纤维素的主要组成部分，以木糖为底物转化乙醇的研究，是乙醇途径工程研究的热点之一。

关键词：木糖醇脱氢酶基因；酿酒酵母一、酵母表面展示系统酿酒酵母为单细胞真核微生物，细胞壁主要由甘露糖蛋白和葡聚糖组成。

细胞壁分为两层，内层由葡聚糖与少量几丁质组成，提供细胞壁的强度；外层由甘露糖蛋白组成，决定了大多数细胞的表面特性；甘露糖蛋白共价连接到内层的葡聚糖上，连接方式主要分为两种类型：一种是通过非共价键松散连接构成细胞壁，能够用SDS提取；另一种甘露糖蛋白通过葡聚糖酶消化细胞壁的葡聚糖层获得，它不能用SDS提取。

絮凝素是一种在絮凝中起重要作用的酵母细胞壁蛋白，拥有高水平糖基化而形成杆状结构，因此能够覆盖长达300nm的距离，与酵母细胞壁的厚度相当。

具有1200个氨基酸残基的重复区域，可以设计不同长度的锚定点。

包含有分泌信号、絮凝功能区，GPI锚定粘着信号和膜锚定区，其中絮凝功能区接近N 末端，能够识别并且以非共价键连接到细胞壁复合物上，如a。

甘露聚糖，引起可逆的细胞絮凝f22l。

酵母表面展示技术由于其具有转录后修饰，蛋白有效的空间折叠等优势，使其在真核生物蛋白展示和直接利用上具有独特优势。

包括乙醇发酵、新药筛选、生物吸、抗原表面展剥、蛋白质分子的相互识别、定向进化、酶的固定化等。

但是同时酵母展示系统也存在许多不利因素，如重组酵母缺少选择性标记，生长条件苛刻；如果配体对细胞有毒性作用，有可能导致酵母死亡，无法得到目的克隆。

相信随着技术的不断发展和完善，多不利因素会被克服，酵母表面展示在进一步的生物科学研究和实际应用中发挥重要作用。

二、木糖醇脱氢酶基因高拷贝表达载体构建及在酿酒酵母中的表达1.表达载体的构建。

第一，PCR反应。

成功获得目的基因和质粒之后，要进～步将目的基因构建到相关的表达载体；这需要在目的基因的两端加上相应的酶切位点，因此设计带有酶切位点的引物，进行PCR反应，其中设以水为模板的阴性对照管。

酿酒酵母质粒的提取酵母细胞的细胞壁比较厚，不容易破壁，不如大肠杆菌的质粒容易提取，最近做了些酿酒酵母的实验，从酿酒酵母中提取质粒，现在就总结下实验的方法和步骤。

一、酵母细胞质粒提取步骤：1、接种单菌落(待检测酵母细胞)于25mLYNB(补加氨基酸营养物)培养基中，30℃振荡培养过夜。

2、第二天取一滴菌液于进行显微镜下观察,目镜用16,物镜用40倍观察细胞壁破碎前的状态,其成杆状,流动性比较下。

3、取10ml的培养酵母菌液,5000g离心3min,弃上清液.加入5ml 的1倍TE悬浮。

4、将悬浮液倒入高压破壁仪的样品管中,利用高压破碎机进行破碎细胞壁,压力加到20Mpa,停留15s,降压,反复来回压3次.取出细胞液,取一滴于显微镜下观察,如果细胞呈不规则的球状时,而且其流动性比较大,说明其细胞壁已经破碎成为原生质体。

5、取2个EP管,每管加入1.5ml上述的细胞液,12000g离心5min,收集原生质体.弃取上清液,每管加入300ul10%的SDS溶液,混匀冰浴5min,进行破原生质体。

6、然后加入150ul的tris饱和酚,和150ul的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1),混匀,12000g,离心10min。

7、将水相移到另一EP管中,加入等体积的卤仿异戊醇混合液(卤仿:异戊醇=24:1), 混匀,12000g,离心10min。

8、将水相移到另一EP管中,加入1/10体积的3M KAC溶液和2倍体积的无水乙醇,放入-20℃冰箱中。

9、1h,12000g离心10min,倒出乙醇,等干燥后加入1ml的70%的无水乙醇,混匀,12000g,离心10min。

10、弃去乙醇,等室温干燥后,每管加入20ul的TE溶液(如要去处RNA酶,加入1ul的100mg/ml浓度的RNA酶),放入-20℃冰箱即可。

11、跑电泳进行检测是否从酵母菌中提出质粒了。

酿酒酵母蛋⽩表达载体是什么？
酿酒酵母基因表达载体系统是基于⼴泛使⽤的pYES2载体⽽构建的，它是⼀个可⽤于在酵母中表达重组蛋⽩，或者通过在酵母中进⾏过表达以研究基因功能的强⼤⽽有效的系统。

