下载文档原格式
高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用
赵碧清;段更利
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2007(029)009
【摘要】综述近几年来高速逆流色谱法在中药有效成分分离方面的研究进展.【总页数】3页(P1347-1349)
【作者】赵碧清;段更利
【作者单位】湖南中医药大学药学院,药物分析教研室,湖南,长沙,410208;复旦大学药学院,药物分析教研室,上海,200032
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.高速逆流色谱在中药有效成分分离中的应用研究进展 [J], 洪波;赵宏峰;司云珊;徐雅娟
2.中药有效成分分离应用中的高速逆流色谱技术 [J], 张志宏
3.应用高速逆流色谱分离纯化黄芩等中药有效成分的方法与价值分析 [J], 臧玉豹
4.高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究 [J], 郭江宁
5.高速逆流色谱技术在中药有效成分分离中的应用 [J], 颜春潮
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用高速逆流色谱分离中药中有效成分及质谱结构研究I. 研究背景在中医药学的发展过程中，中药已经成为了人们日常生活中不可或缺的一部分。
随着科技的进步，人们对中药的研究也越来越深入，尤其是对中药中有效成分的提取和分离技术。
高速逆流色谱(HSLC)作为一种高效的分离技术，已经在中药研究领域得到了广泛应用。
本研究旨在通过HSLC技术分离中药中的有效成分，并利用质谱技术对其进行结构解析，以期为中药的现代化研究和开发提供理论依据和技术支撑。
在过去的几十年里，我国中医药事业取得了世界公认的辉煌成果。
然而随着现代医学的发展，中医药面临着前所未有的挑战。
为了更好地传承和发扬中医药文化，我们需要不断地对中药进行创新研究，提高其药效和安全性。
高速逆流色谱作为一种新兴的分离技术，具有操作简便、分离效率高、适用范围广等优点，为中药的有效成分提取和分离提供了有力保障。
质谱技术作为现代分析科学的重要手段，已经在生物医药领域取得了显著的应用成果。
通过对中药中有效成分的结构解析，我们可以更深入地了解其药理作用机制，为新药的研发提供理论依据。
此外质谱技术还可以用于中药的质量控制和评价，确保药品的安全性和有效性。
中药中有效成分的研究意义及现状在我们的日常生活中，中药已经成为了许多人的日常调理和疾病治疗的重要手段。
而其中最让人着迷的，莫过于中药中那些神奇的有效成分。
这些成分不仅能够治病救人，还能够为我们的生活带来诸多健康益处。
因此研究中药中有效成分的意义不言而喻。
然而尽管中药有着悠久的历史和丰富的经验，但在现代科学技术的发展下，我们对中药中有效成分的认识仍然有限。
这主要是因为中药中的有效成分种类繁多，分离提取难度较大，而且很多成分的结构性质尚不清楚。
因此如何高效、准确地从中药中提取出这些有效成分，成为了一个亟待解决的问题。
近年来随着高速逆流色谱等现代分离技术的不断发展，我们对中药中有效成分的研究取得了一定的进展。
通过对大量中药样品的分析，我们已经发现了许多具有潜在药用价值的化合物。
doi：10.3969/j.issn.1004-275X.2019.08.044近年国内高速逆流色谱分离天然产物的应用施敏(新疆大学,新疆乌鲁木齐830046)摘要：高速逆流色谱(HSCCC)是一种快速高效的分离方法。
综述了近五年来关于HSCCC分离天然产物的研究进展,详细的论述了常用溶剂体系适合分离物质的特征,列举了大量的应用实例和被分离物质的结构及分配系数,对其分离提取天然产物有效成分的应用及其进展进行了综述,对快速选择溶剂体系起到了一定的指导作用。
并对HSCCC的未来发展进行展望。
关键词：高速逆流色谱;溶剂体系;天然产物中图分类号：TQ413文献标志码：A文章编号：1004-275X（2019）08-113-04A p p l ic a t i o n o f H i g h S p e e d C o u n t e rc u rre n t C h ro m a t o g ra p h y in S e p a ra t io n o f N a t u ra lP ro d u c t s in C h in a in R e c e n t Y e a rsShi Min（Xinjiang University,Urumqi,Xinjiang830046）Abstract:High-speed countercurrent chromat ography(HSCCC)is a fast and efficient separation method.The research