DP421-TRNzolA+总RNA提取试剂盒-120227

植物总rna提取试剂植物总RNA提取试剂是一种用于从植物组织中提取总RNA的试剂盒。

总RNA是植物细胞中的一个重要组成部分，可以用于基因表达研究、转录组学和其他分子生物学研究。

本文将介绍植物总RNA提取试剂的原理、操作流程、优缺点以及注意事项。

一、植物总RNA提取试剂的原理植物总RNA提取试剂通过破碎细胞壁和细胞膜，溶解蛋白质，并在碱性条件下使DNA和RNA不同程度地溶解从而实现总RNA的提取。

它通常包括下述主要步骤：1.细胞破碎：将植物样品研磨或经过冻融循环处理，释放细胞。

2.蛋白质沉淀：添加试剂进行蛋白质沉淀，将细胞残渣上清液中的蛋白质沉淀下来。

3. RNA沉淀：通过加入酒精等试剂使RNA从上清液中沉淀下来。

4.清洗：用特定的试剂将沉淀洗涤，去除污染物。

5.溶解：加入溶剂溶解沉淀，得到纯度较高的总RNA。

二、植物总RNA提取试剂的操作流程1.准备样品：收集新鲜的植物组织，将其迅速冷冻在液氮中，然后使用试剂研磨或液氮研磨法将其破碎。

2.加入试剂：向研磨好的样品中加入试剂，根据试剂盒的要求进行操作。

3.离心：离心样品，以将细胞碎片和蛋白质沉淀分离。

4.沉淀RNA：将上清液转移至新的离心管中，加入酒精等试剂，使RNA沉淀下来。

5.清洗：用特定的试剂洗涤RNA沉淀，去除杂质。

6.溶解：使用特定的溶剂将RNA沉淀溶解，使其完全溶解。

7.检测：采用比色法、荧光法或电泳等方法对提取得到的RNA进行定量和质量检测。

三、植物总RNA提取试剂的优缺点1.优点：-操作简单，不需要复杂的仪器和设备。

-高效提取总RNA，得到纯度较高的RNA。

-可以快速提取大量的样品。

-可以适用于多个植物种类和组织类型。

2.缺点：-可能存在某些试剂无法完全溶解质体等问题。

-部分试剂存在对环境的污染隐患。

四、植物总RNA提取试剂的注意事项1.使用新鲜的植物组织进行提取，以确保RNA的质量和完整性。

2.严格按照试剂盒的说明进行操作，不要改变试剂的使用顺序或添加量。

磁珠法动物组织总rna提取试剂磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种常用于从动物组织中提取总RNA的试剂。

总RNA是指包括mRNA、tRNA、rRNA等各种类型的RNA，它们在细胞中起到重要的生物学功能。

动物组织总RNA的提取对于研究基因表达、生物学功能以及疾病研究等领域具有重要意义。

下面将详细介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作流程以及优缺点。

一、原理：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理是利用磁珠在磁场中的作用来实现RNA的分离和纯化。

磁性珠子（磁珠）是一种微米级别的颗粒，表面含有特异性结合分子（如寡聚核苷酸、抗体等），可以与RNA特异性结合。

通过结合物的磁场作用，可以将RNA与其他杂质分离开，并进行纯化。

二、操作流程：磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作流程通常可以分为样品处理、细胞破碎、RNA结合、磁珠分离、洗涤和洗脱等步骤。

