RNA试剂盒提取步骤

rna试剂盒原理
RNA试剂盒是一种用于提取、检测和分析RNA分子的实验工具。

其原理主要包括RNA提取、转录反应和RNA检测。

RNA提取是将RNA从细胞或组织中分离出来的过程。

一般来说，该试剂盒包含有机试剂和缓冲液，可以在裂解细胞膜和核膜的同时，保护RNA免受RNase的降解。

通过离心，组织均质化和蛋白质沉淀等步骤，可以将RNA从其他细胞组分中分离出来。

转录反应是将RNA转录成DNA（cDNA）的过程。

这里所使用的试剂一般包括逆转录酶、反应缓冲液和核酸酶抑制剂。

通过逆转录酶的作用，RNA可以被转录成cDNA，从而可以在后续的实验中使用。

RNA检测是通过聚合酶链反应（PCR）或其他技术检测RNA 的存在和量化水平。

试剂盒中的PCR试剂通常包括引物（正向和反向引物）、DNA聚合酶和核酸酶抑制剂等。

通过PCR 扩增，可以将RNA模板扩增为可检测到的DNA片段，并通过凝胶电泳或实时荧光PCR等技术来定量。

综上所述，RNA试剂盒的原理包括RNA提取、转录反应和RNA检测，其中各个步骤都通过特定的试剂和工艺来完成。

这种试剂盒的应用广泛，可用于基础研究、临床诊断和新药研发等领域。

柱式RNA提取试剂盒原理⼀、概述柱式RNA提取试剂盒是⼀种⼴泛应⽤于实验室的RNA提取⼯具，其基本原理基于吸附和洗脱的分离⽅法。

通过特定的吸附剂，试剂盒能够从复杂的⽣物样本中有效地提取出RNA，提供了⼀个快速、简便、⾼效的RNA提取⽅案。

⼆、试剂盒主要成分及作⽤1.吸附剂：通常为⼀种特殊的硅基质材料，这种材料具有极⾼的表⾯积和吸附能⼒，可以有效地吸附RNA。

2.洗涤液：⽤于在洗脱过程中，将RNA从硅基质上彻底清洗下来。

3.稳定剂：⽤于保持RNA的稳定性和活性，防⽌其在提取过程中的降解。

三、⼯作原理柱式RNA提取试剂盒的⼯作原理主要包括三个步骤：吸附、洗涤、洗脱。

1.吸附：在样本与吸附剂接触时，RNA分⼦通过专⼀的结合反应被吸附到硅基质上。

这⼀步的关键在于RNA与硅基质之间的⾼亲和⼒，使得其他杂质不被吸附，从⽽实现RNA的有效富集。

2.洗涤：在洗涤过程中，通过洗涤液的使⽤，将未被吸附的杂质从硅基质上彻底清洗掉，从⽽进⼀步纯化RNA。

3.洗脱：最后，通过特定的洗脱液将RNA从硅基质上洗脱下来，完成整个提取过程。

洗脱下来的RNA溶液可以直接⽤于后续的实验，如反转录、PCR 等。

四、优势与特点1.⾼纯度：柱式RNA提取试剂盒采⽤⾼效的吸附和洗脱⽅法，能够在⼀次操作中获得⾼纯度的RNA。

2.⾼回收率：通过优化实验条件，试剂盒能够确保RNA的⾼回收率，减少样本浪费。

3.快速简便：整个提取过程仅需数⼩时，且操作简便，⼤⼤提⾼了实验效率。

4.兼容性强：柱式RNA提取试剂盒适⽤于各种不同类型的⽣物样本，如组织、细胞、⾎清等。

5.稳定性好：获得的RNA溶液稳定性好，可直接⽤于多种后续实验。

6.安全性⾼：试剂盒中使⽤的所有成分均经过严格的质量控制，确保⽆毒、⽆致突变性，符合实验室安全标准。

7.重复性好：通过标准化操作和质量控制，柱式RNA提取试剂盒可提供可重复的结果。

8.降低交叉污染⻛险：整个提取过程在封闭的系统中进⾏，避免了⼿动操作可能带来的交叉污染⻛险。

rna提取方法及原理RNA是一种生物大分子，具有非常重要的生物学功能，在生物研究中有着广泛的应用。

为了研究RNA的功能和结构，科学家们需要从细胞中提取出RNA。

本文将介绍RNA提取的几种常用方法及其原理。

一、酚/氯仿法酚/氯仿法是RNA提取的一种经典方法，它基于RNA和DNA的物理性质差异进行分离。

该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织经过低温致裂，使细胞膜破裂释放出RNA。

2. 酚酸提取：加入酚酸溶液，与DNA形成两相体系。

RNA主要溶于上层的酚酸相中，而DNA则主要溶于下层的酚氯仿相中。

