蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性

•试验研究•北方蚕业 2020,41(3)21*柞蚕蛹多肽的抗氧化性及稳定性研究黄静雅张禹*朴美兰魏福安李晓艳李喜升*资助项目：现代农业产业技术体系建设专项（CARS-18）；农业农村部辽宁野蚕科学观测实验站项目（23-S-15）；辽宁省野蚕研究重点实验室项目（2003-）作者简介：黄静雅（1991—）,女，硕士，研究实习员，研究方向为柞蚕资源综合利用。

通信作者：张禹（1968—）,男，副研究员。

E-mail ： zyl3841517804@（辽宁省蚕业科学研究所，辽宁凤城118100）摘 要 研究柞蚕蛹多肽的抗氧化性及环境稳定性，并进行了体外模拟胃肠消化试验。

测定其DPPH 自由基清除能力、还原力、超氧阴离子自由基清除能力和龛基自由基清除能力，及 pH 值、温度、光照、金属离子、食•添加剂、防腐剂及模拟胃肠消化对其稳定性的影响。

结果表明：柞蚕蛹多肽的DPPH 清除能力、还原力、超氧阴离子自由基清除能力、龛基清除能力较好；在酸性至中性环境下稳定性较好，强碱条件下会迅速失活；光照和热处理都会使柞蚕蛹多 肽稳定性降低；在Fe3 +作用下柞蚕蛹多肽的活性明显低于其他金属离子；低浓度的NaCl 添加，可以使柞蚕蛹多肽对DPPH 的清除率小幅度的提升、柠檬酸添加量的增加会使柞蚕蛹多肽DPPH 自由基清除能力先提升后趋于平缓，柞蚕蛹多肽在白砂糖的作用下活性始终较为稳定；对柞蚕蛹多肽抗氧化稳定性的影响，苯甲酸钠〉山梨酸钾；柞蚕蛹多肽的胃肠消化抗氧化 稳定性较低，消化过程中其DPPH 清除率逐渐降低。

经胃消化阶段其清除率由59.09%降低至24. 05%，再经肠消化后下降至9. 4%。

关键词抗氧化性稳定性柞蚕蛹多肽多肽因其易吸收、安全无毒副作用近年来 在保健品市场上大放异彩［13］。

相关研究表明,一些种类的多肽具有良好的抗氧化性，例如刘雅硕等⑷证实鳄鱼肉多肽具有抗氧化活性；申 彩虹5从海参的酶解物中分离出两种海参肽,并发现分子量不同的肽会呈现出不同的抗氧化性；闵建华等⑷通过水解桑蚕蛹制备多肽具有较强的抗氧化能力，这些通过蛋白酶的作用水 解天然蛋白质的过程温和且高效。

第57卷 第11期 广 东 蚕 业 V ol.57,No.11 2023年11月GUANGDONG CANYE Nov . 2023DOI ：10.3969/j .issn .2095-1205.2023.11.01酶解制备蚕蛹免疫肽条件优化李庆荣 陈敏仪 邢东旭 肖 阳 张伟龙 杨 琼（广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所 广东广州 510610）摘 要 蚕蛹蛋白是一种优质的蛋白质资源，在畜禽及水产养殖中备受关注。

文章以新鲜蚕蛹为原料，以抑菌活性为目标，采用酶解法制备具有较好抑菌活性的酶解产物，并通过单因素试验的方法优化酶解工艺条件。

结果显示：在pH =3.0、酸性蛋白酶量6 000 U /g 、酶解温度43 ℃、酶解时间4 h 的工艺条件下，得到的酶解液抑菌活性较强。

期望研究结果为蚕蛹蛋白源生物活性肽的制备提供一定的理论基础，并为其在淡水养殖饲料中的应用提供参考。

关键词 蚕蛹；酶解；免疫肽 中图分类号:S886.9文献标识码:A文章编号:2095-1205(2023)11-01-04随着渔业的迅速发展与扩张，水产养殖业进入了高密度、高产量的精养模式，水产养殖病害日益严重。

抗生素等鱼药在水产养殖与疾病控制中起着不可替代的作用。

然而，由于鱼药大多是仿制兽药、人用药和农药等，存在科学性不足、针对性不强、药效不高、对环境影响大等问题。

根据《中华人民共和国农业农村部公告 第194号》，饲料用抗生素自2020年7月1日起全面退出市场，为保障畜禽水产养殖的生产效益和食品安全，开发安全、高效的抗生素替代品成为养殖业健康发展的难点和热点[1-2]。

我国蚕桑资源丰富，桑园种植面积超过1 300万亩，蚕蛹年产量达30万t 以上。

蚕蛹中蛋白质含量较高，占其干物质重的45%～50%，蚕蛹蛋白是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源。

