核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述

核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。

2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。

3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。

4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。

二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。

核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。

DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。

酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。

盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。

RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。

Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。

核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。

紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。

A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。

琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。

大肠杆菌菌液。

2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。

酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。

无水乙醇、75%乙醇。

3M 醋酸钠（pH 52）。

Trizol 试剂。

异丙醇。

RNA 酶抑制剂。

琼脂糖。

50×TAE 电泳缓冲液。

核酸染料（如 EB 或 GelRed）。

核酸的分离纯化技术从细胞中提取核酸后，仍混杂着蛋白质、多糖和各种大小分子核酸同类物。

除去这些“杂质”的过程，也就是核酸提纯过程。

在核酸的分离纯化时，为防止核酸大分子的变性降解，必须在0～4℃的低温条件下操作。

核酸酶的水解作用，是过去制备具有活性核酸大分子的严重障碍，现普遍采用加入去污剂或加入EDTA、8-羟基喹啉、柠檬酸钠以除去核酸酶的激活剂Mg2+，就可以抑制核酸酶的活性，保证在提纯过程中核酸大分子的完整。

关于核酸分离纯化阶段中除去多糖、蛋白质及不同类型核酸之间分离的一些方法，分别介绍如下：（1）肝糖元、淀粉及粘多糖，由于其物理化学性质与核酸有许多相似之处，常在提取液中残存下来。

除去的方法常有：①取材前尽量减少组织中多糖的含量，如先使动物饥饿数天然后杀死，可使细胞内肝糖元大大减少。

②加入淀粉酶，将大分子多糖分解为小分子，在以后纯化步骤中逐渐被除去。

③在浓磷酸盐存在下，以2-甲氧基乙醇抽提核酸提取液，使多糖溶于下层水相，核酸在上面有机层中。

④以钙盐沉淀DNA，再以草酸钾处理，使之形成DNA钾盐回收，然后用离子交换法吸附DNA，使之与多糖分离。

（2）蛋白质的除去：由于核酸在细胞内以核蛋白体形式存在，不论采用哪种方法提取核酸，蛋白质都不同程度地存在于体系中。

因此，除去蛋白质是核酸分离纯化不可避免的步骤。

常用方法有下列几种：①加入去污剂如硫酸十二脂钠，从提取到分离纯化各阶段均可反复使用此法。

去污剂与氯仿法或苯酚法结合使用，效果更加理想。

②氯仿-戊醇或辛醇对提取液摇荡抽提，蛋白质在氯仿-水界面形成凝胶，离心后除去，核酸留在水溶液中。

此法在分离纯化中也常反复使用。

③苯酚水溶液抽提，在对氨基水杨酸等阴离子化合物存在下，DNA或RNA都可以进入水相，蛋白质则沉淀于酚层，然后取水相加入乙醇或2-乙氧基乙醇沉淀RNA 或DNA，残余的酚可用葡聚糖凝胶G-10或G-25除去。

（3）不同类型核酸的分离：两种类型核酸的制备过程中，DNA制品中混杂着少量RNA或RNA制品中混杂着少量DNA是经常发生的。

核酸的提取与鉴定实验报告核酸的提取与鉴定实验报告引言：核酸是生命的基础，它存在于细胞的核内，承载着遗传信息的传递和表达。

在现代生物学研究中，核酸的提取与鉴定是非常重要的实验步骤。

本实验旨在探究核酸提取的方法以及鉴定核酸的质量和纯度。

一、核酸提取方法核酸的提取方法有多种，本实验采用了常用的酚-氯仿法。

首先，将待提取的细胞或组织样品加入细胞裂解液中，通过离心将细胞碎片沉淀下来。

然后，使用酚和氯仿进行提取，酚层中含有核酸和脂质，氯仿层中含有蛋白质。

通过离心将酚层和氯仿层分离，进一步提取纯净的核酸。

二、核酸的鉴定1. 纯度检测核酸的纯度是指核酸溶液中核酸与其他杂质的比例。

常用的纯度检测方法有比色法和光谱法。

本实验中使用了光谱法，即通过测量核酸溶液的吸光度来评估其纯度。

纯度越高，吸光度比值（A260/A280）越接近1.8。

实验结果显示，所提取的核酸样品的纯度在可接受范围内。

2. 浓度测定核酸的浓度是指单位体积核酸溶液中核酸的含量。

浓度测定常用的方法有比色法和荧光法。

本实验中采用了比色法，即通过比较核酸溶液的吸光度与标准曲线的关系来确定核酸的浓度。

实验结果显示，所提取的核酸样品的浓度为Xμg/μl。

3. 碱基组成分析核酸的碱基组成是指核酸中腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）的相对含量。

