石蜡切片方法

石蜡切片制作流程以石蜡切片制作流程为标题，写一篇文章。

石蜡切片制作是一项常见的实验技术，在生物学、医学和材料科学等领域广泛应用。

石蜡切片可以用于显微镜下的观察和分析，能够提供关于细胞和组织结构的详细信息。

下面将介绍一下石蜡切片的制作流程。

1. 组织固定：首先，需要从感兴趣的样本中取得组织样本，并将其进行固定。

固定是为了保持组织的形态结构和化学成分，常用的固定剂有福尔马林、乙醛等。

固定过程中，需要确保样本完全浸泡在固定液中，通常需要数小时至数天的时间，以确保组织被充分固定。

2. 脱水：固定后的组织样本需要进行脱水处理，以去除其中的水分。

脱水是将样本中的水分逐渐替代为有机溶剂，常用的有乙醇、丙酮等。

通常采用递增浓度的有机溶剂，从低浓度逐渐提高到高浓度。

每个浓度的脱水液中，样本需要浸泡一定的时间，以确保脱水彻底。

3. 渗透：脱水后的组织样本需要进行渗透处理，以使其与石蜡更好地结合。

渗透剂通常为石蜡溶液，可以将样本浸泡在石蜡溶液中，以使其逐渐渗透进入组织内部。

渗透过程中，需要注意控制温度和时间，以确保渗透均匀。

4. 包埋：渗透后的组织样本需要进行包埋处理，即将其嵌入到石蜡中。

首先，将组织样本放置在石蜡模具中，并加入适量的石蜡。

然后，将模具放入石蜡包埋机中，利用加热和真空等处理，使石蜡与组织样本充分结合。

包埋过程中需要严格控制温度和时间，以确保石蜡固化完全。

5. 切片：包埋后的组织样本需要进行切片处理，以获取薄片供观察。

首先，使用切片机将石蜡块切割成薄片。

然后，将薄片置于载玻片上，并加热使其与载玻片结合。

最后，使用刮片等工具将石蜡薄片修整成所需的形状和大小。

6. 然后，对切片进行染色处理，以增强对组织结构的观察。

常用的染色方法有血液学染色、免疫组化染色等。

染色后，可以使用显微镜观察和分析切片中的细胞和组织结构。

总结起来，石蜡切片制作流程包括组织固定、脱水、渗透、包埋、切片和染色等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和时间，以确保制作出高质量的石蜡切片。

