骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒(凝集素亲和法)产品技术要求北京中生金域诊断

小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果浅析作者：肖向东来源：《中国医学创新》2012年第23期【摘要】目的：探讨骨源性碱性磷酸酶(NBAP)测定在小儿佝偻病早期诊断中的应用价值。

方法：随机抽取儿童保健门诊3～36个月婴幼儿400例进行骨源性碱性磷酸酶(NBAP)检测，并对37例中、重度佝偻病患儿NBAP的阳性例数与血清钙、手腕骨X线影像学改变检出例数进行比较。

结果：400例婴幼儿NBAP阳性率为31.5%，37例中、重度小儿佝偻病患者中NBAP阳性例数与血清钙、X线影像学改变检出例数相比，差异均具有统计学意义(P【关键词】骨源性碱性磷酸酶；佝偻病；早期诊断Analysis of Pediatric Bone Alkaline Phosphatase Test Results/XIAO Xiang-dong.//Medical Innovation of China，2012，9(23)：092-093【Abstract】Objective：To explore the early diagnosis value of determination bone alkaline phosphatase (NBAP) in children with rickets. Method：Activity of peripheral blood NBAP in 400 health examinated children in child health care clinic，aged 3 months to 36 months，were detected in our study.In 37 infants diagnosed as moderate to severe rickets， the number of patients with positive NBAP were compared with the number of hypocalcemia of newborn and the number of infants with X ray imaging changement.Result：The positive rate of NBAP in 400 children was 31.5%.In 37 patients with moderate to severe rickets，there was significant difference in positive number of NBAP，compared with the number of hypocalcemia of newborn and the number of infants with X ray imaging changement(P【Key words】Bone alkaline phosphatase；Rickets；Early diagnosisFirst-author’s address： Zhangdian Maternity and Child Care Center of Zibo，Zibo 255000，Chinadoi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.23.059佝偻病(Rickets)是婴幼儿时期常见的慢性营养缺乏性疾病，是因维生素D缺乏，导致钙磷代谢失常，而使骨骼钙化不良所致。

碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)货号：G5610有效期：6个月有效。

产品内容：产品规格试剂(A):ALP Assay buffer 2.5ml试剂(B):ALP显色液 2.5ml试剂(C):显色基液7.5ml试剂(D):Phenol标准(1mg/ml)1ml试剂(E):ddH2O1ml产品说明：碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。

此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌的细胞膜。

碱性磷酸酶检测试剂盒(磷酸苯二钠微板法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用磷酸苯二钠比色法，其检测原理是磷酸苯二钠在碱性条件下，可在碱性磷酸酶的作用下生成游离酚和磷酸。

在碱性条件下酚与氨基安替比林结合，并经氧化生成红色醌式结构物，呈深浅不一的红色，产物红色越深，说明碱性磷酸酶活性越高，反之则酶活性越低，通过酶标仪测定510nm处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出碱性磷酸酶活性水平。

该试剂盒可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的碱性磷酸酯酶活性。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：96孔板、水浴锅或恒温箱、酶标仪操作步骤(仅供参考)：1、配制标准品工作液：取出Phenol标准(1mg/ml)恢复至室温后，取0.1ml溶解于1.9ml ddH2O，使浓度达到0.05mg/ml，即为标准品工作液-Phenol(0.05mg/ml)。

按照下表稀释系列标准品溶液。

012345010******** Phenol(0.05mg/ml)(μl)ddH2O(μl)55453525155相当于金氏单位(U/L)010********2、准备样品：（1）细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-80℃冻存，用于碱性磷酸酯酶的检测。

北京华宇亿康生物工程技术有限公司Co-Health (Beijing )Laboratories Co., Ltd. 液体生化试剂使用说明书_碱性磷酸酶测定试剂（ALP/AKP ） （IFCC ，AMP 缓冲液）【注册产品标准】YZB/国 1959-2003 ◇ 【医疗器械注册证号】京药监械（准）字2005第2400405号本试剂适用于人血清或血浆中碱性磷酸酶活性的体外定量分析。