近几年，蚕蛹蛋白在鳊鱼、草鱼、鸭嘴鱼、南美白对虾、罗氏沼虾等水产养殖上的应用研究表明，其能明显降低饲料成本，提高生长速度，降低饵料系数等[3-5]。

蛹虫草多肽的提取及体外抗氧化活性研究采用酶解法获取蛹虫草子实体中的多肽，并对中性蛋白酶和木瓜蛋白酶提取出的蛹虫草多肽进行体外抗氧化活性的测定。

结果表明，蛹虫草多肽具有一定的还原能力、清除DPPH的能力和清除羟自由基的能力，并且采用木瓜蛋白酶提取出的多肽活性均优于用中性蛋白酶提取出的多肽。

这为以后蛹虫草多肽在医学、食品及保健品等领域广泛应用提供了重要理论基础。

标签：蛹虫草；多肽；蛋白酶；抗氧化0 引言蛹虫草[Cordyceps militaris（L.）Link]是一种和冬虫夏草同属异种的药食兼用真菌，又名北冬虫夏草。

研究表明蛹虫草含有与冬虫夏草相近的功能物质及药用功效[1]。

蛹虫草含有蛋白质、虫草酸、脂肪、SOD酶、虫草素、虫草多糖和很多微量元素。

众所周知，多肽是机体完成各种生理活性必不可少的一种物质，在生物的代谢活动和疾病治疗中也有着举足轻重的作用，因此该研究现已成为一大热点[2]。

但目前国内外的学术研究，有关蛹虫草多肽内容的很少，大部分都围绕虫草素和虫草多糖的研究。

本文对蛹虫草子实体中多肽的提取、及体外抗氧化活性进行研究，旨在为日后蛹虫草多肽类物质的研究及其应用提供参考意见。

1 材料与仪器1.1 材料与试剂蛹虫草子实体、30%过氧化氢溶液、无水乙醇、硫酸亚铁、水杨酸、蒸馏水、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、DPPH、铁氰化钾、三氯乙酸、三氯化铁、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶。

1.2 仪器设备粉碎机、恒温水浴锅、分光光度计、离心机、电子天平、筛子、锥形瓶等。

2 实验方法2.1 多肽的提取将蛹虫草磨成粉用筛子过滤后，取6个150ml锥形瓶加入10 g虫草粉、90ml 蒸馏水，三个分别加0.5 g木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，室温下充分溶胀30min后放入恒温水浴锅中3 h，调节温度为55 ℃和50 ℃。

酶解完成后沸水浴煮沸10 min，离心（4000 r/min）10 min得上清即为肽类物质。

2.2 蛹虫草多肽体外抗氧化活性研究2.2.1 蛹虫草多肽对羟自由基清除能力的测定采用水杨酸法测定。

蚕蛹蛋白论文：蚕蛹抗氧化多肽的制备及分离纯化研究【中文摘要】人类许多慢性疾病及衰老现象均和人体内的自由基水平失衡有关,外源性抗氧化剂可以帮助人们维持体内自由基的平衡。

通过对具有抗氧化活性的天然食物进行研究、筛选和改性有可能开发出有效的抗氧化药物和保健食品蚕蛹蛋白是一种优质蛋白质资源,含有18种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸含量超过氨基酸总量40%,其蛋白含量约为50%,是一种比大豆蛋白更具营养价值的优质蛋白质资源本论文研究了蚕蛹蛋白粉的提取,酶解工艺条件,多肽抗氧化活性的检测方法,以及蚕蛹多肽中具有DPPH·清除活性的多肽的分离纯化。

1.蚕蛹蛋白粉的脱脂及前处理。

选取常规溶剂正己烷,丙酮,乙酸乙酯,无水乙醇分别作为单一脱脂溶剂做脱脂优化,以脱脂率为指标,得到最佳脱脂溶剂为丙酮。

以超声细胞破碎法,微波破碎法,去离子水浸泡法三种方法对蛋白粉进行破碎处理,以上清液中蛋白含量为指标,得到最佳的破碎处理条件为超声波100HZ,间隔2sec,破碎10min2.建立了蚕蛹多肽体外抗氧化活性的检测方法。

检测了蚕蛹蛋白水解液的抗氧化能力,包括清除超氧阴离子、清除羟自由基、清除DPPH·、【英文摘要】Many chronic diseases and human aging phenomenon have something to do with the imbalance of free radicals inside human body. External antioxidants can help people to maintain the balance of free radicals inside body.It’s possible to develop effective antioxidant drugs and health foods on the base of the research, screening and modification of natural foods with antioxidant activity. Silkworm pupa is a high quality protein resources, containing 18 amino acids, including 8 essential amino acids, the content of which is more than 40%。