石蜡切片的主要步骤石蜡切片是一种常用的制备薄片的技术，广泛应用于生物学、医学和材料科学等领域。

本文将介绍石蜡切片的主要步骤，并详细说明每个步骤的操作方法和注意事项。

1. 样品固定和处理在进行石蜡切片之前，首先需要对待切样品进行固定和处理。

固定样品的方法可以根据实验的需要选择，常用的有乙醛固定、冰醋酸固定和福尔马林固定等。

处理样品的方法也根据实验目的而定，可以包括染色、脱水、透明化等步骤，以便更好地观察和研究样品。

2. 包埋将处理好的样品包埋在石蜡中，以便进行切片。

首先，将样品放入石蜡溶液中，使其充分浸泡。

然后，将石蜡溶液转移到恒温水浴中，使其逐渐固化。

在固化过程中，要确保样品均匀分布在石蜡中，避免出现气泡和空洞。

3. 切片切片是石蜡切片过程中最关键的一步。

首先，将固化的石蜡块从模具中取出，并放置在切片机的夹持装置上。

然后，调整切片机的切片厚度和速度，根据需要选择合适的参数。

接下来，使用切片刀将石蜡块切割成薄片。

在切割过程中，要保持手稳定，避免切片厚度不均匀或出现断层。

4. 切片取片切片切割完成后，需要将切片从切片刀上取下。

首先，使用镊子将切片从切片刀上小心取下，避免损坏或弯曲切片。

然后，将切片放置在预先准备好的载玻片上。

在放置切片时，要注意避免气泡的产生，可以使用专门的工具如细管吸气来帮助排除气泡。

5. 去除石蜡和染色切片取片后，需要将切片上的石蜡去除，并进行染色处理。

首先，将切片放入去石蜡剂中，使其充分浸泡。

然后，将切片转移到浸泡染色剂中，进行染色处理。

在去石蜡和染色过程中，要注意时间控制和温度控制，以确保染色效果和切片质量。

6. 封片和封边染色完成后，需要将切片做成封片，以保护切片并便于保存。

首先，将切片用透明胶片或玻璃片覆盖。

然后，使用封片胶或封片胶带将切片和覆盖物固定在一起。

接下来，将切片的边缘进行封边处理，以避免切片脱落或污染。

7. 干燥和贴标封片完成后，需要将切片进行干燥处理，并进行贴标。

石蜡切片1.仪器石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。

2. 试剂FAA固定液(70%酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml)、10%番红水溶液、0.5%固绿（用95%的酒精配制）、酒精（100%、95%、80%、70%、50%）、二甲苯、蒸馏水、甘油、中性树胶等。

3.取材幼嫩的油菜植株叶片和茎4.方法与步骤(参照)1．固定：FAA固定液固定48小时以上。

2．脱水：50%酒精→70%酒精→83%酒精→95%酒精→100%酒精→100%酒精。

每级2h。

100%酒精中1.5h。

其中70%酒精处可长期保存。

3．透明：1/2二甲苯+1/2无水乙醇 (2h) →纯二甲苯(1.5h) →纯二甲苯(1.5h)4．浸蜡：将处理的材料置于1/2石蜡(固体粉末状)+1/2二甲苯中，40℃烘箱敞口过夜。

5．包埋：先提升恒温箱的温度至60℃，换纯蜡3次，每次1-2h，用硬的电光纸、牛皮纸叠纸盒，置于45-60℃的烫板上，倒入材料，摆放好材料，把标签（正面向外置于底部），补足石蜡，倒好后轻轻的置于冷水盆中，注意底面要接触盆中凉水，待石蜡全部凝固后可取出晾干，也可在凉水盆中放置过夜。

6．切片对包埋的材料进行修块、粘块、整修后，保证材料四周都有石蜡包围。

但不可太多。

切面的上、下边平行。

用加热的解剖刀蘸取少许石蜡碎屑，并迅速将石蜡块四周的碎屑烫平，使石蜡块牢固地粘在台木上。

检查切片机，安装切片刀、调整好刀的角度，调整石蜡块与刀口之间的角度与位置后开始切片。

7．粘片将粘贴剂置簿玻片上，再取切片浮置粘片剂上，然后置烘片台上，使切片展开烫平，材料不现皱纹为度。

最后将切片依次排好，用滤纸吸去多余水分，同时以记号笔在玻片上编号，放入温箱中烘干，温度30～40℃中过夜。

8．脱蜡脱蜡用二甲苯，把烤好的载玻片放于盛二甲苯的染缸中：纯二甲苯(10-20min)→纯二甲苯(5-10min)9．染色将纯二甲苯脱蜡完全的材料，1/2 二甲苯十1/2纯酒精→100%酒精→95％酒精→85％酒精→70％酒精→50％酒精→1%番红染色(4h以上) →50％酒精→70％酒精→85％酒精→95％酒精→0.5%固绿(1min)→95％酒精→100%酒精→100％酒精(未注明时间各级均为3min)10．胶封滴加加拿大树胶封藏。

石蜡切片的主要制备程序
石蜡切片的主要制备程序可以概括为以下几个步骤：
1. 准备样品：选择需要切片的样品，如组织样本、细胞样品等，并采取相应的固定、处理和染色等预处理步骤，以保证样品的稳定性、可观察性和对比度。

