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第11卷第4期1998年11月同 位 素Jou rnal of Iso topesV o l.11 N o.4N ov.1998白细胞介素28的125I标记范 我 钱建华 张 毅 沈维明 朱本兴(苏州医学院放射医学系,215007)用Bo lton2H un ter(H PN S)试剂作为联结剂,制备125I2白介素28(I L28)。
首先用125I2N a I标记H PN S,标记率为(5717±1819)%,然后以pH8.5的硼酸缓冲液为标记介质,用125I2H PN S联接I L28。
分离纯化后125I2I L28的放化纯度为9012%±415%。
关键词 125I标记 白介素28 Bo lton2H un ter试剂联结法 放射化学纯度 标记率中图法分类号 O613144 R81715 O621135 O629173白细胞介素28(I L28)是一种被单核细胞、内皮细胞、纤维细胞和许多上皮起源的细胞类型表达的含99个氨基酸的蛋白质,通过一个信号肽分离和氨基终端进一步的蛋白酶化过程,I L2 8被单核细胞优先作为含72个氨基酸、相对分子量为814kD蛋白质分泌或被内皮细胞和纤维细胞作为含77个氨基酸、相对分子量为819kD蛋白质分泌。
据文献[1]报道,I L28的前炎性作用可使它定位在急性和慢性炎症部位并修复中性粒细胞。
除此之外,它可能还具有某些抗炎性质。
I L28可阻止中性粒细胞粘附至活化的血管内皮,对家兔短期血管内给药I L28时,发现由中性粒细胞迁移至细胞素诱导的炎症被抑制。
在近期发现的趋化性细胞素家族中,I L28是几种人类细胞产生的趋化性活化因子中主要的一种,并发现这种趋化因子引起明显的白细胞增多。
作为一种趋化吸引剂,I L28可促进骨髓细胞的修复,另外它对肺缺血再灌注时引起的损伤也有明显的抑制作用。
在很多疾病中(例如肺炎、风湿性关节炎、腹膜炎、脓毒症)和抽烟者体内,I L28的水平都有明显的变化[2-5]。
表达重组蛋白的CHO-GS细胞的无血清培养张芳;张立;易小萍;孙祥明;张元兴【期刊名称】《高技术通讯》【年(卷),期】2005(015)007【摘要】采用DOEHLERT和HADAMARD统计方法建立了一个适于重组CHO-GS细胞生长和外源蛋白表达的无谷氨酰胺无血清培养基SFMB.对多种硫酸多聚糖进行了考察,选取低分子量硫酸葡聚糖,添加浓度为25 mg/L,可以避免细胞结团.用SFMB在方瓶中培养重组CHO-GS细胞,细胞生长优于含10%小牛血清的无谷氨酰胺DMEM/F12培养,最大细胞密度提高了40.7%,外源蛋白的表达水平也得到提高.在100 ml转瓶中分批培养,最大细胞密度和蛋白表达分别达到1.5×106cells/ml和0.48 mg/L.【总页数】6页(P73-78)【作者】张芳;张立;易小萍;孙祥明;张元兴【作者单位】华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237;华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海,200237【正文语种】中文【中图分类】Q81【相关文献】1.人白细胞介素7重组蛋白原核表达载体在大肠杆菌中的表达和鉴定 [J], 耿梅;陈清;徐丽慧;张延亭;何贤辉2.无血清培养人肝癌细胞增生率的变化和bFGF在细胞中的表达 [J], 张华;郭崇洁;景朋;高福云;赵天德3.重组细胞株CHO-105C3无血清培养及人促红细胞生成素的表达 [J], 韩凤来;周向军;范大钧;童涌;曹韫旭;陆德如4.人白细胞介素13重组蛋白表达载体的构建及其在大肠埃希菌的表达 [J], 黄庆;府伟灵;张雪;黄君富5.昆虫细胞中共表达人糖基转移酶对重组蛋白SEAP表达的影响 [J], 唐巍玲;田苗苗;黎健蓓;钟江因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大肠杆菌表达的rhIL—8的分离纯化
李卫党;狄春辉
【期刊名称】《北京医科大学学报》
【年(卷),期】1996(028)005
【摘要】目的：探索人重组白细胞介素－８（ｒｈＩＬ－８）的分离纯化的路线。
方法：用Ｓｅｐｈａｃｒｙ１－Ｓ－２００凝胶过滤和ＷＱｓｅｐｈａｒｏｓｅ
ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ．Ｑｓｅｐｈａｒｏｓｅｂｉｇｂｅａｄ
ｓ两步连续阴郭交换层析纯化，结果：两种方法纯化的ｒｈＩＬ－８纯度分别达９５．６％、９８．６％。
氨基酸组份分析推算值基本与理论值相符。
纯化的ｒｈＩＬ－８对小人中性粒细胞具有明显的体内体外趋势
【总页数】3页(P337-339)
【作者】李卫党;狄春辉
【作者单位】北京医科大学免疫学系;北京医科大学免疫学系
【正文语种】中文
【中图分类】R378.21
【相关文献】
1.rhIL—6大肠杆菌高效表达的影响因素及其产品中试的研究 [J], 杨吉成;盛伟华
