多聚赖氨酸的配置、保存、使用
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多聚赖氨酸包被原理多聚赖氨酸(PLL)是一种具有生物相容性和生物降解性的高分子材料,因其在药物传递、组织工程和生物传感等领域的广泛应用而备受关注。
而PLL包被是一种常见的将生物活性物质包裹在PLL材料中的方法,其原理主要包括电静电相互作用、氢键作用和亲疏水相互作用。
下面将详细介绍多聚赖氨酸包被的原理及其应用。
首先,多聚赖氨酸包被的原理之一是电静电相互作用。
PLL是一种阳离子高分子,具有大量的氨基和羧基,可以与带有负电荷的生物活性物质发生静电相互作用。
当生物活性物质中存在负电荷基团时,它们会与PLL中的氨基或羧基发生静电作用,从而实现生物活性物质的包被。
这种电静电相互作用是PLL包被的重要原理之一,也是其在药物传递领域中被广泛应用的原因之一。
其次,多聚赖氨酸包被的原理还包括氢键作用。
PLL分子中的氨基和羧基不仅可以与带有负电荷的生物活性物质发生电静电相互作用,还可以通过氢键作用与生物活性物质中的氢键供体或受体结构发生相互作用。
这种氢键作用可以增强PLL与生物活性物质之间的相互作用力,从而提高包被效果。
因此,氢键作用也是PLL包被的重要原理之一。
另外,多聚赖氨酸包被的原理还涉及亲疏水相互作用。
PLL分子既含有极性的氨基和羧基,又含有非极性的碳链结构,因此具有一定的亲疏水性。
当PLL与生物活性物质发生包被时,PLL分子中的亲疏水基团可以与生物活性物质中的亲疏水基团发生相互作用,从而增强包被效果。
亲疏水相互作用在PLL包被中起着重要作用,也是其在生物传感和组织工程等领域中得到广泛应用的原因之一。
综上所述,多聚赖氨酸包被的原理主要包括电静电相互作用、氢键作用和亲疏水相互作用。
这些相互作用力共同作用,使得PLL 能够有效地包裹生物活性物质,实现其在药物传递、组织工程和生物传感等领域的应用。
因此,深入理解PLL包被的原理对于其在生物医学领域的进一步应用具有重要意义。
防脱片处理步骤《一》载玻片和盖玻片的处理将载玻片或培养用的小盖片浸泡在重铬酸钾浓硫酸清洁液中24小时,然后流水充分冲洗,再用蒸馏水冲洗3遍以上,而后置95%乙醇中12小时。
取出擦干或烤干,贮放于玻片盒内备用。
盖玻片很薄,以上处理程序必须缩短时间,清洁液浸泡只需2小时,流水冲洗注意勿损伤玻片。
《二》黏附剂的使用1.多聚左旋赖氨酸(poly-1—lysine) 首先配制0.1%(ω/υ)多聚左旋赖氨酸浓缩液,室温下(18~26℃)可保存1年。
使用时.将试剂10倍稀释成工作液,浓度为0.01%(ω/υ),2—8℃冰箱保存,有效期3个月。
使用方法是将充分洗净和预先干燥的玻片浸泡于稀释后的多聚左旋赖氨酸溶液数十秒或提拉十次,沥干.于室温下晾干12—24小时或在45℃以下烤箱内烘干。
处理后的玻片避光干燥可长期保存。
2.3—氨丙基—乙氧基甲硅烷(3—aminopropyl triet hoxy silane,APES) APES必须现用现配。
用此方法黏合的玻片应垂直烤片而不能水平烤片,否则,组织片中易出现气泡。
APES的使用方法:用丙酮50倍稀释(APESl份、丙酮49份混合),将洗净的玻片放人稀释好的APES中,停留20~30秒,取出稍停,再人纯丙酮或蒸馏水中涮去未结合的APES。
置通风橱中晾干即可。
注意用APE S防脱片处理的载玻片捞片时组织应一步到位.并尽量减少气泡存在,以免影响染色结果。
注意不要将A PES与其他防脱片剂混合使用。
多聚左旋赖氨酸为目前免疫组织化学染色中最常用的防脱片剂,适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。
如效果不佳,可用双重处理(APES和p oly-l-lysine)的切片。
在以上两种方法均无效的情况下,可用如下方法:切片在脱蜡前放在APE S l:50丙酮溶液中浸泡3分钟,晾干后即可进行下一步骤。
