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琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)|琼脂稀释法琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)2008-01-27 22:27:10 相关论文相关书籍Tags：微生物学琼脂稀释法测定抗菌药物最低抑菌浓度(MIC)琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
琼脂的溶解方法
琼脂是一种常用的实验室试剂，它在生物学、生物化学、分子生物学
等领域中被广泛使用。
在实验中，我们经常需要将琼脂溶解成液态状态，以便于后续操作。
下面是一种简单易行的琼脂溶解方法。
材料：
1. 琼脂粉
2. 烧杯或容量瓶
3. 蒸馏水或去离子水
步骤：
1. 准备一个干净的烧杯或容量瓶。
2. 根据需要加入适量的琼脂粉。
通常情况下，每100ml液体中加入0.5-1g的琼脂粉即可。
3. 加入足够的蒸馏水或去离子水，搅拌均匀。
注意不要加入过多的水，否则会导致溶液过于稀释。
4. 将混合物加热至沸点，并持续搅拌直到琼脂完全溶解为止。
注意不
要让溶液沸腾过度，以免出现气泡和泡沫。
5. 将溶液倒入需要使用的容器中，并放置冷却至室温。
在冷却过程中，溶液会逐渐凝固成为琼脂凝胶。
注意事项：
1. 在制备琼脂溶液时，一定要使用干净的烧杯或容量瓶，并尽可能避免异物的污染。
2. 加入水时，最好使用蒸馏水或去离子水，以免影响实验结果。
3. 加热过程中要持续搅拌，以免出现结块和沉淀。
4. 在倒入容器之前，要等待溶液冷却至室温，以免出现变形和气泡。
总之，以上是一种简单易行的琼脂溶解方法。
在实验中使用时，请根据具体情况进行调整，并严格按照操作规程进行操作。
琼脂稀释法测抑菌率一、试验原理目的在琼脂培养基中加入不同浓度的抑菌剂，配置成抑菌剂培养基，凝固后涂抹一定数量的菌悬液，根据增长情况计算出抑菌率。
最好在已知抑菌剂MIC的前体下做本试验减少无效操作。
二、试验器材、化学试剂及菌种培养皿、试管、5uL-50uL 微量移液器、100uL-1000uL微量移液器、以及配套的枪头、10mL离心管、麦氏比浊管、涂布棒、量杯、超净工作台、高压灭菌锅、鼓风干燥箱、生化培养箱、MH肉汤培养基、PBS缓冲液、无菌水。
菌种：溶血性链球菌、溶血性葡萄球菌、李斯特菌、结核分枝杆菌、白喉棒状杆菌、吸附性绿脓杆菌、大肠杆菌三、试验准备1、培养基的配置及工器具的灭菌称取营养琼脂培养基42g，蒸馏水900ml。
加热至澄清后，用量杯量取19ml 加入到大试管中，盖好塞子，同PBS缓冲液、无菌水、配套枪头、涂布棒、离心管一同放入高压灭菌锅中灭菌，121℃杀菌25min。
将培养皿用牛皮纸包好和试管一起放入鼓风干燥箱中灭菌，170℃杀菌2h。
实验前超净工作台及操作室使用前需用紫外灯杀菌30min以上。
2、抑菌剂的配置抗菌药物的溶解与稀释，一般情况下，水溶性抗菌药物采用灭菌蒸馏水溶解，而对于不溶或者难溶于水的抗菌药物要根据其特性，采用甲醇，缓冲液，NaOH 溶液，DMSO溶液等，尽量将抗菌药物溶解后用蒸馏水或者缓冲液稀释后，作为抗菌药原液。
3.、菌悬液的配置从冰箱取出需要测试的菌种活化0.5h 后，加入5mL 的PBS缓冲液将斜面上，在手掌上轻轻振打80次，使菌株完全冲下，倒入试管中轻轻摇匀。
吸取1mL 的菌液加入到4mL 的PBS缓冲液中，再吸取1mL稀释的菌悬液依次进行5倍梯度稀释，选择108CFU/mL左右的菌悬液悬浮液（对比0.5麦氏比浊管），将选好的菌悬液十倍系列稀释后选第四支试管（即浓度约为103CFU/mL左右的菌悬液）待用。
四、试验步骤1、吸取2ml配置好的各稀释度抑菌剂加入到培养皿中，倒入冷却后试管中的培养基后迅速摇匀，（顺时针三圈逆时针三圈），待凝固。
琼脂稀释法琼脂稀释法是一种常用的生物学实验方法，用于测定某种物质的活性和数量，包括蛋白质、抗原、抗体、染色体、微生物、核酸、细胞、等等。