虫草肽的生产工艺
虫草肽是一种从蝉蛹中提取的生物活性多肽，具有多种保健功能。

虫草肽的生产工艺涉及蝉蛹提取、蛋白质酶解、分离纯化等步骤。

以下是一般的虫草肽生产工艺流程：
1.蝉蛹提取：
•选择新鲜、健康的蝉蛹作为原料。

经过清洗和杀菌处理后，将蝉蛹进行初步的提取。

2.酶解蛋白质：
•将蝉蛹进行酶解，通常使用蛋白酶进行水解。

酶解的过程中，蛋白质会被分解成肽段，其中包括虫草肽。

3.分离纯化：
•对酶解产物进行分离和纯化，以提取虫草肽。

这可能包括使用各种分离技术，如离心、过滤、柱层析等，以得到高纯度的
虫草肽。

4.浓缩和干燥：
•对纯化得到的虫草肽进行浓缩，将溶液中的水分减少。

然后，通过适当的干燥方法，将虫草肽制成粉末状或其他形式。

5.检测和质量控制：
•对生产的虫草肽进行质量检测，确保其符合相关的安全和质量标准。

可能包括对肽段的成分分析、微生物检测、重金属检
测等。

6.包装和存储：
•最后，将虫草肽进行合适的包装，以确保其稳定性和保存期限。

妥善的存储条件有助于保持虫草肽的生物活性。

值得注意的是，虫草肽的生产工艺可能因不同生产商而有所不同，且具体的步骤和条件可能受到专利保护。

专利名称：一种抗氧化肽及其制备方法和应用
专利类型：发明专利
发明人：年纪尧,何思杰,吴纪龙,刘顺慧,张丹,寻筱萌,颜承海,王俊
申请号：CN202210220514.2
申请日：20220308
公开号：CN114656522A
公开日：
20220624
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：一种抗氧化肽及其制备方法和应用，所述的蚕蛹抗氧化肽的制备方法，包括如下：将脱脂蚕蛹粉进行超声（1‑100KHz）处理，碱溶酸沉法提取蚕蛹蛋白，利用蛋白酶水解，结合超滤层析，凝胶色谱和液质联用仪从水解产物中筛选出新型抗氧化肽。

鉴定得到的抗氧化肽，其特征在于,氨基酸序列是Glu‑Gly‑Leu‑His‑Ala（分子量525.25），Ser‑Leu‑Arg‑Leu‑Ser（分子量574.34）。

本发明利用超声改性处理，增强蚕蛹蛋白的肽键断裂，有效提升其的溶解度和抗氧化活性，为蚕蛹蛋白的高附加值产品开发提供了切实可行的方案。

申请人：江苏科技大学
地址：212100 江苏省镇江市丹徒区长晖路666号江苏科技大学科技处
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：唐循文
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专利名称：一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法及蚕蛹蛋白抗氧化肽的应用
专利类型：发明专利
发明人：黄先智,丁晓雯,沈以红
申请号：CN201810464907.1
申请日：20180516
公开号：CN108456707A
公开日：
20180828
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种蚕蛹蛋白抗氧化肽的制备方法，属于食品加工技术领域。

所述制备方法包括：1)将蚕蛹粉与石油醚混合，超声，固液分离；2)将脱脂蚕蛹粉、水和蚕蛹蛋白水解酶混合进行酶解；3)将蚕蛹粉酶解液灭酶，离心，将得到的上清液采用0.40～0.50μm滤膜过滤，收集滤液；4)将滤液采用3000Da的超滤膜超滤，收集透过液，得到超滤液；5)将超滤液采用200Da的超滤膜超滤，收集截留物。

本发明制备得到的蚕蛹蛋白肽中必需氨基酸含量达到43％左右，总抗氧化能力、对超氧阴离子(O·)的清除能力、对·OH清除能力以及对DPPH的清除能力均较强。

申请人：西南大学
地址：400700 重庆市北碚区天生路2号
国籍：CN
代理机构：北京高沃律师事务所
代理人：刘奇
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蝉蜕蛋白的提取工艺优化及体外抗氧化活性研究目的：优化蝉蜕蛋白的提取工艺，并考察其体外抗氧化活性，为蝉蜕蛋白的深入研究提供参考。

方法：以蛋白提取量为响应值，在单因素试验基础上，采用Box-Behnken响应面法对超声波辅助提取蝉蜕蛋白的液料比、超声时间、提取次数等条件进行优化，并进行验证试验。