碱基组成分析可以通过核酸测序技术来完成。

本实验中使用了Sanger测序技术，通过测序结果可以确定所提取核酸的碱基组成。

4. 凝胶电泳分析凝胶电泳是一种常用的核酸分析方法，可以根据核酸的大小和电荷来分离核酸。

本实验中使用琼脂糖凝胶电泳，将提取的核酸样品与DNA分子量标准品一同加载到琼脂糖凝胶槽中，通电分离。

通过观察凝胶上的DNA条带，可以初步判断核酸的大小和纯度。

结论：通过本实验，我们成功提取了核酸样品，并进行了一系列的鉴定实验。

通过纯度检测、浓度测定、碱基组成分析和凝胶电泳分析，我们确定了所提取核酸的质量和纯度。

核酸的分离纯化及鉴定技术生化分析描述一、核酸的分离纯化技术1.超声破碎法超声破碎法是一种通过超声波的振动作用破碎细胞膜，释放细胞内的核酸分子的方法。

该方法操作简便，效果较好。

2.酚-氯仿提取法酚-氯仿提取法是一种经典的核酸提取方法，通过酚和氯仿相间重复萃取的方法，将细胞或组织中的核酸分子提取到有机相中，然后用酒精沉淀。

3.离心沉淀法离心沉淀法是利用不同物质在不同离心力下沉降速度的不同，将核酸从其他组分中分离出来的方法。

可通过高速离心使核酸沉淀到底部，将上清液中的其他杂质倒掉，最后用缓冲液重悬核酸。

4.配对离心法配对离心法是利用核酸的碱基配对性质，在特定的条件下使目标DNA 与特异性探针配对，然后通过离心将核酸-探针复合物从其他杂质中分离出来。

这种方法常用于核酸的富集和寡核苷酸修饰位点的分析。

二、核酸的鉴定技术1. 紫外-可见分光光度法（UV-Vis）紫外-可见分光光度法是通过核酸分子在紫外光或可见光波长范围内的吸收特性来确定其存在和浓度的方法。

根据核酸中含有的吸收波长为260 nm处的碱基特征吸光峰，可以判断核酸的纯度和浓度。

2.电泳分析法电泳分析法是通过核酸分子在电场中的迁移速率和特定条件下的尺寸分离效应来分析核酸的方法。

主要包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种方法。

核酸经电泳后可以观察到DNA或RNA在凝胶中的特征性带状图案，确定其分子大小、纯度和带电性。

3.PCR（聚合酶链式反应）PCR是一种常用的核酸鉴定技术，通过特定引物和聚合酶的作用，在体外进行核酸的扩增以达到检测目的。

PCR可用于快速检测目标DNA的存在与否，以及定性和定量分析。

4.基因测序技术基因测序技术是指利用测序反应将核酸序列信息转化为比特（通常指二进制），然后通过计算机软件分析的方法对核酸序列进行鉴定。

常用的基因测序技术有dideoxy测序和串联反应测序。

三、应用核酸的分离纯化及鉴定技术广泛应用于生物医学研究、遗传学、分子生物学、基因工程和疾病诊断等领域。

一、实验目的1. 熟悉核酸提取、纯化及鉴定的基本原理和方法。

2. 掌握使用紫外分光光度计测定核酸浓度和纯度的技术。

3. 了解核酸的组成成分，包括DNA和RNA，并学会区分它们。

4. 鉴定核酸的完整性。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA两种。

DNA主要存在于细胞核中，携带遗传信息；RNA则主要存在于细胞质中，参与蛋白质合成等生命活动。

1. 核酸提取：利用细胞破碎、盐析、有机溶剂抽提等方法，将核酸从细胞或其他生物材料中提取出来。

2. 核酸纯化：通过离心、凝胶电泳、柱层析等方法，去除提取过程中混入的杂质，得到纯净的核酸。

3. 核酸鉴定：利用紫外分光光度计测定核酸的浓度和纯度；通过琼脂糖凝胶电泳观察核酸的分子量大小和完整性；通过核酸序列分析确定核酸的种类和碱基序列。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌细胞、质粒DNA、RNA提取试剂盒、琼脂糖、TAE缓冲液、DNA Marker、DNA电泳试剂盒等。

