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配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
我曾用过多聚赖氨酸包被培养瓶,但浓度是0.1mg/ml,我都是放一夜,第二天吸掉晾干就用,当然要紫外消一下.我觉得时间长点没什么大碍。
我们这里的老师说，多聚赖氨酸不能用紫外线照射。
1.用赖氨酸包被培养板和培养瓶时，应该选用多聚左旋赖氨酸(分子量为15-30万) ；2.感觉你“浓度为50ng/1ml”有些低，我一般最后多聚赖氨酸使用浓度达到20－30ug/ml；3.包被时间一般为6－7h，或者过夜也可；4.使用时应该先用灭菌水洗三次＋PBS（起平衡盐作用）洗一次，洗液的量应该大于包被液的量；5.“多聚赖氨酸可以在培养瓶中放多长时间，太长了会有影响吗？”，我包被时间最长的经历有过48h,最后只是多聚赖氨酸随着时间延长蒸发一些而量变少了，但是对细胞生长并无大碍，这是我曾经有过的经历，所以我会负责地告诉你；6.“多聚赖氨酸能在4度冰箱里放多久？”，最好置于－20度保存，放置数月乃至半年都可以。
多聚赖氨酸包被培养皿步骤在我们进行细胞培养时，培养皿就像是细胞的小家，提供了一个温暖的环境，让它们能安安心心地生长。
今天我们要聊的是怎么用多聚赖氨酸（PLL）来包被培养皿，这可是一项神奇的操作，能给细胞提供更好的附着环境。
接下来，就让我来带你走一趟这个步骤吧！1. 准备工作1.1 材料准备首先，我们得准备好所有的材料。
这可是个细致活，万一少了什么可就尴尬了。
你需要的主要材料有：多聚赖氨酸溶液、培养皿（当然要干净的咯）、无菌水和一些吸管，最好还有手套，别让细胞觉得你不讲卫生哦。
再说，搞科研可不能马虎，细节决定成败，像做菜时少了一味调料，味道就大打折扣嘛！1.2 清洁工作在开始之前，别忘了把你的工作台擦得干干净净。
想象一下，如果你的培养皿是在一个满是灰尘的地方包被，细胞一定会不高兴的，对吧？所以，使用酒精消毒一下工作台，让它焕然一新，再把所有材料都摆上来，准备就绪，感觉就像开饭前的备菜一样。
2. 包被步骤2.1 包被准备好啦，接下来进入包被的环节！首先，把多聚赖氨酸溶液取出，根据需要稀释一下，浓度一般在0.1%到0.5%之间。
稀释就像做饮料，太浓太稠的饮料喝了容易腻，细胞也一样，得有个适中的环境才能舒舒服服地长大。
之后，使用吸管将准备好的PLL溶液均匀地加到培养皿的底部，轻轻摇晃一下，让它铺满整个底面，感觉就像给培养皿做了个SPA，真是太贴心了！2.2 静置和冲洗把包好的培养皿放到37℃的温箱里静置30分钟到1小时，让多聚赖氨酸好好地附着在皿底。
这段时间你可以去喝杯咖啡，或者聊聊天，别让自己闲得发慌。
时间一到，把培养皿拿出来，轻轻倾斜，倒掉多余的溶液，接着用无菌水轻轻冲洗一下，去掉没附着好的部分。
冲洗完后，再次轻轻倾斜，倒掉水分，确保底部没有多余的水，想想就像洗完澡后的干爽感觉，真是舒服！3. 使用与储存3.1 培养细胞现在，包被好的培养皿可以用来培养细胞啦！把细胞悬液轻轻加入培养皿里，注意不要让细胞“摔跤”哦。
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。
一种简单的制作多聚赖氨酸黏附载玻片方法
李梅;吴建农
【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》
【年(卷),期】2011(27)5
【摘要】近年来,由于分子生物学基础研究的飞速发展,免疫组化技术和原位杂交技术等检测方法不断普及,黏附载玻片的应用也日益广泛。
其中黏附剂多采用多聚赖氨酸,将其与双蒸水按1∶9稀释后浸泡载玻片,晾干后备用。
此方法虽可一次制作出大量黏附载玻片,但防脱片效果并不理想。
经过不断的探索和实践,我们通过使用棉签直接涂片和降低多聚赖氨酸稀释度的方法,取得了良好的效果,现介绍如下。
【总页数】1页(P555-555)
【作者】李梅;吴建农
【作者单位】江苏省镇江市江苏大学附属医院病理科,212001;江苏省镇江市江苏大学附属医院病理科,212001
【正文语种】中文
【中图分类】R361.2;R-33
【相关文献】
1.一种简单适用的大水箱制作方法 [J], 欧阳砚端
2.四种制作多聚赖氨酸免疫组化黏附载玻片方法的比较 [J], 付先利;支月莹;郑芳;曾超;肖栩;贾静;吴建农
3.制作多聚赖氨酸黏附载玻片四种方法比较分析 [J], 于义娟;朱薇;张萍;李晶梅;漆世华;谢红玲;温文生;吴玉石
4.介绍一种简单易行的组织芯片制作方法 [J], 武振汝;陈梦琳;李丽;石毓君;步宏
5.观察金鱼尾鳍血液流动方法的改进——特种载玻片的制作 [J], 周长信