2.rhIL—6表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达 [J], 田志刚;刘杰
3.大肠杆菌RNA聚合酶σ亚基基因的表达及表达产物的分离纯化 [J], 刘秀丽;丁
清泉
4.大肠杆菌表达rhIL—8的纯化和生物学活性鉴定 [J], 陆宇新;张毅
5.rhIL-13表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达 [J], 王文;田志刚;孙汭;张建华
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重组人白细胞介素8在大肠杆菌的表达、鉴定【摘要】目的：利用PCR技术[1]扩增hIL-8 cDNA，将其与酶切后的原核表达载体pKpL3a〔含PL启动子〕质粒连接，并在大肠杆菌中进行表达、鉴定。
方法：PCR技术扩增hIL-8 cDNA获取目的基因，大肠杆菌质粒提取，将目的基因连接到大肠杆菌表达载体pKpL3a质粒中，重组DNA分子转化到Pop2136大肠杆菌中，利用其所产生的温度敏感性λ阻遏蛋白来调控外源基因表达，经ELISA反应检测其表达水平。
结果：带hIL-8基因的重组pKpL3a质粒成功转化到Pop2136大肠杆菌中，经诱导，表达了IL-8并经ELISA反应检测了其表达水平。
结论：hIL-8成功在大肠杆菌中表达。
【关键词】hIL-8， PCR ，重组DNA【Summary】Purpose：Connecting the hIL-8 cDNA which is amplificated using PCR technology with the plasmid of prokaryotic expression vector digested pKpL3a (including PL promoter),and detecting the expression and identification of 。
Method：Get target gene by amplificating hIL-8 cDNA using PCR technology. Extract the E.coli plasmid. Connect the target gene with E.coli plasmid pKpL3a expression vector. Transform recombination DNA into E.coli Pop2136, and regulate gene expression of exogenous using the temperature-sensitive λ repressor protein, then detect the expression levels by ELISA reaction。
人IL-8定量分析酶联免疫检测试剂盒IL-8简介：IL-8是由巨噬细胞产生的单核因子，是趋化因子家族C-X-C亚族（α亚族）中的一员，对中性粒细胞、T淋巴细胞、嗜碱性粒细胞具有趋化作用，能够吸附中性粒细胞，嗜碱性粒细胞和T细胞，但是单核细胞除外。
人的IL-8 cDNA 序列表明有99个氨基酸残基。
经过剪节掉22个个残基后，形成成熟的具有77个氨基酸的蛋白。
IL-8还能够调节T 淋巴细胞、B淋巴细胞成熟分化，在炎症反应、免疫调节中起重要作用，并且研究表明IL-8还具有促进血管生成的作用。
IL-8在人体内存在两种主要形式，一种是来源于单核细胞含72个氨基酸的多肽，另一种是来源于内皮细胞含77个氨基酸的多肽。
72aa比77aa的IL-8具有更高的趋化活性，而77aa的IL-8具有诱导白血病细胞凋亡的功能，其位于N端的五肽序列已被确定是IL-8具有诱导凋亡功能的活性部位。
检测原理:本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-8 的浓度。
IL-8 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-8 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
当加入生物素化的抗人IL-8 抗体后，抗人IL-8 抗体与IL-8 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。
生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。
最后加入显色剂，若样本中存在IL-8 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。
通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-8 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-8 浓度。
