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细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
在细胞培养中常可见到一些大小不等、形态不同的黑色颗粒在细胞及培养液中做不规则运动。
镜下检查颗粒数目（100×），每视野计数在10个以上者就有可能使细胞生长受到影响。
若培养过程中，其数量继续增多则可能导致细胞停止增殖继而死亡。
人们常称这种颗粒为黑胶虫或中毒颗粒。
近年来，黑胶虫在现代细胞培养中被广泛讨论，但大多数文献未对其进行描述或仅一带而过。
从各个实验中发现，黑胶虫在不同条件或不同种类细胞的培养时对细胞培养的影响大小不一，但存在以下几个特点：（1）黑胶虫与细胞竞争生长，使细胞状态恶化甚至死亡，但不引起培养液浑浊；（2）多数情况下，抗生素对黑胶虫无效；（3）一般单用培养液及血清培养不会得到黑胶虫；（4）黑胶虫在培养体系中多做典型的布朗运动。
科学家们至今尚未对黑胶虫进行分类学上的归类，但对其身份有多种猜测。
一．非生物有部分科学家认为，任何一种外来生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现，而不是简单的运动。
如果黑胶虫的运动状况已达到用显微镜可观察到的程度，其营养代谢和能量需求也可想而知，那么，培养液中营养的消耗将加大、酸碱含量都将发生明显变化。
比如出现迅速、大含量的沉淀，pH值的迅速下降，细胞大量破碎死亡，引发其他微生物侵染等。
但这些状况在黑胶虫感染中很难观察到。
因此，有科学家提出黑胶虫为非生物。
（1）细胞碎片说在从37℃环境中取出细胞进行观察时，由于液体培养基比热大，液内环境高于外界温度，造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧，即出现观察到的“虫体”游动。
同时随着细胞培养的继续，部分细胞开始衰亡，细胞膜结构破裂。
破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中。
尤其是溶酶体的破坏，连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤，如果换液不很勤，又会出现进一步破坏和更多的残渣，即表现为“虫体”增多，同时细胞状态恶化甚至死亡。
（2）无机物说在1990年发表于细胞生物学杂志上的《对细胞培养中一种黑色运动颗粒性质的研究》中，青岛医学院肿瘤研究室指出，细胞培养中的黑色运动颗粒为硅复合物。
细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，已成为很多细胞培养初学者的困扰，这种情况是怎么引起的呢？该如何避免呢？产生原因：1.细胞状态：细胞自身具有分泌功能，或细胞营养不良，生长状态欠佳，细胞老化都有可能在培养过程中出现小黑点。
2.血清沉淀：通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多。
有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为微生物之增殖。
一般而言，此小黑点应不会影响细胞的生长，但若经过平行试验怀疑此血清的品质，应立即停用，更换另一批号的血清。
3：黑胶虫污染黑胶虫概况：在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动（类似布朗运动）,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现）,目前业内人士称其为“黑胶虫”.黑胶虫到底是否为生物?这个一直是业内人士的疑惑.黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm 滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物.如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡.不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的：①与细胞竞争性生长,对细胞生长有不利影响.②“黑胶虫”会增殖,增殖多时,视野下一大片都为“黑胶虫”.③“黑胶虫”与血清有关,与血清质量有一定关系.4：支原体污染：如果细胞表面出现许多小黑点，细胞生长缓慢，培养液很黄，那么支原体污染的可能性就很大。
5：细胞受各种霉菌、细菌等生物污染。
此种原因大多为环境原因造成。
