多聚赖氨酸包被方法定稿版

配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。

最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。

保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。

注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。

(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。

我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。

一个能最多有效过滤200ml。

铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。

消毒后30分钟进入实验室。

事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。

具体细节就不多说了。

首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。

将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。

取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。

换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。

再将水吸出来。

反复三次。

注意换吸管，要无菌操作的。

最后将铺好的板子放于培养箱待用。

如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。

我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。

我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。

1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。

多聚赖氨酸包被方法物理包被利用多聚赖氨酸的聚电解质特性，通过静电作用将其包裹在目标物表面。

这种包被方法具有简单、无毒、环境友好等优势。

常用的物理包被方法包括静电吸附、沉淀共沉淀和纳米胶团包被。

静电吸附法是一种简单有效的物理包被方法，多聚赖氨酸与目标物质通过静电相互作用结合。

多聚赖氨酸具有正电荷，可以与带负电位的目标物质静电吸附。

例如，将多聚赖氨酸与负电荷的纳米颗粒混合搅拌，多聚赖氨酸通过静电吸附形成包被层，使纳米颗粒表面带正电荷。

沉淀共沉淀法是一种多聚赖氨酸包被的物理方法，基于多聚赖氨酸的凝胶形成能力。

多聚赖氨酸在适当条件下可以与其他蛋白质形成复合凝胶，从而包被目标物质。

该方法主要通过改变多聚赖氨酸的溶液条件来实现，如调节pH值、离子强度和温度等。

纳米胶团包被法是利用多聚赖氨酸形成纳米胶团，从而实现目标物质的包被。

当多聚赖氨酸在适当条件下形成胶团时，目标物质会被包裹在胶团内部。

这种包被方法可以使目标物质在多聚赖氨酸胶团内部得到保护，并增强其稳定性。

化学包被是一种通过化学反应将多聚赖氨酸与目标物质共价结合的方法。

这种包被方法具有较高的稳定性和持久性。

常用的化学包被方法包括胺基化和交联反应。

胺基化是一种将多聚赖氨酸表面的羧基转化为胺基的化学反应。

通过胺基化反应，多聚赖氨酸表面的胺基可以与目标物质表面的羧基或酸酐结合。

这种包被方法可以增加多聚赖氨酸与目标物质的接触面积，从而提高包被效果。

交联反应是一种将多聚赖氨酸与目标物质共价交联的化学反应。

通过交联反应，可以将多聚赖氨酸与目标物质牢固结合，从而实现包被效果。

常用的交联反应包括胺基化交联反应、醛胺交联反应等。

总的来说，多聚赖氨酸包被方法在药物和食品工业中具有广泛的应用前景。

无论是物理包被还是化学包被，都可以通过适当的方法来实现多聚赖氨酸与目标物质的结合。

这种包被方法不仅可以提高目标物质的稳定性和生物活性，还可以改善其溶解性和缓释性，从而提高其应用性能。

多聚赖氨酸包被方法多聚赖氨酸（polylysine）是一种具有多种应用潜力的天然生物高分子材料。

其在医学、食品及其他领域中有着广泛的应用前景。

然而，多聚赖氨酸的应用受到其在水溶液中聚集和沉淀的限制。

为了克服这一问题，研究人员开发了多种多聚赖氨酸包被方法，用以稳定多聚赖氨酸的分散态，提高其应用效果。

一、电化学沉积法电化学沉积法是一种常用的多聚赖氨酸包被方法，在这种方法中，通过在多聚赖氨酸溶液中施加电压，利用电化学反应将多聚赖氨酸沉积到基体表面。

这种方法具有简单、可控性高的优点，可以调控包被层的厚度和组成，从而实现不同应用需求。

二、化学交联法化学交联法是另一种常见的多聚赖氨酸包被方法。

在这种方法中，利用化学反应将多聚赖氨酸交联到基体表面，形成稳定的包被层。

常用的交联剂包括戊二醛、硫酸氯化钠等。

化学交联法可以使多聚赖氨酸形成致密的包被层，提高其稳定性和抗溶解性，适用于一些需要长时间稳定性的应用。

三、共沉淀法共沉淀法是一种将多聚赖氨酸与其他物质一起沉淀到基体表面的方法。

通过调节多聚赖氨酸和其他物质的配比和沉淀条件，可以实现多聚赖氨酸的包被。

这种方法适用于多聚赖氨酸与其他物质共同发挥应用功能的场景，如药物缓释系统、生物传感器等。

四、物理吸附法物理吸附法是一种简单而有效的多聚赖氨酸包被方法。

将多聚赖氨酸溶液滴在基体表面，使其通过物理相互作用（如静电相互作用）与基体表面相互吸附，形成包被层。

这种方法不需要特殊实验条件，成本低廉，适用于一些对包被层要求不高的应用。

综上所述，多聚赖氨酸包被方法的选择应根据实际应用需求和条件来确定。

不同的包被方法具有各自的特点和适用范围，在多聚赖氨酸的应用中起着重要的作用。

未来随着科技的不断进步和对多聚赖氨酸功能的深入研究，相信会有更多创新的包被方法出现，进一步拓宽多聚赖氨酸的应用领域。

多聚赖氨酸包被原理多聚赖氨酸（poly-L-lysine，PLL）是一种天然存在的多聚肽，具有多种生物学功能，如抗菌、抗病毒、抗氧化等。

由于其多功能性和生物相容性，多聚赖氨酸在生物医学领域得到了广泛的应用，特别是在药物传递、组织工程、生物传感等方面具有潜在的应用前景。

而多聚赖氨酸包被作为一种常见的药物传递系统，其原理和应用也备受关注。

多聚赖氨酸包被原理主要是指将药物通过特定的方法包裹在多聚赖氨酸分子链上，以实现药物的稳定性、靶向性和控释性。

多聚赖氨酸包被的原理包括以下几个方面：首先，多聚赖氨酸具有多种功能基团，如羧基、氨基和羧甲酰基等，这些功能基团可以与药物分子进行化学键合或物理吸附，从而实现药物的包裹和稳定。

其次，多聚赖氨酸分子链具有一定的空间结构和电荷性质，可以通过静电相互作用、氢键作用等方式与药物分子相互作用，形成包被结构。

此外，多聚赖氨酸分子链的分子量和链长度也会影响其包被药物的能力和方式。

最后，多聚赖氨酸包被的原理还包括药物的释放机制，即多聚赖氨酸与药物之间的相互作用在体内环境下会发生变化，从而导致药物的释放和作用。

多聚赖氨酸包被原理的应用涉及到药物传递、肿瘤治疗、基因治疗等多个领域。

在药物传递方面，多聚赖氨酸包被系统可以提高药物的稳定性和溶解度，延长药物的半衰期，减少药物的毒副作用，提高药物的生物利用度。

在肿瘤治疗方面，多聚赖氨酸包被系统可以实现肿瘤靶向输送、缓释治疗和多药联合治疗，从而提高治疗效果，减少药物的系统毒性。

在基因治疗方面，多聚赖氨酸包被系统可以实现基因的高效传递和稳定表达，从而为基因治疗提供有效的载体和途径。

总之，多聚赖氨酸包被原理是一种重要的药物传递系统，其原理和应用在生物医学领域具有重要的意义。

随着对多聚赖氨酸包被原理的深入研究和应用，相信其在药物传递、肿瘤治疗、基因治疗等领域将发挥越来越重要的作用，为人类健康事业做出更大的贡献。

培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。

不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。

(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。

最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。

