荧光原位杂交技术原理
荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization，FISH）
是一种用于检测和定位靶标DNA序列的方法。
其原理是利用
荧光标记的DNA探针与靶标DNA特异性结合，通过荧光显
微镜观察细胞核内荧光信号的强度和位置，从而确定目标
DNA序列在细胞核中的位置和数量。
荧光原位杂交技术的步骤包括标记DNA探针、固定细胞样品、使细胞核开放透明化、探针与目标DNA杂交、洗涤去掉无特
异连接的探针、显微镜观察和分析。
在标记DNA探针的过程中，将目标DNA序列特异性引物和
荧光标记的核苷酸引物结合，通过聚合酶链反应使DNA探针
荧光标记。
标记DNA探针可以选择性地与目标DNA序列进
行互补结合。
固定细胞样品后，可以通过化学方法将细胞膜破裂并使细胞核透明化，使DNA探针能够更好地进入细胞核。
随后将标记好
的DNA探针加入样品中，在适当的温度下进行DNA杂交反应。
如果目标DNA序列在细胞核中存在，则DNA探针与目
标DNA序列结合，形成探针-目标DNA复合物。
在杂交反应后，需要进行洗涤步骤以去除无特异连接的DNA
探针。
这样可以提高荧光信号的特异性和强度。
最后，利用荧光显微镜观察样品中的荧光信号。
荧光探针与目标DNA序列结合后会发出特定颜色的荧光信号，可以通过观
察荧光信号的位置和强度来确定目标DNA序列在细胞核中的位置和数量。
荧光原位杂交技术可以应用于医学诊断、基因定位等领域，成为研究细胞遗传学和基因组学的重要工具。
荧光原位杂交技术检测宫颈癌及癌前病变组织中hTERC基因的扩增及临床意义刘爽;李亚里;姜淑芳;张咏梅;吕亚莉;钟梅;刘爱军【摘要】目的检测子宫颈病变组织中人端粒酶RNA基因(hTERC)的异常扩增情况,探讨其临床病理学意义.方法收集不同宫颈病变组织195例,包括慢性宫颈炎33例,CIN Ⅰ级34例,CINⅡ—Ⅲ级37例,宫颈鳞癌30例,宫颈腺癌61例.应用双色荧光原位杂交(FISH)技术检测宫颈病变组织中hTERC基因的异常扩增情况,并分析其与临床病理学参数的关系.结果 hTERC基因扩增的阳性率分别为:慢性宫颈炎3.03％,CIN Ⅰ级29.41％,CINⅡ—Ⅲ级72.97％,宫颈鳞癌100％,宫颈腺癌91.8％.宫颈鳞癌及腺癌hTERC基因扩增率明显高于CIN Ⅰ级、CINⅡ—Ⅲ级(P＜0.05),CINⅡ—Ⅲ级hTERC扩增率显著高于CIN Ⅰ级(P＜0.05),但宫颈鳞癌与腺癌hTERC基因扩增率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论应用FISH技术检测hTERC基因的异常扩增可作为组织学诊断困难病变的确诊、病变预测及治疗后风险评估手段.%Objective To detect the human telomerase RNA gene (hTERC) amplification in cervical lesions, and explore its clinical significance. Methods The tissues of the cervical lesions were collected from 195 patients, including 33 of chronic cervicitis, 34 of CIN I , 37 of CIN II - ?, 30 of cervical squamous cell carcinoma, and 61 of cervica1 adenocarcinoma, and abnormal hTERC was detected with amplification of fluorescence in situ hybridization (FISH). The relationship between hTERC gene amplification and clinicopathological parameters was analyzed. Results Among the 195 patients, the positive rate of hTERC gene amplification was 3.03% (1/33), 29.41% (10/34), 72.97% (27/37), 100% (30/30), 91.8% (56/61)in chronic cervicitis, CIN I , CIN D-HI, cervical squamous cell carcinoma and cervical adenocarcinoma respectively, and the results showed that hTERC amplification rate was significantly higher in group CIN II- ? than in group CIN 1 (P<0.05) with statistical significant difference between cervical squamous cell carcinoma and adenocarcinoma, and also between CNI I and CNI II-III (P<0.05). However, no obvious difference in hTERC amplication rate was found between squamous cell carcinoma and adenocarcinoma (P>0.05). Conclusion Detection of gene amplification by FISH technology can be used as a means for accurate diagnosis and prediction of the histologically difficult-to-diagnose lesion and for risk assessment after treatment of cervical precancerous lesions.