真菌βD葡聚糖检测与真菌感染诊断

572014年2月第21卷第3期血清（1-3）-β-D 葡聚糖检测判断肺部侵袭性真菌感染的诊断价值谢 颖肺部侵袭性真菌感染（PIF I ）的诊断目前主要根据患者痰培养或肺组织活检，但操作复杂，尤其是肺组织活检，临床可操作性差，不易开展。

（1-3）-β-D 葡聚糖为一种多糖，普遍存在于真菌的细胞壁中，约占真菌细胞壁干重的50％。

笔者对我院送检痰标本患者的血清进行（1-3）-β-D 葡聚糖检测，评价其在PIFI 中的诊断价值。

1 资料与方法1.1 一般资料与分组 2008年6月至2012年11月，送检我科的支气管镜吸引痰标本及其患者血清各77份。

有广谱抗生素应用史41例（53.2%），糖皮质激素使用史31例（40.3%），体内置留导管22例（28.6%），恶性肿瘤史8例（10.4%）。

痰标本培养真菌阳性28例，设为感染组；阴性49例，设为非感染组。

1.2 血清（1-3）-β-D 葡聚糖检测 检测流程按试剂盒要求逐步进行。

① 将事先准备待检的静脉血2ml 置入离心管中以2900r /min 的转速离心6min ，然后吸取上层血清100μl 置入900μl 处理液中，振荡摇匀。

将其放置在恒温水浴箱中70℃孵育10min ，然后快速放置到冰水中。

② 将制备好的标本200μl 放入含有主反应试剂A 的管中，充分振荡混匀并移植标准玻璃反应管中，放入MB-80微生物快速动态检测系统中进行反应。

③ 反应1h 后进行结果判断。

1.3 统计分析 计量资料以（x-±s ）表示，组间比较用t 检验。

计数资料以百分数表示，组间比较采用χ2检验。

Stata 12.0统计绘制ROC 曲线，并根据敏感性和特异性的最佳组合判断血清（1-3）-β-D 葡聚糖的临界值，并给出相应的该临界值下的诊断PIF I 敏感性和特异性，计算曲线下面积，双侧P ＜0.05认为差异有统计学意义。

2 结果2.1 两组基本情况比较 年龄：感染组（66.8±9.2）岁，非感染组（67.4±11.1）岁，差异无统计学意义（t =0.24，P ＞0.05）。

1—3—β—D葡聚糖动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用目的：探讨血浆1-3-β-D葡聚糖（BG）动态检测在深部真菌感染抗真菌药物疗效评价中的应用价值。

方法：选取38例疑似深部真菌感染患者作为观察对象，应用MB-80微生物动态快速检测系统及GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒定量检测血浆1-3-β-D葡聚糖含量，并与真菌培养进行对照。

结果：BG动态检测法与真菌培养法检测阳性结果均为18例时，BG动态检测阳性而真菌培养为阴性共20例，也即当BG动态检测法均为阳性时，真菌培养法阳性检出率为47.4%。

38例患者中21例經抗真菌药物治疗后血浆BG呈下降趋势，降至健康水平（BG 值<10 pg/ml）。

结论：血浆1-3-β-D葡聚糖动态检测法较传统的真菌培养法更简便、快捷、阳性率高，可作为抗真菌药物疗效评价的重要指标。

标签：血浆1-3-β-D葡聚糖；深部真菌感染；抗真菌药物近年来，由于广谱抗菌药物、糖皮质激素的广泛应用，临床深部真菌感染的发病率和死亡率呈明显上升趋势，而传统的诊断方法，如真菌培养、病理组织性等方法由于耗时长、阳性率低、费用高而难以实现及早诊断及早治疗的目的。

基于此，本文笔者探讨了目前较为流行的血浆1-3-β-D葡聚糖动态检测法诊断深部真菌的可行性和效果，结果证实动态检测法可作为抗真菌药物疗效评价的重要参考指标。

现报道如下。

1 资料与方法1.1 一般资料选取2010年7月-2011年6月笔者所在医院收治的38例疑似深部真菌感染患者，血液检测血浆1-3-β-D葡聚糖动全部≥50 pg/ml。

以上38例患者均动态检测3次血浆1-3-β-D葡聚糖水平，取平均值，再对38例患者至少1次真菌培养。

1.2 方法1.2.1 仪器与试剂选用北京金山川科技公司提供的MB-80微生物动态快速检测系统、GKT-5M Set动态真菌检测试剂盒，及附属的T01智能恒温仪、冰浴槽。