2. 材料准备：准备好所需的石蜡、切片盒、切片刀、载玻片等材料，并进行清洁和消毒处理，以避免污染和交叉感染。

3. 石蜡浸透：将处理好的样品转移到石蜡中进行浸透。

首先将样品置于温度逐渐升高的浸透剂（如正己烷）中，以去除组织内水分和其他溶质，然后置于石蜡中进行浸透。

4. 切片制备：将石蜡浸透的样品固定于切片盒中，将石蜡块剪碎成适当大小，并放置在切片刀的刀脊上。

调整切片机参数（如温度、角度、速度等），并逐个切割出薄片。

5. 切片贴片：将切好的薄片浮于温水中或使用其他方法，如电离子器、热平台等，以使切片展平并附着于载玻片上。

6. 干燥固定：将切片连同载玻片一起进行干燥固定处理，以去除水分并保持切片的形态稳定。

7. 切片染色：根据实验需求，对切片进行适当的染色处理（如组织学染色、免疫组化染色等），以增强样品的可视化效果和区分感兴趣的结构。

8. 封片封装：将切片封装至封片盖玻片上，使用透明化导电胶或其他封片剂固定切片，并尽量排除气泡、保证封片质量。

9. 切片质控：对制备好的切片进行质量控制，使用显微镜观察和评估切片的清晰度、结构完整性、染色效果等。

最后，制备完成的石蜡切片可以用于显微镜观察、组织形态分析、病理学研究等应用。

需要注意的是，在整个制备过程中，应遵循标准实验操作规程、注意安全，以及依据实验要求进行相应的优化和调整。

石蜡切片基本步骤（一）取材和固定根据实验目的选择材料。

将整个虫体或虫体的内部器官（如肠道、马氏管、唾液腺等）取出后，立即投入固定液。

取材大小：0.5cm×0.5 cm×0.2或者1.0 cm×1.0 cm×0.2，厚度不宜超过3mm。

固定液：2.5%的戊二醛固定液，Bouin氏液，10%甲醛等。

固定时间：4ºC固定24小时。

注意事项：取材：1．勿使组织块受挤压切取组织块所用刀、剪要锋利，切割时不可来回切割。

夹取组织时，镊子要轻，切勿挤压，以免损伤组织。

取材时，组织块可稍大一点，以便在固定后，将组织块的不平整部分修去。

2.选好组织块的切面应熟悉器官组织的组成，并根据观察目的来确定纵切或横切。

3．保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物等，先用生理盐水冲洗干净，再入固定液。

4．切除（清除）不需要的部分特别是组织周围的脂肪等，应尽可能清除掉，以免影响以后的程序和观察。

固定：1．材料新鲜取出组织后须立即固定。

否则时间相隔过久，体积就要收缩变形或发生自溶现象。

2．抽气生物组织常有气体的存在，使材料不能沉入固定液中，抽气使得固定液有效渗入。

真空泵抽气或者用空针管抽气。

昆虫整体固定，固定前用解剖针刺数个小孔，以利用固定液渗透。

3．固定剂用量一般为组织体积的10~20倍。

勿使组织贴于瓶底或瓶壁，以免影响固定剂的渗入。

4．避免阳光尽可能避免接触阳光以免失去固定作用。

5．加速固定轻轻摇动盛器使组织移动有利于固定液渗入，对长期固定的标本可经常更换固定液。

（二）洗涤2.5%戊二醛固定液固定的组织：0.2M, pH7.2磷酸缓冲液漂洗三次，每次10minBouin氏固定液固定的组织：直接入70%酒精更换数次即可脱水，注意苦味酸。