progress of natural products separation by HSCCC in recent five years was reviewed. The characteristics of common solvent systems suitable for separation of natural products were discussed in detail.A large number of application examples and structure and distribution coefficients of separated substances were listed.The application and progress of HSCCC in separation and extraction of effective components from natural products were summarized.Rapid selection was also discussed.Solvent selection system plays a guiding role.The future development of HSCCC is also prospected.Key words:HSCCC；solvent system；natural products高速逆流色谱(high-speed countercurrent chromatography,HSCCC)是新型的液-液分配色谱技术,由Ito.Y.最先创立[1]。
药物分析新技术的研究进展【摘要】本文介绍近年来药物分析领域中发展起来的几种新技术，包括高效毛细管电泳技术、高效液相色谱-质谱联用技术、高速逆流色谱技术、时间分辨荧光分析法、手性药物的液相色谱分析法，以及它们的最新应用进展。
药物分析目的是保证药物的质量和用药的安全有效。
它研究药物的化学检验、药物稳定性、生物利用度、药物临床监测和中草药有效成分的定性和定量等。
传统的药物分析,大多是应用化学方法分析药物分子,控制药品质量。
然而, 现代药物分析在计算机技术以及分析技术的飞速发展下已经发生了翻天覆地的的变化。
本文主要介绍一些基于现代色谱、现代波谱、色谱连用技术上的用于药物分析的现代化技术方法。
1、高效毛细管电泳技术高效毛细管电泳(high performanee capillary electrophore-sis , HPCE 又称毛细管电泳 (CE。
毛细管电泳(CE)是80年代后期在世界范围内迅速发展起来的一种分离分析技术，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。
其分析应用的范围极广, 小至无机离子, 大至生物大分子, 都可以用CE 来测定。
HPCE 在DNA 、氨基酸及蛋白质的分析中应用非常广泛，已在生命科学和生物工程等领域中显示出极其重要的应用前景，被用于DNA 分析，如实现微量DNA 的检测、DNA 片段的分离、DNA 的测序、DNA 突变的检测、DNA损伤判断、临床诊断等⑴。
HPCE 技术因其特别适宜快速大量地分析复杂的中药成分而被广泛用于中药材鉴别和质量控制、中药有效成分的分离与测定、中成药和中药制剂的分析。
韩乐等［2］建立了HPCE 同时测定玄参中梓醇、桃叶珊瑚苷、哈巴苷、哈巴俄苷、毛蕊花糖苷及肉桂酸含量的方法，用于玄参药材内在质量的评价和控制。
Yu 等［3］等采用中心组合设计法和多变量分析法，以黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素作为控制标准建立黄芩毛细管指纹图谱，对34 个不同产地的黄芩进行质量分析控制，方法快速、精密、可靠，对所有来源的药材进行了质量评价。
高速逆流色谱法在中药有效成分分离中的应用研究高速逆流色谱是近几年发展起来的新型色谱技术，由于其独特之处已被广泛应用于各个领域，本文就人们关心的热点中药有效成分的分离，采用新的色谱技术高速逆流色谱技术分离取得的成就进行总结，并展望未来的前景。
标签：高速逆流色谱法；中药有效成分；分离；应用近年来，随着中国经济的高速发展，中草药已经越来越受到人们的关注。
而中药的有效成分复杂，如何获得高效的有效成分，分离效果成为研究的热点。
高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography，HSCCC）具有分析能量大、分离效率高、结果重现性好等其他色谱无法替代的优点。
现高速逆流色谱技术这种新型的液-液分配色谱已广泛应用于医药、农林、化工等各领域[1]。
应用新型的高速逆流色谱分离成分复杂的中药有效成分可取得良好的效果，具体总结如下。
1工作原理高速逆流色谱HSCCC是应用不同物质在固液两相中的分配系数不同进行分离。