3. 氯仿提取：将上层的酚酸相与下层的酚氯仿相分离，得到含有RNA的上层液体。

4. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。

酚/氯仿法的原理是利用RNA和DNA的溶解度差异以及RNA在酚酸上层相中的亲和力较大，从而实现RNA的提取。

二、硅胶膜柱法硅胶膜柱法是一种常用的RNA提取方法，它使用硅胶膜柱与试剂盒结合，以实现RNA的高效提取。

该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA不受降解酶的影响。

2. 结合：将破碎后的细胞溶液与硅胶膜柱结合，RNA结合到硅胶膜柱的表面。

3. 洗涤：通过洗涤剂洗去杂质和其他污染物，保留纯净的RNA在硅胶膜柱上。

4. 解吸：将洗涤后的硅胶膜柱加入含有RNase-free水的管中，使RNA从硅胶膜柱中解离。

5. 沉淀：通过加入异丙醇或乙醇使RNA沉淀，然后用冷乙醇洗涤并干燥沉淀，最后用水溶解得到纯净的RNA。

硅胶膜柱法的原理是利用硅胶膜柱的高亲和性和离心过滤来纯化RNA，同时通过试剂的作用保护RNA免受降解酶的影响。

三、磁珠法磁珠法是一种高效且易于自动化的RNA提取方法，它利用磁珠表面的化学基团与RNA分子进行特异性结合。

该方法的步骤如下：1. 细胞破碎：将待提取RNA的细胞或组织破碎，并加入试剂使RNA稳定。

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线: 400-1683301或800-8283301 订货e-mail :****************** 技术咨询: ***************** 网址: 碧云天网站 微信公众号RNAeasy ™动物RNA 抽提试剂盒(离心柱式)(试用装)产品简介：碧云天的离心柱式RNAeasy ™动物RNA 抽提试剂盒(RNAeasy ™ Animal RNA Isolation Kit with Spin Column)是一种基于离心柱法从动物组织或培养的动物细胞中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提长度大于200个核苷酸(nucleotide, nt)的RNA 的试剂盒。

抽提获得的大于200个核苷酸的RNA(也常被称为总RNA)可以用于各种常规用途。

本试剂盒抽提得到的RNA 可用于反转录、RT-PCR 、qPCR 、Northern 、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA 、体外翻译、RNase protection assay 、cDNA 克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(microarray)、高通量测序(high throughput sequencing)等对RNA 质量要求较高的情况。

碧云天的三款离心柱式及Trizol 法RNA 抽提试剂盒的主要特点和差异如下：动物组织或细胞中的RNA 按照长度可以分为长链RNA(long RNA)和小RNA(small RNA)，长链RNA 通常大于200nt ，而小RNA 通常小于200nt 。

长链RNA 按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)和mRNA 。

小RNA 主要包括非编码的5.8S rRNA(ribosomal RNA)、5S rRNA 、tRNA(transfer RNA)、microRNA(miRNA)、siRNA(small interfering RNA)、piRNA(Piwi-associated small RNA)、tsRNA(tRNA-derived small RNA)、srRNA(small rDNA-derived RNA)等。