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包被细胞培养板的相关问题培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
聚赖氨酸包被载玻片改良法时间:2011-09-01 17:34来源:生物吧作者:刘浩点击:324 次原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确原位杂交和免疫组织化学是当前生物化学和分子技术进行基因及产物研究的常用方法,可确定各个细胞中mRNA和蛋白质在何时何处表达。
这两项细胞技术的成功与否,关键在于载玻片的正确处理。
经典的载玻片处理技术用加有洗涤剂的水清洗载玻片数分钟后,再于水中浸泡30 min。
配制足量的500μg/ ml 多聚-L-赖氨酸水溶液,逐一浸载玻片。
经空气干燥后,贮于4℃, 1 周内使用。
在实践中我们发现,该方法操作不当,易导致试验脱片现象。
为确保各项重大试验质量,我们对经典方法进行改良,并取得很好的效果。
1. 清洗载玻片:(1) 用加有玻璃清洁剂的水,浸泡新的载玻片24 h。
(2) 清水冲洗载玻片后,用清水浸泡载玻片24 h。
(3) 用蒸馏水浸洗5 次,再用蒸馏水浸泡载玻片过夜。
(4) 次日用蒸馏水冲洗载玻片,晾干,装盒备用。
2. 包被载玻片:(1) 根据切片组织大小,决定包被载玻片的位置及面积大小。
(2) 用移液器吸取0. 1 % 多聚-L-赖氨酸作者单位:200092 上海第二医科大学新华医院上海儿科研究所10μl 置于载玻片预定位置,用枪头涂匀预定面积。
对多张载玻片逐一进行涂片。
(3) 肉眼观察载玻片预定面积内多聚-L-赖氨酸分布是否均匀,有皱缩的玻片予以剔除。
(4) 将载玻片平放,自然干燥,逐一做好标记。
(5) 将包被载玻片置标本盒内,贮于4 ℃备用。
(6) 根据切片数量多少,当天制备包被载玻片,当天使用。
改良后的载玻片处理技术,不仅可在包被前提供清洁好的载玻片,有利于一次包被成功,而且载玻片在包被前经过预定位置逐一精细涂片,并用肉眼观察和剔除皱缩玻片,从而确保了载玻片包被的质量。
细胞免疫荧光步骤方法一：1. 首先需要把细胞养在玻璃片上（悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片）2. 然后在 4％PFA 里面室温下固定 30 分钟， PBS 洗两次， 0.1% TX-100 室温下作用 1－2 分钟使细胞膜通透。
3. 接下来进行荧光标记，需要在一个大的容器（面积大，扁平状的，比如大的培养皿）里面，放一张用水打湿的滤纸，以保持湿度。
4. 剪一片合适大小的parafilm ，在上面滴上稀释在1％BSA/TBS 中的一抗（稀释倍数依具体抗体而定），每个玻璃片 30ul 足够，把玻璃片盖在上面（细胞面朝下），室温下孵育 30 分钟，然后在 PBS 里洗三次。
5. 接下来二抗孵育步骤同上。
6. 最后，在载玻片加上mounting medium （大约每个玻璃片加10ul）,把玻璃片放上去（细胞面朝下）， 37 度 30 分钟，然后就可以在荧光显微镜下观察了。
7. 抗体很重要，不能有非特异性结合。
你可以先做 WB 检测一下你的抗体，看看有没有杂带。
8. 双标的话，可以把两个一抗一起加或者分别标记两次（可以都试一下看看那种方法合适）。
如果一个抗体需要二抗，一个是直接荧光标记的，可以把荧光标记的那个和另外一个的二抗一起加。
方法二：1. 选取一抗时要来源于两种不同的动物，我用的是来源于rabbit 和 rat 的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC （绿）和donkey anti-rat-Tex-Red （红）。
2. 我的做法是两种一抗同时孵育，然后两种二抗同时孵育。
抗体浓度、孵育时间要仔细摸索，我感觉一抗 4 度孵育过夜比较好，背景比较清晰。
3. 我的阳性对照用的是阳性组织切片，阴性对照则分别是家兔和大鼠的IgG，荧光标记物对照是PBS+荧光标记物。
4. 封闭血清与二抗来源动物一致，我用的是10%的正常donkey 血清。
5. 其余步骤同一般免疫荧光单标操作。
多聚赖氨酸处理载玻片流程
多聚赖氨酸（Poly-L-lysine，PLL）是一种常用的载玻片（Coverglass）表面修饰物，用于细胞培养和免疫组织化学等实验。
以下是一种常见的PLL处理载玻片的流程：
1. 准备载玻片：选择干净、无尘的载玻片，并用无水酒精或酒精灯烘烤消毒。
确保载玻片表面干燥且无油污。
2. 涂覆PLL：将PLL溶液加到载玻片表面。
可以选择将PLL溶液滴在载玻片中央，然后用微量移液器慢慢将溶液扩散到整个载玻片表面，或者使用旋涂法将PLL溶液均匀地涂覆在载玻片上。
