文档：分离纤维素分解菌实验操作步骤

土壤中分离纤维素分解菌的实验操作流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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纤维素分解细菌的分离和鉴定一．实验目的：1.研究低温环境下纤维素降解细菌的分离与鉴定．2.采用低温培养的方法从秸秆堆肥中筛选出3株分解纤维素的细茵。

3.通过PCR克隆这3株茵的16s rDNA并与相似菌株做比对．进一步构建分子进化树．来研究其分类情况。

4.综合其个体形态、茵落形态、生理生化特征、16S rDNA发育树构建结果等分类依据。

二．实验原理：细菌进行化能异养、短杆状、无出芽分裂、好氧、革兰氏染色阴性．无芽孢、无丝状菌体、有细胞壁且能独立生存。

应为其第二部分滑动细菌或第七部分的假单胞菌类。

由于滑动细菌能在“固体表面和汽一水交界面缓慢滑动”，故其固体菌落边缘应不整齐，且其一般形成亮色肉眼可见的子实体。

将灭菌的滤纸蘸取无菌生理盐水后贴在已凝固的平板上，用接种环蘸取土样，点样在平板滤纸上，15℃下培养10 d。

用接种环从有滤纸水解透明圈的单菌落处刮取细菌，在贴有滤纸的初筛平板上划线，计数并且观察。

三、实验仪器：1、材料试验材料为背阴处长时间堆放的秸秆堆肥表层；2、培养基：初筛培养基。

浓缩10倍的赫奇逊固体无机盐培养基”。

：啦嘞1．00 g，MgS04·7H20 0．30 g，NaCl 0．10 g，F'eCl3O．0l g，NaN03 2．50 g，CaCi2 0．10 g，琼脂18．00 g，蒸馏水l000lnl，pH值7．0～7．2．121℃灭菌20min。

无淀粉滤纸(浙江富阳纸厂)用浓度l％的醋酸浸泡一夜后用浓度2％的Na-2C03水溶液洗至中性，晾干备用。

把上述处理过的滤纸剪成直径约为8 ca的圆形滤纸片．放在干净的平皿中，用报纸包好．采用湿热的方法灭菌；3、复筛培养基。

浓缩10倍的赫奇逊固体无机盐培养基：啦P04 1．009，m．庐04‘7H200．309。

NaO 0．109．FeCl30．01g，NaN03 2．50 g．CaCl20．10g，羧甲基纤维素钠lO．00 g，琼脂18．00g，蒸馏水10130ml，pH值7．0—7．2，121℃灭菌20 min。

《从土壤中分离分解纤维素的微生物》实验设计实验目的：1.利用特定的选择培养基和鉴定培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物；2.掌握刚果红染色的机理和操作。

实验原理：1.以纤维素喂唯一碳源的选择培养基能选择分离分解纤维素的微生物；2.刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二塘和葡萄糖发生这种反应。

实验仪器与用具：除实验五中用到的外，还需要恒温振荡培养箱实验材料和试剂：取自湿地或原生林地的土样（大于20g）羧甲基纤维素钠，酵母粉，磷酸二氢钾，蛋白胨，琼脂粉，氯化钠，刚果红，硝酸钠，硫酸亚铁，硫酸镁，磷酸氢二钠，纤维素粉，蔗糖（也可以用廉价的秸秆磨成粉末代替纤维素粉）实验步骤：将称量好的蔗糖，硫酸亚铁，硫酸镁，磷酸氢二钠，硝酸钠，2g纤维素粉（秸秆粉）倒入500ml锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得选择培养基，备用。

讲称量好的羧甲基纤维素钠，蛋白胨，酵母粉，氯化钠，磷酸二氢钾，硫酸镁，4g琼脂粉加入另一个500ml锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得鉴定培养基，备用。

用5ml微量可调移液器向编号为1--5号的试管内分别加入9ml蒸馏水，塞上棉塞，备用。

讲配制好的选择培养基，鉴定培养基，5支装有蒸馏水的试管，包好的培养皿（最少9个），枪头放入灭菌锅内在121度下灭菌20min。

灭菌后，取出灭菌锅内物品，放入超净台内，用酒精棉球擦拭超净台面和实验者的双手，点燃酒精灯，在酒精灯火焰附近将称量好的20g土样加入到选择培养基中，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀。