人定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:组分规格预包被板12条或 6条样本分析缓冲液1瓶5ml/3 ml标准品稀释液10ml/5ml标准品2/1（冻干)生物素化抗体1瓶10ml/5mlHRP连接的酶结合物1瓶10ml/5ml浓缩洗涤液 20×30ml/瓶TMB底物1瓶10ml/5 ml终止液1瓶5ml/3 ml封板胶纸3/2张说明书1份标本收集:1.标本的收集请按下列流程进行操作：A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。
白细胞介素—8渡边一羲;宋艾芝【期刊名称】《日本医学介绍》【年(卷),期】1991(012)008【摘要】众所周知,在产生炎症反应和免疫反应的部位能看到白细胞浸润,其细胞种类因致炎刺激的种类不同而异。
已证明,引起这种现象是因为在局部产生的化学趋化因子(chemotactic factor, CF)的种类不同。
白细胞介助于自身细胞膜上的受体,所感受的CF浓度梯度,向浓度高方向趋化,而最早看到的白细胞是中性粒细胞。
最近又发现,一种中性粒细胞的新的CF是白细胞介素-8(IL-8)。
该因子是由LPS(脂多糖)、IL-1(白细胞介素-1)和TNF(肿瘤坏死因子)刺激单核细胞而产生的一种中性粒细胞趋化因子。
【总页数】2页(P372-373)【作者】渡边一羲;宋艾芝【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R392.12【相关文献】1.Ⅰ期尘肺患者血清白细胞介素12、白细胞介素12p70、白细胞介素10和白细胞介素18含量的变化 [J], 袁宝军;王冬梅;邹吉敏;赵建宏2.血清白细胞介素-17、白细胞介素-22、白细胞介素-27水平对自身免疫性肝炎的临床价值分析 [J], 毕琼;曹赤;李江佩;郭磊3.高压氧治疗对癫痫大鼠血清白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α水平及海马神经元Bax及Bcl-2表达的影响 [J], 崔阳4.外周血白细胞介素-37白细胞介素-8白细胞介素-6在活动性肺结核患者中的变化及与病情相关性 [J], 李向红5.类风湿关节炎患者血清白细胞介素-32、白细胞介素-17和白细胞介素-10表达水平及临床意义 [J], 安新;冯超;高利常因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组人IL-8在大肠杆菌中的表达及纯化工艺的优化张维延;马泓冰;徐颖;张学光【期刊名称】《苏州大学学报（医学版）》【年(卷),期】2005(025)005【摘要】目的优化重组人IL-8(rhIL-8)大肠杆菌表达及纯化工艺,以便获得高纯度的重组蛋白.方法将已构建好的表达载体转化大肠杆菌HB101,经3-吲哚丙烯酸诱导,在发酵罐中进行表达,比较不同诱导剂浓度、温度、pH值及时间,以获得最佳表达工艺参数.离心收集菌体,超声破壁,收集包涵体和胞浆,其中包涵体经变性、复性处理,与包浆部分合并,经肝素亲和层析柱、阳离子交换柱和凝胶层析柱分离纯化,比较不同的洗脱条件,得到纯品,并对重组蛋白的纯度和生物学活性进行鉴定.结果用大肠杆菌HB101在发酵罐中表达rhIL-8,在30℃、pH为7.0的条件下加入50 mmol/L 3-吲哚丙烯酸,诱导28 h,得到约为100 mg/ml的高表达,其分泌的重组蛋白以包涵体和胞浆的形式存在,经三步层析纯化后,得到高纯度的rhIL-8(纯度>95%),经中性粒细胞趋化实验证实,所获IL-8具有良好的趋化白细胞迁移的作用.结论建立高效表达rhIL-8的原核表达和纯化工艺,所获的纯化IL-8具有良好的生物学活性.【总页数】4页(P780-782,806)【作者】张维延;马泓冰;徐颖;张学光【作者单位】苏州大学医学生物研究所,江苏苏州,215007;苏州大学医学生物研究所,江苏苏州,215007;苏州大学医学生物研究所,江苏苏州,215007;苏州大学医学生物研究所,江苏苏州,215007【正文语种】中文【中图分类】R392-33【相关文献】1.人重组核凋亡诱导因子1截短体在大肠杆菌中的表达及纯化 [J], 韩普;莫晓宁;钟丽君;杨彬;马大龙;娄雅欣2.重组人胱抑素C在大肠杆菌中的表达及纯化 [J], 张骥;张巍;赵卫国3.重组人Hexastatin融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及其纯化 [J], 温镭;宋娜玲;贺欣;王德芝;赵启仁4.大肠杆菌表达重组人IL-8分离纯化工艺的建立 [J], 刘继明;张学光;施勤;张毅;朱华亭;徐影;张维延;强亦忠5.重组人抗血栓蛋白在大肠杆菌中的自诱导表达及纯化 [J], 龚志飞;杨翔;颜法宝;陈强;孙小强;华子春因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人白细胞介素-8（IL-8）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素8（IL-8）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-8（IL-8）水平。