保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。

注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。

(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。

我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。

一个能最多有效过滤200ml。

铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。

消毒后30分钟进入实验室。

事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。

具体细节就不多说了。

首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。

将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。

取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。

换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。

再将水吸出来。

反复三次。

注意换吸管，要无菌操作的。

最后将铺好的板子放于培养箱待用。

如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。

问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。

以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。

北京索莱宝科技有限公司
10×多聚赖氨酸使用说明书
货号：P2100
规格：10ml
保存：-20℃保存，有效期2年。

产品简介：
多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片粘合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。

适用于组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等实验中玻片的防脱片处理，以防实验操作过程中组织掉片。

使用说明：
1．用灭菌的双蒸水按照9:1的比例稀释该多聚赖氨酸溶液。

如果用于细胞培养包被培养皿时需要过滤除菌。

2.使用之前将稀释后的多聚赖氨酸溶液放置于室温下，使其温度达到室温18-26℃。

3.将玻片浸在稀释过的多聚赖氨酸溶液中5分钟，增加时间不会提高包被效果。

4.包被后的玻片置于60℃烘箱1小时干燥，或室温18-26℃过夜干燥待用。

5.处理过的玻片可常温存放一年。

注意事项：
1.每100ml已稀释的多聚赖氨酸溶液可处理90张玻片，超过90张玻片会影响其黏合力。

2.包被之前玻片必须保持清洁，必要时用含1%HCl的70%乙醇溶液来清洗。

3.稀释过的多聚赖氨酸溶液可放在2-8℃，至少3个月内是稳定的。

4.用过的稀释液再次使用时要过滤，若出现浑浊或染菌应丢弃。

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包被细胞培养板的相关问题培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。

不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。

(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。

最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。

保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。

注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。

(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。

我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。

一个能最多有效过滤200ml。

铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。

消毒后30分钟进入实验室。

事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。

具体细节就不多说了。

首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。

将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。

取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。

换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。

再将水吸出来。

反复三次。

注意换吸管，要无菌操作的。

最后将铺好的板子放于培养箱待用。

如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。

问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。

聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。

这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。

这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。

经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。

配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。

经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。

在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。

为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。

1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。

(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。

(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。

(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。

2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。

(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。

对多张载玻片逐一进行涂片。

(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。

(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。

(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。

(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。

改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。

骨骼肌的原代培养一.试剂1.包被用多聚赖氨酸poly-lysine的配制与包被1）准备0.94%硼酸溶液称取0.94硼酸粉末溶于80ml水中，用NaOH将pH值调至8.4，再定容。