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2012(037)006【总页数】4页(P598-601)【关键词】原位杂交,荧光;宫颈上皮内瘤样病变;宫颈肿瘤;基因,hTERC【作者】刘爽;李亚里;姜淑芳;张咏梅;吕亚莉;钟梅;刘爱军【作者单位】100853北京解放军总医院妇产科;100853北京解放军总医院妇产科;100853北京解放军总医院妇产科;100039北京武警总医院妇产科;100853北京解放军总医院病理科;100853北京解放军总医院病理科;100853北京解放军总医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R711.74宫颈癌是危及妇女生命的主要疾病之一，且近年来在全球范围内均有年轻化趋势。
应用荧光原位杂交技术检测宫颈脱落细胞的TERC基因表达摘要】目的探讨应用FISH技术检测人类染色体端粒酶( TERC) 基因表达及其在子宫颈病变的临床意义。
方法采用双色荧光原位杂交技术(FISH) 以TERC /CSP3 DNA探针检测TERC 基因在83例宫颈脱落细胞中TERC 基因拷贝数的变化, 并结合病理诊断结果相比对分析。
结果 TERC基因在炎症/CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌患者宫颈脱落细胞中表达率分别是3.4%、52.3%、71.4%、和100%，TERC基因阳性率在炎症/CINⅠ级与CINⅡ级、CINⅢ级及子宫颈癌中有显著性差异(P<0.05)。
随着病变程度增加,TERC基因表达率增加，在炎症/CINⅠ级与CINⅡ级、CINⅢ级及子宫颈癌中TERC基因异常扩增细胞数的阳性率分别3.6%、6.2%、9.1%和17.8%。
TERC基因异常扩增细胞数的阳性率炎症/CINⅠ组明显低于CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组(P<0.005)。
TERC基因平均扩增拷贝数随着病变级别增高也在增加，在炎症/CINⅠ组为2.04%、CINⅡ组2.32%、CINⅢ组2.91%和宫颈癌组3.24%,在炎症/CINⅠ组与CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组以及CINⅡ组和CINⅢ组和宫颈癌组均有显著差异(P<0.05)。
结论 TERC 基因参与宫颈癌的发生发展，是一个重要的肿瘤标记物, 应用F ISH技术检测TERC基因的表达可作为监测宫颈病变进展有预测意义。
【关键词】荧光原位杂交宫颈脱落细胞 TERC基因细胞遗传学宫颈癌是最常见的妇科恶性生殖系统肿瘤之一。
世界范围内, 每年约有50万的宫颈癌新发病例,其中80%的病例来自于发展中国家[1，2]，近年来,发病率呈上升趋势且发病年龄趋于年轻化。
早期诊断和治疗是改善患者预后的关键。
美国国立卫生研究院直接领导的针对子宫颈癌的研究表明,子宫颈细胞由非典型性发育异常向子宫颈癌转变的过程中几乎都伴有人类染色体末端酶( TERC基因图位于3q26.3)基因的扩增。
荧光原位杂交常见问题解析荧光原位杂交常见问题解析1.如何保证荧光原位杂交（FISH）操作中的温度？最好的办法是用荧光原位杂交的专用仪器进行操作，如Vysis的Hybrit FISH杂交仪。
如果是手工操作，(1)对荧光原位杂交操作过程中可能使用的一些仪器（如水浴锅、孵箱）进行温控检查，不符合要求的进行更换（疾病诊断中的探针要求温控精度在0.5度以内）;(2)尽可能地保持环境温度在20度以上;(3）针对需要预热以达到要求温度的试剂，在使用前必须使用温度计对其进行测温(4)同时检测的样本最好不超过4块，且操作中一定要迅速。
实验人员往往忽视一些小部件（诸如载玻片和盖玻片）的温度。
尤其是在冬季，盖玻片本身温度就低，加之探针的量本就不多（10ul），这样事先没有预热的盖玻片会使得杂交液的温度急剧下降，从而严重降低探针和DNA的杂交效率。
2.能对同一样本进行多次的荧光原位杂交操作吗？一般情况下，如果操作没有得到理想的结果，是可以将探针洗涤然后进行再次的杂交的。
如果使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。
针对不同的样本，处理方法略有不同。
外周血样本的处理：1、使用镊子小心地揭去杂交区的盖玻片2、将样本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分钟以便充分脱水。
待片子风干后就可以进行二次杂交了。
二次杂交中建议将变性的时间缩短一半，但不能少于3分钟。
如果对同一样本还要进行三次杂交，变性的时间就无需减少了。
对于多次杂交，复染液浓度的降低有利于保持探针的亮度。
曾有报道称在同一样本片上进行了多达8次的FISH操作。
如何配制各种试剂呢？根据我们的经验，强烈推荐使用灭菌去离子水配制各种所需的试剂。
另外，配制后使用pH计检测试剂是否符合实验要求。
配制的各种试剂都要采用超纯级要求。
每次荧光原位杂交（FISH）实验使用新的试剂，旧的试剂最好弃置不用。
洗脱液和变性液当天用当天配。
3.使用荧光显微镜观察结果时，最初有清晰而明亮的信号，但随后信号急剧衰减，几分钟后信号就消失了。