配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸,如是25mg,就需要250ml三蒸水,用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中,然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中,(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml,过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度,近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满,若20ml的瓶子,只装15ml可,若太满,放于-2度有可能会将瓶子弄碎,因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯,小瓶、移液管都要灭菌处理的,泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器,一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室,包括超净台,紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水,经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子,用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中,大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子,用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管,加入三蒸水,冲洗三次,即将每孔内加入三蒸水,没过底,多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管,要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化,需要放小的玻片到孔内,就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说,多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时,应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ;2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低,我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20-30ug/ml;3.包被时间一般为6-7h,或者过夜也可;4.使用时应该先用灭菌水洗三次+PBS(起平衡盐作用)洗一次,洗液的量应该大于包被液的量;5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间,太长了会有影响吗?”,我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了,但是对细胞生长并无大碍,这是我曾经有过的经历,所以我会负责地告诉你;6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久?”,最好置于-20度保存,放置数月乃至半年都可以。
gibco多聚-d-赖氨酸用法
Gibco多聚D赖氨酸是一种生物化学试剂,用于生命科学研究中的细胞培养和实验。
具体用法如下:1. 培养基中的添加物:可以将Gibco多聚D赖氨酸添加到细胞培养基中,作为细胞的营养物来源之一。
通常的用量是每升培养基添加10-50 mg的多聚D赖氨酸。
2. 包被培养皿表面:可以在培养皿表面预先涂覆Gibco多聚D赖氨酸,从而提供细胞附着的基质。
在培养皿中加入适量的多聚D赖氨酸水溶液,让其在表面均匀涂敷,并在室温下干燥。
3. 组织工程和支架材料:Gibco多聚D赖氨酸也可以用于组织工程和支架材料的制备。
可以将多聚D赖氨酸加入到生物降解材料中,用于细胞生长和组织修复。
需要注意的是,具体的用法可能因研究目的、细胞类型和实验条件而有所不同。
在使用Gibco 多聚D赖氨酸前,最好参考相关的文献或咨询厂家提供的技术手册,以获取更详细的用法指导。
聚赖氨酸是一种天然的生物代谢产品。
具有很好的杀菌能力和热稳定性及优良的防腐性能和巨大商业潜力的生物防腐剂。
现广泛用于方便米饭、湿熟面条、熟菜、海产品、酱类、酱油、鱼片和饼干的保鲜防腐中。
那么聚赖氨酸具体有什么作用及用途呢?
