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琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65?左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止 .3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。
实验材料和试剂(一)实验样品质粒pUC118(二)试剂1(l DNA/HindIII分子量标准2(溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3(1mg/ml溴化乙锭溶液4(电泳缓冲液(TAE)40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA(配制方法:24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml)5(0.7% 琼脂糖凝胶(配制方法:称取琼脂糖0.35克，加入50ml TAE电泳缓冲液)(三)仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1(选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。
cas 琼脂平板法CAS琼脂平板法概述CAS琼脂平板法是一种常用的微生物菌落计数方法，用于检测食品、药品、环境等样品中的微生物污染情况。
本文将介绍CAS琼脂平板法的原理、操作步骤以及注意事项。
一、原理CAS琼脂平板法是基于琼脂平板法发展起来的一种微生物菌落计数方法。
其原理是利用CAS琼脂培养基中的柠檬酸铁盐与细菌产生的外源性胞内酶反应，形成深蓝色或黑色菌落。
通过计数菌落的数量，可以确定样品中的微生物数量。
二、操作步骤1. 准备琼脂培养基：将CAS琼脂培养基按照说明书配制好，煮沸消毒后冷却至50℃左右。
2. 样品处理：将待检样品进行适当稀释，以确保菌落的数量在可计数范围内。
一般建议进行10倍到100倍的稀释。
3. 平板接种：将稀释好的样品取1ml接种于CAS琼脂平板上，均匀涂布。
4. 培养：将接种好的平板倒置放置于恒温培养箱中，温度为30-37℃，培养时间一般为24-48小时。
5. 计数：在培养箱中观察平板上的菌落，选择典型的单个菌落进行计数。
根据菌落的形状、颜色和大小等特征，可以初步判断菌落的种类。
6. 计算：根据所选菌落的数量以及稀释倍数，计算出样品中的微生物数量。
三、注意事项1. 操作环境要清洁，避免外界微生物污染样品。
2. 每个样品都应进行平板对照，以便排除背景菌落的干扰。
3. 在接种平板时要注意均匀涂布，避免菌落过于密集。
4. 培养箱的温度和时间要根据所检测的微生物种类进行调整，确保菌落的生长。
5. 在计数时要仔细观察，排除菌落重叠或异常的情况。
6. 根据实际情况，可以选择不同的稀释倍数，以确保菌落数量在可计数范围内。
结论CAS琼脂平板法是一种简单、快速、可靠的微生物菌落计数方法。
通过该方法，可以准确地检测样品中的微生物污染情况，为食品、药品、环境等领域的质量控制提供科学依据。
在实际应用中，我们还应结合其他检测方法和标准，综合评估样品的微生物质量，并采取相应的控制措施，确保产品的安全性和卫生质量。
临床微生物学检验(sop)确保高压效果的可靠性。
【适用范围】蒸气式高压锅。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【操作方法】1．将水加到高压锅内至其刻度线，将欲灭菌物品放入锅内，关闭锅门，拧紧螺丝并确认已经封闭。
2．打开排气阀。
3．打开蒸汽开关，向锅内输入蒸汽或接通电源，使产生蒸汽。
4．观察排气阀的排气情况，待排出的气体由冷气变为蒸汽，压力表达到0.05mPa 时，关闭排气阀。
5．观察压力表，当压力升至0.15mPa时，开始计时。
6．压力达0.15mPa后，可调节进气阀，减少进气量，维持压力并使其稳定在0.15mPa。
电加热时，可切断电源，维持压力持续15分钟，至多不超过30分钟，否则营养物质破坏。
7．关闭进气阀门或切断电源，让锅内物品自然冷却，不可马上打开排气阀，以免发生意外。
8．待锅内压力降为零时，可打开锅盖，取出物品。
操作人员部门主管质量负责人姓名 ****** ****** ****** 日期 **年**月**日确保培养箱温度恒定。
【适用范围】各种类型隔水式、温度设定为27℃、35℃、42℃、56℃培养箱。
【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【操作方法】1．培养箱应放置于水平地面（或坚固的水平台），电源电压须匹配。
2．从注水口先将隔水箱内的水注满到浮标要求的位置。
3．将温度调节旋扭调至所需温度，然后将电源开关拨至“开”处。
4．每次使用时应在培养箱顶部插入标准温度计，监测实际温度。
5．培养箱工作温度波动范围应控制在±10C以内。
6．培养箱正面贴有温度记录表，记录每天上班和下班时温度，如温度超出正常范围，指示该温度的刻度应划上红圈，并把修正温度记录下来。
7．培养箱内外应保持清洁。
操作人员部门主管质量负责人姓名 ****** ****** ******日期 **年**月**日保证培养基的质量。
药敏试验程序及步骤微生物标本的采集通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物。
1）采集的一般原则：a早期采集b 无菌采集注意对局部及周围皮肤的消毒，渎道底部采集的标本（外通道）正常菌群寄生部位采集的标本应明确目的菌，采用选择培养基。
C 不同菌不同采集方法D 采集适量标本，量不应过少，注意采集不同时间不同部位标本，要全面有特征E 安全采集2）标本处理2h送到检验处，部分菌应保温于一定环境中保存注意安全尤其对烈性传染病。
有时可以直接用抽取标本的注射器如尸检组织、支气管洗液、心包液、痰、尿等标本要保存于4℃环境中，脑脊液保存于25℃3）各部位标本的采集及注意事项A 血液皮肤消毒采血部位采血量采血次数采血时间不同动物有所不同血液应马上送检室温保存不可冷藏。