它通过测定几种不同浓度的溶液的粘度来测定某种物质的活性和数量。
通过测定某比例琼脂溶液的粘度，便可以推断或测定该物质的活性和数量。
琼脂稀释法非常容易进行，原理也很简单：琼脂稀释法利用琼脂溶液测定某种物质（例如蛋白质、抗原、抗体）的活性和数量。
琼脂溶液的粘度随着溶质（即活性和数量）的增加而增加，随着溶质的减少而减少。
因此，通过测定某比例琼脂溶液的粘度，便可以推断或测定该物质的活性和数量。
琼脂稀释法的优势在于测定速度快、可以进行连续的快速稀释测定，并且API溶液和非API溶液均可测定，还可以实现高灵敏度的测定。
琼脂稀释法的缺点在于结果与标准值之间偏差比较大，而且试剂用量也比较大，需要特殊的设备进行测定。
琼脂稀释法用于做什么，首先要明确琼脂稀释法的原理，也就是通过琼脂溶液的粘度来测定活性和数量。
由于琼脂稀释法的灵敏度较高，可以进行高灵敏度的测定，所以它常常用于生物学实验、微生物分析、免疫学实验、蛋白质分析、检测病毒、抗原定量、细胞测定、基因定位等实验。
琼脂稀释法在实验中非常重要，因为它可以帮助科学家准确测定某些物质的活性和数量，进而推断出该物质对实验结果的影响。
此外，它还可以用于检测特定微生物、抗原、抗体、细胞等，以及评价抗生素等药物的有效性。
琼脂稀释法是实验中最为广泛的方法之一，它早已被广泛应用于生物学实验、免疫学实验、蛋白质分析、检测病毒、抗原定量、细胞测定、基因定位等实验中。
但是由于结果与标准值之间偏差较大，以及需要特殊的设备，所以它的应用仍然受到了一定的限制。
因此，在应用琼脂稀释法之前，科学家们有必要考虑其应用的可能性和局限性，以便于更好地发挥它的功效。
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50℃左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。
本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌；缺点是制备含药琼脂平板费时费力。
1.培养基制备使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
淋病奈瑟菌使用GC琼脂基础加1%添加剂；其它链球菌使用含5%（V/V）绵羊血的MH琼脂（当试验磺胺药时，使用溶解的马血）。
2.含药琼脂平板制备根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50℃水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。
通常按1∶9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。
配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可贮存5天。
3.接种物制备与接种制备浓度相当于0.5麦氏标准比浊管的菌悬液，再1∶10稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约1~2μl）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU，形成直径为5~8mm的菌斑。
接种好后置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐药葡萄球菌、万古霉素耐药肠球菌孵育时间应满24h），观察结果。
奈瑟菌属、链球菌属细菌置5%二氧化碳、幽门螺杆菌置微需氧环境中孵育。
4.结果判断将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。
在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺琼脂平板上可见轻微细菌生长，与生长对照比较抑制80%以上细菌生长的最低药物浓度作为终点浓度。
如果出现有2个以上菌落生长于含药浓度高于终点水平的琼脂平板上，或低浓度药物琼脂平板上不长而高浓度药物琼脂平板上生长现象，则应检查培养物纯度或重复试验。