临床意义碱性磷酸酶存在于体内多种组织和器官，其病理性变化表现在：增加：（1） 肝脏疾病如胆汁淤积和肝硬化；（2） 骨骼疾病如软骨病、佝偻病、成骨肉瘤； （3） 恶性肿瘤。

减少：（1） 停止生长（克汀氏病、软骨发育不全）； （2） 先天性低磷酸酶血症。

方法学原理磷酸对硝基苯酚（4-NPP ）在碱性磷酸酶的作用下，将其磷酸基转移到2-氨基-2-甲基-1-丙醇（AMP ）受体分子上，释放出的对硝基苯酚（4-NP ）在碱性溶液中分子重排形成黄色醌，可在405nm 下检测。

黄色醌形成速率与ALP 活力成正比。

ALP 4 -NPP + H 2O → 4 -NP + 磷酸 Mg 2+, 碱性 试剂组成试剂1（R 1） 试剂2（R 2）AMP 0.35mol/L 4 -NPP 80mmol/L MgCl 2 10.5mmol/L 稳定剂 适量 适用仪器ZYA-1003：适用于日立7060/7150、岛津7200/ 7300/8000全自动生化分析仪；ZYB-1003：适用于日立7170 A /7170、奥林巴斯AU400 /600/1000全自动生化分析；ZYC-1003：适用于日立7020全自动生化分析仪； ZYD-1003：适用于贝克曼CX 系列全自动生化分析仪；ZYE-1003：适用于东芝全自动生化分析仪；TYA-1003、TYB-1003、TYC-1003：适用于其它全自动生化分析仪及各类半自动生化分析仪。

试剂贮存及稳定性试剂自生产日期起2—8℃避光存放可稳定12个月；R 1、R 2按4:1比例混为工作液2—8℃避光可稳定4周。

骨源性碱性磷酸酶检测试剂盒（凝集素亲和法）适用范围：用于体外半定量检测人体全血或血清中骨源性碱性磷酸酶催化活性。

1.1 产品型号：JY–Color–BAP NB；JY–Color–BAP AB。

1.2 产品规格1.2.1 包装规格：20人份/盒、50人份/盒、100人份/盒。

1.2.2产品组成：产品主要组成成分见表1、表2。

表1 试剂盒配置表配 置 规 格 （装量）20人份/盒 50人份/盒 100人份/盒反应装置 1×20支 1×50支 5×20支显色液 JY–Color–BAP NB1ml ×1瓶3.5ml ×1瓶7ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB洗涤液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶 8ml ×1瓶 8ml ×2瓶 JY–Color–BAP AB终止液 JY–Color–BAP NB3ml ×1瓶4ml ×1瓶 8ml ×1瓶 JY–Color–BAP AB 7ml ×1瓶 7ml ×2瓶一次性定量取血管（含吸头）21支（含吸头1个）52支（含吸头1个）104支（含吸头1个）注：试剂盒中一次性定量取血管为外购有医疗器械证书的产品。

表2试剂配方和浓度配 置 组成 浓度显色液 氯化钠（NaCl） 700mmol/L氯化镁（MgCl2） 25mmol/L二甲基亚砜（DMSO）0.9%（体积比）洗涤液 氯化钠（NaCl） 13%氯化镁（MgCl2） 2.9% 聚乙二醇（PEG）13%氯化锌（ZnCl2） 7%氯化钙（CaCl2） 18%氯化锰（MnCl2） 32%迭氮钠（NaN3） 5%JY–Color–BAP NB终止液氯化钠（NaCl） 18%迭氮钠（NaN3） 25% JY–Color–BAP AB终止液 乙磺酸（MES） 9%氯化钠（NaCl） 13%迭氮钠（NaN3） 7%2.1 外观2.2.1 反应装置为白色塑料制品，结构应完整、表面光洁、无缺失、无折损、无脱落；2.2.2 测定用液体外观要求：a) 显色液为浅黄色液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；b) 洗涤液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物；c) 终止液为无色透明液体，不得有任何沉淀及絮状悬浮物。

