医学免疫学实验共16页
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医学免疫学实验指导(供医学、药学各专业使用)主编:刘彦平编委:邵嘉会陆东明李萍高翔青海大学医学院病原生物学与免疫学教研室2008年10月医学免疫学是医学院校必设的基础课程之一,按教学大纲要求医学免疫学的实验课时占总学时的1/3左右,说明该学科具有理论与实践紧密结合的特点及实验教学在学科中的重要性。
本课程设置要求学生不仅要掌握基础理论、基本知识,而且要学习和掌握各项基本技能。
据此,我们编写出《医学免疫学实验指导》一书,力求规范实验教学,从整体提高教学水平和教学质量。
本书结合教学工作实际,共编写14个实验项目,每个实验说明实验目的,实验原理,实验内容方法,实验要求及注意事项,并附有一定量的思考题。
本书依教学进程安排实验次序,可帮助学生巩固基础理论知识,培养学生基本技能,提高教学效果。
免疫学和免疫学技术的发展日新月异,医学教育的改革不断向纵深发展,限于编者的学术及认识水平,本书难免存在缺点和不足。
为此,希望广大师生对本书提出宝贵意见,以便及时加以改进。
编者2008年10月实验室规则 (4)实验一显微镜的结构与使用 (4)实验二白细胞的吞噬及溶菌酶试验 (7)一、小吞噬试验(中性粒细胞吞噬功能试验) (8)二、大吞噬试验 (8)三、溶菌酶测定 (9)实验三巨噬细胞(白细胞)移动抑制试验 (9)实验四硝基四氮唑蓝(NBT)还原试验 (11)实验五凝集反应 (12)一、玻片凝集试验 (12)二、人类ABO 血型鉴定试验(玻片法) (13)三、试管凝集反应 (14)四、间接凝集试验 (15)五、间接乳胶凝集抑制试验 (16)实验六沉淀反应 (17)一、琼脂扩散试验 (18)二、免疫电泳 (20)三、火箭免疫电泳 (20)四、对流免疫电泳 (22)实验七补体的溶细胞作用 (23)实验八补体结合试验 (24)一、溶血素单位滴定 (24)二、补体单位滴定 (24)实验九血清补体活性测定 (27)实验十淋巴细胞转换试验 (29)实验十一玫瑰花环形成试验 (31)实验十二变态反应试验 (32)一、豚鼠过敏试验 (33)二、皮肤超敏反应 (33)实验十三免疫浊度试验 (34)实验十四循环免疫复合物的检测 (35)实验十五免疫标记技术 (37)一、酶联免疫吸附试验 (37)二、酶免疫组化技术 (38)三、酶标免疫定量测定 (40)四、免疫荧光技术 (41)五、斑点金免疫渗滤试验 (43)六、斑点免疫层析试验 (44)实验室规则实验是映证理论,对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段,为保证实验效果,同时避免病原微生物的实验室内传染,保障实验操作者的安全,特制定如下规则:一、学生在实验课前,应认真预习所要进行实验的内容,明确实验目的,了解实验原理,熟悉所要使用的仪器、药品的性质及操作程序,如有疑问,应事先请教指导教师。
实验一[实验名称]:沉淀反应[实验目的]:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig含量[实验材料]:1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管打孔器[试验步骤]:(1)将溶解后的离子琼脂冷却到450C,加入适当浓度的抗原混合均匀,吸取3-4毫升加在载玻片上,使其均匀布满载玻片而又不流失。
(2)琼脂凝固后制成凝胶板,然后隔适当距离打孔。
(3)在孔内滴加待测可溶性抗体。
(4)将凝胶平板放入带盖瓷盘中,下面垫一湿纱布以保持湿度,置于370C恒温箱中24小时,观察沉淀环。
[实验结果]:(沉淀环直径)测量沉淀环直径:毫米。
[实验分析]单向琼脂扩散是一种定量试验,主要用来测定标本中各种免疫球蛋白或补体成分的含量。
在孔中加入待测抗体使其向四周扩散,经一定时间后抗体与琼脂中抗原相遇,在比例适宜处生成白色沉淀环。
沉淀环直径与抗体浓度成正比。
根据测试样品沉淀环直径的大小,可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。
实验二[实验名称]:间接凝集抑制试验(妊娠试验)[实验目的]:测定待检尿液中是否含HCG(绒毛膜促性腺激素)以诊断妊娠[实验材料]:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG致敏乳胶抗原、抗HCG血清、载玻片等[试验步骤]:(1)取一片载玻片,标记出左右。
(2)在载玻片左侧加一滴待检尿液,右侧加一滴非孕妇尿液。
(3)在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清,摇动混匀2-3分钟。
(4)在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原,摇动混匀2-3分钟。
(5)观察判定结果。
[实验结果]:(凝集和非凝集的描述)左侧(待检尿液侧)呈现均匀的乳状液状态,无凝集颗粒。
间接凝集抑制阳性。
右测(非孕妇尿液侧)出现明显的凝集颗粒。
间接凝集抑制阴性。
[实验分析]:(结合实验原理)孕妇尿液中的HCG含量显著增高。
尿液中的HCG与加入的抗HCG结合,抗HCG被消耗,使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合,不出现乳胶抗原间接凝集反应(凝集被抑制),所以液滴呈现均匀乳状液,为乳胶间接凝集抑制阳性反应。