将选择培养基放入恒温振荡培养箱内培养48h（震动培养箱转速为200r/min，控制温度为30度）。

等鉴定培养基冷却到不烫手时，在超净台内酒精灯火焰附近往每个培养皿内倒入20ml左右鉴定培养基，在超净台面轻轻摇匀，熄灭酒精灯，等培养基凝固后，将培养基平板倒置于超净台上。

48h后从恒温振荡培养箱中取出选择培养基，置于超净台上点燃酒精灯，再用1ml微量可调移液器移取1ml选择培养基的菌液到1号试管内，得到稀释10-1的稀释液，并用此方法依次稀释10倍，在5号试管内得到10-5的菌液稀释液，再用1ml微量可调移液器移取3号试管中的菌液，滴加2滴到平板上，用涂布器在平板上均匀涂布（注意涂布器要灼烧一下），依照此方法同样将4号5号试管内的菌液涂布到培养皿中，不同菌液每个涂2--3个平板，将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱内，30度培养1--2d,1-2d后取出恒温培养箱内的平板。

土壤中纤维素分解菌的别离实验的具体操作步骤：
1.土样采集
土样采集的方法与本专题课题2类似.土样的采集要选择富含纤维素的环境,这是由于
在纤维素含量丰富的环境, 通常会聚集较多的分解纤维素的微生物.如果找不到适宜的环境,
可以将滤纸埋在土壤中,过一个月左右也会有能分解纤维素的微生物生长.
2.选择培养
选择培养需要的仪器有：250mL锥形瓶、无菌称量瓶、药匙、1mL和10mL的移液管、天平、摇床、温度计等.
培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制. 在250mL锥形瓶中装入30mL培养基,用8 层纱布做成瓶塞,将瓶口塞紧,再在瓶塞外包裹两层包装纸〔或报纸〕,用线绳扎紧,在121c 下高压蒸汽灭菌20min.
选择培养的操作：称取土样20g,在无菌条件下参加装有30mL培养基的摇瓶中.将摇瓶置于摇床上,在30c下振荡培养1〜2d,至培养基变混浊.此时可以吸取0.1mL培养液
进行梯度稀释和涂布平板,也可以按课本中所述,重复选择培养的步骤一次,然后再进行梯度稀释和涂布平板.
3.刚果红染色法别离
纤维素分解菌这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、1mL移液管,装有9mL
无菌水的20mL大试管,温箱等.
培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制.在500mL三角瓶中装入200mL培养基,在
121 C下高压蒸汽灭菌20min.
倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化,按无菌操作的要求,在无菌的培养皿中倒入
15〜20mL培养基,凝固后待用.
制备菌悬液：根据本专题课题1的稀释操作方法,将选择培养后的培养基进行等比稀释, 稀释最大倍数至106.。

纤维素降解菌的分离和筛选1.实验目的：1.掌握纤维素降解菌的的分离和筛选的方法2.学会会培养基的制备3.再次了解菌落的形态2.实验原理：从美术楼后面树林中取适量的土壤，用无菌水将得到的样品经适当稀释, 在28℃下培养1d，稀释10-6、10-7、10-8三个浓度，分别接种于鉴别培养基中培养, 每组3个平行，在37℃下培养2-3 d，然后进行初筛，重复以上步骤，直至获得纯的菌株。

最后镜检。

3.试验方法：1. 取样先从树林中取10g土壤(10—15cm深)。

用灭菌的塑料袋盛装。

2．饥饿培养秤取10g土壤，置于250ml的装有90ml无菌水的锥形瓶中，摇匀，在37℃下培养1d。

3.梯度稀释所需仪器：试管（8支）、洗耳球、移液管。

需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装9ml蒸馏水）、移液管。

用移液管从饥饿培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀。

然后用移液管从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1,10-2,10-3,10-1,10-2,10-310-4,10-5,10-6,10-7,10-8不同稀释度的土壤溶液。

4.选择培养○1刚果红培养基的制备所需要的仪器有：500ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、培养基，用2层纱布加棉花做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层报纸，用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

灭菌后，倒9个灭菌平板，凝固后待用。

○2涂布平板将上述已倒培养基的9个平板底面分别用记号笔写上10-6、10-7、10-83种稀释度（每个稀释度划3个平板）。

然后用移液管分别由10-6、10-7,10-8三管土壤稀释液中各吸取0.2ml对号放入已写好稀释度的平板中，用无菌涂布器在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5~10min，使菌液吸附进培养基。