1.2.2 检测方法（1）取静脉血2 ml置入无热源肝素钠真空采血管，3000 r/min 离心，分离血浆；（2）提取上述血浆0.10 ml加入0.9 ml样品处理液D中，混匀后置于70 ℃恒温10 min，取出后迅速注入冷水浴中，并冷却至37 ℃以下，作为待测血浆样品；（3）取待测血浆样品0.2 ml加入酶反应主剂中（冻干粉），溶解后转移至无热原平底反应管中，插入MB-80微生物动态检测系统中进行反应，1 h后自动计算待测血浆中1-3-β-D葡聚糖含量。

1,3-β-D葡聚糖(BG)在检测侵袭性真菌感染诊断中的影响因素分析近20年来，由于大剂量广谱抗生素、抗肿瘤药物的长期应用，器官移植及造血干细胞移植等治疗方法的完善，各种导管在体内的介人以及恶性肿瘤、艾滋病等免疫功能低下患者的不断增加，侵袭性真菌感染的发病率明显上升。

侵袭性真菌感染（IFI）临床常无特异性，而真菌实验室诊断方法中镜检、培养、血清学诊断、组织病理学检查和分子生物学方法的检出率较低，G试验检测时间短其为非侵人手段在临床上广受关注。

目的及意义:分清1,3-β-D-葡聚糖检测（G试验）干扰因素，提高准确性。

G试验是及激活试剂中鲎变形细胞裂解物中的凝固酶（G因子），形成凝固蛋白，根据反应物的浓度变化对1,3-β-D葡聚糖浓度进行定量检测。

G试验是念珠菌感染的首选检查方法，检测速度快。

G试验是新的真菌抗原检测方法、念珠菌感染首选检查方法，在深部真菌感染早期诊断有重要意义，检查结果作为方法学评价标准，弥补了传统病理学及培养的不足，提高IFI检测率，缩短检查时间，早期治疗赢得时间为临床合理用药提供帮助。

G试验标准值：＜10pg/ml为阴性，10pg/ml-20pg/ml是观察，＞20pg/ml 阳性。

一般两次及以上G试验阳性及临床特征，并排除干扰因素就可以确定真菌感染。

BG升高原因：1，3-β-D葡聚糖(（1，3）-β-D-glucan,BG)广泛存在于多种真菌细胞壁中，是真菌的特有多糖成分，包括念珠菌、曲霉菌、镰刀菌及卡氏肺孢子菌．占其干质量的50％以上，细菌、人和病毒都不含该成分,真菌菌丝生长的过程中、进入人体体液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，1，3-β-D葡聚糖可从细胞壁中释放出来，使血液和体液(如尿、脑脊液，腹水，胸水等)中1，3-β-D葡聚糖含量升高，故检测血液中的BG可以协助侵袭性真菌感染（IFI）的诊断，当真菌在体内含量减少时，机体免疫可迅速清除 1,3-β-D-葡聚糖。

(1-3)-β-D葡聚糖检测与真菌培养联合检测对临床深部真菌感染的对比研究摘要：目的: 评估血清(1-3)-β-D葡聚糖检测定量分析(G实验)与真菌培养联合检测对临床深部真菌感染的诊断意义。

所有真菌细胞膜上都含有(1-3)-β-D葡聚糖，而其他微生物、动物及人的细胞成分和细胞外液都不含这种成分，因此在机体的体液中检测到(1-3)-β-D葡聚糖是诊断深部真菌感染的有效依据。

方法: 通过回顾性分析80例怀疑深部真菌感染住院患者的G实验和真菌培养结果,分别计算两种方法及联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值。

结果: G 实验和真菌培养联合检测的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为88.0%、96.0%、91.7%和94.1%。

G实验的灵敏度和阳性预测值高,真菌培养的特异度高。

结论:血清(1-3)-β-D葡聚糖检测和真菌培养联合检测可提高实验的灵敏度,减少假阴性的发生,对早期诊断深部真菌感染有一定临床意义。

关键词：(1-3)-β-D葡聚糖；真菌培养；深部真菌感染【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602(2014)03-0210-01近年来随着广谱抗菌药物、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用，临床深部真菌感染率不断上升，已成为医院感染的主要原因之一。