一台高速逆流色谱仪是由输液泵、分离柱、检测器、工作站、数据采集系统及馏分收集器等组成。
首先选择固定相，是将两相预先平衡好的溶剂中的一相填充满螺旋管柱，将流动相以一定的流速泵入高速旋转的螺旋管柱内。
在有液体流动相流出时，说明体系达到平衡，此时将样品注入高速逆流色谱体系中，螺旋管分离柱将依据不同成分在固液两相中的分配系数不同达到分离，依据工作站和数据采集系统将分离后的结果进行记录并积分处理。
在仪器运行的时候，可调节溶剂、固定相、流动相、样品浓度、柱温、洗脱方式、进样方式、流动相的流速及转速等使分离效果达到最好。
还需要根据所检测样品的特点，选择不同的检测器，UV-VIS（紫外-可见光检测器）、ELSD（蒸发光散射检测器）或者质谱检测器等[2]。
2中药的有效成分各种植物中所含的有效成分分类为生物碱、黄酮、苷、萜、蒽醌、木脂素、香豆素、有机酸等。
3高速逆流色谱分离各类中药有效成分3.1生物碱类中药的有效成分中生物碱是重要的一类化学成分，其中的天然含氮化合物是重要的疾病治疗和药物发展的物质。
高效液相色谱法测定丁公藤中东莨菪内酯的含量
陈玉敏;曹红;周苏萍
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2005(027)012
【摘要】目的:建立测定丁公藤中东莨菪内酯含量的高效液相色谱法.方法:采用高效液相色谱法.以ZORBAX RX-SIL(250 mm×4.6 mm 5 μm)为色谱柱;流动相:甲醇-0.5%冰醋酸(30:70):检测波长:345 nm:流速:1.0 mL/min.结果:东莨菪内酯的加样回收率平均为97.93%RSD为2.14%(n=6).结论:试验结果表明,该方法准确、灵敏度高,重现性好.
【总页数】2页(P1461-1462)
【作者】陈玉敏;曹红;周苏萍
【作者单位】总后卫生部药品仪器检验所,北京,100071;总后卫生部药品仪器检验所,北京,100071;总后卫生部药品仪器检验所,北京,100071
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.丁公藤注射液中东莨菪内酯含量的HPLC法测定 [J], 张志兰;项苏留;张俭;褚清俊
2.HPLC法测定丁公藤注射液中东莨菪内酯含量 [J], 曹海;王梅娟
3.反相高效液相色谱法测定丁公藤注射液中东莨菪内酯含量 [J], 李梅;周燕文;杨正鸿;赵素荣;陆敏仪;卢勇;覃麟
4.HPLC法测定丁公藤中东莨菪内酯的含量 [J], 杨裕忠;罗干明
5.高效液相色谱法测定水母雪莲中东莨菪内酯、伞形花内酯的含量 [J], 苏薇薇;赵洁;林敬明
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
·药品检验·2012年9月第9卷第26期中国医药导报CHINA MEDICAL HERALD丁公藤，是旋花科植物丁公藤（Erycibe obtusifolia Benth.）或光叶丁公藤（Erycibe schmidtii Craib ）的干燥藤茎，全年均可采收，切段或片，晒干[1]，制成中药饮片，具有解表发汗、抗炎、疏风祛湿、舒筋活络、消肿止痛等功效。
丁公藤的化学成分主要有东莨菪内酯、东莨菪苷、咖啡酸和氯原酸等[2-3]，其中东茛菪内酯具有祛风、抗炎、止痛、抗真菌和抗肿瘤作用[4]，因此建立东莨菪内酯的分离提纯方法具有重要意义。
高速逆流色谱（high-speed counter-current chromatogra -phy ，HSCCC ）是近年来发展起来的新型、不使用固态支撑体或载体的连续液-液分配色谱技术，具有分离速度快、样品吸附低、分离重现性好等优点[5-6]，已被广泛应用于天然药物成分的分析鉴定及分离制备。
东莨菪内酯为香豆素类化合物，目前香豆素的传统分离多采用柱色谱和薄层色谱法，操作繁琐，本实验采用半制备型高速逆流色谱仪从丁公藤粗提物中成功分离纯化出东莨菪内酯，经高效液相色谱峰面积归一化法分析，纯度达到98.04%，为香豆素类化合物的高效、方便和快速分离提供了有效借鉴。
1仪器与试剂1.1仪器TBE 300B 高速逆流色谱仪（上海同田生物技术有限公司），AKTA prime 泵及检测系统（美国通用电器医疗集团），LC-20AT 型高效液相色谱仪（日本岛津公司），HH-1型数显恒温水浴锅（江苏省荣华仪器制造有限公司），9312A 型电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械厂），DFT-100J 型手提式高速中药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司），C3860型超声波清洗器（河南省巩义市英峪予华公司），Milli-Q Academic 超纯水器（法国密理博有限公司）。
