医学免疫学-免疫学实验1

免疫学实验免疫学实验是一项非常重要的研究领域，它涉及到研究人体免疫系统的机制和功能，并通过实验手段来深入了解和探索免疫系统对疾病的防御和治疗作用。

在本文中，我们将介绍免疫学实验的一些基本概念和常见的实验方法，以及它们在研究和治疗免疫相关疾病中的应用。

首先，我们来了解一下免疫学实验中常用的一些基本概念。

免疫学实验主要涉及到免疫细胞、抗体和抗原的相互作用。

免疫细胞是人体免疫系统的重要组成部分，包括巨噬细胞、淋巴细胞等。

抗体是由免疫细胞产生的一种特殊蛋白质，它可以识别和结合到体内外入侵的病原体，激活免疫系统进行防御。

而抗原则是一种能够引起免疫系统反应的物质，可以是细菌、病毒、真菌等。

在免疫学实验中，常见的实验方法包括免疫组化、流式细胞术、ELISA等。

免疫组化是一种用于检测组织或细胞中某一种特定蛋白质的方法，它可以通过使用特异性抗体来标记和检测目标蛋白质的位置和表达水平。

流式细胞术则是一种通过流式细胞仪进行细胞表面标记和分析的方法，它可以对不同类型的免疫细胞进行鉴定和分类。

ELISA是一种用于检测和分析抗体和抗原相互作用的方法，它基于酶标记免疫吸附技术，可以测定目标物质的浓度和活性水平。

除了这些基本方法，免疫学实验还可以进一步应用于研究和治疗免疫相关疾病。

免疫学实验可以帮助我们深入了解免疫系统在疾病中的作用机制，例如自身免疫疾病、感染性疾病等。

通过实验手段，我们可以研究免疫细胞的活性和功能，并探索潜在的治疗策略。

例如，在免疫细胞治疗中，我们可以通过实验手段提取、修饰和培养免疫细胞，并将其用于治疗癌症、自身免疫疾病等疾病。

此外，免疫学实验还有助于研发和评估新型的免疫药物和疫苗。

通过实验方法，我们可以研究药物在免疫系统中的作用机制和疗效，并评估其用于治疗疾病的潜力。

免疫学实验在疫苗研发中也发挥着重要的作用，通过评估免疫细胞对疫苗的反应和效果，我们可以确定疫苗的安全性和有效性。

总结起来，免疫学实验是一项非常重要且广泛应用的研究领域。

实验一人外周血单个核细胞分离（4学时）（一）实验目的1．掌握人外周血单个核细胞分离的原理及操作方法；（二）实验原理密度梯度离心法。

淋巴细胞与单核细胞的比重为 1.075～1.090，而红细胞与分叶核白细胞的比重为1.092。

淋巴细胞分离液的比重为1.077±0.001，与淋巴细胞比重相同，而红细胞较之为重，通过离心，即可将淋巴细胞分离出来。

（三）实验材料①肝素抗凝静脉血；②Ficoll淋巴细胞分离液（密度为1.077±0.001）；③D-Hanks液；④0.4%的台盼蓝染液；⑤器材：离心机、恒温水浴箱、显微镜、细胞计数板等。

（四）实验方法①抽取抗凝血2ml，与等量D-Hanks液混匀；②取分离液2ml，缓慢加入释血液4ml；③2000 rpm离心20 min，观察细胞分层情况；④取出PBMC，用4倍量D-Hanks液洗涤2次，每次1500 rpm离心10 min；④用10%FCS的Hanks液还原体积至1 ml，取样镜检计数；⑤细胞存活率测定：取一个1.5ml EP管，加入等量的细胞悬液与台盼蓝染液，混匀后静置5min，镜检；⑥注意事项。

（五）实验结果①PBMC的计数= xxx 个/ ml；②细胞存活率=实验二淋巴细胞检测（4学时）（一）实验目的1．掌握免疫组化技术的原理、方法、结果判断及实际应用；2．熟悉E花环形成试验和淋巴细胞转化试验的原理及结果判断。

（二）实验内容1．酶免疫组化技术测定CD3+T细胞数量（操作）（1）原理酶免疫组织化学技术是以细胞涂片或组织切片为检测对象，应用酶免疫技术对特定细胞表面抗原进行显色，通过普通光学显微镜观察，判断细胞表面有无特异抗原的表达。