血清rna提取原理血清RNA提取是一种常用的分子生物学实验方法，用于从血清样本中提取RNA分子。

血清RNA的提取原理主要包括以下几个步骤：1. 样本准备：首先，需要收集血清样本，并将其存储在离心管或者试管中。

血清是血液中没有凝固物质和血细胞的液体部分，主要包含了细胞外RNA。

2. 离心：将收集到的血清样本进行离心，以去除悬浮的细胞碎片和固体杂质物。

离心的原理是利用离心力对样本中的固体和液体成分进行分离。

3. RNA提取试剂盒：选择适当的RNA提取试剂盒，根据厂家提供的操作手册，将血清样本加入到试剂盒中。

RNA提取试剂盒中含有特定的化学试剂，能够有效地溶解细胞膜和蛋白质，从而释放出RNA分子。

4. 混合和洗涤：将血清样本与提取试剂盒中的试剂充分混合，使RNA能够与试剂发生相应的反应。

接着，通过离心将样品分为上清液和沉淀。

上清液中含有溶解的RNA分子，而沉淀则主要含有细胞残渣和蛋白质。

5. 脱脂：为了去除个别成分对RNA的干扰，还需要对上清液进行脱脂处理。

脱脂步骤的主要目的是去除上清液中的脂肪颗粒。

6. 乙酸酒精沉淀：通过加入酒精，使溶解于上清液中的RNA分子发生沉淀。

然后，通过离心分离上清液和沉淀。

7. 洗涤：使用特定的洗涤缓冲液洗涤RNA沉淀，以去除悬浮的杂质和试剂残留。

8. 重悬和保存：最后一步是将洗涤后的RNA沉淀进行重悬，即使用适当的缓冲液将RNA溶解成适当的浓度和体积。

重悬后的RNA可以直接用于后续实验，也可以存储在低温条件下，以便长期保存。

这是血清RNA提取的一般原理，具体的实验步骤和所用试剂可能会因不同的研究目的和试剂盒而有所不同。

在进行实验前，需要仔细阅读和按照试剂盒的操作手册进行操作，以确保提取到高质量的血清RNA。

总RNA提取试剂盒(配合TRIZOL使用)Catalog No. TR205-50 (50次反应含DNaseI)TR205-200 (200次反应含DNaseI)TR205-50N (50次反应无DNaseI)TR205-200N (200次反应无DNaseI)Highlights∙适用于从细胞，组织，酵母菌，植物，细菌或生物液体（任何TRIZOL或类似产品可以裂解的样品）中提取到总RNA（含microRNA）。

∙无需进行相分离，无需使用氯仿，无需沉淀过程。

∙提取到的RNA不含DNA,并可应用于Q-PCR，高通量测序等实验。

∙整个过程仅需10分钟。

Ver.1.0.9产品组成:50200RNA洗涤液1 室温40 ml 160 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNA洗涤液2室温12 ml 48 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇DNase I -20℃ 300μl x 1管（5U/μl） 300μl x 4管（5U/μl）DNA消化液室温 4 ml 16 mlRNase-free H2O 室温 6 ml 30 ml2号柱室温50个200个收集管（2ml）室温50个200个特性:1.样品来源：TRIZOL等类似试剂裂解的样品。

2.样品范围：≥17核苷酸。

3.RNA纯度：高质量的RNA可应用于高通量测序等敏感的下游实验。

4.RNA结合量：每个柱子可最多结合50μg的RNA。

试剂制备RNA洗涤液在使用之前一定要配好，添加好乙醇后在试剂瓶上做好标记！！！添加10ml或40ml的无水乙醇（95-100%）到40ml或160ml的RNA洗涤液1中。