3. 等待吸附：将涂覆好PLL的载玻片放置在无尘的环境中，让PLL溶液在载玻片表面吸附，并形成均匀的PLL层。
通常需要等待约20-30分钟，具体时间根据PLL浓度和温度而定。
4. 洗涤载玻片：将载玻片用去离子水或PBS缓冲溶液轻轻地洗涤数次，以去除未吸附的PLL和其他杂质。
避免用力刷洗或产生气泡，以防PLL层的破坏。
5. 干燥载玻片：用空气或干净的氮气吹干洗涤后的载玻片，确保载玻片表面完全干燥。
可以将载玻片放置在干燥箱中或在无尘环境中自然晾干。
6. 使用载玻片：处理好的PLL载玻片即可用于细胞培养、免疫组织化学等实验。
将培养物或样品滴在PLL处理的载玻片上，使其黏附并进行后续实验操作。
具体的操作流程可能因实验目的、PLL浓度和实验要求等而有所不同。
在进行实验前，建议参考相关文献或实验方法以获取更详细和专业的操作指导。
细胞免疫荧光步骤编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（细胞免疫荧光步骤）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为细胞免疫荧光步骤的全部内容。
方法一：1.首先需要把细胞养在玻璃片上(悬浮细胞需要用多聚赖氨酸包被过的玻璃片）2.然后在4％PFA里面室温下固定30分钟，PBS洗两次，0。
1％ TX-100室温下作用1－2分钟使细胞膜通透.3.接下来进行荧光标记，需要在一个大的容器（面积大,扁平状的，比如大的培养皿)里面，放一张用水打湿的滤纸，以保持湿度.4.剪一片合适大小的parafilm，在上面滴上稀释在1％BSA/TBS中的一抗(稀释倍数依具体抗体而定），每个玻璃片30ul足够,把玻璃片盖在上面（细胞面朝下），室温下孵育30分钟，然后在PBS里洗三次。
5.接下来二抗孵育步骤同上.6.最后,在载玻片加上mounting medium（大约每个玻璃片加10ul)，把玻璃片放上去（细胞面朝下），37度30分钟，然后就可以在荧光显微镜下观察了。
7.抗体很重要，不能有非特异性结合。
你可以先做WB检测一下你的抗体，看看有没有杂带。
8.双标的话，可以把两个一抗一起加或者分别标记两次（可以都试一下看看那种方法合适）。
如果一个抗体需要二抗,一个是直接荧光标记的，可以把荧光标记的那个和另外一个的二抗一起加。
方法二：1.选取一抗时要来源于两种不同的动物,我用的是来源于rabbit和rat的抗体，二抗则是不同荧光信号标记的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC（绿）和donkey anti—rat-Tex-Red （红）。
多聚赖氨酸处理玻片1. 引言1.1 概述概述多聚赖氨酸是一种生物相容性强且多功能的天然生物聚合物，具有广泛的应用前景。
在生物材料领域，多聚赖氨酸因其良好的生物相容性和可调控性受到了广泛的研究和应用。
除此之外，多聚赖氨酸还可以作为一种优秀的载体用于药物传递、基因转染和组织工程等领域。
然而，尽管多聚赖氨酸在生物医学领域中具有巨大的潜力，但其在玻片处理中的应用却相对较少被研究。
在病理学和细胞学等领域，制备高质量的玻片是重要的实验步骤之一。
目前常用的方法是通过利用多聚赖氨酸修饰玻片表面，提高玻片的附着力、细胞黏附和显微观察效果。
本文将重点介绍多聚赖氨酸处理玻片的方法和步骤。
首先将详细介绍多聚赖氨酸的特性，包括其生物相容性、成膜性、附着性以及与细胞相互作用的特点。
接着，将介绍利用多聚赖氨酸处理玻片的具体方法和步骤，包括材料准备、玻片表面修饰和处理等方面的内容。
通过本文的研究，相信可以有效地应用多聚赖氨酸处理玻片，并提高玻片的性能和实验结果的准确性。
此外，探索多聚赖氨酸在玻片处理中的应用还能够为其他领域的研究提供新的思路和方法。
因此，本文的研究对于推动多聚赖氨酸的应用和促进细胞学、病理学等领域的研究具有重要的意义和价值。
1.2 文章结构本文总共分为三个部分，即引言、正文和结论。
下面将对每个部分的内容做详细的介绍。
1. 引言部分在引言部分，首先会进行概述，介绍多聚赖氨酸处理玻片的背景和研究意义。
多聚赖氨酸作为一种天然产物，具有许多特殊的化学和物理性质，因此在生物医学领域有着广泛的应用前景。
然后，会详细说明本文的研究结构和目的，以引出后续的研究内容。
2. 正文部分正文部分主要包括两个小节，分别是多聚赖氨酸的特性和多聚赖氨酸处理玻片的方法和步骤。
- 2.1 多聚赖氨酸的特性在这一小节中，将详细介绍多聚赖氨酸的化学结构、物理性质以及其在生物医学领域的应用。
多聚赖氨酸具有丰富的氨基、羧基和假胺基团，以及良好的溶解性和可调节的电荷性质，这些特性使其成为理想的生物材料用于玻片表面的处理。