一、主要用途
一般都是以50%的有效成分配合成商品出售。
如:酒精制剂:以含质量分数50%聚赖氨酸的糊精粉末为基础原料,添加体积分数30%~70%的酒精的制剂,主要用于各种蛋制品。
醋酸制剂:添加体积分数O.5%~5.0%的醋酸,主要用于米饭,色拉等食品;甘油制剂:添加量为体积分数O.01%~5%,主要用于含有动物性蛋白乳蛋白较多的食品;甘氨酸制剂:添加量为质量分数0.01%一10%,和聚赖氨酸复合使用,协同抑菌效果更佳。
二、用途
1、保鲜防腐方面
(1)ε-聚赖氨酸和甘氨酸混合能延长牛奶保质期。
(2)对方便米饭和快餐食品等提高保存期。
(3)聚赖氨酸与大蒜为主要原料混合制成食品防腐剂。
这种食品防腐剂使用时加入食品中或喷淋到食品表面,均具有显著的抗菌防腐作用,能杀死或抑制食品内部或表面的致病微生物。
2、医学方面
聚赖氨酸富含阳离子,与带有阴离子的物质有强的静电作用力并且对生物膜有良好的穿透力,基于这一特性多聚赖氨酸可用于某些药物的载体,因此在医疗和制药方面得到广泛应用。
另外由于聚赖氨酸是作为高吸水性聚合物,所以也可用于妇女卫生巾、婴儿尿片和其他各种工业产品中。
以上就是有关聚赖氨酸作用及用途的一些相关介绍,希望对您进一步的认识了解有所帮助。
聚赖氨酸的添加标准
聚赖氨酸是一种优质的胶原蛋白原料,可以用于食品、保健品等领域。
为了保证产品质量和安全性,需要制定聚赖氨酸的添加标准。
1. 聚赖氨酸添加量应符合国家相关规定和标准,严禁超标添加。
2. 聚赖氨酸应选用优质原料,质量稳定,无污染。
3. 聚赖氨酸的添加应根据产品特性和用途确定,添加量不宜过
多或过少。
4. 聚赖氨酸的添加应在生产过程中控制好温度、PH值和时间等因素,确保添加效果。
5. 聚赖氨酸添加后应进行产品检测,确保产品符合标准。
6. 聚赖氨酸添加应在产品标签上注明添加成分和添加量等信息,方便消费者选购。
7. 聚赖氨酸添加应遵循“安全、科学、合理”的原则,确保产
品质量和安全性。
以上就是聚赖氨酸的添加标准,希望对相关行业的从业人员有所帮助。
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聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。
经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。
配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。
经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。
在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。
为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。
1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。
(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。
(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。
(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。
2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。
(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。
对多张载玻片逐一进行涂片。
(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。
(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。
(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。
(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。
改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。
多聚赖氨酸结构式多聚赖氨酸,又称聚赖胺,是一种由天然氨基酸赖氨酸组成的高分子化合物。
它的结构式可以表示为(-NH-(CH2)4-NH-)n,其中n表示聚合度,即赖氨酸单元的重复次数。
多聚赖氨酸具有许多独特的化学和物理特性,使其在生物医学领域得到广泛的关注和应用。