解决办法：1.如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；如果确定是支原体解决办法很多：a 抗生素(antibiotic)除菌法：用抗生素抑制支原体。
细胞出现小黑点是什么，支原体污染怎么办炎炎夏日，细胞污染严重，它们正在被这越来越热的天气“折磨”。
你会慢慢发现细胞出现了一些不知何物的小黑点那些讨厌的小黑点到底是什么呢？今天我们就来说道说道吧~1.细胞碎片细胞生长状态不好，吹打过多或者多次吹打导致碎片，加大血清浓度，降低离心速度养两代试试。
碎片一般会离心出去。
这就是细胞碎片2.黑胶虫黑胶虫污染，黑胶虫一般小而且密。
“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候，细胞生长就会受到影响直至死亡。
3.支原体污染支原体污染不易发现，很多细胞即使支原体污染，在没有出现猛烈爆发时细胞形态也不会有明显的变化，因此支原体污染经常被人们所忽视。
但是支原体污染对细胞的伤害比人们想象的要大得多，会直接对您的实验结果产生影响，包括以下几个方面：①严重降低细胞的基因转导效率:无论是病毒载体还是脂质体介导的基因转导，细胞都会因为支原体的污染而导致效率低下。
②严重影响细胞的功能表型:支原体严重影响细胞的分化方向，扰乱细胞的增殖、活力与代谢水平，造成实验中极其不稳定的细胞表型结果。
那么出现这些情况之后细胞怎么“自救”呢对于细胞支原体污染，向已经污染支原体的细胞中加入汉恒自主研发特效抗支原体试剂SaveIt™ 后，再用PCR检测培养细胞的支原体，电泳图如下。
结果显示，加入汉恒生物抗支原体试剂后，污染的支原体被有效清除。
虽然有试剂可以帮我们清除支原体，但是既然存在支原体污染那就说明别的地方是存在污染可能性的，例如生物安全柜，工作台，培养箱等等，对于这些情况，我们又可以怎么去解决呢？“喷一喷”汉恒生物SaveIt™抗支原体喷雾预防支原体污染效果显著，可用于生物安全柜、超净工作台、CO2培养箱、显微镜等常用仪器以及细胞房门把手等易污染的死角的消毒中，只需轻轻一喷，就可让您远离支原体污染带来的烦恼。
所以汉恒生物不仅有细胞“自用”的抗支原体试剂，还有“外用”的抗支原体喷雾。
真菌细胞的例子
细胞污染大展观- 真菌篇
VivaCell
天气渐热
实验人最头疼的事情又来了
- 细胞污染-
夏季是污染频发的时间
那么如何判断污染及预防污染呢？
今天我们一起来看看吧~
细胞污染可以分为四大类：细菌污染、真菌污染、支原体污染及黑胶虫污染。
真菌污染
肉眼观察特点：
◆真菌污染最短3天才能长出椭圆形的霉斑。
◆霉斑往往会漂浮在培养液表面，随着时间逐步扩大。
显微镜下观察特点：
念珠菌
◆有些真菌呈类似棉花絮状的漂浮物。
◆若是念珠菌会呈卵圆状，在细胞周边生长。
根霉菌
◆早期并不会使得培养基变黄变浑浊，但在显微镜下可观察到菌丝体。
真菌形成的菌丝呈丝状，管状，树枝状，串珠状。
酵母菌
◆酵母菌等，当其行出芽生殖时可从一大一小的连体结构识别。
◆细胞被污染后，仍可生长，长时间细胞的活力状态会变差。
◆梅雨季时的污染率会提高。
◆呈卵圆状酵母菌增殖到一定规模，形成团簇状的真菌群。
真菌的克星-抗生素
接下来为大家展示几个经典的真菌污染案例：- 根霉菌-
- 酵母菌-
- 念珠菌-。
细胞培养的过程中，经常见到黑色的颗粒或小黑点，已成为很多细胞培养初学者的困扰，这种情况是怎么引起的呢？该如何避免呢？产生原因：1.细胞状态：细胞自身具有分泌功能，或细胞营养不良，生长状态欠佳，细胞老化都有可能在培养过程中出现小黑点。
2.血清沉淀：通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多。
有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为微生物之增殖。
一般而言，此小黑点应不会影响细胞的生长，但若经过平行试验怀疑此血清的品质，应立即停用，更换另一批号的血清。
3：黑胶虫污染黑胶虫概况：在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动（类似布朗运动）,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过,没有菌落出现）,目前业内人士称其为“黑胶虫”.黑胶虫到底是否为生物?这个一直是业内人士的疑惑.黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm 滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物.如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡.不管对于黑胶虫的争论如何,但有几个是目前大家公认的：①与细胞竞争性生长,对细胞生长有不利影响.②“黑胶虫”会增殖,增殖多时,视野下一大片都为“黑胶虫”.③“黑胶虫”与血清有关,与血清质量有一定关系.4：支原体污染：如果细胞表面出现许多小黑点，细胞生长缓慢，培养液很黄，那么支原体污染的可能性就很大。