Prepare polylysine-coated coverslidsMaterials:Poly-l-lysine hydrobromide(P-1524), 100mg dissolved in 10ml h2o, •Incubate cover glasses in 100% ethanol for overnight.•Wash cover glasses for 30 min in running tap water.•Rinse with dH20.•Incubate cover gl asses in 40 µg/ml poly-L-lysine (MW ~70-90kD，made by 0.1M PB,Ph7.2) for 1 hour at room temperature.•Wash cover glasses for 1 hour in running tap water.•Rinse cover glasses 3 times 5 min each in dH2O.•Dry cover glasses on filter paper in a dust-free area.•Sterilize cover glasses inside the laminar flow chamber under UV light for at least 4 hours.处理好玻片之后，将玻片放入培养皿中，接种细胞，密度为10000个/ml，培养三天。
rocedure:1.After treatment, cells were fixed for 10min in 4% Para formaldehyde；2.After fixation, cells were washed three times in TBST (TBS plus 0.05%Tween-20)(10min/each);3.then blocked in 5% nonfat dried milk (NFDM in TBST) for 60 min;4.To detect the interest proteins, the cells were incubated with themonoclonal antibody(1:100) or polyclone antibody(1:500) in TBST plus 5% NFDM for 90 min;5.After three washes in TBST(10min/each at 60RPM), the cells wereincubated with dye-conjugated secondary antibody (Molecular Probes, Inc) diluted 1:400 in 5% NFDM for 60min6.After three washes in D-PBST the cells were pretreated with RNAseA for20min, followed by PI staining for 15min,then three washes in PBS.7.Cells then were mounted in glycerol PBS buffer(50% glycerol plus50%D-PBS)8.Cells were examined on microscope (Carl Zeiss,Inc., Thornwood, NY)equipped with fluorescence using an oil immersion63× objective lens.Images were captured using a Sony color video camera (Park Ridge, NJ)。
培养板的包被及相关问题：为了适应不同的实验需要，可对培养板用不同的物质进行包被后使用，这其中有促进细胞黏附的，也有用于一些特殊检测需要的。
不同的实验目的可能具体的方案亦不同，根据需要灵活掌握。
(一)多聚赖氨酸包被：问：我要培养原代神经细胞培养，要用多聚赖氨酸铺细胞培养板，请问赖氨酸液怎么配，怎样铺扳子答：配制0.01%的多聚赖氨酸: 首先买来sigma 公司的多聚赖氨酸，如是25mg，就需要250ml三蒸水，用移液管将少量三蒸水加到多聚赖氨酸的小塑料瓶中，然后将溶解的多聚赖氨酸加到200ml左右三蒸水中，(已置烧杯中)。
最后加三蒸水达250ml，过滤除菌分装与小瓶中即可。
保存于-20度，近期用的话可放于4度冰箱内保存。
注意每一小瓶的量不要太满，若20ml的瓶子，只装15ml可，若太满，放于-2度有可能会将瓶子弄碎，因冻后体积增加。
(我就有这个教训) 另外烧杯，小瓶、移液管都要灭菌处理的，泡酸高压什么的。
我们用的是一种用注射器过滤的过滤器，一次性的。
一个能最多有效过滤200ml。