一般来说,通常发生于危重患者,而且病情极易被原发病掩盖,从而导致误诊、漏诊[1]。

通过此研究的结果以便对危重病人深部真菌感染早发现、早治疗降低死亡率。

据统计,近30年深部真菌感染的发病率增加了3~5倍,真菌感染已成为艾滋病的重要死亡原因之一。

引起深部真菌感染的病原菌主要有念珠菌病、孢子丝菌病、隐球菌病、曲霉菌病、毛霉菌病、马尔尼菲青霉菌病、组织孢浆菌病以及球孢子、副球孢子菌病等临床病症。

由于传统的培养方法不能及时提供深部真菌感染的信息,目前一些快速诊断技术,如高分辨CT(HRCT)及检测真菌抗原和核酸的非培养诊断技术得到快速发展。

真菌β-D-葡散糖检测取真菌熏染诊疗之阳早格格创做一、概括经钻研标明，(1-3)-β-D-葡散糖是一种广大存留于真菌细胞壁的抗本身分, 占其搞燥沉量的80%～90%，其余微死物、动物及人的细胞身分战细胞中液均没有含有.深部真菌熏染患者中血浆(1-3)-β-D-葡散糖含量删下,二者存留相闭性.当真菌加进人体血液或者深部构制后，经吞噬细胞的吞噬、消化代开后，（1-3）-β-D葡散糖可从胞壁中释搁出去，进而使血液或者其余体液中（1-3）-β-D葡散糖含量删下.当真菌正在体内含量缩小时，肌体免疫可赶快对于其扫除.而正在浅部真菌熏染中，（1-3）-β-D葡散糖已被释搁出去，故其正在体液中的量没有删下，它正在血液及无菌体液中的存留不妨很大程度上视为IFI（深部真菌熏染）的标记.二、深部真菌熏染的诊治连年去，由于制血搞细胞移植、真体器官移植的广大启展、下强度免疫压制剂战大剂量化疗药物的应用以及百般导管的体内介进、留置等，临床上侵蚀性真菌熏染(invasive fungal infections，IFI)的抱病率明隐降下.IFI也日益成为引导骨髓及器官移植受者、交受化疗的恶性血液病战恶性肿瘤患者、AIDS以及其余危沉病患者的宽沉并收症及要害牺牲本果之一.由于缺少灵验的早期诊疗脚法，深部真菌熏染病死率居下没有下.对于深部真菌熏染治疗成败的闭键正在于早期诊疗，趁早用药治疗.惯例病本教诊疗“微死物培植”可为临床提供直交的诊疗依据，但是其培植要领耗时少（4-7天），没有相宜用做早期诊疗.而且，随着光谱抗死素、抗菌药物的洪量应用，使得培植的阳性率极矮.时常使用的免疫教要领，也由于抗本抗体反应的特同性好，往往对于某一疑似真菌熏染患者要做多种真菌抗本或者抗体检测，既费时又没有经济，而且当所用药盒的抗本谱或者抗体谱没有齐时也极易制成漏诊.对于一些往常交触过相映真菌抗本的个体，做抗体检测时还会出现阳性反应，果而对于抗体的检测往往央供做动背瞅察才搞做出诊疗，期终属性较好.有钻研报导血浑葡散糖正在念珠菌血症时明隐降下，将其用于念珠菌血症的早期诊疗明隐劣于保守的培植法战血浑教诊疗考查.虽然检测（1-3）-β-D葡散糖只可提示有无真菌侵蚀性熏染，没有克没有及决定为何种真菌，但是也大概转移为一种劣势.果连年去，一些罕睹的条件致病真菌也可引起深部熏染，那便央供一种能赶快决定有无深部真菌熏染的要领.