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高考生物总复习第一章第3节测定微生物的数量能力提升（含解析）中图版选修11.下列不．属于菌种计数方法的是( )A．平板划线法B．稀释涂布平板法C．显微镜检法D．滤膜法解析：选A。
平板划线法可以用于菌种的纯化和分离，不能用于菌种的计数。
2.有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( )A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．再放在适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落解析：选D。
稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。
只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物才被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。
3.请选出进行土壤中细菌计数的正确的操作步骤( )①土壤取样②称取1 g土壤放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.5 mL进行平板涂布④依次稀释至102、103、104、105、106倍稀释度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→②→④→③D．①→④→②→③解析：选C。
在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(1 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
4.某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每克土壤样品中菌落数是(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)( )A．2.34×108B．2.34×109C．234 D．23.4解析：选B。
每克土壤样品菌数＝(某稀释倍数的菌落平均数/细菌培养时所用的稀释液体积)×稀释倍数。
5.某同学在101、102、103倍稀释的平均菌落数为2760、295和46，则菌落总数(个/mL)为( ) A．2.76×104B．2.95×104C．4.6×104D．3.775×104解析：选D。
第三节 测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。
前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】 血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm 处的土样。
准确称取1 g 土样，放入盛有99 mL 无菌水的锥形瓶中，振荡20 min 后制成102倍的稀释液。
然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录(1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
(2)计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝×稀某稀释倍数的菌落平均数细菌培养时所用的稀释液体积释倍数。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。
以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
本套资源目录高中生物第一章微生物培养技术单元检测含解析中图版选修1高中生物第一章第一节微生物的分离和纯培养课后训练含解析中图版选修1高中生物第一章第三节测定微生物的数量课后训练含解析中图版选修1高中生物第一章第二节培养基对微生物的选择作用课后训练含解析中图版选修1高中生物第三章第一节酶的制备及活力测定课后训练含解析中图版选修1高中生物第三章第三节加酶洗衣粉的洗涤条件课后训练含解析中图版选修1高中生物第三章第二节酶在食品加工中的应用课后训练含解析中图版选修1高中生物第三章第四节酶的固定化课后训练含解析中图版选修1高中生物第三章酶的制备及应用单元检测含解析中图版选修1高中生物第二章第一节发酵与食品加工课后训练含解析中图版选修1高中生物第二章第二节食品安全的评估课后训练含解析中图版选修1高中生物第二章食品加工与食品安全单元检测含解析中图版选修1高中生物第五章植物的组织培养技术单元检测含解析中图版选修1高中生物第五章第一节植物快速繁殖技术课后训练含解析中图版选修1高中生物第五章第二节植物种苗脱毒技术课后训练含解析中图版选修1高中生物第六章第一节蛋白质的提取和分离课后训练含解析中图版选修1高中生物第六章第二节dna片段的扩增__pcr技术课后训练含解析中图版选修1高中生物第六章蛋白质和dna技术单元检测含解析中图版选修1高中生物第四章植物有效成分的提取单元检测含解析中图版选修1高中生物第四章第一节植物色素的提任后训练含解析中图版选修1高中生物第四章第二节植物芳香油的提任后训练含解析中图版选修1第一章微生物培养技术单元检测（时间：45分钟，满分：100分）一、选择题（每小题3分，共60分）1 微生物（除病毒外）需要从外界吸收营养物质并通过代谢来维持正常的生长和繁殖。
下列有关微生物营养的说法正确的是（）。
A．乳酸菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．微生物生长中不可缺少的一些微量的无机物称为生长因子C．培养基中的营养物质浓度越高对微生物的增殖越有利D．生长因子一般是酶或核酸的组成成分，微生物本身合成这些生长因子的能力往往不足2 在接种操作的过程中，不正确的是（）。