5：细胞受各种霉菌、细菌等生物污染。
此种原因大多为环境原因造成。
解决办法：1.如果小黑点有增殖趋势，那么就有可能是污染了，需要处理；如果确定是支原体解决办法很多：a 抗生素(antibiotic)除菌法：用抗生素抑制支原体。
最近看到不少问有关细胞培养污染的事，正好我看到了一个有关这方面的总结，很全很好很强大，跟大家分享下细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。
孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。
听说你的细胞被污染了？导语学会正确地进⾏细胞培养是细胞实验的基础，然⽽⼩⼼翼翼的你，怎奈何体外细胞的脆弱，百密终有⼀疏。
你偶然的⼀个喷嚏，不经意得捋捋你的头发丝，对于这些丢失体外抵抗能⼒的细胞都可能是毁灭性的灾害。
但是，并⾮所有的细胞污染都是致命的，若是及时发现，还是可以得到挽救的。
今天咱们的主题就是：教⼤家辨别各种细胞污染及如何应对。
如下图：实验室常见的细胞污染，你都知道属于哪种污染吗？细胞培养中的常见污染主要包括：细菌、霉菌、⽀原体、⿊胶⾍、病毒和交叉污染等，每⼀种污染都有各⾃的特点。
如细菌和霉菌增殖迅速，短时间就对细胞造成明显伤害；⽽⽀原体和病毒对细胞的影响则是⼀种缓慢长期的过程。
下⾯就具体看看每⼀种污染。
1. 细菌污染（较容易被发现）引起原因：操作不规范或⽆菌措施不到位等；细菌污染种类：⽩⾊葡萄球菌，⼤肠杆菌，假单孢菌、枯草杆菌等；细胞污染后的变化：①污染后由于有⼤量酸性物质产⽣，因此培养基会短时间内由红⾊变为黄⾊；②由于细菌⼤量增殖，培养基变浑浊，稍微振荡后可见培养基表⾯有漂浮物；③普通倒置显微镜⾼倍镜观察，胞浆内可见⼤量颗粒（如下图红⾊箭头）；④细胞⽣长缓慢，逐渐变圆脱落。
如下图所⽰：左：悬浮细胞污染后，可见悬浮细胞个体远⼤于杆状细菌，⽽细菌呈⿊⾊颗粒状并会有较快的运动速度；右：贴壁细胞，可看到球状细菌分布于细胞周围并做剧烈运动。
细菌污染的细胞（左悬浮细胞，右贴壁细胞）图⽚来源：UNC School of Medicine处理措施：在培养液中添加双抗（P/S）处理；可⽤抗⽣素的常⽤量的5~10倍作冲击疗法，⽤药24~48h后再换常规培养液；另外添加西司他丁钠和亚胺培南（泰能）处理细胞，适⽤于培养⽤具被打翻、使⽤了污染的培养液或要培养污染的组织或者冻存细胞的污染情况[1]。
裸⿏体内接种法是⽐较有效和彻底的除菌⽅法。
主要包括腹⽔接种和⽪下荷瘤分离细胞。
既能彻底清除污染细菌，⼜能保持肿瘤细胞的来源特征和恶性特性。
细胞培养中的黑胶虫污染及解决方案点击次数：2365 发布时间：2011-4-2细胞培养中的黑胶虫污染摘要：预防和避免污染是细胞培养成功的关键，黑胶虫(也称黑焦虫)是近几年来几乎出现在每个细胞培养实验室。
但是现在无法对黑胶虫的确认和鉴别，导致学术界说法不一，笔者收集了关于黑胶虫的资料，对黑胶虫进行类系统描述，对黑胶虫出现的情况对细胞培养的影响以及黑胶虫污染后的有效处理进行介绍。
关键词：黑胶虫污染处理细胞培养The pollution of black dots in cell culture(Grade 2005, Biotechnology, School of Life Science and Engineering)Abstract Pollution prevention is the key to success in cell culture, black dots (also called black particles) almost appeared in every cell culture laboratory in past few years .But now no one able to confirm and identify what the black dots is. This lead to appear different academic arguments.The author collected information about the black dots to make a description about black spots which similar to the systemic description,and Introduce when aand where the black dots come out. At the same time give some advice to deal with the black dots.Key words Pollution black dots cell culture前言污染是细胞培养的大敌。