用纯化的人白细胞介素-8（IL-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-8（IL-8），再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-8（IL-8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-8（IL-8）含量。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
检测范围：40 ng/L -1200 ng/L 使用目的：人白细胞介素 -8（IL-8 ）试剂盒使用方法96T本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-8（ IL-8 ）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-8（ IL-8 ）水平。
用纯化的人白细胞介素 -8（ IL-8 ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-8（ IL-8 ），再与 HRP 标记的白细胞介素 -8（ IL-8 ）抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-8（ IL-8 ）呈正相关。
用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-8（ IL-8 ）浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml× 1 瓶7 终止液6ml ×1 瓶2 酶标试剂6ml × 1 瓶8 标准品（ 2400 ng/L ）0.5ml × 1 瓶3 酶标包被板12孔× 8条9 标准品稀释液 1.5ml × 1 瓶4 样品稀释液6ml × 1 瓶10 说明书 1 份5 显色剂 A液6ml × 1 瓶11 封板膜 2 张6 显色剂 B液6ml × 1/瓶12 密封袋 1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1200ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液600 ng/L 4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入150μl 标准品稀释液300 ng/L 3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入150μl 标准品稀释液150 ng/L 2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入150μl 标准品稀释液75 ng/L 1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
#论著#文章编号:1007-8738(2010)01-0041-03人细胞角蛋白8(C K8)基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达李 薇,寻 萌,楚雍烈*,郑建武(西安交通大学医学院免疫与病原生物系分子病毒研究所,陕西西安710061)收稿日期:2009-06-19; 接受日期:2009-09-18基金项目:国家自然科学基金资助项目(330470089)作者简介:李 薇(1985-),女,陕西西安人,硕士生*Correspond i ng au t hor ,Te:l 029-********C loning and expression of hu m an kera -ti n 8gene cDNA i n E.coliL I W ei ,XU N M eng,C H U Yong-lie *,Z HE NG J ian-wu D epart m ent o f I mmuno l ogy and Pathog en B i o l ogy ,M edica l School of X i .an Ji aotong U n i versity ,X i .an 710061,Ch i na[A bstract] A IM:To clone and express human ke ra tin 8gene c DNA in E.co li .M ETHODS :Hu m an cytokeratin 8gene c DNA w as amp lified by RT -PCR fro m genom ic RNA o f hu m an ce ll line 7721.The a m p lifi e d cy t