分解纤维素的微生物的分离知识点

甲
乙
.纤维素分解细菌的筛选：
1.方法：刚果红染色法这种方法能够通过颜色
反应直接对微生物进行筛选
2.原理：
刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当 纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形 成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我 们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解 菌。
土壤取样
选择培养
（此步可以省略）
课题3
纤维素酶：
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至 少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄 糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二 糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。
纤维素 C1酶 Cx酶 纤维二糖 葡萄糖 苷酶 葡萄糖
4、纤维素酶活性的测定实验：
在2支20mL的试管中， 分别放入1×6cm的滤纸条， 再分别加入pH为4.8、物质 的量浓度为0.1mol/L的醋酸醋酸钠缓冲液10mL、11mL。 在加入10mL缓冲液的试管 中加入1mL纤维素酶 （70~80U/mL）。将二支试 管固定在50mL的锥形瓶中， 在摇床上以140r/min的转速 振荡反应1h，观察结果。
无机碳源：如CO2
1、碳源
有机碳源：如糖类
2、自养型微生物利用无机碳源， 异养型微生物利用有机碳源； 3、自养型微生物利用无机氮源， 异养型微生物可能利用无机氮源也可能利用有机氮源 4、有机碳源也是异养型微生物的主要能源
5自养型微生物的能源是光能或无机物氧化释放的化学能； 异养型微生物的能源是和碳源一样（有机碳源）
梯度稀释
挑选产生 透明圈的 菌落
将样品涂布到鉴 别纤维素分解菌 的培养基上
选择培养 （富集培养）
1、目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保
能够从样品中分离所需要的微生物。
2、选择培养的操作方法

将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中， 将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡 培养1-2d，直至培养液变混浊。 吸取一定量的培养液，转移至另一瓶新鲜的 选择培养基中，以同样的方法培养到培养液 变混浊。
刚果红染色法
方法一：先培养微生物，再加 入刚果红进行颜色反应
方法二：在倒平板时就加入刚 果红
为了确定分离得到的是纤维素 分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶 _____________ 实验，纤维素酶的发酵方法有 液体 发酵和______ 固体 发酵。纤维素 ______ 酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸 等纤维素所产生的________ 葡萄糖 含量进 行定量测定。
8．有些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究 和应用，使人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素 酶处理服装面料等。纤维素酶可以通过微生物发酵来生产， 为了提高酶的产量，请你设计一个实验，利用诱变育种的方 法，获得产生纤维素酶较多的菌株。 (1)写出实验步骤： ① ______________________________________________. ②制备含有___________的固体培养基。 ③ _______________________________________________ __________________________. ④ _______________________________________________ ___________________________. (2)预期实验结果结论：
百度文库
（一）微生物需要的营养物质及功能
微生物需要的五大类营养要素物质 碳源 氮源 生长因子 无机盐 水

生长因子

概念 微生物生长不可缺少的微量有机物 来源 酵母膏、蛋白胨、动植物组织的提取液 常见的生长因子 维生素、氨基酸、碱基等
是否培养所有微生物的培养基中都需要 加生长因子？
与对照组相比较大，说明诱变育种 获得了高纤维素酶产量的菌株②诱 变组中菌落周围的透明圈与对照组 相同，说明诱变育种没有使菌株发 生相关变化 ③诱变组中菌落周围的透明圈与对 照组相比较小，说明诱变育种获得 了低纤维素酶产量的菌株
〖8.答案〗（1）①将培养好的菌株分为 两组，一组用一定剂量的诱变剂处理， 另一组不处理作对照。③把诱变组的大 量菌株接种到多个含有纤维素的固体培 养基上，同时对照组接种未处理的菌株。 把它们置于相同的条件下培养④一段时 间后，取培养基用刚果红染色，观察记 录菌落周围透明圈的大小情况
(2)①诱变组中菌落周围的透明圈