学业达标测评（三）一、选择题1 •下列不属于统计菌数方法的是 （ ）A. 显微镜直接计数法B. 活菌计数法C. 稀释平板计数法D. 标志重捕法【解析】 标志重捕法是统计动物种群密度的方法。
【答案】 D2.测定土壤中细菌数量一般选用 104、105和106倍的稀释液进行平板培养；而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是（）A. 细菌个体小，真菌个体大B. 细菌易稀释，真菌不易稀释C. 细菌在土壤中含量比真菌高D. 随机的，没有原因【解析】 稀释的目的是使平板培养基上菌落数适中， 便于计数。
细菌在土壤中含量比真菌高，故稀释倍数高。
【答案】 C3. 某同学在稀释倍数为 106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为 234,那么每毫 升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL ）（ ） 89A. 2.34 X 10B . 2.34 X 10D. 23.4【解析】 平板上菌落的平均数X 稀释倍数=每毫升样品中的菌落数,9人=2.34 X 10 个。
【答案】 B 4.下列关于“检测土壤中细菌总数”的实验操作的叙述中，不正确的是（ ）A. 用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，高温、高压灭菌后倒平板B. 取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液和无菌水各 0.1 mL 涂布于不同的平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37 C 恒温培养C. 234即 234X 10X 1024〜48小时D. 确定对照组无菌后，选择菌落数在300个以上的平板进行计数【解析】本题以“检测土壤中细菌总数”实验为命题点。
检测土壤中细菌总数时，要先用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，然后取稀释倍数为104、105、106的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL,分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37 C 恒温培养24〜48小时，最后在确定对照组无菌后，为保证实验结果的准确性, 应选择菌落数在30〜300个的平板进行计数。
第一节微生物的分离和纯培养S3冏耐自主学习•基础知识一、培养基1 •含义由于微生物代谢方式的不同,因而对营养物质的需求也是有差异的。
根据微生物生长繁殖和代谢的需要，将各种营养物质混合在一起而配制的营养基质。
2 .平板培养基将溶化后的固体培养基基质倒入无菌培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。
二、无菌技术1 .目的和要求在微生物的分离和纯培养中，一定不能有外来的污染性杂菌，所以必须采用无菌技术进行操作。
因此，在实验过程中，要对所用的器材、培养基进行严格的灭菌，对工作场所要进行消毒。
2.灭菌和消毒(1) 灭菌：用强烈的理化因素杀死环境或物体内外所有的微生物，常用的方法是高温灭____________菌法。
(2) 消毒：用相对温和的理化方法杀死环境或物体上的病原微生物和有害微生物的营养细胞，常用的方法是射线消毒法和化学药剂消毒法。
三、接种技术1. 含义把相应的研究对象移入培养基中的过程。
2. 分类在平板培养基上接种的方法有平板划线法、稀释平板涂布法、稀释混合平板法等。
疑难问题卡片I ■ ■ ■ ■ 'll V * I1 I ■ ■ ■ ■■预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题1问题2问题3问题4一、微生物的概念及特点1 •概念微生物是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称。
2.特点•单细胞简单多细胞.非细胞即“分子生物.原核类：细菌、放线菌、支原体、低进立克次氏体、衣原体、蓝细菌化地真核类：真菌酵母菌、霉菌位低生生物I 1非细胞类：病毒、类病毒、朊病毒二、微生物的营养及功能微生物的化学组成成分与其他生物大体相同，也是由C、H ON、P、S等元素组成, 其中C、H O N占细胞干重的90%以上，这些元素最终来自外界环境中的各种无机化合物营养物质定义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CQ、NaHCO等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源凡能提供所需氮兀素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH、铵盐、硝酸盐；有机化合物：重难疑点微生物小微小个体"[[微米级：光学显微镜下可见细胞[]]纳米级：电子显微镜下可简简单构造2H0NGNANTUP0突破^------见细胞器、病毒①微生物最常利用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。