oke ra tin 8gene cD -NA was cloned i n to p MD 18-T vector .Then ,the CK 8cDNA was a m p lifi e d by PCR from recomb inant p las m id p MD 18-CK 8,and was subc l o ned into pET -28a(+)exp ressi o n vec -t o r .The reco m b i n an t p las m i d pET -28a -CK 8DNA was trans -f o r med in t o E.co li DH 5A stra in .RE S ULTS :Human cytoker -a tin 8gene c DNA w as cloned ,and the recomb inan t p las m id pMD 18-CK 8w as transf o r med in to E.co li .The CK 8cDNA was subc l o ned into E.co li DH 5A strain ,and successfu ll y ex -pre ssed in E.co li .CONCLU SI ON :Human cyt okera tin 8gene c DNA is c l o ned ,and successf u lly expressed in E.co li ,wh ich lay the f ounda tion o f f u rthe r study on t he CK 8b i o log-i ca l p rope rti e s and f uncti o ns .[K eywords]cyt okera tin 8(CK 8);gene clon ing ;gene ex -p ress i o n[摘要] 目的:克隆人细胞角蛋白8(CK8)基因cDNA 并在大肠杆菌中表达C K 8蛋白产物。
重组人α8干扰素在大肠杆菌中的克隆与高表达
张平武;王易伦;陆德如
【期刊名称】《第二军医大学学报》
【年(卷),期】1995(16)2
【摘要】利用基因重组技术构建了人干扰素α８（ＩＦＮ－α８）高表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＸＬｌ－Ｂｌｕｅ／ｐＢｍ，经酶切鉴定、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及生物活性测定等分析，表明能特异性地表达具有生物活性的ＩＦＮ－α８，表达量达到总菌体蛋白的２３％，经复性后比活为４．８×１０７ＩＵ／ｍｇ，具有良好的应用前景。
【总页数】4页(P115-118)
【关键词】干扰素α8;基因重组;克隆;基因表达;大肠杆菌
【作者】张平武;王易伦;陆德如
【作者单位】第二军医大学医学生物技术和分子遗传研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q511
【相关文献】
1.大肠杆菌发酵重组人干扰素—α2a的高密度,高表达 [J], 邹钟诚;侯剑英
2.重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达 [J], 王志宇;曹广祥;付加芳;宗工理;李俊玲;王世立
3.重组人αB干扰素在大肠杆菌中的克隆与高效表达 [J], 张平武;王易伦;陆德如
4.重组人干扰素-γ在大肠杆菌高细胞密度发酵中过量表达 [J], 袁宁
5.按大肠杆菌高表达序列设计的人干扰素α-2b基因的化学合成和克隆 [J], 刘丽华;哈斯阿古拉;李宏;张鹤龄;罗辽复
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ImmunoChemistry丨ICT白细胞介素-8说明书白细胞介素-8（IL-8），也称为CXCL8，是一种由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞产生的ELR阳性CXC家族成员趋化因子。
ELR 阳性的CXC趋化因子（如IL-8）特异性地诱导中性粒细胞迁移，并与趋化因子受体CXCR1和CXCR2相互作用。
人IL-8重组蛋白是酵母中产生的纯化白介素-8。
ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",研究工具众多，包含细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒，同时还有高灵敏度的 ELISA开发试剂，包括包被液、封闭液、冲洗液、底物、终止液、板子等等。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8背景：白细胞介素-8（IL-8），也称为CXCL8，是一种由巨噬细胞和其他细胞类型如上皮细胞产生的ELR阳性CXC家族成员趋化因子。