本实验采用鼠抗人CD3单克隆抗体，与待检T细胞表面CD3分子结合，加入二抗，即聚合辣根过氧化物酶（HRP）标记抗小鼠IgG，通过HRP催化底物显色判断CD3分子的存在，从而确定T细胞。

（2）材料①人外周血单个核细胞悬液；②鼠抗人CD3单抗（武汉博士德）；③两步法免疫组化检测试剂盒（武汉博士德）；④ DAB显色试剂盒（武汉博士德）；⑤ 0.01M PBS（PH 7.4）；⑥器材：2 ml EP管、吸附载玻片、微量移液器、恒温水浴箱、光学显微镜等。

第一次实验：免疫器官和免疫细胞（示教）一、免疫器官免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。

在哺乳类动物，中枢免疫器官包括胸腺和骨髓；在禽类，中枢免疫器官包括胸腺和法氏囊。

外周免疫器官有淋巴结、脾脏等。

1.胸腺胸腺位于胸腔纵隔上部，胸骨后方。

胸腺的组织结构：胸腺分左右两叶，表面覆盖有一层结缔组织被膜，被膜深入实质将实质分割成若干小叶。

胸腺小叶的外层为皮质，内层为髓质。

胸腺皮质区分为浅皮质区和深皮质区。

皮质区内85%-90％的细胞为未成熟的T 细胞。

髓质区内有大量的胸腺上皮细胞和稀疏分散的较成熟的胸腺细胞、单核﹣巨噬细胞和树突状细胞。

人类胸腺在胚胎期及出生后2岁内生长很快，体积较大；2岁后到青春期发育仍很快；但青春期后开始萎缩，逐渐由脂肪组织所代替，它在机体免疫功能的建立上占有重要地位。

骨髓内有部分淋巴细胞迁移到胸腺内，在胸腺素的影响下，增殖分化成为具有免疫功能的T 细胞，再经血流输送到淋巴结和脾等周围免疫器官发挥免疫功能。

若新生期切除胸腺或胸腺生长肿瘤，可导致细胞免疫功能显著下降，常因感染而死亡。

胸腺组织切片2.骨髓骨髓位于骨髓腔中，分为红骨髓和黄骨髓。

红骨髓有造血功能，由造血组织和血窦构成。

造血组织主要由基质细胞和造血细胞组成。

基质细胞包括网状细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、巨噬细胞等。

骨髓是各类血细胞和免疫细胞发生的场所。

骨髓又是B 细胞分化成熟的场所和体液免疫应答发生的场所。

因此骨髓既是中枢免疫器官又是外周免疫器官。

骨髓概述图3.法氏囊在禽类，法氏囊是位于泄殖腔上方的一个囊状物，内充满着淋巴组织，其中淋巴细胞不断受囊素的影响，发育成B 淋巴细胞。

若新生期切除法氏囊，抗体的形成将受影响，而细胞免疫功能不受影响。

对于 B 淋巴细胞发育而言，禽类的法氏囊具有哺乳类动物骨髓相似的作用。

法氏囊外观4.淋巴结淋巴结的实质分为皮质区和髓质区两部分。

皮质区分为浅皮质区和深皮质区两部分。

浅皮质区靠近被膜下，是B 细胞定居的场所，称为非胸腺依赖区。

医学免疫学实验报告免疫学实验报告引言：免疫学是研究人体免疫系统的科学，通过实验研究可以更好地了解免疫系统的功能和应对机制。

本次实验旨在探究免疫系统对外来抗原的应答过程，并评估免疫细胞的活性和效能。

实验材料与方法：1. 实验动物：使用小鼠作为实验对象，因其免疫系统与人类相似度较高。

2. 抗原制备：选择一种常见的抗原，如牛血清白蛋白（BSA），通过纯化和浓缩得到高纯度的抗原溶液。

3. 免疫程序：将小鼠随机分为实验组和对照组，实验组注射抗原溶液，对照组注射生理盐水。

观察并记录两组小鼠的免疫应答情况。

4. 免疫指标测定：采集小鼠血液样本，使用酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术测定血清中特定免疫球蛋白（如IgG、IgM）的水平。