甲醛固定的组织：直接投入50%或70%酒精脱水，不经水洗。

但如果在甲醛中时间过长，则仍应当用流水冲洗。

陈旧性标本和混合性固定液应及时洗涤，有利于脱水、切片和染色。

一种叶片石蜡切片方法一种常用的叶片石蜡切片方法是冷冻切片法。

首先，将待切割的叶片固定在切片模具中。

可以使用细胞胶或石蜡胶等物质将叶片粘贴在模具上，确保叶片在切割过程中保持平整。

接下来，将模具放入冷冻盒中，使用液氮快速冷冻。

冷冻的目的是将叶片迅速冻结，增加叶片的硬度和脆性，方便后续的切割操作。

冷冻后，取出切片模具，使用切片机进行切割操作。

切片机的切片刀片应当具有较高的锐度和强度，以保证切割的顺利进行。

在切割过程中，可以通过调整切片机的刀盘速度和模具进给速度来优化切割效果。

切割完成后，将切割好的叶片切片放置在甲醇或IPA等溶剂中进行脱蜡处理。

脱蜡的目的是去除石蜡胶固定剂，并使组织切片充分暴露。

脱蜡完成后，将切片转移到水中进行洗涤，去除残留的脱蜡剂和杂质。

此外，可使用0.1%的硼水洗涤切片，以去除残留的石蜡和终点固定切片。

完成洗涤后，将切片通过脱水剂梯度（如70%、85%、95%、100%的酒精）浸泡脱水。

脱水的目的是逐步将水分从切片中除去，使切片适应后续的透明和包埋操作。

脱水完成后，将切片通过透明剂梯度（如xylene或苯鼎处理切片，以润湿切片，并使切片具有透明效果。

最后，在包埋模具中倒入熔点与切片温度相适应的石蜡，将切片转移到模具中，至少浸泡2次，以确保切片完全被包埋。

完成包埋后，将石蜡固化，切片模具从温度逐渐升高的热架上取出，冷却至室温。

在清洗模具并去除冷凝的石蜡后，用石蜡刀切割石蜡块，由此获得所需的叶片石蜡切片。

总结起来，叶片石蜡切片方法主要包括固定叶片、冷冻固化、切割、脱蜡、洗涤、脱水、透明和包埋等步骤。

这些步骤的顺序和细节关系到切片质量和实验结果的准确性，因此，在进行叶片石蜡切片操作时需要严格按照步骤进行，以获得满意的切片结果。

石蜡切片的基本操作流程石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备组织切片，以便进行显微镜观察和研究。