哺乳动物中有17种不同的CXC趋化因子，分为两类：在CXC基序的第一个半胱氨酸之前具有谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（简称ELR）的特定氨基酸序列（或基序）的趋化因子（ELR阳性），以及没有ELR基序的趋化素（ELR阴性）。
ELR阳性的CXC趋化因子如IL-8特异性地诱导中性粒细胞迁移，并与趋化因子受体CXCR1和CXCR2相互作用。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8协议:人IL-8蛋白可用于细胞培养、作为IL-8 ELISA标准品和作为Western印迹对照。
ImmunoChemistry 白细胞介素-8相关研究：重组小鼠CCL3重组人IL-17A重组人GM-CSF重组大鼠CXCL9（MIG）重组小鼠IL-1α重组小鼠IL-18重组小鼠IL-1αNIR-FLIVO 690游离染料对照试验抗体夹心ELISA开发试剂盒块缓冲区优化包ELISA板密封盖Monster Block ELISA阻断缓冲液。
人白细胞介素-8（IL-8）试剂盒使用方法检测范围：96T40 ng/L -1200 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-8（IL-8）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-8（IL-8）水平。
用纯化的人白细胞介素-8（IL-8）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-8（IL-8），再与HRP标记的白细胞介素-8（IL-8）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-8（IL-8）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-8（IL-8）浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
人成纤维细胞生长因子8a在大肠杆菌中的表达研究作者：徐轶彦来源：《科技视界》 2015年第32期人成纤维细胞生长因子8a在大肠杆菌中的表达研究徐轶彦（福建卫生职业技术学院，福建福州 350025）[摘要]目的：研究人成纤维细胞生长因子8（FGF8）在大肠杆菌中的表达。
方法：利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人FGF8a亚型蛋白，利用亲和色谱和凝胶过滤技术对包涵体中的重组人FGF8a进行纯化，通过柱在位复性方式对重组人FGF8a进行复性。
结果：柱在位复性的方法能很好的对人FGF8a进行复性，纯度达到电泳纯。
纯化后的FGF8a蛋白能刺激NIH3T3细胞增殖，表明具有生理功能。
[关键词]人成纤维细胞生长因子8a；表达；纯化；复性成纤维生长因子（Fibroblast growth factors FGFs）家族是一群具多种生理功能的生长因子，通过细胞表面的酪氨酸激酶受体将胞外信号传到胞内，其功能涉及胚胎发育、血管生成和伤口愈合等，对组织和细胞的增殖和分化起重要作用[1-2]。
FGFs在哺乳动物中至少有22个成员，从FGF1~23，在人类中没有FGF15。
FGF8是其中的一个成员，最初从雄激素依赖的小鼠乳腺癌细胞系SC-3克隆出来[3]。
通过可变剪接，FGF8基因可转录加工成多种亚型。
在小鼠中可产生FGF8a~h8种亚型，在人类中产生四种亚型：FGF8a、FGF8b、FGF8e和FGF8f[3-5]。
本文利用大肠杆菌系统表达人FGF8a，并对表达的人FGF8a进行纯化、复性及体外活性检测。
本研究将为进一步了解FGF8a的功能奠定一定的基础。
1材料与方法1.1材料含FGF8a cDNA序列的质粒pBluescript-FGF8a为本实验室保存；大肠杆菌Top 10′被用于分子克隆；大肠杆菌BL21(DE3)pLysS用于蛋白表达；T4DNA连接酶和限制性内切酶均购于TaKaRa公司；Ni Sepharose 6 Fast Flow和Sephacryl S-200 HR购于美国通用公司；抗6×His一抗和碱性磷酸酶标记的二抗购于中杉金桥(北京)生物技术；其它试剂为国产分析纯。
人重组白细胞介素-8在大肠杆菌的表达、鉴定【摘要】目的利用PCR技术扩增hIL-8 cDNA，将其连接于原核表达载体pKpL-3a（含PL启动子）中,并在大肠杆菌中表达、鉴定。
方法PCR技术扩增hIL-8 cDNA获取目的基因，将该基因重组到大肠杆菌表达载体pKpL3a质粒中，重组DNA分子转化到Pop2136大肠杆菌中，利用其所产生的温度敏感性λ阻遏蛋白来调控外源基因表达，经ELISA反应检测其表达水平。
结果带hIL-8基因的重组pKpL3a质粒成功转化到Pop2136大肠杆菌中，经诱导，表达了IL-8并经ELISA反应检测了其表达水平。
结论：hIL-8成功在大肠杆菌中表达。