果系统抗真菌药物种类较少，抗菌谱较广，且没有果真菌种类而同，当检测到标本中的（1-3）-β-D葡散糖含量较下时，可赋给予系统制疗，没有必耗时等待审定出种属，可则会贻误最好治疗时机.果此，血浑（1-3）-β-D葡散糖含量检测没有得为一种真用的真菌熏染早期诊疗要领.而且，相闭钻研标明，（1-3）-β-D葡散糖火仄正在确诊IFI患者的血浑中出现持绝降下，而随着药物的使用，对于药物敏感者可很快出现（1-3）-β-D 葡散糖火仄下落及转阳，而药物治疗无效人群（1-3）-β-D 葡散糖值无明隐改变.果此，（1-3）-β-D葡散糖不妨用去推断药物的疗效，以协帮临床医师即时举止药物种类及剂量的安排.通过对于人体体液举止（1-3）-β-D葡散糖含量检测，可帮闲推断人体是可已被真菌熏染.对于下危患者的样本举止连绝分解，可为临床检测提供侵犯真菌的量值或者阳性预示值，为临床诊疗战治疗提供了一种赶快查看要领，对于普及病人治疗治愈率战指挥医死合理用药，以及促进尔国调理职业的死少具备要害意思.三、海内皮毛闭死少情况暂时，临床上诊疗侵蚀性真菌熏染(invasive fungal infections，IFI)的要领主要由宿主果素、临床个性、微死物教查看战构制病理教4部分组成.血液、收气管肺泡灌洗液中的百般真菌PCR测定，是诊疗IFI的微死物教的检测要领.但是保守真菌审定要领皆果周期少、血培植率矮而易于赶快诊疗.钻研者也渐渐将早期诊疗的注意力转背修坐血浑教要领去检测真菌菌体身分或者代开产品，如测定黑念珠菌的苦露散糖、烯醇化酶、D-阿推伯糖醇等.基于深部真菌熏染时，经吞噬细胞处理，菌胞壁落解身分洪量进血，90年代初，有教者修坐了以检测血浆或者血浑中真菌胞壁身分直霉半乳苦露散糖抗本(GM)战(1-3)-β-D葡散糖抗本[(1-3)-β-D-gluean，BG]的含量，用于早期诊疗深部真菌熏染具备较好敏捷度战特同性，且赶快、烦琐，并能提示抗真菌药物治疗.BG检测(也称G考查)是一种新的真菌抗本检测要领，主要由以下钻研机构启展，日本东京Wako杂化教钻研所，Seikagaku Kogyo公司，Ma-ruha公司战好国Cape Code协会.其中Cape Code协会研制的Fungitell试剂盒已被好国FDA 担当用于血液病、肿瘤等免疫受益的患者IFI的诊疗.BG是酵母战丝状真菌细胞壁的多散糖身分，动做真菌抗本具备较下的特同性，本核死物、病毒战人体细胞皆没有存留那种多散糖.果此，它正在血液及无菌体液中的存留不妨很大程度上视为IFI的标记.真菌细胞壁的主要身分BG的比色法检尝试剂盒已广大用于临床.好国FDA已于2003年担当该考查用于可疑IFI患者血浑定性检测.2008年欧洲肿瘤钻研治疗构制(EORTC)IFI合做组(IFICG)战国家过敏及熏染类徐病钻研(NIAID)真菌病钻研组(MSG)将G考查截止列为诊疗IFI的诊疗尺度，但是试剂盒必须是FDA认证的.海中多个钻研核心为评估该考查的个性已搞了洪量的回瞅性考察，证据其敏感度、特同度及临床普遍性均较好.编写： gaowei2010 根源：丁香园。