（一）样品处理：首先要将收集到的动物组织样品进行样品处理，如清洗、离心等，以去除表面的杂质并提取细胞。

（二）细胞破碎：将经过样品处理的细胞进行破碎，以释放细胞内的RNA。

目前常用的破碎方法包括机械破碎、酶解和超声破碎等。

选择不同的破碎方法需要根据所研究的组织类型、细胞数量以及目标RNA 的适应性来确定。

（三）RNA结合：将破碎后的细胞溶液与磁珠结合试剂加入，并进行混匀。

通过磁性珠子表面的特异性结合分子与RNA结合，使得RNA能够与磁珠结合。

（四）磁珠分离：通过磁力，将含有磁性珠子的RNA溶液与其他不具有磁性的杂质分离。

可以利用磁力器将磁性珠子收集到一侧，将无磁性的溶液倒掉，从而分离纯化RNA。

（五）洗涤：为了去除残留的污染物，可以进行洗涤步骤。

将洗涤缓冲液加入含有磁珠的管中，再次使用磁力使磁性珠子沉淀，倒掉上清液，然后重复该步骤多次以保证洗涤的彻底性。

（六）洗脱：最后，用洗脱缓冲液将RNA从磁珠上洗脱下来。

将洗脱缓冲液加入磁性珠子所在的管中，轻轻摇晃管子，使RNA溶解在洗脱缓冲液中，从而得到纯化的RNA溶液。

总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。

∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。

∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。

∙整个过程仅需10分钟。

Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。

2.样品范围：≥17核苷酸。

3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。

4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。

试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。

添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。

总RNA提取试剂盒说明书货号：R1200规格：50T/100T产品内容：试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期裂解液50ml100ml2-8℃一年漂洗液15ml15ml×2RT一年洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。

b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。

用取样器吹打混匀。

d.细胞悬液：离心收集细胞。

每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。

弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。

离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。

2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。

4.2-8℃12000rpm离心10分钟。

RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液。

7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

E.Z.N.A. Total RNA Kit I (R6834-01 50 preps) 步骤A．真核细胞和组织自备材料：β－巯基乙醇、70％乙醇（DEPC水配置）、除RNase的枪头和EP管、disposable latex gloves。

细胞的步骤1．在microfuge tube中用TRK裂解缓冲液裂解细胞，使细胞团松散，轻弹EP管或者用枪头吹旋，再用漩涡振荡混匀。

使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul的β－巯基乙醇。

如果是单层的组织培养细胞（成纤维细胞，内皮细胞等），可以直接在细胞培养器里裂解细胞。

吸净培养基后直接加TRK裂解缓冲液至细胞中。

加600ul的TRK到T35细颈瓶或10cm的培养皿中，更小的培养器则加350ul的TRK。

Pipette buffer over entire surface of vessel 以使裂解完全。

将液体布满整个器皿表面，确保细胞裂解完全。

将裂解产物转移至干净的1.5mlEP管中，然后进行第2步。

如果细胞是悬液培养，收集细胞（≤1,500rpm or 400*g）*5min，弃上清，加入TRK）裂解液，漩涡振荡混匀（具体略，见说明书）。

2．匀浆化裂解产物“裂解和匀浆化样品”－第四页有更详细的说明，如果细胞≤1*105，漩涡振荡1min。

样品匀浆化不完全会显著的减少RNA的产量并容易造成柱子堵塞。

a)用匀浆器（rotor-stator ）30 s，使样品匀浆化，而后进行第3步。

b)使裂解产物通过钝的针头的注射器（0.9mm直径20-gauge），使之匀浆化。

注射器要除RNase。

进行第3步。

c)将裂解物转移入omega homogenizer spin column,10000g离心1分钟。

将flow-though移入新的tube中，进行第3步。

组织的步骤：1．TRK裂解缓冲液在microfuge tube中裂解细胞，使用前每1ml TRK裂解缓冲液加入20ul 的β－巯基乙醇。

全血总RNA提取试剂盒(离心柱型)货号：KTSM2908■ 产品简介：本产品适用于从血液中提取高品质总RNA。

本试剂盒配有独特的裂解体系，将RNA从组织中释放出来后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过去蛋白液和漂洗液将蛋白等杂质去除，最后由RNase-Free Water将RNA从硅基质膜上洗脱下来。

本产品提取RNA方便快捷，无需使用氯仿、苯酚等有毒有害化学物质，对操作人员及实验环境无毒害作用。

■主要成分：■保存条件：DNase I，10 × DNase I Buffer置于-20℃保存；其他溶液于室温（15-25℃)保存。

■自备试剂：无水乙醇，β-巯基乙醇。

■ 注意事项：1．第一次使用前请先在去蛋白液RD和漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇，并做好标记。

2．裂解液RG在使用前请加入β-巯基乙醇至终浓度为1%，如1 ml裂解液RG加10 µl β-巯基乙醇。

加入β-巯基乙醇的裂解液RG 在4℃可保存1个月，如出现沉淀，请加热溶解后使用。

3．裂裂解液RG和去蛋白液RD中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4．人类的血液或体液可能有潜在的感染性，所以如果对人类的全血进行处理，请注意做好防护措施。

