药学本科分子生物学实验指导

《分子生物学与基因工程实验》课程实验教学大纲(制药工程).《分子生物学与基因工程实验》课程实验教学大纲（制药工程）课程代码：XXX课程性质：专业必修课学时：XX 学时学分：X 学分课程负责人：XXX一、课程目的与任务本课程旨在培养学生对于分子生物学和基因工程理论知识的掌握，能够熟练运用实验技术和仪器仪表进行分子生物学和基因工程研究，并具备独立设计和完成分子生物学实验的能力。

重点培养学生的创新思维和实验操作技能，为制药工程领域的科学研究和工程实践提供有力支撑。

二、参考教材1. 《分子生物学实验指导》（第二版），XXX 主编，XXX 出版社，20XX 年。

2. 《基因工程实验技术教程》，XXX 主编，XXX 出版社，20XX 年。

3. 其他参考图书及相关论文资料。

三、教学大纲及主要内容1. 实验室安全操作规范与实验仪器仪表的基本操作方法介绍- 实验室安全操作规范及急救常识- 常用实验仪器仪表的使用方法与注意事项2. DNA的提取与纯化实验- 细胞裂解与DNA提取方法- DNA纯化与测定方法3. DNA聚合酶链反应（PCR）实验- PCR反应体系的构建和优化- PCR实验的操作技巧与实时监测方法4. 基因克隆实验- 基因片段扩增与连接- 质粒构建与转化菌株筛选5. 基因组DNA库构建与筛选- 基因组DNA库构建技术与流程- 文库筛选方法与数据分析6. RNA提取与逆转录实验- RNA提取与纯化方法- 逆转录反应的优化及相关测定方法7. 蛋白质的表达与纯化实验- 蛋白质表达系统的选择与构建- 蛋白质的纯化与鉴定方法8. 基因工程在制药工程中的应用- 制药工程中的基因修饰技术- 基因工程在药物生产中的应用案例介绍四、实验安排与要求1. 课程实验顺序与安排：- 实验一：DNA的提取与纯化实验- 实验二：DNA聚合酶链反应（PCR）实验- 实验三：基因克隆实验- 实验四：基因组DNA库构建与筛选- 实验五：RNA提取与逆转录实验- 实验六：蛋白质的表达与纯化实验- 实验七：基因工程在制药工程中的应用2. 实验要求：- 学生需按照教师指导的程序和要求，完成实验操作，并提交实验报告。

实验项目一：总RNA的提取（必做）一、实验学时：6学时二、实验目的通过本实验学习总RNA的提取和分析方法。

三、实验内容利用匀浆裂解细胞，采用TRilzol试剂盒抽提RNA去除蛋白质和DNA。

四、实验要求学会提取基因组RNA的方法和操作过程提取RNA时，要特别注意防止RNase的污染，所用玻璃器皿均应用0.1％的二乙基焦碳酸盐(diethyl pyrocarbonate，DEPC)处理。

塑料器材均使用一次性用品，并高压灭菌处理，必要时，也可用0.1%DEPC处理。

五、实验所需仪器设备与试剂仪器：移液器及吸头，电泳仪,台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪等试剂：TRIzol 试剂、氯仿、异丙醇、75% 乙醇（DEPC H2O 配制）、DEPC H2O六、实验原理TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。

最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。

取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；七、实验步骤1. 颈椎脱臼法处死大鼠，打开大鼠腹腔，取出肝脏2. 将肝脏用ddH2O冲洗几遍，去除血液3. 将大鼠肝脏放入研钵，用剪刀剪成绿豆大小的组织块，4．冷冻离心机冷却到4℃（预冷半个小时）。