真菌β-D-葡聚糖检测与真菌沾染诊断一.概述经研讨标明,(1-3)-β-D-葡聚糖是一种普遍消失于真菌细胞壁的抗原成分, 占其湿润重量的80%～90%,其它微生物.动物及人的细胞成分和细胞外液均不含有.深部真菌沾染患者中血浆(1-3)-β-D-葡聚糖含量增高,两者消失相干性.当真菌进入人体血液或深部组织后,经吞噬细胞的吞噬.消化代谢后,（1-3）-β-D葡聚糖可从胞壁中释放出来,从而使血液或其它体液中（1-3）-β-D葡聚糖含量增高.当真菌在体内含量削减时,机体免疫可敏捷对其消除.而在浅部真菌沾染中,（1-3）-β-D葡聚糖未被释放出来,故其在体液中的量不增高,它在血液及无菌体液中的消失可以很大程度上视为IFI（深部真菌沾染）的标记.二.深部真菌沾染的诊治近年来,因为造血干细胞移植.实体器官移植的普遍开展.高强度免疫克制剂和大剂量化疗药物的运用以及各类导管的体内介入.留置等,临床上侵袭性真菌沾染(invasive fungal infections,IFI)的患病率显著上升.IFI也日益成为导致骨髓及器官移植受者.接收化疗的恶性血液病和恶性肿瘤患者.AIDS以及其他危宿疾患者的轻微并发症及重要逝世亡原因之一.因为缺乏有用的早期诊断手腕,深部真菌沾染病逝世率居高不下.对深部真菌沾染治疗成败的症结在于早期诊断,及早用药治疗.通例病原学诊断“微生物造就”可为临床供给直接的诊断根据,但其造就办法耗时长（4-7天）,不合适用作早期诊断.并且,跟着光谱抗生素.抗菌药物的大量运用,使得造就的阳性率极低.经常运用的免疫学办法,也因为抗原抗体反响的特异性差,往往对某一疑似真菌沾染患者要作多种真菌抗原或抗体检测,既费时又不经济,并且当所用药盒的抗原谱或抗体谱不全时也极易造成漏诊.对一些以往接触过响应真菌抗原的个别,作抗体检测时还会消失阳性反响,因而反抗体的检测往往请求作动态不雅察才干作出诊断,期末属性较差.有研讨报导血清葡聚糖在念珠菌血症时显著升高,将其用于念珠菌血症的早期诊断显著优于传统的造就法和血清学诊断实验.固然检测（1-3）-β-D葡聚糖只能提醒有无真菌侵袭性沾染,不克不及肯定为何种真菌,但也可能转化为一种优势.因近年来,一些罕有的前提致病真菌也可引起深部沾染,这就请求一种能敏捷肯定有无深部真菌沾染的办法.因体系抗真菌药物种类较少,抗菌谱较广,且不因真菌种类而异,当检测到标本中的（1-3）-β-D葡聚糖含量较高时,可赐与以体系治疗,不必耗时等待判定出种属,不然会贻误最佳治疗机会.是以,血清（1-3）-β-D葡聚糖含量检测不掉为一种适用的真菌沾染早期诊断办法.并且,相干研讨标明,（1-3）-β-D葡聚糖程度在确诊IFI患者的血清中消失中断升高,而跟着药物的运用,对药物迟钝者可很快消失（1-3）-β-D葡聚糖程度降低及转阴,而药物治疗无效人群（1-3）-β-D葡聚糖值无显著转变.是以,（1-3）-β-D葡聚糖可以用来断定药物的疗效,以协助临床医师实时进行药物种类及剂量的调剂.经由过程对人体体液进行（1-3）-β-D葡聚糖含量检测,可帮忙断定人体是否已被真菌沾染.对高危患者的样本进行中断剖析,可为临床检测供给入侵真菌的量值或阴性预示值,为临床诊断和治疗供给了一种快速检讨办法,对进步病人治疗治愈率和指点大夫合理用药,以及促进我国医疗事业的成长具有重要意义.三.国表里相干成长情形今朝,临床上诊断侵袭性真菌沾染(invasive fungal infections,IFI)的办法重要由宿主身分.临床特点.微生物学检讨和组织病理学4部分构成.血液.支气管肺泡灌洗液中的各类真菌PCR测定,是诊断IFI的微生物学的检测办法.但传统真菌判定办法都因周期长.血造就率低而难于快速诊断.研讨者也逐渐将早期诊断的留意力转向树立血清学办法来检测真菌菌体成分或代谢产品,如测定白念珠菌的甘露聚糖.烯醇化酶.D-阿拉伯糖醇等.鉴于深部真菌沾染时,经吞噬细胞处理,菌胞壁降解成分大量入血,90年月初,有学者树立了以检测血浆或血清中真菌胞壁成分曲霉半乳甘露聚糖抗原(GM)和(1-3)-β-D葡聚糖抗原[(1-3)-β-D-gluean,BG]的含量, 用于早期诊断深部真菌沾染具有较好敏锐度和特异性,且敏捷.轻便,并能提醒抗真菌药物治疗.BG检测(也称G实验)是一种新的真菌抗原检测办法,重要由以下研讨机构开展,日本东京Wako纯化学研讨所,Seikagaku Kogyo公司,Ma-ruha公司和美国Cape Code协会.个中Cape Code协会研制的Fungitell试剂盒已被美国FDA同意用于血液病.肿瘤等免疫受损的患者IFI的诊断.BG是酵母和丝状真菌细胞壁的多聚糖成分,作为真菌抗原具有较高的特异性,原核生物.病毒和人体细胞都不消失这种多聚糖.是以,它在血液及无菌体液中的消失可以很大程度上视为IFI的标记.真菌细胞壁的重要成分BG的比色法检测试剂盒已普遍用于临床.美国FDA已于2003年同意该实验用于可疑IFI患者血清定性检测.2008年欧洲肿瘤研讨治疗组织(EORTC)IFI合作组(IFICG)和国度过敏及沾染类疾病研讨(NIAID)真菌病研讨组(MSG)将G实验成果列为诊断IFI的诊断尺度,但试剂盒必须是FDA认证的.国外多个研讨中间为评估该实验的特点已做了大量的回想性查询拜访,证实其迟钝度.特异度及临床一致性均较好.编辑： gaowei2010 起源：丁喷鼻园。