连续稀释分离法

四大类微生物菌落形态的比较和识别一、实验目的和内容目的：1 熟悉四大类微生物菌落的主要特征2 掌握识别四大类微生物菌落形态的依据和要点，并应用于识别未知菌落内容：1 观察已知的四大类微生物菌落特征2 辨认未知的四大类微生物菌落特征实验原理掌握识别四大类微生物菌落形态的要点对于从事菌种的筛选、杂菌的识别和菌种鉴定等项工作都有重要意义。

菌落是由某一微生物的少数细胞或孢子在固体培养基表面繁殖后所形成的子细胞群体，因此，菌落形态在一定程度上是个体细胞形态和结构在宏观上的反映。

由于每一大类微生物都有其独特的细胞形态，因而其菌落形态特征也各异。

在四大类微生物的菌落中，细菌和酵母菌的形态较接近，放线菌和霉菌形态较相似。

菌和酵母菌的异同细菌和多数酵母菌都是单细胞微生物。

菌落中各细胞间都充满毛细管水、养料和某些代谢产物，因此，细菌和酵母菌的菌落形态具有尖似的特征，如湿润、较光滑、较透明、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等。

它们之间的区别如下：细菌：由于细胞小，故形成的菌落也较小，较薄、较透明且有“细腻”感。

不同的细菌会产生不同的色素，因此常会出现五颜六色的菌落。

此外，有些细菌具有特殊的细胞结构，因此，在菌落形态上也有所反映，如无鞭毛不能运动的细菌其菌落外形较圆而凸起；有鞭毛能运动的细菌其菌落往往大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边缘从不规则、缺刻状直至出现迁居性的菌落，例如变形杆菌属和菌种。

具有荚膜的细菌其菌落更粘稠、光滑、透明。

荚膜较厚的细菌其菌落甚至呈透明的水珠状。

有芽孢的细菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皱褶等特征。

细菌还常因分解含氮有机物而产生臭味，这也有助于菌落的识别。

酵母菌：由于细胞较大（直径约比细菌大10倍）且不能运动，故其菌落一般比细菌大、厚而且透明度较差。

酵母菌产生色素较为单一，通常呈矿蜡色，少数为橙红色，个别是黑色。

微生物分离纯化的方法微生物分离纯化的方法是一种将复杂微生物混合物分离为纯化菌株的过程。

这是研究微生物多样性，发现新的微生物物种，以及从微生物中获得新的代谢产物等研究领域的关键步骤之一、以下是几种常见的微生物分离纯化的方法：1.常规分离法：常规分离方法是一种最常用的微生物分离技术。

该方法基于微生物菌落形态和特性的观察和比较，通过选取和分离菌落来获取纯化的微生物。

常见的常规分离方法包括移植法、罐培养法和环扩散法等。

2.筛选培养基：筛选培养基是通过优化微生物的培养条件，选择能够选择性生长其中一特定微生物的培养基。

这种方法常用于分离特定类型的微生物，例如革兰氏阳性菌、细菌等。

常见的筛选培养基包括含有特定抗生素、特定营养物质或特定pH值的培养基。

3.稀释分离法：稀释分离法是一种通过连续稀释样品来使微生物单个分离的方法。

首先，将样品连续稀释，然后在培养基上接种稀释液，并进行培养。

稀释分离法适用于稀释样品中含有少量微生物的情况，可以帮助分离纯化微生物。

4.毛细管扩散法：这是一种通过毛细管将微生物分离到培养基上的方法。

首先，将培养基注入玻璃毛细管中，并将其将培养基表面用火焰加热，使其与空气接触。

然后，将毛细管插入样品中，微生物通过毛细管扩散到培养基中。

这种方法使用较少的培养基和试剂，能够直接从样品中获得纯化的微生物。

5.细胞分离技术：细胞分离技术是通过分离微生物细胞来纯化微生物的方法。

这种方法包括细胞离心、滤膜分离和凝胶过滤等。

通过这些方法，可以将微生物细胞从细胞混合物中分离出来，从而获得纯化的微生物。

以上是几种常见的微生物分离纯化的方法。

根据具体的实验目的和样品特点，可以选择合适的方法进行微生物的分离纯化。

这些方法在微生物研究和应用中起着至关重要的作用，有助于深入了解微生物的多样性和功能。

土壤、水质检测——放线菌、霉菌、大肠杆菌的分离方法微生物因为体积小、质量轻、适应性强、繁殖能力强等特点，广泛分布于自然界中。

它们存在于食品、化妆品、饲料、环境等人们能触及的各个角落中。

某些微生物对产品的污染，不仅影响到产品本身的质量，更严重的是它危及消费者的健康和安全。

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以下介绍几种菌的分离方法：一、从土壤中分离放线菌1.制作高氏一号培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取土壤10克，放入装有100毫升无菌水的锥形瓶中，并加入10%酚10滴，以抑制细菌生长。

振荡10分钟，制成10-1菌悬液。

按照连续稀释分离法，进一步制成10-3菌悬液。

3.用移液管吸取0.1毫升10-3菌悬液，注入平板培养基上，用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整个培养基上。