5．在白细胞裂解后，该说明书中的所有步骤需在室温（15-25℃）进行，操作速度越快越好。

6．本试剂盒不适用于冻存的全血。

■ 预防RNase污染：1．全程佩戴一次性手套，经常更换新手套。

皮肤经常带有细菌和霉菌，可能污染RNA的抽提并成为RNA酶的来源。

培养良好的微生物实验操作习惯预防微生物污染。

2．使用无RNA酶的非一次性的玻璃器皿或塑料器皿。

玻璃器皿可以在150℃的烘箱中烘烤4 h，塑料器皿可以在0.5 M NaOH中浸泡10 min，用水彻底漂洗干净后高压灭菌备用。

■ 操作步骤：1．向新鲜的抗凝全血样本中，加入5倍血液样本体积的1×红细胞裂解液（请于使用前用RNase-Free Water 将10×红细胞裂解液稀释10倍），轻轻涡旋或颠倒混匀。

磁珠法动物组织总rna提取试剂动物组织总RNA提取是一项重要的实验步骤，其中磁珠法被广泛应用。

本文将介绍磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理、操作步骤和优势，以及其在科研工作中的应用。

一、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的原理磁珠法动物组织总RNA提取试剂是一种基于磁性珠子的提取方法。

其原理是利用磁性珠子表面的羧基与RNA中的氨基结合，形成稳定的结合，从而实现RNA的高效提取。

该试剂具有高选择性和高纯度的特点，可有效去除DNA、蛋白质和其他杂质。

二、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的操作步骤1. 准备工作：将动物组织样品切割成小块，并加入适量的细胞裂解缓冲液。

2. 组织裂解：利用机械或化学方法将组织完全裂解，使细胞内的RNA充分释放。

3. 加入磁性珠子：将磁性珠子加入细胞裂解液中，并充分混匀，使珠子均匀分散。

4. 结合RNA：在一定的温度和时间下，RNA与磁性珠子表面的羧基发生结合，形成RNA-磁性珠子复合物。

5. 分离复合物：利用磁性装置将RNA-磁性珠子复合物迅速沉降，然后去除上清液，以实现复合物的分离。

6. 洗涤：用洗涤缓冲液洗涤复合物，去除杂质和残余试剂。

7. 释放RNA：将洗涤后的复合物加入洗脱缓冲液，使RNA从磁性珠子上释放出来。

8. 收集RNA：将释放的RNA收集下来，即可用于后续的实验操作。

三、磁珠法动物组织总RNA提取试剂的优势1. 高效性：磁珠法能够在较短的时间内提取高纯度的RNA，适用于大规模样品的处理。

2. 纯度高：该方法能够有效去除DNA、蛋白质和其他杂质，获得高纯度的RNA。

3. 灵敏度高：磁珠法能够提取低浓度的RNA，适用于少量样品和低表达基因的研究。

4. 操作简便：该方法操作简单，不需要复杂的仪器设备，适用于实验室内各种规模的科研工作。

5. 可靠性强：磁珠法提取的RNA具有较好的稳定性和可靠性，适合多种分子生物学实验的需求。

四、磁珠法动物组织总RNA提取试剂在科研工作中的应用磁珠法动物组织总RNA提取试剂在生物医学研究中广泛应用。

RNA提取试剂盒1. 简介RNA提取试剂盒是一种用于从生物样品中提取RNA的试剂盒。

RNA提取是分子生物学和遗传学研究中的一个重要步骤，它可以从细胞中提取出RNA，并用于进一步的RNA分析，如逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、实时定量PCR（qRT-PCR）、Northern印迹、原位杂交等实验。