准备冰盒。

5．戴口罩，戴手套。

6. 每个EP管中，加入100mg左右的组织，加入1mL Trizol 试剂，7. 超声破碎仪破碎细胞8. 剧烈震荡30秒，室温静置10分钟。

9．加入200uL氯仿（三氯甲烷），剧烈震荡30秒，室温静置5分钟。

10. 离心：4℃，13,000rpm，10min。

11．取新EP管。

将上层水相（约600uL）加入新EP管，12. 再加入500uL异丙醇，室温静置10分钟。

13. 离心：4℃，13,000rpm，10min。

14. 去上清夜，加入20-30 uL DEPC水，55℃10min，以完全溶解RNA。

《分子生物学与基因工程实验》课程实验教学大纲（制药工程）课程名称（中文）分子生物学与基因工程实验课程性质独立设课课程属性专业必修课教材及实验指导书名称《分子生物学实验》学时学分：总学时总学分实验学时45 实验学分 2.5应开实验学期二年级四学期先修课程微生物学、生物化学一．课程简介及基本要求分子生物学与基因工程实验是分子生物学和基因工程基础理论课的配套课程，与理论课密不可分，是医学、药学和生物学重要的基础课之一。

根据课程的性质、任务、要求及学习的对象，将课程内容分二个层次：基础实验与综合设计性实验。

基础实验是学生需要掌握的基本原理与技能。

由于实验的特殊性，必须由教师准备，学生按实验操作进行。

综合设计性实验是当学生有一定的实验基础时，在教师的指导下，拟定实验方法和步骤后进行实验。

经过分层次，多方式教学的训练后，学生应达到下列要求：1．进一步巩固和加深分子生物学和基因工程基础理论知识的理解，提高综合运用所学知识，独立完成实验的能力。

2．能正确使用仪器设备，掌握仪器设备的工作原理。

3．能掌握实验设计的原理，独立完成实验设计，准确分析实验结果，得出正确的结论。

二．课程实验目的要求《分子生物学与基因工程实验》是理论教学的深化和补充，具有较强的实践性，是一门重要的技术基础，可独立设课和非独立设课作为药学、制药工程、生物技术、生物工程和生物制药专业的必修课。

随着分子生物学的发展与拓宽，分子生物学方法与技术显得尤为重要。

因此，熟悉掌握分子生物学方法与技术，特别是基因操作技能的建立对其它很多学科的发展有直接的影响。

分子生物学实验主要目的是使学生掌握研究与应用分子生物学的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的实验技能。

三．适用专业：制药工程四．主要仪器设备：超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌器、干热灭菌箱、空气浴振荡器、恒温水浴箱、电泳仪、凝胶成像系统、电磁炉、微波炉、CO2培养箱、荧光显微镜、核酸蛋白检测仪、PCR仪、酶标仪、高速冷冻离心机、高速离心机等。

分子生物学实验指导(总45页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除分子生物学实验指导分子生物学实验课程的内容是从亚克隆一个基因直到最终表达出该基因产物的一个完整的科研项目。

以表达纳豆激酶为例，从已经克隆在pMD-18-T 载体上的纳豆激酶酶原基因上用PCR扩增出837bp的纳豆激酶成熟肽基因片段，与T载体连接后转入DH5菌中筛选鉴定，然后用双酶切下纳豆激酶成熟肽基因片段，插入带有6个组氨酸标签的原核表达载体pET-Trx，在表达菌BL(21)DE3中诱导表达出纳豆激酶蛋白质并用SDS-PAGE鉴定。

整套实验围绕纳豆激酶基因的亚克隆、重组、转化、筛选直到表达这一研究顺序进行操作。

其间共涉及学习约11种基因操作的基本技术，我们按这些操作技术出现的先后顺序分别编为实验一至实验十一。

各个实验之间具有很强的逻辑性和连贯性，前一个实验的结果就是下一个实验的原料。

整套实验设计实际上是一个基因操作实验平台，随时能根据需要更改外源基因和表达载体或进一步扩充实验内容。

我们在每年的教学实践中会不断增加目的基因和表达载体的种类，以便于学生实验小组能够从事不同的项目，减少雷同，增加兴趣。

分子生物学实验的宗旨是让学生在独立实践操作中学习分子生物学的基本研究方法和体会分子生物学研究的严密逻辑和科研理念。

实验教学的组织方式是科研项目式管理，即在教师的总体指导下，在给定的实验材料和实验条件的基础上，让学生独立思考、自行规划实验流程、制定实验计划、准备实验材料、动手操作、整理和分析实验结果，最后完成实验项目，写出实验论文。