1.2试剂东莨菪内酯标准品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110768-200504），粗提物的制备及高速逆流所用的有机溶剂正己烷、乙酸乙酯和甲醇均为分析纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），HPLC 分析用甲醇为色谱纯（美国Fisher 公司），实验室用水是自制的超纯水。
丁公藤购自安徽省亳州市药材总公司，经哈尔滨医科大学大庆校区药学院申志英副教授鉴定确认为光叶丁公藤的干燥藤茎。
2方法与结果2.1样品制备称取丁公藤粉末（过40目筛）300g ，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇500mL ，放置过夜。
超声30min ，过滤，滤渣再分别用500mL 的甲醇超声过滤两次，合并滤液，滤液经减压浓缩后转移到真空干燥器中干燥，最后得到丁公藤干浸膏5.40g ，称取适量的干浸膏用甲醇溶解并定容，备用。
2.2标准品溶液制备准确称取一定量的东莨菪内酯标准品，置5mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声10min ，冷却后补足体积，经0.45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液即得。
高速逆流色谱法分离纯化丁公藤中东莨菪内酯高赛男1李森1张林娜1孙跃2张福琴21.哈尔滨医科大学大庆校区药学院，黑龙江大庆163319；2.北京四环科宝制药有限公司，北京100071[摘要]目的探讨高速逆流色谱法（HSCCC ）分离丁公藤中东莨菪内酯的可行性及工艺。
方法用纯甲醇超声萃取三次，得到丁公藤粗提物，再用HSCCC 技术分离得到高纯度的东莨菪内酯。
结果正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统（体积比为3.0∶5.0∶3.5∶5.0）具有较好的分离效果；较佳工艺条件为：转速850r/min 、流动相流速2mL/min 和水浴温度25℃。
结论采用HSCCC 技术分离得到的东莨菪内酯样品经高效液相色谱法检测，纯度可达98.04%。
[关键词]高速逆流色谱法；丁公藤；东莨菪内酯；高效液相色谱法[中图分类号]R284.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）09（b ）-0122-03Isolation and purification of scopoletin from Erycibe obtusifolia by high -speed counter-current chromatographyGAO Sainan 1LI Sen 1ZHANG Linna 1SUN Yue 2ZHANG Fuqin 21.College of Pharmacy,Daqing Campus of Harbin Medical University,Heilongjiang Province,Daqing 163319,China;2.Sihuankebao Pharmaceuticals Co.Ltd.,Beijing 100070,China[Abstract]Objective To study the feasibility and techniques for isolating scopoletin from Erycibe obtusifolia by high -speed counter -current chromatography (HSCCC).Methods Erycibe obtusifolia was ultrasonically extracted in 100%methanol three times,and then a HSCCC unit was used to get high purity of scopoletin.Results The preferable solvent system was composed of hexane-ethyl acetate-methanol-water (3.0∶50∶3.5∶5.0,V /V ),and the preferable technical conditions were as followed:the rotate speed was 850r/min,the mobile phase flow rate was 2mL/min,and the bath temperature was 25℃.Conclusion The purity of scopoletin sample isolated by HSCCC is 98.04%through the technique of high perfor -mance liquid chromatography (HPLC).[Key words]HSCCC;Erycibe obtusifolia ;Scopoletin;HPLC[基金项目]黑龙江省教育厅科学技术研究项目（项目编号：11551178）。