2. 实验仪器：紫外分光光度计、凝胶成像系统、PCR仪、电泳仪、离心机、冰箱等。

四、实验步骤1. 核酸提取：- 将大肠杆菌细胞用超声波破碎。

- 加入RNA提取试剂盒中的试剂，进行细胞裂解和核酸释放。

- 离心分离细胞碎片和核酸。

- 收集上清液，即为提取的核酸。

2. 核酸纯化：- 将提取的核酸用乙醇沉淀。

- 离心收集沉淀，用无菌水洗涤沉淀。

- 离心收集沉淀，即为纯化的核酸。

3. 核酸鉴定：- 浓度和纯度测定：- 将纯化的核酸用紫外分光光度计测定A260/A280值，计算核酸的浓度和纯度。

- 分子量大小和完整性鉴定：- 将纯化的核酸进行琼脂糖凝胶电泳。

- 用DNA Marker作为参照，观察核酸的分子量大小和完整性。

- 核酸种类鉴定：- 对提取的核酸进行PCR扩增，检测DNA和RNA的存在。

五、实验结果与分析1. 浓度和纯度测定：- 核酸A260/A280值为1.8，说明核酸纯度较高。

核酸分离纯化的技术原理核酸提取是核酸检测实验的第一步，也是最关键的一步。

核酸提取的纯度、产量和质量是影响下游实验的关键。

核酸提取主要有两个步骤，分别是裂解和纯化，其中，裂解的目的是通过各种方法裂解细胞，将核酸释放到溶液中，纯化的目的则是将核酸分子从裂解液中特异性地分离出，从而避免裂解液中原有的蛋白分子、脂类、糖类、多肽、其他有机或无机分子对后续核酸检测实验的干扰。

在核酸提取过程中还应遵循以下原则：保证核酸分子一级结构的完整性；去除其他污染分子。

一、液相核酸分离纯化技术（一）胍硫氰酸酚-氯仿提取法盐类通常是核酸样本中最常见的杂质成分，因此，在将核酸样本进行下游处理和分析前，通常需要去除盐类成分。

因此，通常需一或多个分离和（或）纯化步骤来使样本脱盐。

核酸纯化的常规步骤包括细胞裂解，该步骤通过破坏细胞结构而形成细胞裂解液，同时灭活包括DNA酶和RNA酶在内的细胞内源性核酶，并最终从细胞碎片中获得纯净的核酸样本。

有机溶剂-苯酚-氯仿提取法正是基于上述原理最常见的核酸经典提取方法之一。

苯酚-氯仿-异丙醇按照一定比例混合后（即：25∶24∶1）可抵制RNA酶活性，从而克服单用苯酚无法抑制RNA酶活性的不足。

蛋白、脂质、碳水化合物和细胞碎片可通过提取苯酚和氯仿有机试剂混合物的水相而去除。

含有DNA样本的水相可通过加入2∶1或1∶1比例的乙醇或异丙醇沉淀，最后，沉淀下来的DNA用70%乙醇洗涤并最后溶解于TE缓冲液或无菌去离子水中。

异硫氰酸胍（guanidinium isothiocyanate）用于RNA提取的方法最早见于1977年，但是，由于该方法比较繁琐，后来逐步被称之为胍硫氰酸酚-氯仿提取法（guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction）代替，该方法可一步完成RNA提取。

其基本原理是：硫氰酸胍是蛋白质强变性剂，能裂解组织细胞，释放RNA，抑制RNA酶的活性，同时与RNA形成可溶性复合物，经过酚-氯仿抽提，使RNA 与组织中的DNA和蛋白质分离开，达到分离提取总RNA的目的。

第1篇一、实验目的1. 掌握核酸分离与鉴定的原理和方法。

2. 了解核酸的组成和结构。

3. 学会使用实验仪器和试剂，进行核酸的分离与鉴定。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。

DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成和调控。

核酸的分离与鉴定是分子生物学研究的基础。

核酸分离与鉴定主要包括以下步骤：1. 核酸提取：利用细胞破碎技术，将细胞内的核酸释放出来。

2. 核酸纯化：去除杂质，得到纯净的核酸。

3. 核酸鉴定：通过物理、化学或生物学方法，鉴定核酸的种类和结构。

本实验以酵母细胞为实验材料，采用碱法提取RNA，并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法进行鉴定。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母细胞2. 试剂：0.04mol/L NaOH溶液、酸性乙醇溶液、琼脂糖凝胶、缓冲液、核酸染料、DNA/RNA Marker等四、实验步骤1. 核酸提取（1）称取1g干酵母细胞，加入2ml 0.04mol/L NaOH溶液，研磨至匀浆状。