因此学生在实验前要认真预习实验内容，结合学过的分子生物学原理，弄懂每一步实验的目的和原理，了解实验的内容和总体实验方案，写出分子生物学大实验《开题报告》，交教师审阅和讨论修改后才能进入实验室操作。

在实验过程中，教师不干涉学生的实验安排和操作程序，仅以导师的身份对学生的实验操作进行现场巡回指导、回答学生的疑问、为学生示范一些高档实验仪器和软件的使用，提供公用的试剂（如酶）等，并对学生的每一步实验结果进行评价和把关。

大学生物教案：分子生物学实验的操作指南1. 引言本指南旨在提供大学生物专业的教师和学生们关于分子生物学实验的具体操作步骤与技巧。

分子生物学是现代生命科学研究中至关重要的一部分，通过实验操作可以加深对分子级别生命现象的理解。

在这个指南中，我们将介绍几个常见的分子生物学实验，并提供详细步骤以及相关注意事项。

2. 实验1：DNA提取2.1 实验原理在本节中，我们将介绍DNA提取实验的基本原理和背景知识。

这包括了DNA 提取方法、材料准备和实验目标等内容。

2.2 实验步骤•样品准备：选择适当来源（如水果、血液等）并根据实验要求进行预处理。

•细胞破碎：使用细胞裂解缓冲液和搅拌器将样品细胞破碎。

•DNA沉淀：添加盐和酒精使DNA沉淀出来，并用无菌水洗涤。

•DNA溶解：使用缓冲液溶解沉淀的DNA。

2.3 注意事项•材料应严格按照实验要求选用，确保实验结果的可重复性。

•使用无菌操作技巧以避免外源性DNA污染。

•注意个人安全，佩戴实验室所需的防护装备。

3. 实验2：PCR扩增反应3.1 实验原理在本节中，我们将介绍PCR（聚合酶链式反应）扩增反应的原理和背景知识。

这包括了PCR技术的基本原理、引物设计和酶选择等内容。

3.2 实验步骤•反应体系准备：根据实验目标计算并配置PCR反应所需的试剂和底物。

•DNA模板制备：提取样品中的DNA，并以适当浓度加入到PCR反应中。

•PCR反应设置：配置好PCR反应管，包括引物、酶和缓冲液等。

•PCR条件设定：根据要扩增的序列特点合理设定温度和时间参数。

3.3 注意事项•注意使用不同样本DNA之间相互污染的可能性，避免交叉污染。

•检查引物设计是否正确并符合预期扩增目标。

4. 实验3：凝胶电泳分析4.1 实验原理在本节中，我们将介绍凝胶电泳分析的原理和背景知识。

这包括了DNA迁移速度、凝胶类型选择和标记物设计等内容。

4.2 实验步骤•凝胶制备：根据实验需要配置适当浓度的琼脂糖凝胶。

《分子生物学大实验》实践教学大纲一、课程基本信息1. 课程编号：1117045072. 课程类别：集中实践课程3. 课程性质：必修课4. 学时/学分：2周/2学分5. 先修课程：分子生物学基因工程发酵工程细胞工程6. 适用专业：生物制药本科二、课程目标及学生应达到的能力本课程是生物工程专业的一门必修实践课程。

目前，以分子生物学为基础的基因克隆重组技术已成为现代生物技术的核心。

因此，本实践课程通过从基因分离、目的基因克隆及鉴定等一系列的实验，帮助学生巩固和掌握有关分子生物学和基因工程的相关理论与实验方法，提高学生操作技能、及独立分析问题、解决问题的能力，为学生从事分子生物学技术方面的相关研究奠定实践基础。

具体课程目标及能力要求如下：课程目标1:学生掌握下列主要的分子生物学实验技术：质粒DNA的分离及纯化，PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳，DNA重组、大肠杆菌感受态细胞的制备和转化，转化与检测实验等。