然后将培养皿倒置于25-30℃温箱中，培养7-10天，培养基上会出现微生物菌落。

如果菌落的硬度较大，干燥致密，且与基质紧密结合，不易被针挑起，这就是放线菌菌落。

4.挑取放线菌菌落，接种于斜面培养基上。

二、从土壤中分离霉菌1.制作豆芽汗葡萄糖培养基，并添加80%乳酸数滴，以抑制细菌生长。

将培养皿中，凝成平板，待用。

2.称取10克土壤，按上述分离放线菌的方法制成10-4或10-5的菌悬液。

3.取0.1毫升菌悬液注入培养皿内培养基上，用玻璃刮刀涂抹均匀。

然后将培养皿倒置于2 5-30℃温箱内培养3-4天。

培养基上会出现微生物菌落。

霉菌菌落常长成绒状、棉絮状或蜘蛛网状，可根据这一特征寻找霉菌菌落。

4.挑取培养皿内的霉菌菌落接种于斜面培养基上三、从饮水中分离大肠杆菌1.制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。

2.用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1:10稀释。

菌落分离纯化的方法
菌落分离纯化是微生物学中常用的一种方法，用于从混合培养基中分离出纯种细菌。

以下是一些常见的菌落分离纯化方法：
1. 灭菌分液法，将混合培养基均匀涂布在琼脂平板上，培养后在形成的菌落中选择单个菌落，用接种环在无菌条件下转移到新的琼脂平板上，经过培养后得到纯种菌落。

2. 稀释分液法，将混合培养基连续稀释后，在琼脂平板上均匀涂布，使得每个菌落都来自于单个细胞，然后进行培养，最终得到纯种菌落。

3. 过筛法，将混合培养基均匀涂布在琼脂平板上，培养后用无菌玻璃珠滚动在菌落上，使得每个菌落只有一个细胞，然后用接种环转移到新的琼脂平板上培养，得到纯种菌落。

4. 挑拣法，在混合培养基上直接挑选出单个菌落，然后用接种环转移到新的琼脂平板上培养，得到纯种菌落。

这些方法都可以用于分离纯化菌落，选择合适的方法取决于具
体的实验要求和操作技能。

值得注意的是，在进行菌落分离纯化时，需要严格遵守无菌操作规范，以避免外源微生物的污染。

一、实验目的1. 学习和掌握微生物分离接种的基本原理和方法；2. 熟悉微生物纯种培养技术；3. 提高无菌操作技能。

二、实验原理微生物分离接种是微生物学实验中的一项基本操作，其主要目的是从混杂的微生物群体中分离出所需的纯种微生物。

实验原理主要包括以下两个方面：1. 稀释分离法：通过将微生物群体在适宜的培养基上进行稀释，使每个稀释度内仅含有一个或几个微生物细胞，然后选取单菌落进行培养，从而达到分离纯化的目的。

2. 选择培养法：根据微生物对特定条件的适应性，选择合适的培养基和培养条件，使所需的微生物生长繁殖，而抑制其他微生物的生长，从而实现分离纯化。

三、实验材料1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌等；2. 培养基：牛肉膏蛋白胨固体培养基、琼脂糖固体培养基、液体培养基等；3. 试剂：无菌水、无菌生理盐水、无菌酒精、无菌接种环等；4. 仪器：无菌操作台、酒精灯、接种环、接种针、显微镜等。

四、实验步骤1. 准备工作（1）将无菌操作台、酒精灯、接种环、接种针等实验器材进行消毒处理；（2）将牛肉膏蛋白胨固体培养基和琼脂糖固体培养基在无菌条件下进行配制，并倒入培养皿中，待凝固后备用；（3）将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽胞杆菌等菌种在无菌条件下进行复苏，并制备成菌悬液。

2. 微生物分离接种（1）稀释分离法① 取无菌接种环，蘸取菌悬液，在牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上进行划线；② 重复上述操作，使菌悬液在平板上形成一系列平行线；③ 将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时；④ 观察菌落生长情况，选取单菌落进行纯化培养。

（2）选择培养法① 将菌悬液接种于琼脂糖固体培养基平板上；②在平板上加入适量抗生素，使平板成为选择培养基；③ 将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时；④ 观察菌落生长情况，选取单菌落进行纯化培养。

3. 纯化培养（1）将单菌落挑取至新的牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上；（2）将平板倒置，放入37℃恒温培养箱中培养24小时；（3）观察菌落生长情况，确认纯化成功。

微生物纯种的分离方法自然界中的微生物总是杂居在一起，即使一粒土或一滴水中也生存着多种微生物。

要研究其中的某一种微生物，首先必须将它分离出来。

下面介绍几种纯种微生物的分离方法。

平板划线分离将已经熔化的培养基倒入培养皿中制成平板，用接种环沾取少量待分离的材料，在培养基表面平行或分区划线(图5-5)，然后，将培养皿放入恒温箱里培养。

在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。

液体稀释法将待分离的样品经过大量稀释后，取稀释液均匀地涂布在培养皿中的培养基表面，培养后就可能得到单个菌落。

利用选择培养基进行分离不同的微生物对不同的试剂、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用这些特点可配制出适合某种微生物生长而限制其他微生物生长的选择培养基。