添加48ml100%的乙醇（或52 ml95%的乙醇）到12ml的RNA洗涤液2添加192ml100%的乙醇（或208 ml95%的乙醇）到48ml的RNA洗涤液2操作步骤:整个操作步骤是由2个步骤组成：（I）样品裂解匀浆（I I）样品纯化（I）样品裂解匀浆此步骤主要参考TRIZOL等类似裂解试剂说明书的裂解液用量，以下给出我公司提供的可完美替换TRIZOL的TRIcom试剂用量作为参考。

总RNA提取试剂盒说明书货号：R1200规格：50T/100T产品内容：试剂盒组成R1200-50R1200-100保存有效期裂解液50ml100ml2-8℃一年漂洗液15ml15ml×2RT一年洗柱液50ml50ml×2RT一年RNase free ddH2O15ml15ml×2RT一年RNase free吸附柱50个100个RT一年RNase free收集管(2ml)50个100个RT一年操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。

b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。

c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。

用取样器吹打混匀。

d.细胞悬液：离心收集细胞。

每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。

e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。

弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。

离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。

2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。

4.2-8℃12000rpm离心10分钟。

RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。

5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液。

7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。

Trizol使用说明书一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、 ips （RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。

注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品 250°C烘烤3小时以上。

四、从组织中提取总RNA1) 液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/ml Trizol加入Trizol，转入离心管进行第2步操作。

RNA提取：用TaKaRa RNAiso Reagent试剂提取RNA步骤2007-12-10 13:52试验前准备的物品(1).试剂盒之外所需准备试剂：◆氯仿◆异丙醇◆75%乙醇（DEPC 处理水配制）◆RNase-free 水（制备方法：使用RNase-free 的玻璃瓶，向超纯水中加入DEPC 至终浓度0.01%（v/v），过夜搅拌后，高温高压灭菌。

(2).尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。

a）用0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12 小时。

b）然后在120℃下高压灭菌30 分钟以除去残留的DEPC。

RNA 实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。

(3) 用于RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60 分钟）或使用上述方法进行DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA 实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用0.1%的DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。

RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。

实验操作1. RNAiso Reagent 的使用量情况如下。

2. 实验样品的研磨和匀浆。

A. 贴壁培养细胞①倒出培养液，用1×PBS 清洗一次。

②每10 cm2生长的培养细胞中加入2 ml的RNAiso Reagent，水平放置片刻，使裂解液均匀分布于细胞表面并裂解细胞，然后使用移液枪吹打细胞使其脱落（对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮勺剥离细胞）。

③将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

④室温静置5 分钟。

B. 悬浮培养细胞①将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000 g 4℃离心2 分钟，弃上清。

②向每5×106个细胞中加入l ml的RNAiso Reagent。

③用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。

④室温静置5 分钟。

C. 动物组织、植物材料样品①将超低温冻结的RNA 提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（无明显的可见颗粒，如果没有研磨彻底会影响RNA 的收率和质量）。

天隆RNA提取仪GeneRotex 96 SOP1. 简介该文档旨在提供天隆RNA提取仪GeneRotex 96的操作步骤(SOP)。

本SOP详细介绍了该设备的使用方法，以确保正确的样品处理和RNA提取。

2. 设备准备在使用天隆RNA提取仪GeneRotex 96之前，请确保以下设备准备就绪：- GeneRotex 96主机- RNA提取试剂盒- 96孔板和孔板盖- 离心机- 手套- 试管架和试管夹- 显微镜3. 操作步骤步骤1: 样品准备1. 使用手套，并确保工作区域清洁。