38℃倒置培养2-3d，至菌落长出，产生纤维素酶的菌落周围将会出现透明圈。

实验分解纤维素的微生物的分离一、教学内容本节课的教学内容来自于小学科学教材的《生物与生活》章节。

具体内容为：通过实验分解纤维素的微生物的分离。

实验内容包括：纤维素的概念、微生物的种类、分离微生物的方法、实验操作步骤等。

二、教学目标1. 让学生了解纤维素的概念和微生物的种类。

2. 培养学生动手操作实验的能力，提高学生的观察和分析问题的能力。

3. 培养学生热爱科学，勇于探索的精神。

三、教学难点与重点重点：纤维素的概念，微生物的种类，分离微生物的方法。

难点：实验操作步骤的理解和掌握。

四、教具与学具准备教具：显微镜、载玻片、盖玻片、染色剂、培养皿、接种针等。

学具：学生实验操作手册、实验记录表等。

五、教学过程1. 实践情景引入：通过展示实物纤维素和微生物的图片，引导学生思考纤维素和微生物的关系。

2. 知识讲解：讲解纤维素的概念和微生物的种类，让学生了解纤维素和微生物的基本知识。

3. 实验操作：指导学生进行实验操作，包括培养基的制备、微生物的接种、培养等步骤。

4. 观察与分析：指导学生观察实验结果，分析微生物对纤维素的分解作用。

5. 随堂练习：让学生根据实验结果，回答相关问题，巩固所学知识。

六、板书设计板书内容：纤维素的概念、微生物的种类、分离微生物的方法、实验操作步骤。

七、作业设计（1）实验中使用了哪些微生物？（2）这些微生物对纤维素有什么作用？（3）分离微生物的方法有哪些？2. 答案：（1）实验中使用了酵母菌和霉菌。

（2）酵母菌和霉菌能够分解纤维素，产生二氧化碳和水。

（3）分离微生物的方法有平板划线法、涂布法等。

八、课后反思及拓展延伸1. 课后反思：通过本节课的实验，学生是否掌握了纤维素的概念、微生物的种类、分离微生物的方法等知识？实验操作是否规范？观察和分析问题的能力是否得到提高？2. 拓展延伸：引导学生思考纤维素在生活中的应用，如纤维素的食品添加剂、纤维素的环保作用等。

鼓励学生进行科学探究，培养学生的创新能力。

分离纤维素分解菌实验操作步骤实验的具体操作步骤如下1.土样的采集土壤中的微生物，大约70%～90%是细菌。

细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表约3～8cm的土壤层。

因此，土壤取样时，一般要铲去表层土。

另外，土样的采集要选择富含纤维素的环境，这是因为在纤维素含量丰富的环境，通常会聚集较多的分解纤维素的微生物。

2.选择培养3.富集培养在将样品稀释涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基之前，先通过选择培养增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物。

富集培养所需要的仪器有：250ml锥形瓶、天平、药匙、玻璃棒、电炉、摇床、玻璃珠、称量纸等。

选择培养基的制备比例见下：纤维素分解菌的选择培养基纤维素粉 5gNaNO31gNa2HPO4•7H2OKH2PO4MgSO4•7H2OKCl酵母膏水解酪素将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000ml按上表比例配制50ml选择培养基。

在250ml锥形瓶中装入50ml培养基，放5～6颗玻璃珠，用8层纱布做成瓶塞，将瓶口塞紧，再在瓶塞外包裹两层牛皮纸，用线绳扎紧，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。

称取土样20g，在无菌条件下加入装有50ml培养基的锥形瓶中。

将瓶置于摇床上，在30℃下振荡培养3～4d，至培养基变浑浊。

4．梯度稀释所需仪器：试管（7支）、移液器、枪头。

需要先经高压蒸气灭菌的仪器：试管（每只内装9ml蒸馏水）、枪头（黄色、蓝色）。

用量程为1000µL的移液管从富集培养土壤液中吸取1ml土壤悬液加入盛有9ml无菌水的试管中充分混匀。

然后换枪头从此试管中吸取1ml加入另一盛有9ml 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。

5.刚果红染色法分离与观察（涂布平板）所需仪器：无菌培养皿（12个）、涂布器（3个）、移液器、枪头、温箱等。

需要灭菌的仪器：无菌培养皿（12个）、涂布器（3个）、移液器、枪头。