用这种培养基来培养微生物就可以达到纯种分离的目的。

菌丝尖端切割这种方法适于丝状真菌。

用无菌的解剖刀切取位于菌落边缘的菌丝的尖端，将它们移到合适的培养基上培养后，就能得到新菌落三、细菌的分离与计数（一）背景知识介绍1.细菌的分离与纯化自然界的细菌总是以杂居的方式存在，如土壤、水、空气等都分布着种类繁多的细菌。

我们如何知道这些杂居的细菌是哪种细菌呢？这就需要将这些带菌的材料中混杂的细菌，经过稀释，使其分散成单个存在的菌体，在固体培养基平板上，长成肉眼可见并具有一定特征的菌落。

这些菌落分离出来，进行纯培养。

所谓纯培养即在一个培养物中，所有的细菌都是由一个细菌分裂繁殖而产生的后代。

这种获得单一菌株纯培养的的方法称为细菌的分离。

常用的分离方法有稀释法和划线法。

（二）课题提出：我们的身体和周围的环境有大量的细菌，细菌与我们的生活和健康密切相关。

但是，自然存在的细菌都混杂在一起，我们要想研究和了解各种细菌的形态结构和功能，就要对其进行分离纯化，才能进行深入的研究。

如对一些致病菌的研究，食品卫生的研究，微生物工业的研究等。

在研究过程中，有时需要调查和检测细菌密度，则需要统计细菌的数量。

微生物分离原理
微生物分离是一种常用的实验方法，用于分离和培养单一的微生物菌株。

其原理主要包括以下几个方面。

1. 稀释法：通过将微生物污染物或样品进行一系列的稀释，依靠概率的随机分布，使微生物个体分散在培养基上。

然后，通过无菌的针筒或平板涂布法将其分散均匀后进行培养。

2. 针对性分离法：针对自然样品中特定的微生物，根据其特性选择特定的培养基，包括特异的生理反应、生长因子等，并结合不同的温度、pH等环境条件，使目标微生物菌株生长而其他的微生物不能生长。

3. 选择培养基法：针对特定微生物的特异性要求，设计配制一种特定的培养基，只有特定的微生物能够在该培养基上生长而其他的微生物不能生长。

4. 纯化分离法：通过连续传代培养，将混合培养物中的微生物不断分离纯化，直至获得单一的纯培养物。

5. 涂布法：通过将微生物样品均匀涂布在培养基表面，利用微生物的生长特点形成独立的菌落，从而分离出单一的微生物。

6. 降温法：依靠微生物的生长特性和温度敏感性，通过一定的温度处理，使目标微生物因为生长受到抑制而其他微生物得到排除。

通过以上不同的分离方法，可以有效地从混合的微生物中获取纯净的单一微生物菌株，为后续的实验研究提供可靠的基础。

植物病原菌的分离一、实验原理植物患病组织内的真菌菌丝体，如果给予适宜的环境条件，除个别种类外，一般都能恢复生长和繁殖。

植物病原菌的分离就是指通过人工培养，从染病植物组织中将病原真菌与其它杂菌相分开，并从寄主植物中分离出来，再将分离到的病原菌于适宜环境内纯化，这个过程总称植物病菌的分离培养。

植物病原真菌的分离一般都是采用组织分离法，就是切取小块病组织，经表面消毒和灭菌水洗过后，移到人工培养基上培养。

二、实验目的植物病原菌的分离培养是植物病理学实验最基本的操作技术之一，它对原害鉴定，病原形态观察、植物病害接种体的培养等方面都是经常使用的研究手段。

通过本实验，要求植物病原菌分离培养的一般原则和方法。

三、实验材料及准备1.分离材料：梨黑斑病（Alternaria kikuchiana），柿树圆斑病（Pestnlotia sp）及杉木炭疽病（Glomerella cingolata）新发病的病叶；杨树烂皮病（Cytospora chrysosperma）国槐腐烂病（Dothiorella sp.）的带有新病斑的枝条；油松种子。

2.分离用具：酒精灯4个，手术剪4把，眼科镊4把，PDA培养基3瓶，培养皿（Φ9cm）24套，小烧杯（5ml）4个，大烧杯1个，斜面培养基12管，灭菌水4瓶，75%酒精瓶1个（内放脱脂棉球）0.1%升汞瓶1个，5%乳酸瓶（60ml）1个，火柴1盒，湿、干纱布各4张。

四、实验方法及步骤（一）分离前的准备工作：1.工作环境的清洁和消毒分离培养一般在无菌室、无菌箱或无菌工作台（超净工作台）上进行，无菌室和无菌箱要经过喷雾除尘，并用药物或紫外线照射消毒（常用消毒药物为70%酒精，2%煤酚皂液，5%石炭酸液等喷雾。

若用紫外线灯照射则需20-30分钟）。

在没有上述设备条件时，在清洁房间里关闭门窗，避免空气流动，经过喷雾除去空气及地面灰尘后进行操作，也可获得较好的结果。

工作前擦净桌面，最好铺上湿纱布。