2. 准备待处理的样品，如血液、组织或细胞。

3. 将样品置于2 mL试管中。

步骤2: 样品预处理1. 使用试管架将样品置于GeneRotex 96的样品盒中。

2. 添加适量的细胞破解缓冲液。

3. 转移样品盒至样品室中，并关上盖子。

4. 调节设备设置，如处理时间和温度，以适应样品类型。

步骤3: RNA提取1. 将RNA提取试剂盒中的试剂充分搅拌均匀。

2. 将所需试剂按照试剂盒说明书中的指导添加到每个孔中。

3. 将GeneRotex 96的孔板盖关闭，确保密封良好。

4. 设定RNA提取程序并启动。

步骤4: 反向转录1. 提取的RNA样品可用于后续的反向转录步骤。

按照反向转录试剂盒说明书中的指导进行操作。

步骤5: 结果分析1. 使用离心机将PCR产物离心以去除残留液体。

2. 打开孔板盖，将PCR产物转移到96孔板中。

3. 使用显微镜检查样品是否正确提取。

4. 注意事项- 在操作过程中务必遵守安全操作规范，如佩戴手套并确保工作区域清洁。

- 根据样品类型和要求，适当调整设备设置，以保证最佳的RNA提取。

- 详细阅读设备和试剂盒的说明书，并按照要求操作。

以上为天隆RNA提取仪GeneRotex 96的操作步骤(SOP)的简要介绍。

更详细的操作细节和步骤请参考设备和试剂盒的说明书。

杭州昊鑫生物科技股份有限公司 htpp://RNApure Total RNA KitRNApure高纯总RNA快速提取试剂盒目录号：RN03试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成50次(RN0302)裂解液RL（4℃避光）50 ml去蛋白液RE 25ml漂洗液RW10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 10 mlRNase-free吸附柱RA 50个收集管（2ml）50个本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：1.因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

裂解液RL可以常温运输，收到后4℃避光可长期保存，常温保存3个月也不影响使用质量。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：改进的异硫氰酸胍/酚一步法（TRIzol法）裂解细胞和灭活RNA 酶，然后总RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。

2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好，纯度高和离心柱方便快捷的优点，不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程，RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3.独有的RL裂解液配方，可以有效的消除基因组污染。

4.多次漂洗去蛋白过程，提取RNA纯度更高。

5.有效的去除了5S在总RNA中含量，提高了纯度。

注意事项1.第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.本试剂盒抑制RNA酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。

3.裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。

TRIpure ReagentTRIpure Reagent总RNA提取试剂目录号：RN01试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成(RN0101) (RN0102)TRIpure （4℃避光）50 ml 100 ml储存事项：TRIpure 在室温下能稳定保存12个月。

尽管如此，为达到最佳效果，我们建议保存在2~8°C的环境下。

重要提示：本品中含有苯酚，具有毒性和腐蚀性。

如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。

使用本制品时应穿戴防护物品，如防护服装、手套、眼罩、面罩等。

如果不小心接触，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

注意事项：1.样品用TRIpure匀浆后，如果不即刻加入氯仿之前，，置于-70°C下可放置一个月以上。

保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2-8°C可以保存一周，-20°C条件下可以保存1年。

RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。

2.若下游实验对DNA非常敏感，建议用RNase free DNase I（货号：RN45）对RNA进行处理。

3.自备试剂：氯仿、异丙醇（新开封或提取RNA专用）、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、RNase free water或者DEPC处理过的水。

4.本公司生产TRIpure Reagent质量优异，可以完美替代Invitrogen的TrizolReagent。

提取质量和下游实验完全一样。

已经销售8年数万瓶。

从无质量问题。

客户如果购买本公司TRIpure Reagent证明不能替换Invitrogen的Trizol，无条件退货，并3倍销售价格赔偿。

RNA抽提操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：用TRIpure 抽提RNA时要戴手套和护眼罩。

避免接触皮肤和衣服。

在化学通风橱完成操作。

避免呼吸道吸入。

如无特殊说明，所有的操作应该在在15~30°C 的室温条件下。

一、Total RNA的提取1)吸弃Dish中培养液，每个Dish中加入1 ml Trizol试剂，轻轻吹打，室温放臵5 min，充分裂解细胞；2)将样本转移至1.5 ml Eppendrof管中；3)每个1.5 ml Eppendrof管中加入200 ul氯仿，剧烈振荡混匀30秒。