2019-2020年高中生物第一章微生物培养技术第三节测定微生物的数量自我小测中图版选修11．测定土壤中不同微生物的数量，要选用不同倍数的稀释液进行平板培养，请选出培养细菌时所用的稀释倍数（）①10②102③103④104⑤105⑥106A．①②③B．②③④C．③④⑤D．④⑤⑥2．下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，其中错误的是（）A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 hD．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数3．下列关于土壤取样的叙述，错误的是（）A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3～8 cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤4．关于微生物的培养，下列叙述错误的是（）A．霉菌一般在25～28 ℃的温度下培养3～4 dB．不同种类的微生物，一般培养的温度和时间不同C．测定真菌数量，一般选用103、104、105倍的稀释液D．微生物培养要注意无菌操作5．下列有关稀释涂布平板法，叙述错误的是（）A．首先将菌液进行一系列的梯度稀释B．然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C．再放在适宜条件下培养D．结果都可在培养基表面形成单个的菌落6．梯度稀释过程中用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，其目的是（）A．增加试管内的溶氧量B．使菌液与水充分混匀C．使试管中菌液的浓度降低D．使细菌的形态结构发生改变7．若某一稀释度下，平板上生长的平均菌落数为80，涂布平板时所用的稀释液体积为0.1 mL，稀释液的稀释倍数为106，则每克样品中的活菌数约为（）A．8×108B．8×107C．8×105D．8×1068．需要在火焰旁操作的有（）①土壤取样②称取土壤③稀释土壤溶液④涂布平板⑤微生物培养A．①②③④⑤B．②③④⑤C．③④⑤D．②③④9．在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，甲组实验用只含尿素作氮源的培养基，乙组实验用另加入硝酸盐的培养基，其他成分都相同，在相同条件下操作、培养与观察，则乙组实验属于（）A．空白对照B．标准对照C．相互对照D．条件对照10．以下关于菌落的叙述，正确的是（）A．一定是圆形的B．一定是黄色的C．大小一定是相同的D．观察到的单个菌落也有可能来自2个菌体的增殖11．在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。
测定微生物的数量【学习目标】1．会直接计数法；2．会间接计数法；3．实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》。
【学习重难点】实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》。
【学习过程】课中学习1．直接计数法和间接计数法例1．用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。
在某稀释浓度下，某同学做了若干个平板并统计每个平板的菌落数，最接近样品中菌体数真实值的是（）A．菌落数最多的平板B．菌落数量最少的平板C．菌落数量适中的平板D．取若干个平板菌落数量的平均值2．实践案例：《土壤中好气性细菌的计数》例2．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是（）A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数分别是251和260，取平均值256C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212、256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233通关检测一、选择题1．下列说法不正确的是（）A．科学家从70~80℃热泉中分离到耐高温的Taq DNA聚合酶B．统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，则以M3作为该样品菌落数的估计值C．设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D．同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多2．产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（）A．一个细菌，液体培养基B．许多细菌，液体培养基C．一个细菌，固体培养基D．许多细菌，固体培养基3．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（）A．筛选出能分解尿素的细菌B．对分离的菌种作进一步鉴定C．培养基中还缺乏酚红指示剂作细菌的营养D．如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素4．下列关于测定土壤中微生物数量的叙述，正确的是（）A．一般选用103~107倍的稀释液分别涂布B．测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释C．测定真菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释D．若第一次测定某种细菌的数量，可以将101~107倍的稀释液分别涂布到平板上培养二、非选择题5．土壤有“微生物的天然培养基”之称，下图表示对土壤中某种微生物进行分离和计数而进行的对样品的稀释和稀释液的取样培养流程示意图。
第三节测定微生物的数量一、测定微生物数量的方法测定微生物数量的方法可分为两类：直接计数法和间接计数法。