配置的培养基血液和肉汤比为1：5～1：10血液中常见的病原体引起的疾病有葡萄球菌菌血症，肠球菌菌血症、革兰隐性杆菌、厌氧菌菌血症真菌血症。
B 脑脊液采集脑脊液一般用腰椎穿刺术获得。
采集后立即送检，一般不要超过1h，避免凝固和混入血液一般取3～5ml 35度保温送检不可至于冰箱保存做病毒检查时应放置冰块4度保存72h常见细菌性脑膜炎如流行性脑脊髓膜炎肺炎球菌脑膜炎，链球菌脑膜炎等真菌性脑膜炎常见隐球菌脑膜炎假丝酵母菌脑膜炎等特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发。
如AIDS恶性肿瘤严重糖尿病等流行性乙型脑炎是一种人兽共患病肠道病毒可见多种病毒引起脑膜炎和肺炎c 脓液标本的采集首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，在采集标本，用针和注射器抽吸采取，再移入无菌容器立即送检也可用拭子在伤口深部采集渗出物，对于皮肤或下表皮的散播性感染，应采集病灶出边缘而非中央处的感染组织送检。
沙门氏菌药敏试验的判定标准如下：首先，根据实验方法的不同，将沙门氏菌药敏试验分为两种判定标准，即琼脂稀释法和肉汤稀释法。
在琼脂稀释法中，当细菌浓度低于1×10^5 cfu/ml时，药物的最小抑菌浓度（MIC）就是其最低杀菌浓度（MBC）；当细菌浓度高于1×10^5 cfu/ml时，需要选择琼脂稀释法中的敏感菌株，通过将药物点种在平板培养基上，待对数期沙门氏菌生长繁殖后，再加入判断敏感性的划痕线，通过观察划痕线处是否生长细菌来判定敏感性。
如果细菌生长，则药物为沙门氏菌的敏感药物。
肉汤稀释法中，实验步骤和判定标准也有详细的说明。
首先，要选择合适的药物浓度进行药敏试验，然后将无菌的沙门氏菌人工培养物液体培养物接种到相应的肉汤培养基中，使其达到一定的细菌数密度。
随后将配制好的药物稀释液进行接种，通常用适当的接种工具挑取适量的细菌混合菌悬液接种于含药平板培养基中混合均匀，在接种前需要注意确保培养基与稀释药液充分混匀，并在4分钟以内完成接种。
完成接种后放在相应条件下培养。
沙门氏菌药敏试验的最后结果判定需要根据细菌生长情况、抑菌圈大小、敏感性带的位置以及是否出现多重耐药性带等因素综合考虑。
在判断结果时，如果细菌在培养基中生长良好，则表明该药物对沙门氏菌没有抑制作用。
如果细菌在含有药物的平板培养基中不生长或生长较少，则表明该药物对沙门氏菌具有高度敏感性。
如果敏感性带较窄或抑菌圈较小，则表明该药物对沙门氏菌的敏感性较低。
同时需要注意的是，如果沙门氏菌同时表现出多重耐药性，则表明该药物对沙门氏菌的敏感性很低。
综上所述，沙门氏菌药敏试验的判定标准涉及到多个方面，需要综合考虑多种因素进行判断。
因此在进行沙门氏菌药敏试验时，需要严格按照实验方法进行操作，以确保结果的准确性。
同时，对于不同的药物和细菌浓度组合，也需要进行充分的试验和验证，以确保药物的安全性和有效性。
琼脂糖电泳操作PROTOCOL一、材料、试剂和器材1、DNA样品。
2、琼脂糖。
3、5×TBE缓冲液：使用时十倍稀释。
4、溴化乙锭（EB）储备液：10mg/ml水溶液。
5、上样缓冲液。
6、DNA分子量标准。
7、电泳槽、电泳仪、紫外检测仪、微量加样枪。
二、操作步骤1、琼脂糖凝胶液配制称取1克琼脂糖，置于干净的三角瓶中，加入100ml 0.5×TBE缓冲液，在微波炉中加热1min，使之彻底融化。
之后，加入3 µlEB储备液混合（终浓度0.5pmg/ml），即制成1％的琼脂糖溶液。
此为示例，琼脂糖浓度应根据实际要求配置。
2、凝胶板的制备将电泳装置所配备的塑料胶托盘放置在胶槽中，注意托盘的放置位置。
水平地放在桌面上。
在胶模的标有黑色条带的一端放上样品梳。
将上述琼脂糖溶液放在室温下，待温度下降至60℃时，倒在凝胶板模具上，室温放置0.5小时左右。
待琼脂糖彻底凝固后，轻轻拔出样品梳。
3、加样将凝胶连同塑料托盘一起放置到电泳槽中，加入0.5×TBE缓冲液，使缓冲液淹过凝胶表面约1mm。
用微量加样品吸取0.5-1 µg DNA样品，按一定（上样缓液：DNA样品＝1：10）的比例（体积/体积）加入上样缓冲液。
混合后吸取10－20ul小心地加到凝胶板上的加样孔中。
按同样的方法在附近的加样孔中加入已知分子量的标准DNA，作为参照。
4、电泳与观察加样的一端接负极，另一端接正极。
以适当电压电泳0.5－1小时。
当指示剂泳动到距凝胶前沿约1厘米的位置时，停止电泳。
带上手套将凝胶板出，置于紫外分析仪下观察和照相。
安全注意：试验中使用的溴化乙锭（EB）为强致癌剂！试验中所有的物品，包括烧杯、胶、手套都不要带到他处！。
药敏试验用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。
但由于药敏试验要求比较严格，条件比较高，仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作，一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。
针对这个问题，农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践，逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。
目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test法），和自动化仪器等。
目录药物的敏感性也有差异。
长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参考，并提高疗效。
农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。
编辑本段药敏试验分类一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
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