放臵3 min使自然分相；4)12000 rpm，4℃离心15 min；5)将上清液（400－500 ul）小心的转移到无RNase的1.5 ml Eppendrof管中，加入500 ul（等体积）异丙醇，颠倒混匀，室温放臵15 min；6)12000 rpm，4℃离心10 min；7)小心弃去上清，留下白色沉淀；8)每个离心管中加入1 ml 75%乙醇（0.1% DEPC水配制），剧烈振荡使沉淀溶解。

12000 rpm，4℃离心5 min；9)弃去75%乙醇，重复步骤8。

尽可能彻底弃去上清，在吸水纸上扣干。

此步骤中沉淀容易漂起，注意避免倒弃沉淀。

10)管口打开，通风柜或37烘箱内晾干；11)沉淀用40 ul 0.1% DEPC水溶解(根据沉淀量调整加入水的量)；12)取1～2 ul在Nanodrop分光光度计上测定RNA浓度。

注意吸取前尽量混匀，保证RNA溶液均一。

二、逆转录根据逆转录所需RNA量，将各RNA样品用溶剂（DEPC水）调至相同浓度，然后取相同体积进行逆转录反应，以尽量避免加样误差。

逆转录方法参照逆转录试剂盒说明书，不同试剂盒方法不一样。

以下为Taka ra逆转录试剂盒说明书：反应体系中包含逆转录酶、oligo dT引物、6聚体随机引物和5×缓冲液以及水和RNA模板。

三、荧光定量PCR定量PCR分SYBR和Taqman两种方法，一般使用SYBR即嵌合荧光检测法。

嵌合荧光检测法原理：SYBR Green I与双链DNA结合后发出荧光，实验时可以实时监测反应体系中的SYBR Green I荧光强度，达到检测PCR产物扩增量的目的。

磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒使用说明书原理及用途本试剂盒利用磁珠的特殊分离作用，采用独特的缓冲液系统，从组织研磨液、血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、尿液或各种病毒保存液中分离纯化高质量病毒DNA或RNA。

特殊包埋的磁珠，在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，而当条件改变时，磁珠释放吸附的核酸，能够达到快速分离纯化核酸的目的。

提取的病毒DNA/RNA得率高、纯度高、质量稳定可靠。

使用本试剂盒纯化的核酸可适用于各种常规操作，包括反转录、PCR、RT-PCR、荧光定量PCR、荧光定量RT-PCR等各种下游实验。

试剂盒组成储存条件1. 所有缓冲液在室在温条件下（15–25℃）保存。

2. 在原始状态下，Carrier RNA冻干粉可在室温条件下储存至有效期；已配好的工作液时必须按照“Carrier RNA工作液的配制”要求进行配制、储存、使用。

3. 有效期：1年样品处理1.组织样品处理：每份组织分别从三个不同的位置称取样品约1g，用手术剪剪碎混匀后取0.05 g于研磨器中研磨，加入1.5 mL生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液用于检测。

2.排泄物样品处理：取约0.05g排泄物于1.5 mL灭菌离心管中，加入1mL生理盐水涡旋振荡，8000 rpm离心2 min，取上清液用于检测。

3.其它液体样品：直接取上清液用于检测注意事项（请务必在使用本试剂盒之前仔细阅读）1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的核酸片段较小且提取量降低。