铺板的操作:首先要在消毒实验室，包括超净台，紫外消度20-30分钟。
消毒后30分钟进入实验室。
事先准备100ml三蒸水，经高压灭菌处理。
具体细节就不多说了。
首先打开板子，用消毒好的试管将0.01%的多聚赖氨酸加入每一孔中，大概每孔3-4滴吧。
将板子盖好放到培养箱中(37度 5%CO2)30分钟。
取出板子，用吸管将多聚赖氨酸吸出。
换吸管，加入三蒸水，冲洗三次，即将每孔内加入三蒸水，没过底，多点也行。
再将水吸出来。
反复三次。
注意换吸管，要无菌操作的。
最后将铺好的板子放于培养箱待用。
如果你做免疫组化，需要放小的玻片到孔内，就在加多聚赖氨酸之前用无菌的镊子将无菌的玻片夹到孔内即可。
问：PLL的分子量有3-5万，7-15万，15-30万几种，应怎样选择？？谢谢：）答：我们养神经细胞，用的是分子量3万到7万的pll 。
以PBS配成1mg/ml的母液，－20度保存。
实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法一、爬片前盖玻片处理方法对于悬浮培养的细胞，在进行各种染色前常需先制备成涂片。
为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落，必须使其牢固贴附于载玻片上。
在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一。
能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等，这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法。
1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂(如Decon)浸泡5min，间或振荡。
2、用自来水冲洗5min。
3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min。
4、烤箱干燥(至此即可用于普通染色)。
5、多聚L-赖氨酸(1:10溶于去离子水)浸泡5min，振荡。
6、入60℃烤箱1 h，或室温过夜干燥(用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学)。
二、细胞固定常用方法固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来，避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等，使细胞和组织内的各种酶失去活性，防止细胞和组织的各种分子变性、解离，使细胞的化学物质和酶能准确定位，并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏。
同时，固定还可使细胞的各部分易于着色，适于观察、长期保存和分析。
1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法。
2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物，如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料。
对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说，常通过离心收集细胞，PBS漂洗2～3次后，备固定制片；对盖片单层培养物来说，将盖片从培养器皿中取出后，PBS液漂洗2～3次，以洗去血清和附着于细胞表面的残渣，备固定用。
3.常用固定液：常用的固定液分两类，一类是以单一化学物质配成的固定液，称简单固定液。
主要有甲醇、乙醇、甲醛、醋酸、丙酮、戊二醛、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞、氯化镉、四氧化锇(锇酸)。
另一类是用两种或两种以上化学物质配合成的固定液，称混合固定液。