⽬的基因可以克隆在该载体上，通过客户选择的启动⼦来介导表达。

VectorBuilder上有⼏种可供选择的标准启动⼦，其中之⼀是来⾃酵母半乳糖激酶（GAL1）基因的强诱导型启动⼦，它是酵母重组蛋⽩表达系统中最常⽤的启动⼦。

在典型的酵母实验菌株（如INVSc1）中，GAL1启动⼦的转录活性与培养基中的碳源有⼀定的关系。

在葡萄糖存在的情况下，GAL1启动⼦的的转录受到抑制；半乳糖则会激活该启动⼦。

因此，通过简单地去除葡萄糖的培养基，并⽤含有半乳糖的培养基替代，可以实现⽬的基因的诱导表达。

或者，将棉⼦糖作为碳源。

棉⼦糖既不抑制也不诱导GAL1启动⼦的转录，即使在棉⼦糖存在情况下，加⼊半乳糖也⾜以激活GAL1启动⼦。

与使⽤葡萄糖培养基培养的细胞相⽐，半乳糖对使⽤含棉⼦糖培养基培养的细胞诱导更快。

然⽽，由于棉⼦糖⽆法抑制GAL1启动⼦，所以该⽅法会导致诱导前⽬的基因的“泄漏”表达。

通常情况下，利⽤葡萄糖维持培养的细胞经半乳糖诱导后约4⼩时可检测到重组蛋⽩的表达，⽽⽤棉⼦糖培养的细胞仅需约2⼩时即可。

建议您设置⼀个时间梯度来优化重组蛋⽩的表达。

酿酒酵母表达载体pYES2,pYES2/NT,pYES2/CT,pYES3,pYES6, pYCplac22-GFP,酵母载体pAUR123,pRS303TEF,pRS304, pRS305,pRS306,pY13TEF,pY14TEF，pY15TEF，pY16TEF,酵母基因重组表达载体pUG6, pSH47,酵母单杂载体pHISi,pLacZi,pHIS2, pGAD424, 酵母双杂交系统:酿酒酵母Y187, 酿酒酵母AH109；质粒pGADT7,pGBKT7；对照质粒pGBKT7-53，pGBKT7-lam，pGADT7-T，PCL1，酿酒酵母菌株INVSc1,YM4271, AH109,Y187,Y190,毕赤酵母表达载体pPIC9K,pPIC9K-His,pPIC3.5K,pPICZalphaA,B,C,pPICZA,B,C,pGAPZαA,pAO815,pPIC9k-His,pHIL-S1,pPink hc，配套毕赤酵母Pichiapink,毕赤酵母宿主X33，KM71，KM71H，GS115，原核表达载体pQE30,31,32,40,60,61,62,等原核表达载体,包括pET系列，pET-GST，pGEX系列（含GST标签），pMAL系列pMAL-c2x,-c4x,-c4e,-c5x,-p5x,pBAD,pBADHis,pBADmycHis系列，pQE系列,pTrc99a,pTrcHis系列，pBV220,221,222,pTXB系列，pLLP-ompA,pIN-III-ompA （分泌型表达系列）,pQBI63（原核表达带荧光）pET3a, pET 3d, pET 11a, pET 12a, pET 14b, pET 15b, pET 16b, pET 17b, pET 19b, pET 20b, pET 21a,b,d, pET 22b, pET 23a, pET 23b, pET 24a,b, pET 25b, pET 26b, pET 27b, pET 28a,b, pET 29a, pET 30a, pET 31b, pET 32a, pET 35b, pET 38b, pET 39b, pET 40b, pET 41a,b pET 42a, pET 43.1a,b pET 44a, pET 49b pET302,303 pET His,pET Dsb,pET GST,pET Trx pQE2, pQE9 pQE30,31,32, pQE 40 pQE70 pQE80L pQETirs system pRSET-A pRSET-B pRSET-C pGEX4T-1,-2,-3,5x-1,6p-1,6p-2,2tk,3c pBV220,221,222 pTrcHisA,B,C pBAD24,34,43 pBAD HisA,B,C pPinPoint-Xa1,Xa2,Xa3 pMALc2x, p2x pBV220 pGEM Ex1, pGEM7ZF（+）, pTrc99A, pTwin1, pEZZ18 pkk232-8,pkk233-3,pACYC184,pBR322,pUC119 pTYB1,pTYB2,pTYB4,pTYB11 pBlueScript SK （+）,pBlueScript SK（-）pLLP ompA, pINIIIompA, pMBP-P ,pMBP-C, 大肠杆菌冷激质粒： pColdI pColdII pColdIII pColdTF 原核共表达质粒：pACYCduet-1,pETduet-1,pCDFduet-1，pRSFduet-1 Takara公司大肠杆菌分子伴侣： pG-KJE8 pGro7 pKJE7 pGTf2 pTf16 大肠杆菌宿主细胞： DH5a JM101 JM103JM105 JM107 JM109 JM110 Top10 Top10F BL21（DE3）HB101 ER2529 E2566 C2566 MG1655 XL-10gold XL blue M15 JF1125 K802 SG1117 BL21（AI）BL21（DE3）plysS TG1 TB1 DH5a（pir）Tuner（DE3）Bl21 codonplusRIPL Novablue （DE3）Rosetta Rosetta（DE3）Rosetta（DE3）plys Rosetta-gami（DE3）Rosetta-gamiB（DE3）, Rosetta-gamiB（DE3）plysS Orgami（DE3）OrgamiB（DE3）HMS174（DE3）植物表达/RNAi载体农杆菌pBI121,pBI121-GFP,pBI101,pBI221,pSN1301,pUN1301,pRTL2 , pRTL2-GFP , pRTL2-CFP, pRTL2-RFP , pRTL2-YFP,pCAMBIA 1300, 1301, 1302,1303,1304,1305, 1381Z,1391Z,2300, 2301,3300,3301,pCAMBIA super1300,pCAMBIAsuper1300-GFP,pPZP212,pPZP2121,pPZP212-GFP,pGDG,RNAi载体pART27,pHANNIBAL,pKANNIBAL, pFGC5941,pTCK303, pTRV1,pTRV2,T-DNA插入载体（随机突变体库）pSKI015,pSKI074,真菌ATMT载体pBIG2RHPH2-GUS-GFP,pBHt1枯草芽孢杆菌表达载体pWB980,pHT43,pHP13,pHP43,pBE2,pMUTIN4,pUB110,pE194,pMA5, pMK3,pMK4,pHT304,pHY300PLK,pBest502,pDG1363,pSG1154,pAX01, pSAS144,pDL,pDG148-stu,pDG641,pAL12,pUCX05-bgaB,pHT01，配套菌株BS 