课程目标2:使学生熟悉现代分子生物学实验的基本原理、操作技能，能够理论联系实际学会应用，提高学生独立分析问题、解决问题的能力。

本课程采用实验教学方法，2-3人一组操作，结合小组讨论与集体讨论、分子生物学相关实验小技巧介绍等多种教学手段，要求学生认真预习，熟悉实验的内容，了解所用的仪器用具；实验中严格按操作规程进行，仔细观察，及时记录实验现象及结果，认真做好每一天的实验报告：实验结束后仔细分析和总结实验结果，帮助学生通过本实践课程的学习全面地掌握分子生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，提高学生从事科学研究的综合素质。

五、课程的考核环节1、评定方法本课程要求学生对每次实验进行认真学习操作，详细观察和记录，实验结束后形成完整实验资料和结果分析，在此基础上撰写完整的实验报告，作为实验考核的主要依据；同时，每次实验由指导老师对操作环节进行等级评定。

实验成绩按照考勤占10%,实验操作占40%,实验报告成绩占50%o 实验成绩分：优、良、中、及格、不及格五级评定。

分子生物学大实验操作指南单林娜王莲哲编常用试剂的配制方法（一）配方1、1MTris-HCl, pH8.0, 500ml60.55g Tris + 400ml H2O + 约26 ml浓HCl2、0.5 M Na2EDTA，pH8.0, 200ml （EDTA难溶于水，应优先配制，并加入适量NaOH 助溶）37.22g EDTA + 180ml H2O + 约8 g NaOH片（若是EDTA二钠盐可减半）3、10% 葡萄糖10g 葡萄糖+ 90ml H2O4、1M NaOH：4g NaOH+ 96 ml H2O5、KAc (3M K. 5M Ac)（9.814×3）g KAc + 30ml H2O + 11.5ml [60.5×2/1.049] 冰醋酸+ 28.5ml H2O——定容至100ml（溶液III: KAc 14.7g,HAC 5.8mL, 加水至50mL。

乙酸；醋酸；冰醋酸【英文名称】acetic acid 【结构或分子式】CH3COOH 【相对分子量或原子量】60.05 【密度】1.049 醋酸钾(医药级) C2H3KO2 F.W. 98.14）6、70% 乙醇7、TE50ml ：10 mmol/L Tris-HCl, pH8.0，1 mmol/L EDTA，pH8.01MTris-HCl（pH8.0 ）0.5ml0.5 M Na2EDTA（pH8.0 ）0.1mlH2O 49.4ml8、CTAB抽提液100ml：2%CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）100mmol/L Tris-HCl, pH8.0 / 1MTris-HCl（pH8.0 ）10ml20 mmol/L EDTA，pH8.0 / 0.5 M Na2EDTA（pH8.0 ）4ml1.4mol/L NaCl (8.18g)（二）操作步骤1、刷洗试剂瓶等玻璃器皿清水——去污粉——清水4遍——蒸馏水2遍2、按配方配制试剂计算用量写出配方——称量（学习掌握电子天平用法）——混溶3、灭菌（复习巩固压力锅用法）实验一总DNA提取（4学时）（一）总DNA提取1．目的：学会提取纯化DNA的试剂的配法，学会使用离心机、移液器，掌握总DNA 的提取和纯化技术。

农学院《分子生物学》实验指导书适用专业：园艺、农学、植物保护、农产品质量与安全、中草药栽培与鉴定贵州大学二OO 七年八月前言本实验课的目的是使学生掌握一些基本的分子生物学实验技术，提高专业技术水平。

学生通过实验掌握分子生物学的基本实验方法，验证、巩固和加深对分子生物学基本理论的理解，培养严谨的科学态度和分析问题，解决问题的能力，培养从事科学研究的基本素养。

为了使学生更好地理解和深刻地把握这些知识，设置了以下实验项目：实验一质粒DNA的提取与分离（验证性实验，学时数3）实验二质粒DNA的酶切（验证性实验，学时数3）实验三酶切片段的琼脂糖凝胶电泳分析（验证性实验，学时数2）实验四PCR技术在农业中的应用（综合性实验，学时数10）通过本课程的相关实验，让学生熟悉进行分子生物学研究的基本仪器设备和规范的操作方法，使学生学习并掌握质粒DNA提取的原理和操作步骤；了解质粒酶切鉴定原理；掌握应用琼脂糖凝胶电泳的原理及操作方法，并对PCR的扩增结果及DNA的质量进行检测。