2．若缓冲液RLCK中有沉淀，可于37℃水浴重新溶解，摇匀后使用。

3．需要用户自行准备的试剂：生理盐水、异丙醇、无水乙醇。

4．实验前应仔细阅读说明书，在提取核酸时提前配制缓冲液RLCK、Carrier RNA工作液、漂洗液PWI和漂洗液PWII工作液。

缓冲液的配制1．缓冲液RLCK使用前应加入5 mL异丙醇，并在瓶签上勾选已配制标识，以方便操作时确认。

RNA的提取方法RNA提取是生物学中一项非常重要的实验技术，它可以用于研究RNA在生物体内的表达以及功能调控。

RNA提取的方法有多种，下面将介绍一些常用的RNA提取方法。

1.总RNA提取：总RNA提取是最常用的RNA提取方法之一，它可以提取细胞或组织中的所有RNA种类，包括mRNA、rRNA和tRNA等。

总RNA提取的步骤包括细胞或组织的裂解、蛋白酶处理、RNA溶液的提取和纯化等。

提取时可以使用商业化的总RNA提取试剂盒，也可以自制试剂进行提取。

2.mRNA提取：mRNA是总RNA中占比相对较小的一部分，它包含了大部分的转录信息。

mRNA的提取主要是通过使用寡聚dT寡核苷酸的亲和浸润材料，富集含有poly(A)尾的RNA分子。

提取步骤包括细胞裂解、磁珠富集和纯化等。

3. miRNA提取：miRNA是一类长度较短的非编码RNA，具有多种生物学功能。

miRNA的提取相对较为复杂，步骤包括细胞裂解、蛋白酶处理、有机溶剂萃取、硅胶膜纯化和乙酸乙酯沉淀等。

商业化的miRNA提取试剂盒则简化了这一过程。

4.胚胎RNA提取：胚胎RNA提取主要适用于研究早期胚胎发育过程中的基因表达变化。

提取步骤包括选择合适的胚胎发育阶段、胚胎裂解、RNA的提取和纯化等。

在这个过程中，需要注意减少RNA的降解，因为胚胎RNA含有RNA酶。

5.组织RNA提取：组织RNA提取是为了研究不同组织中特定基因的表达差异。

提取组织RNA的步骤包括组织的裂解、蛋白酶处理、RNA的提取和纯化等。

组织RNA的含量通常较少，需要采取额外的措施来提高RNA的得率。

6.体液RNA提取：体液RNA的提取用于研究循环系统或分泌系统中的RNA信息。

体液RNA的提取步骤包括样本的离心、细胞裂解、RNA的提取和纯化等。

一般情况下，体液RNA的浓度较低，因此需要使用高敏感的RNA提取方法。

总的来说，RNA提取是RNA研究的基础，根据不同的研究目的和样本类型选择合适的RNA提取方法非常重要。

Trizol法使用步骤一、分离纯化的基本原理研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化RNA。

RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。

Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

二、用户需自备的试剂和材料无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf管（RNase-free）、Tips（RNase-free）三、准备工作RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。

它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。

用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与RNA制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。

RNase的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。

一般情况下采用用DEPC(焦炭酸二磷脂，一种RNase抑制剂)配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。

取RNase-free的物品时必须戴手套。

1、料制品的处理尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。

对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。

处理步骤如下：1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。

注意：DEPC为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。

2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入DEPC水溶液，使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。