2. 原理RNA提取试剂盒的原理通常基于以下步骤：2.1 细胞破碎首先，样品中的细胞需要被破碎，以释放细胞内的RNA。

常用的方法有机械破碎、化学破碎和酶解法等。

机械破碎是利用高速旋转的珠子等破碎细胞膜，而化学破碎通常使用细胞裂解液来破坏细胞膜。

酶解法则是利用特定酶来降解细胞膜。

2.2 RNA结合破碎的细胞后，RNA需要与试剂盒中的特定试剂结合。

这些试剂通常包括抗RNA酶和助剂，可以保护RNA不被降解，同时也可与其他细胞成分如DNA和蛋白质区分开来。

2.3 吸附和洗脱结合的RNA会通过离心等操作与试剂盒中的吸附材料结合，并且其他杂质如DNA、蛋白质等被洗脱。

这一步骤通常是通过向细胞裂解液中加入酒精或其他特定试剂来实现。

2.4 最后的RNA洗脱和纯化最后，从吸附材料上洗脱RNA，并通过离心等方式纯化RNA。

这样可以得到纯度较高的RNA样品，并且可以进一步用于RNA分析。

3. 使用RNA提取试剂盒的优势使用RNA提取试剂盒进行RNA提取的主要优势如下：3.1 高纯度RNA提取试剂盒可以通过洗脱和纯化步骤，获得高纯度的RNA，可以减少其他杂质对实验的干扰，提高实验结果的可靠性。

3.2 方便快捷相对于传统的RNA提取方法，使用RNA提取试剂盒可以更快速、更方便地提取RNA。

通常只需要几个步骤即可完成RNA提取，节省了实验人员的时间和精力。

3.3 可重复性好由于使用RNA提取试剂盒的步骤相对标准化，因此可以获得较好的重复性。

这对于需要进行大量实验或进行样本比较分析的研究非常有价值。

3.4 更适合高通量实验随着高通量实验技术的发展，需要处理大量样本的实验也越来越常见。

Version Number:1.1Plant Total RNA Isolation Kit PlusCat.No.RE-05021/05024For total RNA purification from general plant samples containing high polysaccharide and polyphenol componentsFor research use only Store at room temperature目录产品介绍 (3)产品特点 (3)试剂盒应用 (4)RNA的应用 (4)RNA的储存 (4)产品质量控制 (4)试剂盒内容 (5)产品信息 (5)储存条件 (5)DNA-Cleaning Column特性 (6)RNA-Only Column特性 (6)RNA提取得率与纯度 (7)RNA完整性 (7)RNA洗脱回收效率 (8)注意事项 (9)操作前准备事项 (10)实验材料和设备 (10)自备试剂 (10)安全性 (10)操作指南 (11)样本选取和保存 (11)样本初始用量 (11)植物组织破碎 (12)RNA污染预防 (12)基因组DNA污染及清除 (12)操作步骤 (13)RNA浓度及纯度检测 (15)DNA污染及检测 (15)快速操作示意图 (16)问题分析指南 (17)该试剂盒采用本公司研制的离心柱和配方，可以从各种多糖多酚含量高的植物组织中高效率的提取得到高纯度高质量的总RNA。

提供DNA-Cleaning Column能轻松的让上清液和组织裂解物分离，去除样品中的DNA，操作简便、省时；RNA-Only Column 能高效的结合RNA，搭配独特的配方，可以同时处理大量样品。

全体系RNase-Free，使得提取的RNA无降解；Buffer PRW1、Buffer PRW2缓冲液洗涤体系，使得获得的RNA纯度极高。

产品特点◆全程常温(15-25°C)操作，无需冰浴和低温离心。

总R N A纯化试剂盒说明-中文版总RNA纯化试剂盒产品说明书此款RNA纯化试剂盒提供了一种从培养的动物细胞、组织样品、血液、细菌、酵母、真菌、植物和病毒中快速提取和纯化总RNA的方法，。

该试剂盒可以纯化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到小RNA（microRNA 或miRNA）和小干涉RNA（siRNA）。