掌握应用PCR技术对植物进行DNA水平遗传多样性检测及分析的方法。

使学生学会分子生物学的基本实验方法，并在科学态度、实验技能、独立工作能力等方面获得初步的训练。

目录1、实验一：质粒DNA的提取与分离······························································页码2、实验二：质粒DNA的酶切·········································································页码3、实验三：酶切片段的琼脂糖凝胶电泳分析··················································页码4、实验四：PCR技术在农业中的应用····························································页码5、实验报告基本内容要求··············································································页码6、实验报告格式····························································································页码实验一：质粒DNA的提取与分离实验学时：3实验类型：验证性实验实验要求：必修一、实验目的从细菌菌体中提取、分离质粒DNA分子，是基因工程的基础步骤。

分子生物学实验指导第一节、实验室规则及安全防护一、实验室规则二、实验室安全防护第二节、分子生物学常用研究技术一、核酸分离纯化二、聚合酶链反应技术三、分子杂交技术四、分子克隆技术五、其它新技术第三节、常用仪器使用一、离心机二、分光光度计三、PCR仪第四节、如何撰写实验报告第五节核酸分离纯化技术实验一、基因组DNA的提取制备与检测实验二、总RNA的提取制备与检测实验三、质粒DNA的提取制备与检测第六节 PCR技术实验四、常规PCR技术实验五、定量PCR技术第七节分子克隆技术实验六、DNA的限制性酶切与电泳实验七、凝胶中DNA片断的纯化回收实验八、DNA连接实验实验九、感受态细胞的制备实验十、重组DNA转化与篮白斑筛选第八节分子杂交技术实验十一、Southern 印迹杂交实验十二、Northern印迹杂交实验十三、Western印迹实验十四、核酸原位杂交第九节综合性实验实验十五、蛋白质双向电泳实验十六、酵母双杂交实验实验十七、RNA干扰实验第一节、实验室规则及安全防护一、实验室规则1．每个同学都应该自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不迟到，不早退，不大声谈笑。

2．实验前认真预习实验内容，熟悉本次实验的目的，基本原理，操作步骤，懂得每一步操作的意义和了解所用仪器的使用方法，否则不能开始实验。

3．实验时要听从指导老师的指导，严格认真地按规程进行实验，并注意与同组同学的配合。

未经许可，不得乱动实验装置、仪器以及电器设备等。

4．实验数据和现象应随时记录在专用的实验记录本上。

实验结束时，实验记录必须送指导老师审阅后方可离开实验室；实验报告应该当堂完成或在下次实验开始前交给指导老师。

5．保持台面、地面、水槽内及室内整洁。

精心爱护各种仪器，要随时保持仪器的清洁。

如发生故障，应立即停止使用并报告指导老师。

完成实验后应将器材洗净，把器材、药品归放回原处，试管倒置于试管架中并排列整齐。

按规定处理好废物，废液，做好清洁卫生。

第一部分分子生物学实验入门一、实验室规则（一）实验室安全规则1．水电使用安全规则：注意节约用水（不管是自来水还是纯净水），清洗器皿时，先用自来水洗干净后，根据实验需要再用纯净水冲洗l～3遍；随时注意水龙头是否关掉，水池是否堵塞、漏水；注意节约用电，不能随意调节空调，仪器使用前应了解是否漏电、短路，使用完后按操作程序关掉电源；最后离开实验室的同学应检查实验室的照明灯、仪器电源、水龙头是否关掉。

2．药品使用安全规则：易燃易爆药品远离火源；注意有毒或腐蚀性药品—的使用方法；绝对禁止药品、试剂间的相互污染；废弃液体入水池后用水冲掉，固体废弃物严禁入水池；有毒废弃物倒到指定地点。

3．仪器使用安全规则：实验室任何仪器不能随意操作，严格按照操作规程进行；仪器在使用过程中出现故障要报告，不能自行处理；使用完仪器后要清洁仪器和台面并记录仪器使用情况。