168,WB600,WB800,WB700,WB800N,1012,FZB42,1A747,广宿主质粒pVLT33RNAi基因沉默干扰敲除载体pSilencer1.0，pSilencer 2.1-U6 hygro， pSilencer 3.1-H1 hygro，pSilencer 3.1-H1 neo， pSilencer 4.1-CMV neo， pSilencer 4.1-CMV puro pMIR-REPORT Luciferase RNAi载体（oligoengine）pSuper-puro RNAi逆转录病毒载体（clontech）: RNAi-Ready pSIREN-Retro Q， RNAi-ReadypSIREN-RetroQ-ZsGreen（Luciferase shRNA Annealed Oligonucleotide）RNAi慢病毒载体（addgene）: pLKO.1哺乳动物表达载体pcDNA3.1+/-,pcDNA4/HisMax B，pSecTag2 A，pVAX1，pBudCE4.1,pTracer CMV2，pcDNA3.1（-）/myc-His A ，pcDNA6-Myc/His B，pCEP4， pIRES，pIRESneo，pIRES hyg3，pCMV-myc，pCMV-HA，pIRES-puro3，pIRES-neo3,pCAGGS哺乳动物双杂交系统pACT，pBIND，pACT-MyoD，pBIND-Id，pG5luc,pCMV-BD, pCMV-AD, pBD-p53, pFR-luc,Cytotrap Two-Hybrid System:pSos, pSos MAFB, pMyr蜕皮激素诱导系统pIND, pVgRxR,LacSwith II哺乳动物诱导表达系统:pOPRSVI ，pOPI3CAT，pCMVLacI,GeneSwitch System:pSwitch哺乳动物表面展示系统:pDisplay, 四环素调控系统（Invitrogen）：pcDNA4/TO/Myc-His A，pcDNA4/TO/Myc-His B，pcDNA4/TO/Myc-His C，pcDNA4/TO/Myc-His/LacZ，pcDNA6/TR四环素调控系统（Clontech）：pTet-On，pTet-Off，pTRE2,pRevTRE，pRevTet-On，pRevTet-off信号通路报告载体:pGAS-TA-Luc，pSTAT3-TA-Luc, pISRE-TA-Luc, pTA-Luc，pIκB-EGFP，pNFAT-TA-Luc，pCaspase3-sensor，pAP1（PMA）-Luc;pGL4.26[luc2P/minP/Hygro],pGL4.29[luc2P/CRE/Hygro],pGL4.30[luc2P/NFA T-RE/Hygro]，pGL4.75;p53-Luc，pAP-1-Luc， pNF-κB-Luc，pSRE-Luc，pFA2-Elk1，pFC-MEKK，pFR-luc,Gateway系统（invitrogen）pcDNA6.2-GWEmGFP-miR negative, pLenti 6/TR,pcDNA 6.2-GW EmGFP-miR，乳酸菌表达载体及各种乳酸菌乳酸杆菌菌株，pNZ8148,pLEISS,pMG36e,pBBR1MCS-5,pBBR1MCS-6,pRV610,pLEM415,pHY3 00PLK,分泌型乳酸菌表达载体pVE5523，pPG611.1,pPG612.1等和乳酸杆菌菌株宿主菌NZ9000,MG1363,Lactobacillus casei 1.539,Lactobacillus casei,acidophilus NCFM,1.2,Lactobacillus sakei 23K,L.plantarum,L.rhamnosusGG,B.coagulans,Bifidobacterium bifidum,Bifidobacterium infantis,Lactococcus lactis M17,1663,Lactobacillus reuterii广宿主表达载体链球菌表达敲除载体假单胞菌表达载体pVLT33,pBBR1MCS-2,3,4,5,6, pJRD215,pJN105,pME6032,Cos载体pLAFR3,pMP2444（GFP）, pHY300PLK,pRT102,pRL1063a, 转座子载体pUT-miniTn5,pMGS100, pWHM10,pKC1139,pSET152,pOJ260,pPG611.1,pPG612.1，腺病毒载体/慢病毒，逆转录病毒表达载体及包装包膜质粒，腺病毒系统（Stratagene）: pAdEasy-1,pShuttle-CMV,pShuttle,pAdTrack, pAdTrack-CMV, pShuttle-IRES-hrGFP-1、pShuttle-IRES-hrGFP-2、pShuttle-CMV-lacZ,pShuttle-CMV-EGFP-C,pXC1, pBHGE3, 配套大肠杆菌BJ5183,293,293T cellline 腺相关病毒系统（Stratagene）： pAAV-MCS，pAAV-RC，pHelper，pAAV-LacZ，pAAV-IRES-hrGFP，pCMV-MCS，慢病毒载体:pLVX-DsRed-Monomer-N1,pLVX-IRES-ZsGreen1,pLVX-AcGFP1-N1,Lenti6/v 5-EDST-EGFP,pWPXL, FUGW,pLentilox 3.7,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q,RNAi-Ready pSIREN-Retro Q-ZsGreen,pSUPER.Retro-GFP/Neo,pSUPER-Retro-Neo, pSUPER.Retro-puro,PLNCX PLNCX2 pMSCV-HYG pMSCV-neo pMSCV-puro pLEGFP-C1 pLOX-CW-CRE pLOX-GFP-IRES-TK pRetroX-IRES-DsRedExpress, pLVX-IRES-mCherry质粒载体。