【关键词】hIL-8 PCR 重组基因表达正文趋化因子（Chemokine）是一组具有趋化作用的细胞因子，能吸引免疫细胞到免疫应答局部，参与免疫调节和免疫病理反应。
白细胞介素-8（Interleukin-8）属于趋化因子家族成员，其分子中含有Cys-X-Cys的三联氨基酸序列，因而属于CXC趋化因子亚家族（α家族）。
IL-8的重要生物学功能是对中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞具有区划作用，并可促进中性粒细胞的活化，在炎症反应中是一种重要的炎症因子。
另外，IL-8还具有促进造血细胞增殖及新生血管生成作用，在伤口愈合和肿瘤生长及转移的过程中发挥重要作用。
由于天然来源的IL-8含量极低，难以大批量制备，因而只能利用基因工程技术进行表达和生产。
其基本过程是：获取目的基因；表达载体的选择和构建；目的基因与表达载体的拼接；重组DNA分子转化到大肠杆菌；使其复制转录并合成重组的免疫分子。
利用重组技术, 可使大肠杆菌成为生产IL-8的生物工厂。
这种生物工厂一旦建造成功, 只要供给大肠杆菌适当的生长条件, 就可提供取之不尽的IL-8。
1 材料与方法1.1 主要材料1.1.1 菌株与载体Pop2136大肠杆菌和含pKpL-3a质粒的大肠杆菌由本实验室提供。
1.1.2 工具酶与试剂TaqDNA聚合酶及其buffer购于北联生物医学工程公司。
dNTPmix购于Takara 公司。
Klenow酶购于北联生物医学工程公司。
内切酶StyⅠ、XbaⅠ购于Takara 公司。
T4 DNA连接酶及其buffer购于Takara公司。
1.1.3 PCR引物的设计、合成上游5ˊ引物：agt gct aaa gaa ctt aga tgt；下游3ˊ引物：ccg tct aga tta tga att ata agc cct ct(内含XbaⅠ酶切位点和TAA 终止密码)由Takara公司合成。
1.1.4 主要仪器PCR仪，微量加样器（20μl、200μl、1000μl），高速台式离心机，DYY-10型电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统，水浴摇床，孵箱，酶标仪，一次性酶标板等。
1.2 试验方法1.2.1 PCR技术扩增hIL-8cDNA在Eppendorf管中依次加入下列成份构建总体积为50μl的反应体系：ddH2O 37μl、10×buffer 5μl、dNTPmix 5μl、上游引物1μl、下游引物1μl、cDNA模板1μl、Taq酶1μl。
调节PCR仪，设置95℃预变5分钟。
94℃30秒，60℃30秒，72℃1分钟，反应30个循环。
最后72℃再延伸5分钟。
在设定好的PCR仪上进行反应。
反应结束后取出10μl进行琼脂糖凝胶电泳。
向管中余下的40μl反应体系中加入Klenow酶1μl，室温30分钟，以修平扩增片段的3ˊ末端。
之后转至1.5ml离心管中，加入50μl酚-氯仿-异戊醇并混匀，10000rpm，30秒离心。
吸取上层清液转至另一已加入5μl 3M NaAc的1.5ml离心管中，加入150μl无水乙醇，-20℃放置1小时。
10000rpm，10分钟离心，弃上清，加入0.5ml 70%乙醇，10000rpm，5分钟离心，弃上清，空气中干燥，溶于20μl TE。
1.2.2 DNA琼脂糖凝胶电泳配置0.8%琼脂糖凝胶板。
充分凝固后从制胶槽中卸下凝胶板，放入电泳槽，加入TAE（×1），使其液面略高于琼脂糖板，拔出样品梳。
DNA样品10μl加5μlGEBS 样本液，在蜡面纸上混匀，全部加样于琼脂糖的样品孔中。
稳压电泳80v约2小时，是溴酚蓝指示剂泳动到适当位置，1-5v/cm。
取出凝胶板置溴化乙锭中染色20分钟。
在凝胶成像仪观察结果。
1.2.3 质粒提取从转化平皿上接种一单菌落到LA培液体养基中，37℃震荡培养，待细菌浓度增至OD600=1.5时，收获细菌。
取菌液1ml转至Eppendorf管中，8000rpm，2分钟离心，弃上清。
加入200μl缓冲液A，充分混匀。
加200μl碱溶液裂解细菌，反复倒转管5次至溶液清亮，开盖后能拉出丝状粘稠液体。
加200μl乙酸缓冲液，反复倒转管5次混匀，冰浴10分钟（宁短勿长）。
10000rpm 5分钟离心，上清转至另一Eppendorf管中，加2.5倍体积的无水乙醇，混匀，-20℃放置1小时。
10000rpm 5分钟离心，弃上清，加入70%乙醇0.5ml。
10000rpm 5分钟离心，弃上清，干燥。
加入50μl TE使质粒溶解，酶切备用。
1.2.4 限制性内切酶消化取两个Eppendorf管分别标记A、B，依次加入下列物质构建两个反应体系。
A管：ddH2O 16μl 、10×H buffer 2μl、质粒DNA 1μl、StyⅠ1μl。
B管：ddH2O 14μl 、10×M buffer 2μl、0.1%BSA 2μl、PCR产物1μl、XbaⅠ1μl。
37℃水浴45分钟。