2）按每4.9mg多聚赖氨酸粉末溶解于98ml0.94%硼酸溶液配制100ml.3）0.22µM过滤分装，-20°C储存，避免反复冻融。

4）包被：按10cm皿用4ml包被液进行包被，4°C过夜或37°C 2 小时后，吸干，回收包被液，包被过的皿置4°C保存可达一个月，临用前用PBS或灭菌的去离子水洗3遍再使用，整个包被过程均为无菌操作。

多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴离子相互作用会产生较强的黏合力。

也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。

多聚赖氨酸包被培养板使用前是用灭菌的去离子水稀释，最好不要用双蒸水或别的，因为多聚赖氨酸包被的原理是通过改变器皿表面的电荷而促进细胞的黏附。

2. 0.1% I型胶原酶（1mg/ml）100mg I型胶原酶溶于100ml D-hank’s液中，过滤后4°C保存。

3. D-hank’s液（可以直接购买使用）KCl 0.40g，KH2PO4 0.06g，NaCl 8.00g, NaHCO30.35g, NaH2PO4·7H2O 0.09g，酚红0.01g。

以上均为分析纯，加三蒸水定容至1L后高压灭菌，4℃分装备用;4. 血清的灭活:常用的血清要先在56℃水浴中灭活30min方可使用。

灭活后-20℃保存备用;5. 细胞生长液的配制(100mL):即含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液。

取20ml灭活的血清，再加青、链霉素各100IU，然后用DMEM/F12培养基补充到100 mL，4℃保存备用。

6. 0.1%胶原酶II(100 mL)的制备:称取胶原酶II 100mg用100mL DMEM/F12液充分溶解，0.22µM过滤后分装备用，-20℃保存;7. 75%乙醇8. Mini-Q(超纯水)--灭菌无离子水二.实验器械1、培养皿2、培养瓶3、直剪和眼科剪4、眼科镊和止血钳5、烧杯6、15ml离心管三、正常小鼠原代骨骼肌细胞培养实验流程取肌肉于平皿，Hank’s洗3次↓剔除脂肪、结缔组织↓肌肉标本剪约0.1cm3小块↓移至离心管，Hank’s洗3次↓静置1min，弃去上层液及漂浮组织↓0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次↓生长培养基终止消化，反复吹打，依次100，200，400目过筛↓离心，1000rmp,10min，弃去上清↓重悬，计数细胞，接种密度以5 × 105个/ml↓悬液加入未经PPL包被培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度，1h↓转移包被瓶中，生长培养基培养，培养37℃，5%CO2↓4d换液，以后每天换四、实验操作1、新生小鼠拉颈椎处死，乙醇消毒腿部，在超净工作台内，取肌肉于平皿，Hank’s 洗3次，剔除脂肪、结缔组织，将肌肉标本剪约0.1cm3小块；2、将剪碎的肌肉移至离心管，Hank’s洗3次，静置1min，弃去上层液及漂浮组织；3、向上述离心管中加入0.25%胰酶，37度水浴消化20min，每5min摇动或吹打1次离心管，然后加入生长培养基终止消化；4、反复吹打后，依次100，200，400目过筛，滤液收集后，1000r/min离心10min；5、弃去清夜，用生长培养基重悬细胞，悬液加入未经PPL包被的培养瓶中，差速贴壁去除成纤维细胞，37度培养1h后，转移包被瓶中，生长培养基培养，4d 换液，以后每天换液1次。

Prepare polylysine-coated coverslidsMaterials:Poly-l-lysine hydrobromide(P-1524), 100mg dissolved in 10ml h2o, •Incubate cover glasses in 100% ethanol for overnight.•Wash cover glasses for 30 min in running tap water.•Rinse with dH20.•Incubate cover gl asses in 40 µg/ml poly-L-lysine (MW ~70-90kD，made by 0.1M PB,Ph7.2) for 1 hour at room temperature.•Wash cover glasses for 1 hour in running tap water.•Rinse cover glasses 3 times 5 min each in dH2O.•Dry cover glasses on filter paper in a dust-free area.•Sterilize cover glasses inside the laminar flow chamber under UV light for at least 4 hours.处理好玻片之后，将玻片放入培养皿中，接种细胞，密度为10000个/ml，培养三天。

rocedure:1.After treatment, cells were fixed for 10min in 4% Para formaldehyde；2.After fixation, cells were washed three times in TBST (TBS plus 0.05%Tween-20)(10min/each);3.then blocked in 5% nonfat dried milk (NFDM in TBST) for 60 min;4.To detect the interest proteins, the cells were incubated with themonoclonal antibody(1:100) or polyclone antibody(1:500) in TBST plus 5% NFDM for 90 min;5.After three washes in TBST(10min/each at 60RPM), the cells wereincubated with dye-conjugated secondary antibody (Molecular Probes, Inc) diluted 1:400 in 5% NFDM for 60min6.After three washes in D-PBST the cells were pretreated with RNAseA for20min, followed by PI staining for 15min,then three washes in PBS.7.Cells then were mounted in glycerol PBS buffer(50% glycerol plus50%D-PBS)8.Cells were examined on microscope (Carl Zeiss,Inc., Thornwood, NY)equipped with fluorescence using an oil immersion63× objective lens.Images were captured using a Sony color video camera (Park Ridge, NJ)。