2μm质粒在酿酒酵母遗传操作中的应用举例
当霉菌孢子落在适宜的基质上后，织而成的一个菌丝集团称菌丝体。

而伸展到空间的菌丝体则称为假根是Rhizopus根霉属有固着和吸取养料等功能。

匍匐菌丝毛霉目真菌在固体基质上常形成与表面平行、锁状联合双核细胞构成的二级菌丝通过形成突起而连合两个细胞不断使双核细胞分裂，而使菌丝尖端不断向前延伸病毒是形体微小，结构简单，子显微镜下才能观察到的一类非细胞形态的微生物。

温和噬菌体某些噬菌体侵染细菌后，裂而同步复制，并不引起细菌裂解释放噬菌体，因而被称作温和噬菌体。

aw表示，在天然环境中，微生物可实际利用的自由水或游离水含量。

专利名称：一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包专利类型：发明专利
发明人：周景文,高松,徐沙,余世琴,曾伟主,陈坚
申请号：CN202210436848.3
申请日：20220414
公开号：CN114606256A
公开日：
20220610
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一组用于酿酒酵母多拷贝整合的质粒工具包，属于基因工程和代谢工程领域。

通过将筛选基因KlLEU2的起始密码子替换为GUG，从而构建得到了一组能够实现高拷贝整合的表达框，将表达框整合至酿酒酵母中，可实现外源基因的高效、稳定表达。

可使目的荧光蛋白表达强度显著提升至改造前的10倍左右，并使转化子数量也降低至20～40个，更有利于简化筛选流程、提升筛选效率。

本发明的多拷贝整合质粒将有利于在微生物中过表达目的蛋白。

申请人：江南大学
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国籍：CN
代理机构：哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
代理人：赵巧娜
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