A管中加入1μl Klenow酶、2μl dNTPmix，室温30分钟，加50μl酚-氯仿-异戊醇，混匀，10000rpm 5分钟离心，取上层液转至另一Eppendorf管中，加100μl 无水乙醇、4μl乙酸钠，混匀，-20℃沉底1小时。
10000rpm 10分钟离心，弃上清，100μl 70%乙醇洗涤一次，干燥。
加入2μl 10×M buffer、2μl 0.1%BSA、1μlXbaⅠ，37℃水浴45分钟。
加50μl酚-氯仿-异戊醇，混匀，10000rpm 5分钟离心，取上层液转至另一Eppendorf管中，加100μl无水乙醇、4μl乙酸钠，混匀，-20℃沉底1小时。
10000rpm 10分钟离心，弃上清，100μl 70%乙醇洗涤一次，干燥。
加20μl TE进一步用于连接反应。
B管中加50μl酚-氯仿-异戊醇，混匀，10000rpm 5分钟离心，取上层液转至另一Eppendorf管中，加100μl无水乙醇、4μl乙酸钠，混匀，-20℃沉底1小时。
10000rpm 10分钟离心，弃上清，100μl 70%乙醇洗涤一次，干燥。
加20μl TE进一步用于连接反应。
1.2.5 DNA连接在Eppendorf管中加入下列物质构建反应体系进行连接反应：H2O 9.5μl、10×T4 DNA连接酶buffer 2.5μl、pKpL3α质粒DNA 7μl、IL-8 PCR产物5μl、T4 DNA 连接酶1μl。
置12-16℃水浴反应过夜。
65℃水浴15分钟，灭活T4 DNA连接酶，用于转化。
1.2.6 转化将无质粒大肠杆菌pop2136接种于1ml LB培养基37℃培养3-5小时。
待OD600=0.4时转移至Eppendorf管中，8000rpm 2分钟离心，弃上清。
加200μl 100mM Cacl2混匀，冰浴30分钟。
加10μl连接好的质粒DNA，混匀，冰浴30分钟，37℃水浴2分钟，冰浴2分钟。
加入1ml LB培养基，37℃培养0.5小时。
取出50μl涂于LA培养皿上（含氨苄青霉素），37℃倒置培养过夜，检查转化菌是否生成(只有转化的细菌才能在平皿上生长)。
1.2.7 细胞因子的测定—ELISA双抗体夹心法包被：将稀释好的包被抗体加入ELISA板，100μl/孔，放置湿盒中，4℃24小时。
洗涤：加入洗涤液洗涤1分钟/次，共3次。
加样：加入待测样品、阴性对照及倍比稀释的标准品，100μl/孔，放置湿盒中，37℃ 30分钟。
洗涤：同前。
加酶标抗体：100μl/孔，100μl/孔，放置湿盒中，37℃ 30分钟。
洗涤：同前。
加显色剂：A液（TMB，四甲基联苯胺）1滴，B液（H2O2）1滴，室温显色5-10分钟。
终止反应：加中止液（2mol/L H2SO4）。
测OD值：酶标仪测450nm处OD 值，以OD值为横坐标，标准品浓度为纵坐标绘制标准曲线。
2 结果2.1 DNA琼脂糖凝胶电泳见图1。
检查扩增结果，9组都见一致的扩增区带，PCR产物与设计的228bp相符，并无非特异性扩增，说明目的基因扩增成功。
1 2 3 4 5 6 7 8 9图1 DNA琼脂糖凝胶电泳分析注：PCR Products:228bp2.2 ELISA双抗体夹心法检测IL-8含量所测OD值和标准曲线见表1和图2。
表1 450nm处OD值4组Measurement count:1 Filter: 4501 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 AB 0.81 0.485 0.914 1.654 0.445 0.614 1.7 0.241 1.503 0.155C 0.735 0.633 0.939 1.702 0.449 0.364 1.415 0.383 1.412 0.754D 0.836 0.618 0.921 1.237 0.366 0.384 1.339 0.352 1.481 0.261E 0.861 0.747 1.169 1.84 0.358 0.575 0.343 0.542 0.226 0.11F 0.321 1.198 1.51 2.136 0.704 0.882 0.704 1.108 0.55 0.192G 0.377 1.565 2.198 1.876 0.448 0.654 0.612 0.949 0.915 0.408H图2 ELISA双抗体夹心法标准品OD值标准曲线根据标准品的浓度和试验所测OD值，计算出待测样本的hlL-18浓度为10.4ng/ml。
3 讨论本实验首先通过PCR技术扩增hlL-18cDNA，反应结束后取出少量做琼脂糖凝胶电泳，根据图1的结果可以看出，引物的设计和PCR反应条件的设计是很成功的。
而在PCR反应中，引物的设计尤为重要。
引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补；其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构；再次引物不能在模板的非目的位点引发ZML聚合反应（即错配）。
具体实现这3条基本原则需要考虑到诸多因素。