3）在通风柜中室温处理过夜。

4）将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯，高温高压蒸气灭菌至少30分钟。

5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。

置于干净处备用。

2、璃玻和金属物品250°C烘烤3小时以上。

血液RNA提取方法1.准备工作-清洁实验台面，穿戴好实验室安全装备。

- 准备所需的试剂和器材，包括RNA提取试剂盒、漂白液、异丙醇、1.5 ml离心管，离心机等。

2.血液采集-使用无菌的针头和注射器采集血液样本，将血液保存在无菌离心管中。

-如需处理大量样本，可以使用血液采集管，一次采集多个样本。

3.血液预处理- 将采集到的血液样本倒入1.5 ml离心管中，并加入等体积的漂白液。

-轻轻颠倒离心管，使漂白液和血液充分混合。

4.混合液离心-将混合液置于离心机中，以最大速度离心10分钟，将红细胞沉淀在底部。

5.上清液转移- 小心地用吸管或移液器将上清液转移到新的1.5 ml离心管中，避免沉淀带入。

-上清液中含有白细胞和血小板。

6.细胞溶解-加入等体积的溶解缓冲液到上清液中，充分混合均匀。

-将样本在室温孵育10分钟，使细胞溶解。

7.RNA沉淀-向离心管中加入等体积的异丙醇，轻轻颠倒离心管混合均匀。

-将混合液置于-20℃的冰箱中冷藏30分钟，使RNA沉淀。

8.离心沉淀-将样品置于离心机中，以最大速度离心10分钟，使RNA沉淀在离心管底部。

9.清洗RNA沉淀-轻轻将上清液倒掉，并用70%的乙醇洗涤RNA沉淀。

-注意避免触碰RNA沉淀，以免影响后续的实验分析。

10.干燥和溶解RNA-将离心管打开，将离心管放入干燥器中，使RNA沉淀完全干燥。

- 加入适量的RNase-free水或缓冲液溶解RNA沉淀，使其完全溶解。

11.RNA质量和浓度测定-使用纳米分光光度计或其他方法测定RNA的浓度和纯度。

-确保提取的RNA质量好，以获得准确的实验结果。

12.存储RNA样品- 将提取的RNA样品分装到RNase-free离心管中，并存储在-80℃的冰箱中，避免RNA降解。

总RNA提取一、实验材料及作用原理1，Trizol主要成分：苯酚，8-羟基喹啉，异硫氰酸胍，β-巯基乙醇Trizol 法提RNA时，加入氯仿RNA在上层水相，DNA及蛋白质在下层有机相中（也有人说是在中间层和有机相中）。

酚氯仿法提取DNA时：提取试剂Tris 饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1à主要成分苯酚，氯仿，异戊醇用酚氯仿法提取DNA时，DNA出现在水相中，DNA出现在不同位置的原因是Trizol方法是通过剧烈变性，导致基因组DNA和核蛋白，如核小体，发生共沉淀，因此，加入有机溶剂萃取后，基因组DNA不会溶解，可能会出现在沉淀或者两相之间的界面。

而游离的RNA，以及部分DNA碎片则会保留在水相中。

TRIZOL是一种新型总RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA；TRNzol可保持RNA完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物。

异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，其主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白/核酸物质解聚得到释放。

酚可有效的变性蛋白质，但是它不能完全抑制RNA酶活性，因此Trizol中还加入了8-羟基喹啉、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNAase。

在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA 在上层水相中，取出水相后，用异丙醇沉淀可回收RNA，用乙醇沉淀中间层可回收DNA，用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。

2，异丙醇的作用是通过羟基的疏水作用使得RNA链中的亲水基团收到保护，等同于沉淀。

因为RNA和某些杂质不溶于异丙醇，所以用乙醇来沉淀去盐和有机溶剂。

3，D EPC(Diethyl pyrocarbonate)，中文名为焦碳酸二乙酯。

分子式为C6H10O5，分子量为162.14。

是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。

通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性，常用于生物实验中RNA的提取等。

DEPC37℃溶于水中，处理12h，然后120℃高温高压灭菌30min。

EASYspin Plus Complex Plant RNA KitEASYspin Plus多糖多酚/复杂植物RNA快速提取试剂盒目录号：RN53适用范围：适用于快速提取植物组织细胞总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等。

试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN5301)裂解液CLB 室温50 ml裂解液RLT Plus 室温25 ml去蛋白液RW1 室温40 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 ml基因组DNA清除柱和收集管室温50套RNase-free吸附柱RA和收集管室温50套本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：1.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。

2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

注意事项1.所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.需要自备β-巯基乙醇，乙醇，研钵(可选)。

3.样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。

开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。

4.裂解液CLB和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。

若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5.关于DNA 的微量残留:一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的EASYspin Plus RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。