8、18、30个月小儿骨源性碱性磷酸酶结果分析目的分析8、18、30个月小儿骨源性碱性磷酸酶（NBAP）的检测结果。

方法对2015年5～10月大连市普兰店区妇幼保健院儿童保健门诊体检的2640例8、18、30个月小儿进行NBAP活性检测，根据原卫生部颁发的婴幼儿佝偻病防治方案进行佝偻病临床筛查。

并对NBAP检测结果异常者进行治疗后复查，观察NBAP值的变化情况。

结果月龄越小，佝偻病检出率越高，NBAP可疑率为77.3%，以NBAP≥250 U/L为佝偻病界限值，患病率为15.1%。

男童阳性预防水平和阳性异常检出率稍高于女童，差异无统计学意义（χ2=1.06，P>0.05）。

居住在乡镇的婴幼儿阳性预防水平和阳性异常检出率明显高于居住在城市的婴幼儿，差异有统计学意义（χ2=124.00，P＜0.01）。

治疗组有效率为76.33%，高于对照组的37.37%，两组比较差异有统计学意义（χ2=32.97，P＜0.01）。

结论小儿NBAP是佝偻病早期诊断的可靠指标，也是判断治疗效果的监测指标。

标签：骨源性碱性磷酸酶；检出率；早期诊断；佝偻病；监测指标维生素D（Vit D）缺乏性佝偻病影响儿童的骨骼发育和生长，严重危害儿童身体健康，是儿童保健工作中重点防治的四大疾病之一[1]。

小儿骨源性碱性磷酸酶（NBAP）活性作为一种反映骨代谢状况的生化指标，在Vit D缺乏的早期已升高，且NBAP活性升高程度能很好地反映佝偻病活动程度，因此NBAP 活性的测定用于佝偻病的早期筛查和诊断，并对治疗效果的判断有一定的价值[2]。

为进一步了解小儿NBAP活性在诊断佝偻病中的价值及正确指导Vit D及钙剂的补充等，对普兰店区妇幼保健院儿童保健门诊8、18、30个月2640例婴幼儿的NBAP测定结果进行分析，现报道如下。

1资料与方法1.1一般资料选取2015年5～10月大连市普兰店区妇幼保健院儿童保健科门诊8、18、30个月正常体检的2640例婴幼儿为分析对象，其中男1201例，女1439例。

小儿骨源性碱性磷酸酶检测结果浅析目的：探讨骨源性碱性磷酸酶(NBAP)测定在小儿佝偻病早期诊断中的应用价值。

方法：随机抽取儿童保健门诊3～36个月婴幼儿400例进行骨源性碱性磷酸酶(NBAP)检测，并对37例中、重度佝偻病患儿NBAP的阳性例数与血清钙、手腕骨X线影像学改变检出例数进行比较。

结果：400例婴幼儿NBAP阳性率为31.5%，37例中、重度小儿佝偻病患者中NBAP阳性例数与血清钙、X线影像学改变检出例数相比，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。

结论：NBAP检测对婴幼儿佝偻病的诊断具有一定的灵敏性和特异性，且检测方便，对小儿佝偻病的早期诊断具有重要意义。

佝偻病(Rickets)是婴幼儿时期常见的慢性营养缺乏性疾病，是因维生素D缺乏，导致钙磷代谢失常，而使骨骼钙化不良所致。

它不但影响患儿的骨骼发育，同时还影响患儿神经、肌肉、造血、免疫等多组织、器官的功能。

佝偻病很少直接危及生命，但因发病缓慢，易被忽视，一旦发生明显症状时，机体的抵抗力低下，易并发肺炎、腹泻、贫血等其他疾病[1]。

20世纪90年代后，中国严重佝偻病发病率已逐年降低，但轻、中度佝偻病发病率仍较高。

因此早期发现、预防佝偻病比治疗佝偻病具有更重要的意义。

小儿骨源性碱性磷酸酶(NBAP)在佝偻病发病初期即出现升高，而且升高程度与佝偻病活动程度密切相关[2]。

因此，小儿NBAP检测对佝偻病的早期筛查、诊断、预防和治疗都有很大的应用价值。

1资料与方法1.1一般资料随机抽取了儿童保健门诊3～36个月婴幼儿400例，其中男212例，女188例；年龄3～12个月174例，13～24个月121例，25～36个月105例，对其进行外周血NBAP检测[3]。