[作者简介]高赛男（1975-），女，湖南永顺人，土家族，硕士研究生，讲师，主要从事天然药物活性成分高效分离。
1222012年9月第9卷第26期CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报·药品检验·2.3高速逆流溶剂系统的选择对样品进行分离的必要条件是在互不相溶的两相中具有合适的分配系数，分配系数值过小，待分离物来不及分离，就随着流动相流了出来；但是分配系数值太大的话，分离时间过长，浪费试剂，理想的分配系数值应在0.5~1.5之间。
按照所需比例，配制20mL 的溶剂，置于分液漏斗中静置过夜。
称取待测样品适量放入5mL 的试管中，吸取上、下相溶剂各2mL ，充分振摇，静置分层，分别取上、下相液体用HPLC 检测东莨菪内酯的峰面积，设上、下相峰面积分别为A 1和A 2，根据公式K =A 1/A 2，求出分配系数值。
根据丁莨菪内酯的极性，重点考察了HSCCC 中常用于中等极性物质分离的溶剂体系正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，研究了不同溶剂配比对目标组分东莨菪内酯分配系数K 值的影响。
结果发现，随着体系中甲醇/水比例的增加，分配系数K 值出现下降的趋势。
当正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积配比调为3.0∶5.0∶3.5∶5.0和3.0∶5.0∶3.0∶5.0时，K 值分别为0.60和1.28，满足理想的K 值范围，可以进行下一步的试验。
2.4高速逆流色谱分离效果考察用分液漏斗分别配制2000mL 体积比为3.0∶5.0∶3.5∶5.0和3.0∶5.0∶3.0∶5.0的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的两种溶剂系统，密封振荡混合后静置分层过夜，分出上相（固定相）和下相（流动相），超声脱气30min 。
打开循环水浴，预热高速逆流色谱系统，待水浴温度达到设置温度25℃后，打开泵，将固定相以30mL/min 的流速泵入分离柱，等有液体流出后按泵暂停键；开启主机转速控制器，使高速逆流色谱仪螺旋管柱按顺时针方向旋转，当转速达到850r/min 后，再以2mL/min 的流速泵入流动相。
用量筒收集柱后流出物，首先从溢出口流出的是固定相，待有流动相流出时，按泵暂停键，读出流出的固定相体积V s 。
根据保留在分离柱内的固定相体积占分离柱总容积V t 的比例就可求出固定相的保留率R ，即：R =V t -V s t。
实验结果表明，体积比为3.0∶5.0∶3.5∶5.0和3.0∶5.0∶3.0∶5.0的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的两种溶剂系统，对应的固定相保留率均在0.7左右，两种溶剂系统似乎不存在什么差别。
但是把供试液注入进样环后，以2mL/min 的流速对丁公藤粗提液进行分离，却可从两者的分离效果图中看出它们的差别。
从图1可以看出，当正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积配比3.0∶5.0∶3.5∶5.0时，180min 内，主要有两个峰出现，峰形尖锐，分离效果良好；但是当体积配比为3.0∶5.0∶3.0∶5.0时，对应两个组分的峰形很钝，分离效果不好，因此采用体积配比为3.0∶5.0∶3.5∶5.0的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系，并用试管分别收集在123～140min 和142～163min 两个时间段所对应峰的流出物，记为收集液a 和收集液b ，备用。
2.5高效液相色谱分析2.5.1高效液相色谱条件色谱柱是日本岛津公司的Inertsil ODS-SP （4.6mm ×150mm ，5μm ），检测波长是347nm ，流动相由甲醇和水（30∶70，V /V ）构成，总流速1.0mL/min ，进样量10μL 。
2.5.2高效液相色谱用供试液的制备将收集得到的a 、b 两个流分分别蒸干，用甲醇溶解，0.45μm 的微孔滤膜过滤后定容，得到纯化后的供试品溶液，备用。
2.5.3分离样品的测定参照“2.5.1”项下色谱条件，分别对东莨菪内酯标准品、a 和b 三种溶液进行图谱分析，发现丁公藤粗提液在正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（3.0∶5.0∶3.5∶5.0）溶剂体系下，溶液b 的保留时间与东莨菪内酯标准品的一致，因此判断收集液b 为东莨菪内酯，纯度高达98.04%。