预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。
一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。
细胞培养中常见的生物污染类型有7种，分别是细菌污染、支原体污染、原虫污染、黑胶虫污染、真菌污染、病毒污染以及非细胞污染。
他们在细胞培养中污染的特点如下：1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
2、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
3、黑胶虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。
常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。
对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。
4、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。
真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
5、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。
他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。
这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
6. 病毒：组织细胞培养过程中，如果没有除去潜在的病毒，就会产生病毒污染。
目前，从原代猴肾细胞的培养中已发现不少于20种血清性病毒。
尽管病毒污染的细胞不影响原代培养，但生产疫苗是不安全的。
因此，潜在病毒是细胞大量生产和疫苗、干扰素等生物制品制作中的难题7、非同种细胞污染：即是细胞交叉污染，由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染。
目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。
非细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生，大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不彻底而带入一些有毒化学物质所致。
在上述的八种污染物中，黑胶虫是现代细胞培养中讨论比较多的，但大多数文献未对其进行描述或一带而过，就像上面关于描述黑胶虫的情况是不完整，还有很多不明的情况。
对其身份有多种猜测，到现在都没有权威地对黑胶虫进行分类学上的归类。
黑胶虫到底是不是一种生物，如果是那黑胶虫会是何种生物，如果不是，那黑胶虫会是什么？一系列的问题都悬在奋斗在细胞生物学领域的学者们的心中。
1关于黑胶虫的描述1.1分类上的描述对于黑胶虫的分类，学术界没有明确给予说法。
关于黑胶虫的分类，目前大部分人认为黑胶虫污染是微生物感染。
在一些文章论述上把黑胶虫归为生物污染类型，但是没把它归为确定的生物分类类型，只是把黑胶虫独立为一种未知生物。
而根据中国病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，但是由于课题经费不够而不能继续下去，最终也没有有力证明黑胶虫是属于原虫。
也有一些学者不认为所谓的黑胶虫污染是一种生物污染，而认为是细胞碎片类物质，是在细胞培养时，细胞衰亡破裂产生的；也有在文献中报道说是玻璃瓶中类似氧化硅的物质，那个文献很少人找得到；还有报道黒胶虫是一种纳米级的细菌。
1.2形态上的描述形态上类似与杆状细菌，但长度比细菌长，直径约在0.5~1微米，不染色观察为黑色；胶虫成熟后呈线状，而且形态是椭圆形。
1.3运动形式在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动(不规则的原地小距离抖动)，即很多细胞培养者看到的，像黑色的小虫游来游去。
