疟原虫形态及镜检技术(欧阳榕)
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疟原虫镜检技术血片制作与染色一、血片制作(一)所需器材1、载玻片:玻片使用前应清洗。
新玻片应先浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟,然后用干净棉巾逐个擦拭,再用清水冲洗干净,晾干,最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。
用于特殊的目的时,最后可将玻片浸泡在95%酒精中5~10分钟,再将玻片擦干擦亮。
已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1~2天,或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1~2小时,再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时,逐个擦去玻片上旧的血膜痕迹,用清水漂洗干净,再将玻片擦干擦亮。
洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内,保存于干燥环境中备用。
2、采血针:使用一次性釆血针。
3、玻片盒:为防止污染和苍蝇吸食血膜,新制作的血膜应放在玻片盒中,厚血膜放置时要保持水平,直到充分干燥。
4、75%酒精棉球:用于采血前后的消毒。
5、记号笔或铅笔:用于玻片上书写号码。
(二)采血部位及取血方法采血部位以耳垂较为合适,也可在手指末端采血,婴儿可从拇趾或足跟取血。
先用75%酒精棉球消毒取血部位后,以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深,然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。
(三)涂制血膜取玻片2张,1张作载片,1张作推片(具有光滑边缘)。
用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部,用推片的左下角刮取血液4~5μl,再用该端中部刮取血液1~1.5μl。
将左下角的血滴涂于载片的中央偏右处,由里向外划圈涂成直径为0.8~1cm的圆形厚血膜(厚度以1个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜)。
用干棉球抹净玻片角上的血渍,然后将推片下缘平抵载玻片的中线,当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时,使两玻片保持25°~35°角,从右向左迅速向前推成舌状薄血膜,制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞,细胞之间互相接触而不相互重叠。
每张载玻片上分别做1个薄血膜,1个厚血膜。
取干净玻片及推片各一张,用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部,用推片的左下角刮取血液4~5μl(约火柴头大小),再用该端中部刮取血液1~1.5μl。
福建省3例输入性卵形疟的实验诊断分析林耀莹;张山鹰;杨发柱;谢汉国;欧阳榕;陈朱云【摘要】目的随着输入性疟疾的增加,通过镜检结合PCR方法,提高检出率.方法福建省2013年成立基因诊断参比实验室,用PCR方法回顾性筛查过往病例时发现有3例卵形疟原虫误诊为间日疟.结果镜检结合PCR扩增和序列分析发现F J1、F J2为卵形疟亚种curtisi和恶性疟混合感染,FJ3为单一卵形疟亚种curtisi感染.结论福建省以往卵形疟报道很少,需要加强诊断培训,镜检结合PCR检查提高检出率.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2015(031)005【总页数】4页(P493-496)【关键词】疟疾;输入性;卵形疟原虫【作者】林耀莹;张山鹰;杨发柱;谢汉国;欧阳榕;陈朱云【作者单位】福建省疾病预防控制中心,福州 350001;福建省疾病预防控制中心,福州 350001;福建省疾病预防控制中心,福州 350001;福建省疾病预防控制中心,福州350001;福建省疾病预防控制中心,福州 350001;福建省疾病预防控制中心,福州350001【正文语种】中文【中图分类】R382卵形疟最早是1900年Charles F.Craig发现,1922年Stephens从一个非洲回英国的士兵血液里被感染的红细胞中发现,并正式命名[1]。
卵形疟主要流行于西非、菲律宾、印尼东部和巴布亚新几内亚[2],孟加拉、柬埔寨、印度、泰国和越南也有报道。
全球每年大约有1 500万卵形疟感染,在西非疟疾病例中卵形疟超过10%。
卵形疟通过基因方法分为两个亚种—卵形疟curtisi和卵形疟wallikeri[3-4],两个亚种的谱系分离各自发生在100万和350万年前[5]。
Calderaro A 等报道[1],流行病学和生物学的调查发现,卵形疟与间日疟形态相似,虫种密度低,只引起密度相对低的虫血症,即使实在首发感染,虫密度峰值也低于10 000/μL。