多聚赖氨酸的配置、保存、使用一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-lysine-coated tissue cultur e surfac esTo coat covers lips: Prepar e a stocksoluti on by dissol ving25 mg/ml polyly sinein 4.73 ml wa ter(both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue cultur e surfac es; checkspecif ic pr otoc ol for choice of isomer) and filter steril ize throug h a 0.22-μm filter. Storein 100-μl aliquo ts at 20°C. When readyto use, dilute one aliquo t in 40 ml waterto prepar e 13 μg/ml workin g soluti on. Steril ize covers lipsby autocl aving priorto coatin g. Dip covers lipsin the workin g soluti on, then i ncuba te 15 min to severa l hoursin a humidi fied37°C, 5% CO2 incuba tor. Allowsurfac e to dry.To coat cultur e dishes or 8-well chambe r slides: Prepar e a stocksoluti on by dissol ving100 m g poly-lysine in 100 ml water(both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue cultur e surfac es; checkspecif ic protoc ol for choice of isomer) and filter steril ize throug h a 0.22-μm filter. Storein 5-ml aliquo ts at ?20°C. When readyto use, dilute 1 part stocksoluti on with 9 partswaterto prepar e 100 μg/ml workin g soluti on. Fill tissue cultur e dishes or slidewellswith the workin g so luti on and incuba te 1 hr in a humidi fied37°C, 5% CO2 incuba tor, then remove soluti on by vacuum aspira tionand allowsurfac e to dry.Storecoated tissue cultur e ware up to 3 months at 4°C. Use dilute d soluti ons only once, but unused dilute d aliquo ts can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
因为自己做PC12细胞培养，想在接种前将培育皿用多聚赖氨酸包被，到园子里搜索了下，关于多聚赖氨酸的帖子不少，看了一些帖子，将大部分收集在此。
个人觉得关于多聚赖氨酸的配置、保存、使用各方面问题，这些帖子里面都解释了。
注：我只是摘了一个帖子里某段或某句话。
一般一段话来自某一位战友。
一、常用的多聚赖氨酸包被可以用三蒸水，或者PBS，浓度一般为用0.1 mg/ml进行包被。
二、其他常用包被方法比较(以各种免疫分析为例)：49456826.snap三、我配成1mg/ml的储存液，用Mini-Q(超纯水)配制，放在－20℃储存，使用时稀释10倍（也用超纯水），即终浓度100ug/ ml，过滤后使用。
工作液过滤使用，如一次用不完，放在4℃储存。
多聚赖氨酸在水溶液中易分解，所以一次不要配太多工作液。
四、我现在要配多聚赖氨酸,书上写的用PBS配,但没写PH,浓度，向各位请教。
答：PH应该在7.0~7.4，PBS：取氯化钠7.650 g，无水磷酸氢二钠0.724 g，磷酸二氢钾0.210g 溶于蒸馏水1000 mL 中，以1N 氢氧化钠溶液调pH 值为7.0~7.4，经121℃灭菌15 分钟五、我准备用多聚赖氨酸涂片培养细胞,不知道多聚赖氨酸涂过的玻片如何灭菌？能否干烤灭菌？答：Sigma的产品说明书上写的很明白的。