RNA优先从蛋白等的细胞组分中纯化出来，而不使用抑制的苯酚或者氯仿。

纯化的RNA是高度完整的，可以应用到一系列的下游应用试验中，包括实时PCR，Northern免疫印迹分析，RNase保护实验和引物延伸，以及表达芯片分析。

纯化技术纯化的基础是旋转柱色谱法，用特有的树脂作为分离介质。

RNA优先从其他细胞组分（如蛋白质）中分离出来，而不使用苯酚或者氯仿。

纯化步骤包括首先用合适的裂解液融解细胞或组织，然后裂解液中加入乙醇后上样到旋转柱中。

树脂结合RNA是基于离子的浓度，所以只有RNA结合到柱子上而所有剩余的蛋白和其他的污染物会在流动液中而被除去或者仍在树脂的顶部。

然后结合的RNA用试剂盒提供的洗涤液洗涤以除去所有残余的杂质，然后纯化的总RNA用抽提缓冲液洗涤。

纯化的RNA是高度完整的，可以用于一系列的下游实验分析。

说明优点•使用旋转柱提取，步骤快且简单•提取总RNA，从大的核糖体RNA（rRNA）到小（RNAmicroRNA或者miRNA)•不需要苯酚或氯仿作提取液•从多种种类来源样品中提取高质量的总RNA•可以提取和检测到的RNA组织样品可以小到单个动物细胞试剂盒成分储存条件和产品稳定性所有的溶液需在室温密闭保存。

所有的试剂在不开封条件下稳定保存１年。

预防措施和警告事项该试剂盒只为科研目的设计，不可用于人或者临床。

要确保有合适的实验服，在操作化学试剂时一次性的手套和护目镜会磨损。

需要更多信息，请参考适合的材料安全表（MSDSs）。

所有人和动物组织的问题是要考虑到潜在的感染。

当操作全血样品时，所有在使用国家的有关当局建议的预防措施都要执行。

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://RNApure Total RNA KitRNApure高纯总RNA快速提取试剂盒目录号：RN03试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成50次(RN0302)裂解液RL（4℃避光）50 ml去蛋白液RE 25ml漂洗液RW10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 10 mlRNase-free吸附柱RA 50个收集管（2ml）50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：1.因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：改进的异硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3.独有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。

4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。

5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

注意事项1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。

3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

实验二总RNA的提取和检测实验目的1.掌握从动物组织细胞中提取总RNA的方法；2.熟悉紫外吸收法检测RNA浓度与纯度的原理及测定方法；3.掌握RNA琼脂糖凝胶电泳方法并分析总RNA的电泳图谱；实验原理（一）概述1. 10-5 µg RNA/细胞含有rRNA 80-85%：28S 18S 5StRNA, snRNA 10-15%mRNA 1-5%2. mRNA 3’端存在20-250个多聚腺苷酸(polyA) 结构，可用oligo(dT)亲和层析柱分离mRNA。

3.RNA分离的方法：异硫氰酸胍氯化铯超速离心法，盐酸胍-有机溶剂法，氯化锂-尿素法，蛋白酶K-细胞质RNA提取法、异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法等。

4.目前常用的是Trizol法。

（二）Trizol的主要成分1.Trizol 是一种新型总RNA 抽提试剂，主要成分是异硫氰酸胍和苯酚。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，其主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白/核酸物质解聚得到释放。

2.酚虽可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。

3.溶解组织细胞的混合物在氯仿作用下溶液分为水相和有机相，RNA在上层水相中。

4.取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA。

(三)总RNA的纯度检测原理：不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就会被不同程度的吸收，光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的比例关系。

RNA在260nm紫外光波长处有最大的吸收峰。

因此，可以用260nm波长分光测定RNA浓度，OD值为1相当于大约40μg/mL 的单链RNA。

用PH=7.6 的TE（tris HCl缓冲液）稀释RNA样品n倍并以TE为空白对照，根据此时读出的OD 260 值即可计算出样品稀释前的浓度:RNA (mg/mL) = 40×OD 260 读数×稀释倍数(n)/1000实验步骤（一）样品处理与Trizol用量1.提取组织RNA时，每50～100mg组织（即0.5×0.5×0.5cm,约合0.1cm3）用1ml Trizol试剂对组织进行裂解；2.悬浮细胞先离心沉淀，每5-10×106个细胞加1mL Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞。

高纯总RNA快速提取试剂盒（RLT-离心柱型）GK3091 20次GK3092 50次一.试剂盒组成Components GK3091 GK3092GenClean Column 2.0-ml Collection TubeRLT Solution aRW SolutionRPE Solution bDEPC-WaterProtocol202014ml15ml5ml2ml1copy505035ml30ml12ml4ml1copya. 在收到试剂盒后，应将RLT Solution取出存放于4ºC。

b. RPE Solution在首次使用前，必须加入4倍体积的无水乙醇。

无水乙醇必须是新开封的，保证无RNase污染。

用户自备试剂、材料：无水乙醇、70%乙醇(DEPC-H2O配制，植物和丝状真菌用)、PBS(动物细胞用)、液氮(植物和丝状真菌用)、RNase-free的Eppendorf管和Tips。