前者常用的是显微镜直接计数法，这种方法是先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。
该方法适用于纯培养悬浮液中各种单细胞菌体的计数。
后者最常用的是稀释平板计数法，需要将待测样品配制成均匀的系列稀释液并使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后统计培养基中出现的菌落数，从而推算出样品中的活菌数。
利用血球计数板测出的菌体数与平板计数法相比哪个多些？【提示】血球计数板测出的是全部菌体数，而平板计数法只能测出活菌数，而且比实际数偏少。
二、间接计数法的实验设计1．制备土壤稀释液取土壤表层5～10 cm处的土样。
准确称取1 g土样，放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶中，振荡20 min后制成102倍的稀释液。
然后进行系列稀释，得到103、104、105、106倍的系列稀释菌液。
2．取样及倒平板3．培养4．观察记录(1)计数时对于细菌、放线菌以每个培养皿内有30～300个菌落为宜，霉菌以每个培养皿内有10～100个菌落为宜。
(2)计算每克样品菌数公式为：每克土壤样品菌数＝某稀释倍数的菌落平均数细菌培养时所用的稀释液体积×稀释倍数。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中一、微生物生长量的测定1.测重量法干重法：将单位体积待测的培养液离心后，用清水洗涤1～5次，放入干燥器中加热干燥，加热温度一般在100～105 ℃之间，再称重。
以细菌为例，一个细胞一般重约10－12～10－13g，也可在较低温度(如40 ℃)下进行真空干燥。
湿重法：将一定量的菌悬液离心或过滤，得到菌体，反复洗涤后称湿重，干重一般为湿重的20%～25%。
2．计数法(1)直接计数法这种方法是利用特定细菌计数板或血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
此法的缺点是不能区分死菌与活菌。
计数板是一块特制的载玻片，上面有一个特定的面积1 mm2和高0.1 mm的计数室，在1 mm2的面积里又被划分成25个(或16个)中格，每个中格进一步划分成16个(或25个)小格，但计数室都是由400个小格组成。
将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按下面公式求出每毫升样品所含的细菌数。
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×1 000×稀释倍数(2)间接计数法(活菌计数法)稀释平板涂布法，常用来统计样品中的活菌数。
此法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的，也就是说一个菌落即代表一个单细胞。
计数时先将待测样品做一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿上，使其均匀分布于平板中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的含菌数。
说明：①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板上进行计数。
②将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布整个平板表面，放入适宜的温度下培养计算菌落数。
为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布、培养计算出菌落平均数。
③统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
④涂布平板法所选择倒平板的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为最好。
每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。
二、测定土壤中的微生物数量土壤中生活的微生物种类和数量是极其丰富的，这些数量众多的微生物对提高土壤肥力有重要作用。
因此，测定土壤的含菌量可以作为判定土壤肥力的一个重要指标。
1．实验原理平板菌落计数法是将待测定的微生物样品按比例作一系列稀释后，将其中的微生物充分分散成单个细胞，吸取一定量某几个稀释度的菌液接种到平板上，培养一段时间后，每个单细胞生长繁殖形成单个菌落，根据稀释倍数、取样接种量和菌落数即可换算出样品的含菌数。
2．材料用具土壤样品：尿素，酵母粉，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠、酚红、琼脂，1 mol/L NaOH溶液，无菌吸管，盛有9 mL无菌水的试管，盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的锥形瓶，试管架，无菌培养皿，记号笔，烧杯等。
3．方法步骤(1)制备尿素固体培养基准确称取尿素20 g，酵母粉0.1 g，磷酸二氢钾9.1 g，磷酸氢二钠9.5 g，酚红0.01 g，琼脂20 g，依次加入盛有900 mL蒸馏水的烧杯中，加热溶解后，用1 mol/L NaOH溶液调pH至7.2～7.4，补加蒸馏水至1 000 mL。
(2)制备土壤样品稀释液称取土样10 g，放入盛有90 mL无菌水并带有玻璃珠的锥形瓶中，振荡约20 min，使土样和水充分混合，将土壤悬液制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6不同稀释度的稀释液。
制备土壤样品稀释液时应注意每个吸管只能接触一个浓度的稀释液，且取样前需充分摇匀。
