疟原虫检验技术

疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。

一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。

玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。

皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。

记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。

（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。

载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。

如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。

用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。

3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。

如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。

二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。

疟疾实验室检查方法疟疾是一种由疟原虫引起的传染病，该病在全球范围内广泛分布，并造成了大量的疾病和死亡。

为了及时准确地诊断和治疗疟疾，实验室检查方法起着至关重要的作用。

本文将介绍疟疾实验室检查的常见方法。

1. 血涂片检查血涂片检查是最常用的疟疾实验室检查方法之一。

该方法通过在玻片上涂抹患者的血液样本，并使用特殊的染色剂染色，然后在显微镜下观察。

疟原虫在血液中的形态特征使其能够与其他细胞区分开来，从而能够准确地诊断疟疾。

血涂片检查的优点是简单易行，结果迅速可靠。

然而，该方法需要经过专业人员的训练和经验，以确保结果的准确性。

2. 快速诊断试纸检测快速诊断试纸检测是一种简便快速的疟疾实验室检查方法。

该方法基于抗原-抗体反应原理，通过在试纸上加入患者血液样本，检测疟原虫抗原或抗体的存在与否。

试纸通常具有几个测试线，每个测试线代表一种疟原虫类型。

根据试纸上测试线的出现情况，可以快速诊断疟疾的类型。

快速诊断试纸检测的优点是操作简单，结果迅速，适用于一线医疗机构和偏远地区的疟疾筛查。

3. 分子生物学检测分子生物学检测是一种高灵敏度和高特异性的疟疾实验室检查方法。

该方法通过提取患者血液中的疟原虫DNA或RNA，然后使用特定的引物和荧光探针进行PCR扩增和实时荧光检测。

分子生物学检测能够检测到非常低浓度的疟原虫，具有高度的准确性和敏感性。

然而，该方法需要复杂的实验室设备和专业人员的操作技术，限制了其在资源匮乏地区的应用。

4. 免疫荧光检测免疫荧光检测是一种基于抗原-抗体反应的疟疾实验室检查方法。

该方法通过在患者血液样本中加入特定的荧光标记抗体，与疟原虫抗原结合形成复合物，然后在荧光显微镜下观察。

免疫荧光检测可以同时检测多种疟原虫类型，并具有高度的特异性和敏感性。

然而，该方法需要昂贵的设备和专业人员的操作技术，限制了其在一线医疗机构和偏远地区的广泛应用。

总结起来，疟疾实验室检查方法包括血涂片检查、快速诊断试纸检测、分子生物学检测和免疫荧光检测。

疟原虫半定量计数方法引言疟疾是一种由疟原虫引起的传染病，全球范围内仍然存在高发和流行的地区。

因此，准确快速地检测疟原虫的数量对于疟疾的诊断和治疗非常重要。

疟原虫的半定量计数是一种常用的方法，本文将详细介绍该方法的原理、步骤以及优缺点。

二级标题1：疟原虫半定量计数方法的原理三级标题1：荧光显微镜技术在疟原虫半定量计数方法中，荧光显微镜技术是一种常用的方法。

该方法基于荧光显微镜的原理，通过特殊的荧光染料，使疟原虫在显微镜下呈现出特定的荧光信号。

三级标题2：实时荧光定量PCR技术实时荧光定量PCR技术也是疟原虫半定量计数的一种常用方法。

该方法通过PCR扩增疟原虫的DNA，并使用荧光标记探针或SYBR Green等荧光染料进行检测。

三级标题3：流式细胞术流式细胞术是疟原虫半定量计数的另一种常用方法。

该方法通过流式细胞术仪器，将疟原虫样品悬浮于液体中，并通过流式细胞术仪器的检测系统，对疟原虫数量进行快速准确的测定。