（二）实验室卫生规则1．维护实验室的清洁卫生：不能随地吐痰，乱扔废纸屑等物品。

每小组实验完后清洗器皿和清理台面。

2．严格执行卫生值日制：实验完后实验室的清洁卫生由值日小组按照布置严格执行，不能无故不做。

（三）学生守则1．每位同学都应衣冠整齐，自觉遵守课堂纪律，维护课堂秩序，不得无故迟到早退，保持室内安静。

2．注意实验室环境、仪器和实验桌面的整洁，每次实验完成后该清洗的器皿清洗完后按原位放好，经老师检查后方可离开。

3．每次开始做实验前，应预习好实验指导，要充分了解实验原理、方法及仪器设备的使用方法，原则上按照实验指导的方法进行，如经预习，查资料后，有更好的实验方法，可与老师讨论后进行，鼓励创新。

4．使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约，应特别注意保持药品和试剂的纯净，严防混杂。

5．注意安全。

易燃易爆物远离火源，注意有毒或腐蚀药品的使用方法，玻璃器皿的使用、洗涤，尽可能减少损坏、割伤手。

行走时不要碰撞他物。

废弃液体倒入水槽并用水冲走，固体废弃物严禁入水槽，应丢入垃圾桶中。

《药学分子生物学实验》教学大纲一、课程基本信息课程编号：2中文名称：药学分子生物学实验英文名称：Experiments of Medical Molecular Biology适用专业：药学课程类别：学科基础实验开课时间：5总学时：24总学分：1二、课程简介“药学分子生物学”课程，在药学各专业的教学计划中是一门非常重要的、前沿性的专业基础课，其主要任务是使学生获得分子生物学的基本理论和技术，以及在生命科学各领域中的应用。

实验课是完成本课程教学的重要环节，其目的是使学生掌握分子生物学基本实验设计、实验方法、实验结果分析等，培养学生独立处理问题和解决问题的能力。

三、相关课程的衔接与相关课程的前后续关系。

预修课程：药学分子生物学 (2)、药学专业综合实验(2)四、教学的目的、要求与方法（一）教学目的：本课程主要向学生传授遗传信息的贮存、传递与表达相关实验技术。

使药学学生为深入学习其他药学基础课乃至毕业后的继续教育、药学各学科的研究工作中在分子水平上探讨疾病的病因、发病机理及疾病诊断、预防、治疗奠定理论与实验基础。

（二）教学要求：1、阐明遗传学中心法则所揭示的信息流向，包括DNA复制、RNA 转录、翻译、DNA的损伤与修复、基因表达调控；2、概要地介绍与疾病相关的分子生物学基础；3、概要地介绍重组DNA和基因工程技术及其与医学应用的联系、基因操作，基因诊断；4、概要地介绍细胞信息传递及其途径；（三）教学方法：本课程实验为实际操作、多媒体和示教相结合。

学生根据实验教程提供的方法有目的性地进行实验操作，每项实验操作前实验课教师讲解实验原理和基本操作要求，学生根据课上所提供的试剂和器材进行实验操作。

五、教学内容（实验内容）及学时分配（教学难点用黑体标出）第一部分（8学时）：DNA的提取与鉴定真核生物基因组DNA的提取与电泳分析；大肠杆菌质粒的提取与电泳分析；DNA的转膜与杂交。

第二部分（8学时）：克隆载体的构建与转化引物设计；聚合酶链式反应扩增目的基因；目的基因的限制性内切酶酶切与胶回收；目的DNA片段与原核表达质粒载体的连接与大肠杆菌转化；重组质粒的酶切鉴定。

分子生物学实验指导1. 实验背景分子生物学是研究生物大分子的结构、功能和相互作用的一门科学。

它包括DNA、RNA、蛋白质等生物大分子的研究，以及研究它们在细胞内的功能和相互作用的方式。

分子生物学的发展对于理解生物现象、治疗疾病和推动基因工程等都起到了重要的作用。

在进行分子生物学实验之前，我们需要了解一些基本的实验原理和步骤，以确保实验的准确性和可重复性。

本文将介绍一系列分子生物学实验的指导，包括DNA提取、PCR、凝胶电泳等。

2. 实验材料•细菌培养基•细菌菌株•试剂盒（DNA提取、PCR、凝胶电泳）•离心管、PCR管、琼脂糖凝胶板等实验器材3. 实验步骤3.1 DNA提取1.取一定数量的细菌菌株，并将其转接到细菌培养基中。

