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疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
疟原虫镜检操作流程疟原虫镜检操作可有趣啦，就像一场小小的探索之旅呢。
一、准备工作。
咱们先得把要用的东西都找齐喽。
那需要啥呢？显微镜肯定是必不可少的啦，就像战士上战场不能没有枪一样。
然后就是载玻片和盖玻片，这俩就像是舞台和舞台上的小屋顶，疟原虫就在这上面表演呢。
还有采血针、酒精棉球这些小物件，采血针用来取血，酒精棉球用来消毒，它们可都是小助手。
另外，染色剂也得准备好，这染色剂就像是给疟原虫化妆的东西，能让咱们把疟原虫看得更清楚。
二、采血。
采血这一步可得小心点儿。
找个舒服的地方让被采血的人坐好或者躺好，别让人家紧张，就像跟朋友聊天似的，说“放松哈，就一下下，不疼的”。
用酒精棉球在手指尖或者耳垂轻轻擦一擦，消消毒。
然后拿起采血针，就像拿一支小小的魔法棒，轻轻一扎，血就出来啦。
把这一滴血小心地滴在载玻片的一端，可别滴太多，也别滴到外面去了，一滴小小的、圆圆的血滴就像一颗红色的小珍珠在载玻片上呢。
三、涂片。
血滴在载玻片上了，咱们就要开始涂片啦。
拿另一个载玻片的一端，轻轻地斜着靠在有血滴的载玻片上，就像小滑梯一样。
然后慢慢地把这个载玻片往前推，让血滴在两个载玻片之间均匀地铺成薄薄的一层。
这一步可有点像画画的时候把颜料涂开，要涂得薄厚均匀才好呢。
如果涂得太厚了，疟原虫就会像躲猫猫一样藏在里面，咱们就不容易看到它啦；要是涂得太薄了，可能疟原虫都没几个在上面，也不好找。
四、固定和染色。
涂片弄好之后呢，要固定一下。
这就像是给疟原虫拍个照片定住它的样子。
可以用小火苗稍微烤一烤载玻片，不过得小心别烤糊了，要不然疟原虫就被烤成小焦炭啦。
固定好之后就到染色的时候了。
把染色剂小心地滴在涂片上，让染色剂把疟原虫包裹起来，就像给疟原虫穿上一件彩色的衣服。
等染色剂在涂片上待一会儿，就像让疟原虫在染缸里泡个澡，把自己染得美美的。
五、镜检。
终于到了最激动人心的镜检啦。
把载玻片放在显微镜的载物台上，就像把宝贝放在展示台上一样。
先从低倍镜开始看，慢慢地转动粗准焦螺旋，让镜头一点点靠近载玻片，就像在寻找宝藏一样。
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法ICS11.020C62WS 中华⼈民共和国卫⽣⾏业标准WS/T 569—2017疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法Microscopic examination of blood films for malaria parasites2017-08-01发布2018-02-01实施前⾔本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准起草单位：海南省疾病预防控制中⼼、江苏省寄⽣⾍病防治研究所、中国疾病预防控制中⼼寄⽣⾍病预防控制所、云南省寄⽣⾍病防治所、海南省农垦总局医院。
本标准主要起草⼈：王善青、⾼琪、汤林华、杨恒林、郑彬、胡锡敏、王光泽、李⾬春、刘莹、欧阳范献。
疟原⾍检测⾎涂⽚镜检法1 范围本标准规定了⾎涂⽚镜检法检测疟原⾍的技术规范。
本标准适⽤于各级疾病预防控制机构和医疗机构对疟原⾍的显微镜检测。
2 术语和定义下列术语和定义适⽤于本⽂件。
2.1疟原⾍Plasmodium spp疟原⾍是⼀类单细胞、寄⽣性的真核动物，是疟疾（malaria）的病原体。
寄⽣于⼈体的疟原⾍主要有恶性疟原⾍（Plasmodium falciparum）、间⽇疟原⾍（Plasmodium vivax）、三⽇疟原⾍（Plasmodium malariae）和卵形疟原⾍（Plasmodium ovale）等。
2.2⾎涂⽚ blood films将⾎液涂制于载玻⽚上制成的涂⽚。
供显微镜疟原⾍检查⽤的⾎涂⽚包括厚⾎膜涂⽚和薄⾎膜涂⽚两种。
3 仪器和器材3.1 ⽣物显微镜（100×油浸物镜、5×或10×⽬镜）。
3.2 计数器。
3.3 载玻⽚（⽆划痕⽆油污的洁净载玻⽚）。
3.4 推⽚。
3.5 ⾎⽚染⾊架。
3.6 ⾎⽚⼲燥架。
3.7 玻⽚盒。
3.8 染⾊盘和染⾊缸。
4 试剂和材料4.1 吉⽒染⾊原液。
4.2 pH7.2磷酸盐缓冲液（PBS）。
4.3 甲醇（分析纯）。
4.4 ⾹柏油或专⽤浸油（折射率≥1.5）。
疟原虫镜检技术血片制作与染色一、血片制作（一）所需器材1、载玻片：玻片使用前应清洗。
新玻片应先浸入有液态洗涤剂的清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干净、柔软的棉巾将玻片擦亮。
用于特殊的目的时，最后可将玻片浸泡在95％酒精中5~10分钟，再将玻片擦干擦亮。
已用过的玻片应先浸泡于洗涤剂溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水中1~2小时，再移到新配置的洗涤剂溶液中1~2小时，逐个擦去玻片上旧的血膜痕迹，用清水漂洗干净，再将玻片擦干擦亮。
洗净的玻片每10~20张用白纸包好放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。
2、采血针：使用一次性釆血针。
3、玻片盒：为防止污染和苍蝇吸食血膜，新制作的血膜应放在玻片盒中，厚血膜放置时要保持水平，直到充分干燥。
4、75％酒精棉球：用于采血前后的消毒。
5、记号笔或铅笔：用于玻片上书写号码。
（二）采血部位及取血方法采血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。
先用75％酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2mm深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。
（三）涂制血膜取玻片2张，1张作载片，1张作推片（具有光滑边缘）。
用右手拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用该端中部刮取血液1~1.5μl。
将左下角的血滴涂于载片的中央偏右处，由里向外划圈涂成直径为0.8~1cm的圆形厚血膜（厚度以1个油镜视野内可见到5~10个白细胞为宜）。
用干棉球抹净玻片角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，制成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之间互相接触而不相互重叠。
每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。
取干净玻片及推片各一张，用右手大拇指和食指夹持推片侧缘中部，用推片的左下角刮取血液4～5μl（约火柴头大小），再用该端中部刮取血液1～1.5μl。