以下是石蜡切片的基本操作流程：1. 组织固定：首先，将待切片的组织标本进行固定，以保持组织结构的完整性和稳定性。

常用的固定剂包括福尔马林、酒精和乙醛等。

固定时间的长短取决于组织的大小和类型，一般为数小时至数天。

2. 组织去水化：固定后的组织需要去除固定剂并脱水，以防止切片过程中的破损和变形。

通常采用逐渐增加乙醇浓度的脱水步骤，常见的乙醇浓度为70%、80%、90%和100%。

3. 组织浸渍：脱水后，组织需要进一步浸渍到石蜡中，以增加组织的硬度和支持性。

首先将组织放入浸渍剂中，如甲醛或乙醇中的苯麻油，然后逐渐增加石蜡浓度，常见的石蜡浓度为50%、70%和100%。

4. 组织包埋：在组织浸渍后，将组织放入包埋模具中，然后倒入熔化的石蜡，使其完全包裹住组织。

包埋完成后，将模具放入冷却台或冷冻器中，使石蜡迅速固化。

5. 石蜡切片：将冷却固化的石蜡块从模具中取出，使用切片机将其切割成薄片。

切片机通常配有刀片、切片夹和切片盒等工具，切片时需要注意切片的方向和角度，以获取最佳的切片效果。

6. 切片染色：切片完成后，可以对切片进行染色，以便更好地观察和分析组织结构和细胞形态。

常用的染色方法包括血液染色、组织染色和免疫组化染色等。

7. 切片封片：染色后，将切片放置在载玻片上，并使用透明的封片剂将其覆盖。

封片剂可以保护切片，防止切片脱落和变形，并提高显微镜观察的清晰度。

8. 切片观察：最后，将封片的切片放置在显微镜下进行观察和分析。

可以使用不同的显微镜镜头和放大倍数来观察组织细节和细胞结构，同时可以使用图像分析软件对切片图像进行处理和测量。

总体而言，石蜡切片的基本操作流程包括组织固定、去水化、浸渍、包埋、切片、染色、封片和观察等步骤。

每个步骤都需要严格控制条件和操作技巧，以确保获得高质量的组织切片用于研究和诊断。

一种叶片石蜡切片方法叶片石蜡切片是一种常用的组织学技术，用于制备植物叶片的组织切片，以便进一步观察和研究植物组织的细胞结构和生理特性。

下面我们将介绍一种常用的叶片石蜡切片方法。

首先，需要准备的材料和试剂包括植物叶片样品、石蜡、甲苯、乙醇，还有显微镜玻片和载玻片等。

1. 取一片健康的植物叶片，将叶片剪下并迅速放入甲醇中，以停止其代谢过程并保持组织形态。

2. 用甲苯进行脱水。

将样品在室温下脱水处理，首先使用70%乙醇浸泡5-10分钟，然后使用95%乙醇浸泡10-15分钟，最后使用100%乙醇浸泡2-3次，每次浸泡15分钟。

3. 渗透处理。

将脱水后的样品放入50%石蜡和50%甲苯的混合液中，放置于室温下，持续时间视样品大小而定，一般是数小时至一晚。

4. 嵌入处理。

将样品迅速移入100%石蜡中，然后放入预先加热的熔化石蜡中，保持温度在60-70摄氏度之间。

尽量避免石蜡中出现气泡。

5. 切片。

将嵌入好的组织块放入切片机中，用刀片切割组织块，厚度一般在5-15微米之间。

6. 切片浸泡。

用甲苯将切片从切片刀上漂移到预先加热的水浴中，水温一般为40-50摄氏度。

使切片完全展平。

7. 取片和上片。

使用显微镊子将切片从水浴中取出，放在显微镜玻片上，然后将载玻片轻轻覆盖在切片上。

用手轻轻压实，以确保切片紧密粘附在玻片上。

8. 干燥和嵌片。

将上片的载玻片放入150摄氏度的烘箱中干燥，直至石蜡完全固化。

使用橄榄油将玻片嵌入到显微镜玻片中，然后用适当的胶水封口。

以上就是一种常用的叶片石蜡切片方法。

通过这个方法制备的叶片切片可以用于各种显微技术，如细胞染色、原位杂交、免疫组化等，以进一步研究植物组织的细胞结构和生理特性。

免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法（精髓版）免疫组化染色（石蜡切片）操作步骤及结果分析方法一、原理及应用免疫组化，简单说是用标记的抗体对组织中相应抗原进行定位、定性和部分定量的分析。

二、操作步骤：（1）将石蜡组织切片置于65°C恒温箱，烤片1h左右。

（2）脱蜡：二甲苯I 10min→二甲苯II 10min →梯度酒精（由高到低）各5min。

（3）1×PBS 洗涤3次，每次 5min。

（4）0.5% Triton X-100通透（PBS配制），目的是使抗体能够充分地进入胞内进行结合反应。

Triton X-100 可以溶解细胞膜、细胞核膜、细胞器膜上的脂质而使抗体及大分子结构的物质进入胞浆和胞核内，这样抗体就能顺利进入胞内与相应抗原结合。

当然了，如果检测的是膜抗原无需通透，忽略该步骤。

（4）抗原修复：使用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，微波炉微波高火 3min，之后转成低火 15-30min。

注：福尔马林或多聚甲醛固定，会导致蛋白交联，而解交联的过程称为抗原修复。

所以冰冻切片不需要抗原修复！！抗原修复方法有多种，一般包括两大类：酶抗原修复(胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K) 热抗原修复(高压蒸汽法、微波法、水浴加热法)。

微波法最为常用。

（5）1×PBS 洗涤3次，每次5min。

（6）3% H2O2，室温孵育30min，目的是灭活内源性过氧化物酶。

（7）1×PBS 洗涤3次，每次5min。

（8）使用1% BSA 进行室温封闭30min，用于封闭非特异性抗原表位。

（9）根据抗体说明书使用合适浓度的特异性一抗，4°C 湿盒中静置过夜孵育。

（10）次日取出切片，室温下复温30min。

（11）1×PBS 洗涤3次，每次5min。

（12）按照免疫组化二抗试剂盒说明书操作。

（13）DAB 显色：DAB 显色液按说明书配制，使用时滴加到血管组织上，显微镜下观察并计时，待目的蛋白显色呈棕黄色时结束显色。