可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去。
但是在物理学上来说，颗粒足够小，在液体中也是做布朗运动的，这不足以说明黑胶虫的布朗运动就证明它是生物。
1.4生理上的描述1.4.1抗性抗细菌和抗霉菌的药物对黑胶虫均无效，可以保守的判定黑胶虫不属于细菌。
1.4.2环境抗逆性将培养器材150度烘烤8小时，可以消除，这个黑胶虫高压灭菌泡酸都不死。
可见黑胶虫可以耐高温高压，而且还有点嗜酸，如果证实它是生物的话，那它很有可能是极端微生物，一种古菌。
1.4.3营养条件“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。
可见“黑胶虫”是一种异养生物。
2对黑胶虫的各种猜测及相应的处理2.1非生物类2.1.1细胞碎片类在细胞培养的时候，由于细胞代谢、物质交换、周边环境变化，尤其是在从37度培养箱中拿出来观察的过程中，由于液体培养基的比热较大，液内温度高于外界温度，造成冷热交换、小范围内形成液体流动加剧，当然这些小岁末就会被搅动起来形成似乎“游动”的感觉；随着细胞培养的继续，部分细胞开始衰亡，细胞膜结构破裂，破裂之后的细胞内容物泄露到培养液中。
尤其是溶酶体的破坏，连续性地造成其他细胞和细胞器的损伤，如果换液不很勤，又会出现进一步破坏和残渣的出现；再者，“黑焦虫”问题是很多细胞培养者已经发现的问题，但到目前为止尚未找到其监测和排除的试剂和手段，这首先是由于所谓“黑焦虫”病原体根本难以收集和捕捉，这也从另一个侧面证明了“黑焦虫”问题的难以确定性；再说任何一种外来的微生物在培养基中都会有生命活动的反应和表现，而不是简单地运动那样的外观性表现。
举一个例子：如果“黑焦虫”的运动状况已经到了用显微镜已经可以观察出的程度，其营养代谢和能量需求也就可想而知。
这样，培养液中的影响消耗、酸碱含量程度等都要发生明显变化。
比如说：迅速的、大含量的沉淀， pH值的迅速下降，细胞大量破碎死亡、引发其它类型微生物侵染等等。
而这些状况，在所谓的“黑焦虫”感染中，是很难观察到的。
同时“黑焦虫”的出现而影响细胞状态似乎得不到有力的证据。
倒是细胞状态下降的时候，“黑焦虫”明显增多了。
很有可能是细胞状态下降时，细胞衰亡产生的细胞碎片。
所以黑胶虫属于细胞碎片是比较可能和合理的。
2.1.2玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西网上有一篇文章说，黑胶虫其实不是一种生物，是无机物，其本质是玻璃培养瓶里的硅颗粒。
可影响细胞生长，细胞状态好时，不明显。
细胞状态较差，数量少时才容易看到，最好的办法是用一次性培养瓶，可消除黑胶虫影响。
2.1.3血清聚合物产物gibco公司的血清说明，此物为血清聚合产物，而不是微生物2.2生物类2.2.1支原体有人曾认为黑胶可能是支原体污染，因为相对比较权威的网站文章指出，黑胶虫可以通过滤膜，可以在空气中传播。
而恰巧口腔支原体为人体口腔中之正常菌丛，所以实验室之操作人员的污染亦可能为支原体的污染源。
但有人为此做了实验证明黑胶虫不会是支原体，原因如下：1、光镜下可见, 因为体积不对，支原体在普通显微镜下不能看到。
2、多种染色后可见，甚至hoechst即能将它染色,一般来说支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。
所以，黑胶虫是一种支原体的可能性比较小。
2.2.2真菌有很多人发现类似黑胶虫的，但最后确定是真菌，二性霉素B对其有效。
那说明黑胶虫不存在只是细胞培养中的真菌感染，还是说明黑胶虫污染属于真菌类污染物。
如果黑胶虫是一种真菌，那么由此引起的污染是不会引起那么多人的关注，即使它很特殊。
但是这不能排除那些认为“黑胶虫”是真菌的细胞者，看到的只是一般真菌感染。
由于细胞被感染了，要进行拯救处理，不像理论上那么简单，稍有不注意都是很容易导致培养失败，所以黑胶虫是一种真菌也是不太可能。
2.2.3寄生类原虫黑胶虫属于寄生类的原虫，而不是细菌、支原体，也不是什么补体、细胞碎片或蛋白沉淀。
有人在400倍以上的高倍镜下可以清楚的看到胶虫有两种不同形态，一种较大，运动较慢，泛红光；另一种较小，运动较快，红中带绿，个小的围着个大的分布，很可能是公的围着雌的。
这种生物也并非离开细胞就不能存活，也有人做过这样的试验，单纯培养过污染胶虫的血清4周，直到满视野都是黑煤渣般的胶虫。
给人的感觉是胶虫和细胞一样有丛集性，如果胶虫密度低则生长缓慢，如果手懒，拖了几天没换液，待胶虫生长到一定浓度后便会飞速分生，细胞受感染的程度也大，这时除了培养基中可见外，细胞表面通常也象长满了粉刺，所以有人认为细胞旁分泌的某些因子可以抑制胶虫的生长。