采用小儿NBAP检测试剂盒。

1.2方法采用小儿NBAP检测试剂盒。

NBAP试剂盒为北京中生金域诊断技术有限公司生产。

试剂盒组成：NBAP反应装置、显色液、洗涤液、终止液、一次性定量取血管(含吸头)、使用说明书(含标准比色板)。

碱性磷酸酶测定试剂盒(NPP底物-AMP缓冲液法)适用范围：本产品用于体外定量测定人血清中碱性磷酸酶的活性。

1.1规格具体产品规格见下表:组成成氨基-2--1-丙1mol/22mmol/L磷酸对硝基苯酚(P-NPP) 16mmol/L2.1外观2.1.1外包装完整无破损；2.1.2试剂：黄色澄清透明液体。

2.2净含量净含量不低于标示值。

2.3试剂空白2.3.1试剂空白吸光度在主波长405nm、副波长660nm、37℃条件下, 试剂空白吸光度应小于1.2。

2.3.2试剂空白吸光度变化率在主波长405nm、副波长660nm、37℃条件下，试剂空白吸光度变化率应不大于0.004。

2.4线性2.4.1线性范围[25，1000] U/L，相关系数r≥0.990。

2.4.2线性偏差(100，1000] U/L线性范围内，相对偏差不超过±10%；[25，100] U/L线性范围内，绝对偏差不超过±10U/L。

2.5分析灵敏度检测浓度为335U/L的样本时，吸光度变化率应不小于0.031。

2.6 重复性测试（120±12）U/L的人血清或质控品，重复测试至少10次，CV≤5%。

2.7 批间差用三个不同批号的试剂测试(120±12) U/L的同一样本，重复测试3次，相对极差R≤10%。

2.8 准确度测定SRM909b标准物质，测定结果应不超过标示值的±10%。

2.9 稳定性原包装试剂2～8℃避光储存,有效期12个月。

取到效期后2个月内产品进行检测, 检测结果应符合2.3、2.4和2.8的要求。

骨源性碱性磷酸酶的测定及注意事项血浆中骨源性碱性磷酸酶(BAP)活性测定，首先是血球和血浆的分离，这一过程是基于全血样品经血浆分离器将血球截留在分离器的血球容纳膜上，而血浆渗滤穿过转运膜到达反应膜的特定区域，血浆分离完成后，将血浆分离器从反应装置上取下。

第二步是BAP与血浆中其它组分，包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。

这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同，分别选择相应的亲和素，我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白，预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。

当血浆经过此区域渗滤时，BAP即被结合，而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉，从而完成特异性亲和反应。

第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。

反应膜固定在反应滑板上，待亲和反应完成后，将反应滑板推动，使反应膜到达反应孔正中，将显色液滴加到反应孔内的反应膜上，在37℃反应一定时间，酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比，对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。

作为干化学分析技术，结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。

其中，标准色板的色阶印刷在说明书上，不同批次的产品使用同一标准色板，如何使每批次的产品使用同一标准色板，如何使每批产品酶促显色的深浅都能与标准色板一致呢?这是通过每批产品出厂前的校正实现的。

校正是用已知NBAP(活性为200U／L，250U／L，300U／L)和ABAP(活性为150U／L，200U／L，250U／L)的血清(17µl)进行的，在37℃进行反应，使显色强度与标准色板上相应色强相一致，确定所需的反应时间为每批产品说明书上填写的反应时间(多少分钟)。

可见，在影响酶促反应的诸多因素(底物种类和浓度、缓冲液种类和浓度、PH值、反应温度、激活剂等辅助因子)一定的前提下，样品中BAP催化反应产物的多少(显色强度)只决定于反应时间的长短。