2.在转接后的细菌培养基中培养一夜，使细菌得到充分生长。

3.将培养好的细菌菌液转移到离心管中，进行离心。

4.移除上清液，加入细菌细胞裂解液，并进行充分混合。

5.进行高速离心，将裂解后的细菌细胞碎片与上清液分离。

6.取得上清液，为DNA提取做好准备。

3.2 PCR1.准备PCR反应试剂盒，包括模板DNA、引物、dNTPs等。

2.处理PCR管，加载模板DNA、引物、dNTPs和酶。

3.设置PCR反应器的温度程序，包括变性、退火和延伸等步骤。

4.将PCR反应管放入PCR机中，进行PCR反应。

3.3 凝胶电泳1.准备琼脂糖凝胶板，根据需要调整琼脂糖浓度和凝胶浓度。

2.准备样本，将PCR反应产物与DNA标准样品一同加载到凝胶孔中。

3.加载电泳缓冲液，确保凝胶完全被浸泡。

4.打开电泳仪，进行凝胶电泳，设定一定的电流和时间。

4. 结果分析通过实验，我们可以获得一系列结果。

在DNA提取实验中，我们可以通过测量DNA的浓度和质量来评估提取的效果。

在PCR实验中，可以通过检测PCR产物的大小和数量来评估PCR反应的效果。

在凝胶电泳实验中，可以通过观察凝胶图像来判断PCR产物的大小和纯度。

5. 实验注意事项在进行分子生物学实验时，需要注意以下事项：•实验前要充分准备。

《分子生物学》实验指导实验1 总DNA提取生物总DNA的提取是分子生物学实验的一个重要内容。

由于不同的生物材料细胞壁的结构和组成不同，而细胞壁结构的破坏是提取总DNA的关键步骤。

同时细胞内的物质也根据生物种类的不同而有差异，因此不同生物采用的提取方法也不同，一般要根据具体的情况来设计实验方法。

本实验介绍采用CTAB法提取植物总DNA的技术。

[实验目的]学习和掌握学习CTAB法提取植物总DNA的基本原理和实验技术。

学习和掌握紫外光吸收法鉴定DNA的纯度和浓度。

[实验原理]植物叶片经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如CTAB），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。

本实验采用CTAB法，其主要作用是破膜。

CTAB 是一种非离子去污剂，能溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。

植物材料在CTAB的处理下，结合65℃水浴使细胞裂解、蛋白质变性、DNA 被释放出来。

CTAB与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mM）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1-0.5mM NaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。

经过氯仿/ 异戊醇(24:1) 抽提去除蛋白质、多糖、色素等来纯化DNA，最后经异丙醇或乙醇等沉淀剂将DNA沉淀分离出来。

由于核酸、蛋白质、多糖在特定的紫外波长都有特征吸收。

核酸及其衍生物的紫外吸收高峰在260nm。

纯的DNA样品A260/280≈1.8，纯的RNA样品A260/280≈2.0，并且1μg/ml DNA 溶液A260=0.020。

[实验器材]1、高压灭菌锅2、冰箱3、恒温水浴锅4、高速冷冻离心机5、紫外分光光度计6、剪刀7、陶瓷研钵和杵子8、磨口锥形瓶（50ml）9、滴管10、细玻棒11、小烧杯（50ml）12、离心管（50ml）13、植物材料[实验试剂]1、3×CTAB buffer（pH8.0）100mM Tris25mM EDTA1.5M NaCl3% CTAB2% β-巯基乙醇2、TE缓冲液（pH8.0）10mmol/L Tris·HCl1mmol/L EDTA3、氯仿-异戊醇混合液（24：1，V/V）4、95％乙醇5、液氮[实验步骤]1、称取2g新鲜的植物叶片，用蒸馏水冲洗叶面，滤纸吸干水分。