另外，有本书上是这么写的，供参考：Poly-lysine-coated tissue culture surfacesTo coat coverslips: Prepare a stock solution by dissolving 25 mg/ml polylysine in 4.73 ml water (both poly-L-lysine an d poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isomer) and filter sterilize throu gh a 0.22-μm filter. Store in 100-μl aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute one aliquot in 40 ml water to prepare 13 μg/ml working solution. Sterilize coverslips by autoclaving prior to coating. Dip coverslips in the working solution, then incubate 15 min to several hours in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator. Allow surface to dry.To coat culture dishes or 8-well chamber slides: Prepare a stock solution by dissolving 100 mg poly-lysine in 100 ml water (both poly-L-lysine and poly-D-lysine are used to coat tissue culture surfaces; check specific protocol for choice of isom er) and filter sterilize through a 0.22-μm filter. Store in 5-ml aliquots at ?20°C. When ready to use, dilute 1 part stock solutio n with 9 parts water to prepare 100 μg/ml workin g solution. Fill tissue culture dishes or slide wells with the working solution and incubate 1 hr in a humidified 37°C, 5% CO2 incubator, then remove solution by vacuum aspiration and allow surface to dry.Store coated tissue culture ware up to 3 months at 4°C. Use diluted solutions only once, but unused diluted aliquots can be stored up to 3 months at 4°C.你可以配置好PLL后单独将其过滤除菌，分装，待用。
多聚赖氨酸处理粘附载玻片1.引言1.1 概述概述：多聚赖氨酸是一种具有多种特殊性质的生物大分子，其在生物医学领域的应用潜力备受研究者关注。
本文主要研究了多聚赖氨酸在处理粘附载玻片中的应用。
粘附载玻片作为一种常用的实验工具，在细胞培养、药物筛选等领域发挥着重要作用。
然而，粘附载玻片的表面往往具有一定的亲水性，导致细胞的黏附和生长效果不佳。
因此，需要寻找一种能够改善粘附载玻片表面性质的方法。
多聚赖氨酸因其独特的化学结构和生物活性而备受研究者青睐。
相比于传统的表面修饰方法，多聚赖氨酸具有较强的亲水性和生物相容性，可以与细胞黏附分子快速结合，从而提高细胞的附着和生长效果。
多聚赖氨酸还具有良好的附着能力和稳定性，能够在粘附载玻片表面形成均匀的薄膜，有效增加载玻片的表面粗糙度，提高细胞黏附的效果。
本文旨在探索多聚赖氨酸在处理粘附载玻片中的应用前景。
通过实验和分析，我们将评估多聚赖氨酸对粘附载玻片表面性质的改善效果，并探讨其在细胞培养、药物筛选等领域中的潜在应用价值。
同时，我们也将分析多聚赖氨酸处理的优势和局限性，并提出进一步的研究方向和改进建议。
综上所述，本文的目标是通过多聚赖氨酸处理来改善粘附载玻片表面性质，并探索其在细胞培养等领域的应用潜力。
本文将从多聚赖氨酸的特性和粘附载玻片存在的问题出发，系统介绍相关研究和实验，以期为研究者提供有益的参考和启示。
文章结构部分的内容可以包括以下几个方面：1.2 文章结构本文主要包括引言、正文和结论三个部分。
引言部分首先对本研究的背景和研究目的进行概述，引出对多聚赖氨酸处理粘附载玻片的需求和重要性。
接着介绍本文的整体结构和各个章节的主要内容，以便读者对全文有一个清晰的概念。
正文部分将围绕多聚赖氨酸的特性和粘附载玻片的问题展开讨论。
首先，介绍多聚赖氨酸的特性，包括其化学结构、物理性质和生物活性等方面。
然后，探讨粘附载玻片存在的问题，如粘附不牢固、易脱落和重复使用等方面的挑战。