大连市婴幼儿BALP检测结果分析摘要目的：了解大连市婴幼儿体内BALP活性，为临床筛查佝偻病提供诊断依据。

方法：采用化学免疫浓缩法检测636例婴幼儿血中BALP活性。

结果：BALP≤200U/L占13.2%，BALP在200～250U/L者占86.2%，BALP＞250U/L者占0.6%。

结论：大连市婴幼儿钙营养缺乏情况严重，应加强营养。

关键词婴幼儿BALP活性检测佝偻病是临床婴幼儿常见疾病，可导致骨骼、神经、肌肉等改变，早诊断、早治疗对佝偻病的防治十分重要。

为了解本地区婴幼儿钙营养状况，我们对636名婴幼儿进行了末梢血BALP检测，现将结果报告如下。

资料与方法对象：2011年1～3月到大连市妇产医院妇保门诊体检的0～6岁婴幼儿636名，其中男357名，女279名。

方法：检测方法：采用中生金域诊断技术有限公司生产的小儿骨源性碱性磷酸酶试剂盒进行测定。

取末梢血30μl，严格按照说明书进行操作，依照标准色板判断结果。

判断标准：BALP＜200U/L者为正常，200～250U/L为可疑，BALP＞250U/L 为临床佝偻病。

结果636例婴幼儿中，BALP＜200U/L者为84例，占13.2%；BALP在200～250U/L 者为548例，占86.2%；BALP＞250U/L者为4例占0.6%，见表1。

讨论婴幼儿佝偻病是儿童保健工作的重要内容之一。

其中，维生素D缺乏性佝偻病是我国小儿常见病，可引起多系统功能受损，对儿童健康危害较大［1,2］发现、早诊断、早治疗是防治佝偻病的关键。

本文选取了636名婴幼儿进行BALP 检测，结果发现BALP水平正常者仅占13.2%，预防水平者占86.2%，治疗水平占0.6%。

BALP异常率远高于张国荣［3］所测数据。

这可能与家长喂养方式及1～3月北方较为寒冷，多数婴幼儿无法进行室外活动有关。

再加之0～3岁为婴幼儿迅速发育生长阶段，因而该年龄段孩子普遍缺乏VD，应格外注意多从饮食中补充。

附件9碱性磷酸酶检测试剂盒产品注册技术审查指导原则本指导原则的主要目的是规范碱性磷酸酶检测试剂（盒）的技术审评工作，帮助审评人员理解和掌握该类产品的原理、组成、性能、预期用途等内容，明确技术审评过程中应该关注和重点把握的内容，对产品安全性、有效性作出系统评价。

本指导原则是对碱性磷酸酶检测试剂（盒）的一般要求，审评人员应依据产品的具体特性确定其中的具体内容是否适用并对注册申报资料的内容进行补充要求。

本指导原则是对技术审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。

应在遵循相关法规、国家标准、行业标准的前提下使用本指导原则。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。

一、适用范围碱性磷酸酶检测试剂（盒）是指基于分光光度法原理对人血清、血浆或其他体液中的碱性磷酸酶活性进行体外定量分析的试剂。

本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。

碱性磷酸酶活性的测定方法目前主要有连续监测法和比色法两类：1. 连续监测法（磷酸对硝基苯酚底物法）碱性磷酸酶催化水解磷酸对硝基苯酚（4-NPP），生成对硝基苯酚（4-NP），在特定波长处监测吸光度变化速率，可计算碱性磷酸酶活性。

2. 比色法（磷酸苯二钠底物法）碱性磷酸酶催化水解磷酸苯二钠，生成游离酚，酚与4-氨基安替比林结合，经铁氰化钾氧化生成红色的醌衍生物，在特定波长处监测吸光度值，可计算碱性磷酸酶活性。

从方法学考虑，本文主要指以碱性磷酸酶水解底物引起特定产物的吸光度的改变对碱性磷酸酶活性进行定量检测的体外诊断试剂，不包括干化学、酶联免疫及金标类检测试剂。

前列腺碱性磷酸酶试剂不属于本指导原则涵盖的范畴。

依据《体外诊断试剂注册管理办法》（试行）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），肌酸激酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。