二级标题2：疟原虫半定量计数方法的步骤三级标题1：样品处理在进行疟原虫半定量计数之前，首先需要对样品进行处理。

样品处理的步骤包括收集样品、制备样品涂片等。

三级标题2：荧光显微镜技术的步骤荧光显微镜技术的步骤包括染色、显微镜观察、图像分析等。

三级标题3：实时荧光定量PCR技术的步骤实时荧光定量PCR技术的步骤包括DNA提取、PCR扩增、荧光检测等。

三级标题4：流式细胞术的步骤流式细胞术的步骤包括样品制备、细胞染色、流式细胞术仪器的设置和数据分析等。

二级标题3：疟原虫半定量计数方法的优缺点三级标题1：优点•精确性高：疟原虫半定量计数方法可以在很短的时间内准确地测定疟原虫的数量。

•灵敏性好：疟原虫半定量计数方法可以检测低浓度的疟原虫。

•可靠性高：疟原虫半定量计数方法的结果可靠且重复性好。

三级标题2：缺点•依赖设备：疟原虫半定量计数方法需要使用特殊的仪器和设备，增加了成本和操作的复杂性。

•需要专业技术人员：疟原虫半定量计数方法对操作人员的技术要求较高，需要专业培训和经验积累。

疟疾检测通常包括以下指标：
1. 血涂片显微镜检查（Thick and Thin Blood Smears）：这是诊断疟疾最传统的方法，通过在显微镜下观察血液涂片中的寄生虫来确定是否感染疟疾以及感染的种类。

2. 快速诊断试验（Rapid Diagnostic Tests, RDTs）：这种方法使用试纸条来检测血液中特定的疟疾抗原，结果通常在15-20分钟内可获得。

3. 聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）：PCR是一种高灵敏度和特异性的分子技术，能够检测血液中极少量的疟疾DNA，适用于确诊、监测治疗效果以及疟疾流行病学研究。

4. 免疫荧光技术（Fluorescence-based Antibody Testing）：这种方法通过荧光标记的抗体与寄生虫特异性抗原结合，在荧光显微镜下进行检测，以确定感染。

5. 血清学检测：通过检测血液中针对疟原虫的特异性抗体，可以帮助诊断疟疾，特别是在急性期之后。

疟疾的检测不仅需要准确的实验室方法，还需要综合临床症状和患者的旅行史等信息进行综合判断。

疟原虫检验技术一、疟原虫的生物学特征疟原虫是一类单细胞真核生物，寄生在人类和其他脊椎动物的红细胞内。

常见的疟原虫种类包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。

疟原虫的生活史包括在人体内的无性生殖和在蚊体内的有性生殖两个阶段。

在人体内，疟原虫经历了肝细胞内的红外期和红细胞内的红内期发育过程。

了解疟原虫的生物学特征对于选择合适的检验方法具有重要意义。

二、疟原虫检验技术的分类1、显微镜检查法这是疟原虫检验的经典方法，包括薄血膜涂片和厚血膜涂片检查。

薄血膜涂片用于疟原虫形态学观察，可鉴定疟原虫的种类；厚血膜涂片则提高了疟原虫的检出率。

在显微镜下，观察疟原虫的形态、大小、细胞核和细胞质的特点，以及疟色素的分布等，从而确定是否感染疟原虫以及感染的种类。

2、免疫学检测法（1）抗原检测利用免疫层析技术检测患者血液中的疟原虫抗原。

这种方法操作简便、快速，适用于现场检测和大规模筛查。

（2）抗体检测检测患者血清中的特异性抗体。

但由于抗体在感染后一段时间才会产生，且抗体检测不能区分现症感染和既往感染，因此在疟疾诊断中的应用相对有限。

3、分子生物学检测法（1）PCR 技术通过扩增疟原虫特定的基因片段来检测疟原虫。

具有高度的敏感性和特异性，能够检测到极低浓度的疟原虫核酸。

（2）核酸杂交技术利用标记的核酸探针与疟原虫核酸进行杂交，从而检测疟原虫。

4、其他检测方法（1）血常规检查疟疾患者可能会出现贫血、白细胞减少等血常规异常。

（2）血生化检查部分疟疾患者可能会有肝肾功能损害，通过血生化检查可以了解相关情况。

三、显微镜检查法的操作步骤1、采血通常采集患者的末梢血或静脉血。

2、制作血涂片薄血膜涂片：将一滴血液滴在载玻片的一端，用推片以 30°－45°角均匀地推成薄而均匀的血膜。

厚血膜涂片：取较多的血液滴在载玻片上，用推片制成较厚的血膜。

3、固定和染色薄血膜涂片自然干燥后，用甲醇固定，然后用吉姆萨染液或瑞氏染液染色。

疟原虫检验技术1）薄血膜（thin blood film）制作方法（1）采血：临床上取病人耳垂或指尖血（2）操作方法：取病人末梢血1滴，置载玻片的中部，使推片和玻片保持30～40度夹角，将血滴在推片边缘展开后，匀速向前推动，即形成舌状血膜。