二．基本原理幼嫩组织和对数生长期的细胞生长旺盛，含有大量的RNA。

RLT Solution能使细胞裂解，释放出RNA的同时灭活RNase。

GenClean柱中的膜能选择性的与RNA结合，而蛋白等杂质不能结合，经RW Solution和RPE Solution的几步洗涤后结合在膜上的RNA用DEPC-H2O洗脱，可用于各种分子生物学实验。

三. 主要特点1. 安全，整个过程没有用酚和氯仿抽提，无须担心酚和氯仿对皮肤和呼吸道的腐蚀。

2. 纯度高，本试剂盒抽提得到的RNA样品可用于任何分子生物学操作。

3. 快速，整个抽提过程只需要20分钟。

四. 操作步骤表1 不同组织和细胞最大使用量样品最大使用量动物细胞 1x107动物组织 50mg细菌 1x109酵母 1x107植物组织 100mg丝状真菌 100mg为获得最佳的结果，采用的样品数量一定要合适。

可以参考表1。

细胞培养物、细菌菌体、酵母以及真菌菌丝应该在对数生长期收集，动物和植物样品应该取生长旺盛的幼嫩部位。

总RNA提取试剂盒操作流程1.准备工作首先，准备实验室所需的所有试剂和材料。

包括总RNA提取试剂盒，标本样本（细胞培养物或组织样本），RNase去除剂、DNase处理试剂、异硫氰酸盐混合物、洗涤缓冲液、乙醇，10%叠氮化钠溶液，TE缓冲液和脱水酒精。

2.样本预处理对于细胞培养物，将其转移到离心管中，用1×PBS缓冲液洗涤细胞，然后将PBS去除。

对于组织样本，使用刀片将组织切碎，并将其转移到离心管中。

3.细胞裂解和组织裂解使用总RNA提取试剂盒提供的裂解缓冲液，将培养细胞或组织完全裂解。

对于细胞裂解，直接将缓冲液加入细胞，并彻底混匀。

对于组织裂解，将裂解缓冲液加入裂解管中，然后使用离心机将组织完全裂解。

4.清洁RNA将裂解的细胞或组织样本转移到离心管中，添加RNase去除剂，摇动混匀，然后在室温下孵育10分钟。

5.微量RNA精炼将异硫氰酸盐混合物添加到离心管中，摇动混匀，然后孵育10分钟以精炼RNA。

6.RNA沉淀和洗涤根据试剂盒提供的指引，将样品以及裂解缓冲液转移到分离管中。

加入等体积的酒精，然后彻底混匀。

样品将出现白色絮状，代表RNA已经沉淀。

使用离心机将样品离心10分钟，将沉淀收集到离心管底部。

轻轻倒出上清液，并加入预先配制好的洗液进行洗涤。

洗涤过程中，将洗涤缓冲液加入沉淀中，并轻轻混匀。

然后使用离心机将样品离心，去除上清液，并加入新的洗液进行额外的洗涤。

重复上述洗涤步骤2-3次，以确保完全清洁RNA。

最后，去除所有的上清液。

7.去除基因组DNA污染使用DNase处理试剂，按照试剂盒提供的指引，去除所有的基因组DNA污染。

将DNase处理试剂加入裂解液中，并轻轻混匀。

在室温下孵育15分钟。

8.乙醇沉淀RNA加入等体积的乙醇，并轻轻混匀。

样品将再次出现白色絮状，代表RNA再次沉淀。

使用离心机将样品离心10分钟，然后倒出上清液。

9.干燥RNA使用10%叠氮化钠溶液将RNA片段再次洗涤，并轻轻混匀。

RNA试剂盒所含药品：Component CW0559S 50 preps DNase I（DNA酶Ⅰ）1000 U 10×Reaction Buffer（10×缓冲液）1000 μlBuffer RL 35 mlBuffer RLC 35 mlBuffer RW1 40 mlBuffer RW2（concentrate）11 ml RNase-Free Water（无RNA酶的水）10 ml50Spin Columns FL with Collection Tubes（含收集管的吸附柱FL）50Spin Columns RM with Collection Tubes（含收集管的吸附柱RM）50RNase-Free Centrifuge Tubes（1.5 ml）（无RNA酶的离心管）自备试剂：β-巯基乙醇、无水乙醇（新开封或提取RNA专用）。