多聚赖氨酸的结构中含有大量的氨基和羧基,这使得它具有良好的溶解性和生物相容性。
由于多聚赖氨酸分子链上带有正电荷的氨基,它能够与带有负电荷的生物大分子如DNA、蛋白质等发生静电相互作用,从而形成稳定的复合物。
这使得多聚赖氨酸成为一种重要的基因传递载体和药物传递系统。
多聚赖氨酸还具有良好的生物可降解性和低毒性。
它在体内可以被酶类分解为天然氨基酸,无毒性产物可以通过正常的代谢途径排出体外。
这使得多聚赖氨酸成为一种理想的生物材料,可用于制备生物可降解的缝合线、药物缓释系统等。
多聚赖氨酸还具有较高的亲水性和水吸附性。
它可以吸附大量的水分子,形成水凝胶。
这种水凝胶具有良好的生物相容性和生物活性,可以用于制备组织工程支架、伤口敷料等。
多聚赖氨酸还具有独特的光学性质。
它在紫外光下具有荧光特性,能够发射出特定波长的荧光信号。
这使得多聚赖氨酸成为一种重要的荧光探针和生物成像材料。
除了在生物医学领域,多聚赖氨酸还可以应用于环境保护、食品工业等领域。
例如,多聚赖氨酸可以用作废水处理剂,能够吸附和去除废水中的重金属离子。
此外,多聚赖氨酸还可以用作食品添加剂,增加食品的营养价值和口感。
多聚赖氨酸是一种具有多种特性和应用潜力的高分子化合物。
它的独特结构和性质使其在生物医学、环境保护、食品工业等领域都有广泛的应用前景。
随着对多聚赖氨酸的深入研究,相信它将为人类带来更多的福祉和发展机会。
天然防腐剂ε-聚赖氨酸对不同微生物的抑菌效果与使用方法常见的天然防腐剂有大豆碱性多肽、壳聚糖、纳他霉素、ε-聚赖氨酸等。
ε-聚赖氨酸作为一种新型的天然抑菌剂已经被广泛应用于食品保藏。
ε-聚赖氨酸又称25~30个赖氨酸残基的阳离子均聚物,分子量约为5000 kDa,由链霉菌好氧发酵产生。
ε-聚赖氨酸为淡黄色粉末,是一种食品添加剂,具有水溶性、食用性、对人体无毒、高温稳定、生物降解性好等特点,可以承受一般食品加工中的热处理,被FDA批准为公认的安全(GRAS)剂。
早在2003年,ε-聚赖氨酸就被FDA批准应用于食品保藏,并逐渐在美国、韩国和日本得到广泛的应用。
我国也于2014年将ε-聚赖氨酸纳入食品添加剂使用范畴,具有广泛的应用前景。
1、ε-聚赖氨酸对不同微生物的抑菌机制和浓度比较白森萌[1]通过对各菌种抑菌情况分析,ε-聚赖氨酸的抑菌效果与自身浓度和目标菌种的结构有关。
在对酿酒酵母作用时,500μg/mL的ε-聚赖氨酸可使酵母细胞死亡;而在对大肠杆菌作用时,150μg/mL的ε-聚赖氨酸即可使大肠杆菌内外膜发生破损,细胞完整性被破坏。
在对革兰氏阳性菌如枯草芽孢杆菌和李斯特菌作用时其效果并不明显。
单独的ε-聚赖氨酸对枯草芽孢杆菌作用仅会使细胞轻微受损,只有在ε-聚赖氨酸与乳酸链球菌素联合使用时才能破坏细胞结构。
相关研究推测,ε-聚赖氨酸对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抑菌作用有明显的差距,原因是阴性菌的膜表面主要是脂多糖和磷脂,无大量的肽聚糖,所以其机械强度较小;并且ε-聚赖氨酸作为聚阳离子抑菌肽可以与阴性菌表面的二价钙镁离子竞争阴离子活性位点,从而破坏细胞膜结构,更容易进入到细胞内部。
革兰氏阳性菌膜表面有较厚的肽聚糖层,细胞的机械强度较高,并且没有较多的阴离子结合位点,使得ε-聚赖氨酸对阳性菌的抑菌效果不够明显。
虽然ε-聚赖氨酸对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑菌效果有明显的区别,但近年来的研究依然致力于寻找可以使ε-聚赖氨酸对阳性菌及阴性菌均产生抑制作用的方法。
我们知道聚赖氨酸盐酸盐是一种食品添加剂,它也需要在安全范围内应用,一般会有相应的使用说明,我们在应用它的时候可以参考以下这些方法。
由于聚赖氨酸盐酸盐主要是用来防腐保鲜的,按先来了解一下使用的范围:(1)和甘氨酸混合能延长牛奶保质期。
(2)对方便米饭和快餐食品专等提高保存期。
(3)与大蒜为主要原料混合制成食品防腐剂。
这种食品防腐剂使用时加入食品中或喷淋到食品表面,均具有显著的抗菌防腐作用,能杀死或抑制食属品内部或表面的致病微生物。
那么在使用聚赖氨酸盐酸盐的时候主要的方法有:
一般都是以50%的有效成分配合成商品出售.如:酒精制剂:以含质量分数50%聚赖氨酸的糊精粉末为基础原料,添加体积分数30%~70%的酒精的制剂,主要用于各种蛋制品。
醋酸制剂:添加体积分数0.5%~5.0%的醋酸,主要用于米饭,色拉等食品;甘油制剂:添加量为体积分数0.01%~5%,主要用于含有动物性蛋白乳蛋白
较多的食品;
甘氨酸制剂:添加量为质量分数0.01%一10%,和聚赖氨酸复合使用,协同抑菌效果更佳。
在一些地方已经将聚赖氨酸盐酸盐批准作为防腐剂添加于食品中。
同时还发现它和其他天然抑菌剂配合使用,有明显的协同增效作用,可以提高其抑菌能力。