细胞培养污染图片及甲醛熏蒸(精编课件).ppt
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细胞污染鉴别与图片细菌培养液是被洋葱佰克霍尔德菌污染了洋葱佰克霍尔德菌(Burkholderiacepacia)原属假单胞菌属,是植物病原菌,因引起洋葱患病而得名,是医院感染病原菌之一。
洋葱伯克霍尔德菌是一种广泛存在于土壤及水中,与医院感染密切相关的革兰阴性杆菌,尤其为免疫缺陷及肺囊性纤维化患者易感染细菌之一。
它可以在无糖的培养基中生长。
在医院环境中常可污染自来水、体温表、喷雾器、静脉导管、导尿管、静脉输液管等,造成院内传播,导致多种医院感染,如败血症、心内膜炎、肺炎、伤口感染、深部脓肿和眼结膜炎等,尤其采用导管植入进行治疗者,更容易引起感染。
洋葱伯克霍尔德菌对多种抗菌药具有天然的耐药性。
耐药现象严重,治疗可选择复方磺胺甲繟唑、哌拉西林,三唑巴坦、哌拉西林和头孢他啶等抗菌药物。
白色念珠菌污染:(倒置)白色链球菌是常见的细胞污染革兰氏染色阳性通过革兰氏染液染色的链球菌中间长梭型的是正在分裂的念珠菌真菌感染真菌感染支原体污染电镜照片(X30k),煎蛋状和其他形状支原体污染电镜照片(X30k)支原体污染电镜照片(X12k)上面这个很明显是霉菌,确切的说应该属于丝霉,因为你可以看到明显的菌丝,有些种类是无横隔的,有的是具横隔的,培养基呈淡紫色,或不变色,但会变得粘稠。
污染来源:一般是来自实验服,并且具有季节性,像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
这个是细菌污染,你在倒置显微镜下无法看到细菌的结构(需油镜),污染晚期培养基呈黄色。
污染来源:操作问题。
*这个可能是螨虫。
这个是原代培养皮肤成纤维细胞时污染的,形态呈杆状,能自主直线游动,速度相当快。
污染源:小鼠毛发中。
这个可能是酵母污染,镜下能隐约看到出芽生殖,不过不知道酵母会不会呈团聚集在一起,因为照片中那团黄色的东西也是此污染物,肉眼观察使可看到明显的白色或淡黄色颗粒状的漂浮物,同样这个污染源也是小鼠的皮肤。
细胞培养中常见的污染情况总结如下:常见的污染如下:1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生素处理2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。
或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。
并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。
待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。
孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。
预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml 的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。
,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作3、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。
而且它不能用过滤的办法除去。
支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢死去。
用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。
Sigma公司的使用时用50ug/mlTylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。
白色念珠菌污染革兰氏染色阳性中间长梭型的是正在分裂的念珠菌生命经纬网友布兰卡的观点为:我个人感觉,操作之前酒精擦手消毒非常重要,因为环境再差,无菌台里一般是没问题的,但是,污染往往在这里操作时发生,因此,个人手的卫生非常重要,白色念珠菌是人体霉菌感染的常见霉菌种类(尽管我们有时感觉不到,但它就在你我的身边甚至身上存在着),我认为绝大多数污染是我们自己带进去的,因此,如果环境不是太差,那就找找自身的原因。
生命经纬网友dsh1205的观点为:灭菌水,是否有必要我也不太肯定。
其实这一点是很容易办到的,有总比没有好。
多注意一些可能的因素,对细胞总是有力的。
被污染总是很麻烦的,细胞长得不好不说,还影响实验进程。
我认为有两个环节很重要,操作台及温相。
我们操作前、后都要紫外杀菌30min,而且保持操作台通风设施正常。
我们的温相好像从来没有用酒精擦过,更没用紫外照射。
我们开温相时,先清洁剂洗手,在酒精擦手,范围与手术洗手差不多,时间一般在几秒内。
另外,我自己将瓶放回相中时,还对瓶体进行酒精擦洗。
当然还有给细胞换液也要注意了,吸管尽量不要深入瓶内,要深入瓶内的最好先在酒精灯上烧一烧等等。
HepG2细胞,荧光染色检测支原体支原体污染检测在上面的支原体检测图片里没大片的针状点,但不敢肯定个别细胞核外的小点是不是支原体,可是要有也不应该就这么几个啊?(细胞一共培养了40小时)生命经纬网友bianmin8024认为:这么大面积的污染,你可以看看是不是做这批细胞时操作上出了问题,要不然就是培养基的问题。
其实我觉得在每次试验前,最好简略写一下操作步骤做到心中有数。
这样可以避免实验中的忙乱。
既然现在已经污染了,就全部更换你的器皿。
培养箱的水没有必要用无菌水,但最起码要是蒸馏水。
以上图片细胞系念珠菌污染处理办法:扔掉,善后办法,养成良好的无菌操作的习惯,拿70%酒精擦手,擦超净台,擦培养瓶,擦培养基瓶,各种瓶子的口多拿火焰烧灼。
细胞常见污染图片与鉴别
赛默飞世尔科技(中国)有限公司
ThermoFisher Scientific
图1. 洋葱佰克霍尔德菌污染洋葱佰克霍
尔德菌(Burkholderiacepacia)原属假单胞菌属,
广泛存在于土壤及水中,因引起洋葱患病而得
名,是医院感染病原菌之一。
图2. 白色念珠菌污染常见的细胞污染之一,左侧为倒置显微镜下视图,右侧为革兰氏染色图片,其中,长梭型的是处于分裂期的链珠菌
图3.链球菌革兰氏染色
图4. 真菌感染
图5. 支原体污染煎蛋状和其他形状,左侧:电镜照片(×30k);右侧:电镜照片(×12k)
图6. 霉菌(丝霉)污染培养基呈淡紫色,或不变色,但会变得粘稠,一般是来自实验服,并且具有季节性,像现在这种长蘑菇的季节很容易污染这种菌类。
图7. 细菌污染倒置显微镜下无法看到细菌的结构(需油镜),污染晚期培养基呈黄色。
当快,源自小鼠毛发中。
源自小鼠的皮肤。