实验前准备及重要注意事项：1．预防RNase污染，应注意以下几方面：1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2）配制溶液应使用无RNase的水。

3）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2．预防RNase污染，应注意以下几方面：1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

3）配制溶液应使用无RNase的水。

4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

3．提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取的量和质量。

4．Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1 ml Buffer RL加10 μl β-巯基乙醇。

加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。

Buffer RLC使用时不需加β-巯基乙醇。

5．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer RW2中加入无水乙醇。

RNA 提取试剂盒1、总RNA 提取试剂（TRI Reagent，RNA Isolation Reagent）TRI ® Reagent 是改进型的一步法细胞总RNA 纯化试剂。

它可以快速、经济、有效的提取人、动物、植物、酵母、细菌和病毒的总RNA。

也可以同时提取DNA 和蛋白质。

该产品含有硫氰酸胍和苯酚，能够有效溶解RNA，DNA 和蛋白质。

在加入氯仿并离心后，上层水相中含有RNA。

水相的RNA 经过沉淀和洗涤后几乎没有DNA 或者蛋白质污染，可以用于Northern blots、mRNA 纯化、体外翻译、RNA 酶保护分析、克隆或者PCR 等等。

该产品可以有效分离0.1-15 kb 长度单位内的RNA 分子，每毫升TRI® Reagent 可以提取5-10×106细胞、50-100mg 组织或者10 cm 2培养瓶表面的单层培养细胞。

完全移走水相的离心产物加入无水乙醇沉淀DNA，用柠檬酸钠乙醇溶液洗涤，溶解后可用于PCR、限制性酶切以及Southern blotting 等。

沉淀DNA 后的水相加入异丙醇沉淀蛋白质，用盐酸胍乙醇溶液洗涤，分离的蛋白质可用于Western blotting 等。

优点：1）可用于多种组织：人、动物、植物、酵母、细菌和病毒。

2）提取大量或者少量的组织细胞效果良好。

3）比传统的硫氰酸胍/氯化铯方法产率高。

4）1 ml 最多可以提取107细胞或者100 mg 组织。

货号名称适用范围产品规格价格T9424TRI Reagent组织，培养细胞，细胞团25ml, 100 ml, 200ml506，1590，2860T3809TRI ReagentBD全血，血浆，血清25ml, 100 ml, 200ml536，1699，2978T3934 TRI Reagent LS 细胞悬浮液，脑脊液，羊水25ml, 100 ml, 200ml938，2603，43362、哺乳动物细胞总RNA 提取试剂盒（GenElute TM Mammalian Total RNA Miniprep Kits）该试剂盒结合了硅质膜技术和离心柱技术，可以快速结合、洗涤、溶解获得高质量的细胞总RNA。

2) 胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS 洗涤细胞，吸除PBS ，向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free 的离心管中，300×g 离心5 min ，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。

注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA 的产量降低。

d. 细胞悬液：离心取细胞。

每5×106-107动物细胞和植物细胞加入1 ml TRNzol-A +。

加入TRNzol-A +前不要洗涤细胞，以免降解mRNA 。

e. 血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积TRNzol-A +(推荐0.25ml 全血加入0.75 mlTRNzol-A +)，充分振荡混匀。

2. 将匀浆样品在15-30℃放置5 min ，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤：4℃ 12,000 rpm(~13,400×g) 离心10 min ，取上清。

注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。

离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA ，上清中含有RNA 。

处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。

取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

4. 每使用1 ml TRNzol-A +加0.2 ml 氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15 sec ，室温放置3 min 。

注意：如不能旋涡混匀，可手动快速颠倒混匀2 min 。

5. 4℃ 12,000 rpm(~13,400×g)离心10-15 min 。

样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 主要在水相中，把水相（约500 μl ）转移到新管中。

(如果要分离DNA 和蛋白质，可向天根公司索取提取方法)。

6. 在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 min 。