以维生素C（VC）为阳性对照，以对1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2，2′ -连氮基-双-（3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸）（ABTS）自由基的清除率为指标，评价蝉蜕蛋白的体外抗氧化活性。

结果：蝉蜕蛋白的最佳提取条件为液料比28 ∶1（mL/g），超声时间65 min，提取2次。

验证试验中，蝉蜕蛋白的平均提取量为65.45 mg/g（RSD=1.68%，n=3），与预测值的相对误差为5.48%。

蝉蜕蛋白对ABTS和DPPH自由基均有一定的清除效果，当蝉蜕蛋白质量浓度为0.2 mg/mL时对ABTS自由基的清除率即达97.0%，其作用与VC相当；蝉蜕蛋白对DPPH自由基的清除能力稍弱，半数清除浓度为0.96 mg/mL，其作用不及VC。

结论：采用Box-Behnken响应面法优化蝉蜕蛋白的提取条件准确、可靠；蝉蜕蛋白具有一定的体外抗氧化活性。

ABSTRACT OBJECTIVE：To optimize extraction technology of protein from Cryptotympana pustulata and investigate its in vitro antioxidant activity，so as to provide reference for further research of protein from C. pustulata. METHODS：Using extraction amount of protein as response value，based on single factor test，Box-Behnken response surface methodology was used to optimize the ratio of liquid to material，ultraonic time and extraction times. Validation test was conducted. Using Vitamin C （VC）as positive control，in vitro antioxidant activity of protein from C. pustulata was evaluated by using scavenging rate of 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH）and 2，2′ -azino-bis（3-ethyl benzothiazoline-6-sulfonic acid）（ABTS）free radical as index. RESULTS：The optimal extraction condition of protein from C. pustulata was as follows as the ratio of liquid to material 28 ∶ 1 （mL/g），ultrasonic time of 65 min，extracting for twice. In validation test，average extraction amount of protein from C. pustulata was 65.45 mg/g（RSD=1.68%，n=3），relative error of which to predicted value was 5.48%. The protein from C. pustulata showed strong scavenging effect on ABTS and DPPH free radicals. When the concentration of protein from C. slough was 0.2 mg/mL，and the scavenging rate of it to ABTS free radicals was 97%，the effect of which was similar to VC. The protein from C. pustulata showed weak scavenging ability to DPPH free radical，IC50 was 0.96 mg/mL，the effect of which was not as good as VC. CONCLUSIONS：The extraction technology of protein from C. pustulata optimized by Box-Behnken response surface methodology shows high accuracy and good reliability. The protein from C. pustulata shows certain antioxidant activity in vitro.KEYWORDS Protein from Cryptotympana pustulata；Ultrasonic assisted extraction；Technology optimization；Box-Behnken response surface methodology；Antioxidant activity in vitro蝉蜕为蝉科昆虫黑蚱（Cryptotympana pustulata Fabricius）的若虫羽化时脱落的皮壳，味甘，性寒，入肺、肝经，具有疏散风热、明目退翳、利咽、解痉等功效[1]。

蚕蛹多肽的制备工艺及其体外抗氧化活性
闵建华;李建科;陈婷
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2009(030)014
【摘要】采用碱性蛋白酶、风味蛋白酶、复合蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶水解蚕蛹蛋白,以水解度和清除DPPH·能力为指标对酶解过程进行分析,并研究水解产物多肽的体外抗氧化活性.结果表明,碱性蛋白酶对蚕蛹蛋白具有较好的水解效果,其水解产物有较高抗氧化活性,对DPPH·、超氧阴离子自由基(O-2·)和羟自由基(·OH)都具有较强的清除能力.
【总页数】4页(P123-126)
【作者】闵建华;李建科;陈婷
【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062
【正文语种】中文
【中图分类】TQ936.16
【相关文献】
1.海蜇多肽的制备工艺及体外抗氧化活性的研究 [J], 佘旭霞;沈春佳;陈静;赵源慧;阮明毅;马剑茵
2.蚕蛹抗氧化肽的制备及其体外抗氧化活性评价 [J], 卢楠;廖鲜艳;翁新楚;宋红生
3.虎斑乌贼生殖腺多肽的制备工艺优化及其体外抗氧化活性 [J], 陈敏;陈道海
4.蚕蛹多肽螯合钙的制备工艺优化及结构表征 [J], 赵梓月;王思远;廖森泰;穆利霞;邹宇晓
5.贮藏时间及缫丝工艺对桑蚕蛹蛋白质和脂肪酸组成及蛹油体外抗氧化活性的影响[J], 吴宝祥;梁舒韵;朱立宏;江虹锐;刘小玲;姜毅
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