实验结果与讨论：1. 免疫应答：实验组小鼠在注射抗原后，免疫系统迅速启动，产生针对抗原的特异性免疫应答。

对照组小鼠未注射抗原，免疫系统无明显应答。

2. 抗原特异性免疫球蛋白：ELISA结果显示，实验组小鼠血清中特定抗原特异性免疫球蛋白（如IgG）的水平显著升高，而对照组无明显变化。

这表明实验组小鼠的免疫系统成功识别并产生了针对抗原的免疫应答。

3. 免疫细胞活性：通过流式细胞术等技术，观察并比较实验组和对照组小鼠免疫细胞的活性。

实验结果显示，实验组小鼠的免疫细胞活性较高，表明其免疫系统对抗原的识别和攻击能力增强。

4. 免疫记忆效应：在实验组小鼠中，注射抗原后，免疫系统形成了对抗原的记忆效应。

再次注射相同抗原时，免疫应答更为迅速和强烈。

而对照组小鼠未形成明显的免疫记忆效应。

结论：本次实验结果表明，免疫系统对外来抗原具有高度的特异性和记忆性。

免疫细胞的活性和效能在免疫应答中起到关键作用。

这些实验数据为进一步研究免疫系统的功能和应对机制提供了重要依据。

展望：在未来的研究中，可以进一步探究免疫系统对不同类型抗原的应答差异，以及免疫细胞的分化和调控机制。

此外，可以结合其他技术手段，如基因工程和单细胞测序，深入研究免疫系统的细节和复杂性。

医学免疫学实验指导病原生物与免疫学教研室实验一免疫系统组织和细胞形态学一、实验目的观察小鼠胸腺、脾脏等免疫器官及免疫细胞二、实验内容机体免疫系统由免疫器官、免疫细胞、免疫分子组成。

该系统具有识别和排除抗原性异物、维持机体内环境稳定和生理平衡的功能，是执行体液免疫和细胞免疫的物质基础。

本次实验主要观察免疫器官大体解剖学、免疫细胞的形态学特征。

小鼠是啮齿目中体形较小的动物，淋巴系统很发达，包括胸腺、脾脏、淋巴管、外周淋巴结及肠道派氏集合淋巴结。

本实验在带教老师指导下，解剖小鼠，观察胸腺、脾脏等免疫器官，并制血涂片，观察小鼠免疫细胞。

（一）小鼠免疫器官解剖学观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。

２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液。

３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。

【方法】１小鼠脱臼处死，投入盛有3%来苏尔水的缸内，浸泡5分钟。

取出小鼠，仰卧位置于试验台上，使动物腹部朝上。

２以镊子提起耻骨处皮肤，用剪刀沿正中线直剪开至下颌部，然后钝性分离皮肤，再把皮肤向四肢剪开。

３注意观察腹壁，用剪刀沿正中线自阴部至膈肌为止剪开，观察腹腔液量及性状，观察脾脏。

４切开膈肌，剪断胸骨，翻起胸骨，观察胸腺、心脏及肺脏，胸腺位于小鼠胸腔心脏前上方，内有许多大淋巴细胞（即前胸腺细胞）及特定的上皮网状细胞（分泌胸腺激素）。

５解剖结束，深埋动物。

（二）免疫细胞的形态观察【材料】１动物：昆明种小白鼠。

２试剂：3%来苏尔水，瑞特氏染液，pH8.6硫酸盐缓冲液，20%盐酸甲醇。

３器材：眼科镊，眼科剪，玻片。

【方法】１准备洁净玻片两张，一张用于推片，另一张用于固定标本。

２剪断小鼠尾巴取血或小鼠眼球取血，迅速在玻片上涂血膜制备血涂片，自然干燥。

３瑞氏染色（１）染色：甲醇固定标本２分钟（亦可省略），滴加瑞氏染液数滴覆盖血膜，染色１分钟，再加等量的pH8.6硫酸盐缓冲液或新制蒸馏水，用洗耳球吹打，使之与染液混匀，静置染色8～10分钟，弃去染料，水洗。

（２）脱色：用20%盐酸甲醇脱色，肉眼观察玻片呈粉红色为宜，显微镜下观察结果。

第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。

2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。

3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。

4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。

5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。

6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。

7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。

8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。

9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。

主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。

10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。

11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。

中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。

12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。

当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。

填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。

2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。

3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。