(3)加样取10套无菌培养皿，取10－4、10－5和10－6每种稀释度做3个重复平板，留下一个平板作空白对照。
分别用1 mL无菌移液管精确吸取10－4、10－5、10－6三个稀释度菌悬液各0.2 mL，加至相应编号的无菌培养皿中(如图)。
微生物数量测定的流程图(4)倒平板将菌液移入培养皿后立即倒入溶化并冷却至45 ℃左右的尿素培养基(倒入量约15 mL)，随即快速晃动培养皿，使菌液和培养基充分混匀后平置，待凝。
(5)培养待平板完全凝固后，倒置于恒温箱中37 ℃培养。
(6)统计菌落数培养48 h后取出平板，统计各皿中的菌落数，将结果记录在表格中，计算结果时，应选取每皿菌落数在30～300(如图)的一组平板为代表进行统计。
每皿菌落数示意图(7)计算样品中菌数的公式每克样品的菌数＝同一稀释度的菌落平均数÷0.2÷稀释度×10在探究培养液中酵母菌种群数量变化的实验中，需利用计数板对微生物细胞进行直接计数。
计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片，样品就滴在计数室内。
计数室由25×16＝400个小室组成，容纳液体总体积为0.1 mm3。
某同学操作时将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释，用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，盖上盖玻片并用滤纸吸去多余菌液，进行观察计数。
(1)在实验中，某同学的部分实验操作过程是这样的：①从静置试管中吸取酵母菌培养液加入计数板进行计数，并记录数据；②把酵母菌培养液放置在冰箱中；③第七天再取样计数，记录数据，统计分析绘成曲线。
请纠正该同学实验操作中的3处错误：①______________________________________________________________。
②______________________________________________________________。
③______________________________________________________________。
(2)在实验前应该对计数板、吸管等器具进行______处理。
(3)如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应采取的措施是____________。
(4)如果观察到如图所示a、b、c、d、e 5个大格共80个小室内共有酵母菌48个，则上述1 mL酵母菌样品中约有酵母菌________个；要获得较为准确的数值，减少误差，你认为该怎么做？__________________。
【解析】对各小题逐项分析如下②应将酵母菌培养液放置在适宜温度下培养③应连续七天，每天观察、取样计数并记录数据(2)灭菌(3)适当稀释(4)2.4×108多次计数，求平均值1．上题中某同学用一支移液管连续三次取1 mL菌液进行稀释，(过程如图)中间忘记冲洗移液管，计数结果将( )A．偏低B．偏高C．不变D．无法判断【解析】由于移液管未冲洗，下一次使用时会带有上次的高浓度菌液，使计数结果偏高。
【答案】 B(2016·四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。
(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。
(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。
该过程采取的接种方法是________________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。
(3)现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。
突变基因转录的mRNA中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基酸。
【审题导析】【精讲精析】(1)脲酶能够催化尿素水解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为唯一氮源。
挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升高，酚红指示剂将变红。
(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。
利用稀释涂布平板计数法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30～300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156＋178＋191)÷3＝175个。
每克土壤样品中的细菌数为175÷0.1×105＝1.75×108。
血细胞计数板计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板计数法只能计数活细胞(只有活细胞才能在平板上生长)，故一般血细胞计数板计数法要比稀释涂布平板计数法的结果大。
(3)箭头处插入70个核苷酸，箭头后密码子的解读方式为*AG，UGA，GAA……对比3种终止密码可发现，此处的终止密码为UGA。
从起始密码到终止密码之前共有273＋72个碱基，因此突变基因表达的蛋白含115个氨基酸。
【答案】(1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法 1.75 少(3)UGA 115稀释平板计数法的误差分析(1)稀释时移液管不冲洗，偏大；(2)平板中菌落数太多，(可能重复)偏小；(3)稀释时未混合均匀，可能大可能小。