2）厚血膜（thick blood film）制作方法（1）采血同薄血膜法（2）操作方法：厚血膜可置于薄血膜的另一端。

取病人末梢血2-3滴，自里向外顺着一个方向徐成直径约1cm大小，厚薄均匀的血膜。

厚、薄血膜间用蜡笔画线分开。

充分晾干后，滴加蒸馏水于厚血膜上溶血，将水倾去，晾干后与薄血膜一起染色。

3）固定、染色（1）瑞氏染色：先用蜡笔在血膜两端划上线，以防染液外溢。

瑞氏染液为甲醇溶液，血膜不需预固定、此染色法快速，适于临床检验，但较易褪色，保存时间不长。

滴加瑞氏染液数滴，使之覆盖血膜，约1～2min后血膜被染液中的甲醇固定，再加与染液等量的缓冲液或蒸馏水，轻摇载玻片，使染液与稀释液混匀，3～5min后用缓冲液或自来水从玻片一端冲洗，晾干后镜检。

4）注意事项(1）玻片要洁净，无油脂。

血量适中，推速均匀，以防血膜过厚、过薄或出现条状横纹。

血片在干燥过程中，避免灰尘或苍蝇脱吸。

(2）厚薄皿膜制备在一张载玻片时，应注意在厚血膜溶血前必须先用甲醇固定薄血膜，以避免接触水而使薄血膜上的红细胞溶解。

厚血膜溶血时间不可太长，不要振荡，以防血膜脱落。

(3）染液是甲醇溶液，切忌混入水滴，否则发生沉淀，妨碍染色，故染液发现有沉淀时不可再用。

(4）滴加染料切忌太多，否则染料残渣粘在血膜上无法洗净，影响检查。

加水后必须与染料充分混合，否则发生染色不均。

冲洗血膜时应流水直接将染液冲去，避免染料粘着血膜。

目录第一章疟原虫生活史一、概述二、人体内发育三、蚊体内的发育第二章疟原虫镜下形态一、薄血膜中疟原虫形态二、厚血膜中疟原虫形态第三章显微镜使用及维护一、显微镜的构造二、显微镜使用三、使用注意事项四、显微镜的维护保养第四章血片制作与染色一、血片制作二、血膜的染色第五章疟原虫镜检技术一、血液二、血液中各种正常细胞形态三、薄血膜镜检四、厚血膜镜检五、杂质与疟原虫的鉴别六、疟原虫计数附录：疟原虫图谱第一章疟原虫生活史一、概述疟原虫是疟疾的病原体。

疟原虫为单细胞真核生物，属原生动物亚界顶端复合物门、孢子纲、真球虫目、疟原虫科、疟原虫属。

人体疟原虫有4种：间日疟原虫（Plasmodium vivax）、恶性疟原虫(P.falciparum)、三日疟原虫(P.malariae)和卵形疟原虫(P.ovale)，依次引起间日疟、恶性疟、三日疟和卵形疟。

在我国间日疟较常见，恶性疟次之，但对人体危害较间日疟严重，三日疟偶尔发现，卵形疟已无病例报告。

4种人体疟原虫的生物学特征见表1-1。

疟原虫的发育和繁殖，必须通过脊椎动物与昆虫媒介两个宿主，人体疟原虫的宿主是人和按蚊。

疟原虫在人体分别寄生于肝实质细胞和血液中的红细胞内，在蚊体内则寄生于蚊胃，最后积聚于唾腺。

4种人体疟原虫的生活史基本相同，包括在人体内的红细胞外期和红细胞内期以及在蚊体内的配子生殖和孢子增殖两个阶段。

二、人体内发育疟原虫在人体内的发育分成肝细胞内的发育和红细胞内的发育两个阶段。

（一）红细胞外期按蚊吸人血时，按蚊唾腺中的子孢子随唾液进入人体的末梢血液中，在30分钟内，随血流进入肝脏，在肝实质细胞内发育，进行裂体增殖，此时期称红细胞外期（简称红外期）或肝细胞期（简称肝期），此时期的疟原虫称肝期裂殖体。

成熟肝期裂殖体直径为45～60 m，内含数以万计的肝期裂殖子。

肝期裂殖体成熟致使肝细胞破裂，肝期裂殖子释入血液。

不同种疟原虫的此期所需时间不同，从6～12天不等。