（2）加入4ml 0.04mol/L NaOH溶液，混匀，转移至离心管中。

（3）沸水浴加热30min，冷却后离心（2000r/min，15min）。

（4）取上清液，加入等体积的酸性乙醇溶液，混匀，静置2h。

（5）离心（2000r/min，15min），弃去上清液。

（6）加入70%乙醇洗涤沉淀，离心（2000r/min，15min），弃去上清液。

2. 核酸鉴定（1）紫外分光光度法：取适量RNA溶液，在260nm和280nm波长下测定吸光度值，计算RNA浓度。

（2）琼脂糖凝胶电泳：将提取的RNA与DNA/RNA Marker混合，加样至琼脂糖凝胶孔中，电泳（100V，30min）。

观察电泳结果，判断RNA的纯度和完整性。

五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定结果显示，RNA浓度为0.5mg/ml。

2. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，RNA条带清晰，无杂质带，表明RNA纯度和完整性良好。

核酸提取与纯化1. 引言核酸提取与纯化技术是分子生物学研究中的一项基本操作。

随着分子生物学研究的深入，核酸提取与纯化技术变得越来越重要。

通过提取和纯化核酸，可以从生物样本中分离出DNA和RNA，并用于后续的实验分析，如PCR、测序、基因克隆等。

本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项，以帮助读者更好地理解和应用这一技术。

2. 核酸提取与纯化的基本原理核酸提取与纯化的基本原理是利用不同物质间的化学和物理性质的差异实现核酸的分离和纯化。

一般情况下，核酸提取与纯化的基本步骤包括细胞破碎、核酸溶解、核酸分离、纯化和沉淀。

下面将逐步介绍每个步骤的原理。

2.1 细胞破碎细胞破碎是核酸提取与纯化的第一步，目的是将细胞破坏，释放出细胞内的核酸。

常见的细胞破碎方法包括机械破碎、化学破碎和酶解。

机械破碎是通过物理力量（如搅拌、振荡、高压等）破坏细胞结构，使细胞内的核酸释放。

化学破碎则是利用化学物质（如酸、碱、溶剂等）破坏细胞膜和核酸结构，使核酸溶解。

酶解则是利用特定酶（如蛋白酶、核酸酶等）降解细胞内的蛋白质和核酸，使核酸得以释放。

2.2 核酸溶解核酸溶解是在细胞破碎后，将核酸从其他组分中溶解出来。

核酸的溶解需要满足一定的条件，如适当的温度、pH值和离子浓度等。

常见的核酸溶解缓冲液包括Tris-HCl缓冲液、EDTA缓冲液和含有盐的缓冲液等。

这些缓冲液能够提供适当的pH值和离子浓度，有利于核酸的稳定和溶解。

2.3 核酸分离核酸分离是将溶解的核酸与其他杂质分离的过程。

核酸的分离可通过差速离心、柱层析和电泳等方法实现。

差速离心是利用离心力将核酸与其他物质分离的方法。

由于核酸的分子量较大，其在离心过程中沉降速度较慢，从而与其他物质分离。

柱层析则是利用柱状填料的吸附、分配和排除等原理，通过溶液在柱中的流动进行分离，将核酸与其他组分分离。

电泳是利用核酸在电场中的迁移速度的差异进行分离的方法。

2.4 核酸纯化核酸纯化是将分离的核酸进一步纯化，去除可能存在的杂质。

核酸提取与纯化引言核酸提取与纯化是生物学研究中常用的操作步骤之一。

核酸提取是指从生物样本中分离出DNA或RNA分子，纯化则是指将提取得到的核酸分子除去杂质，获得纯净的核酸样品。

本文将介绍核酸提取与纯化的基本原理、常用方法以及注意事项。

核酸提取原理核酸提取的基本原理是利用生物样本中DNA和RNA分子与其他组分（如蛋白质、细胞壁等）之间的化学或物理性质的差异，将核酸分子从样本中分离出来。

常见的提取方法有有机溶剂法、盐析法和离心法等。

有机溶剂法有机溶剂法是一种常用的核酸提取方法。

其原理是利用有机溶剂（如酚-氯仿混合液）与生物样本中的其他组分之间的亲和性差异，将核酸分子从样本中提取出来。

这种方法操作简单，适用于提取DNA和RNA。

具体操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞培养物或组织样本。

2.加入细胞裂解缓冲液，破坏细胞膜、核膜等结构，释放核酸分子。

3.加入酚-氯仿混合液，与细胞裂解液混合，形成两相体系。

4.离心分离两相，核酸分子会在有机相中分配到有机相中，而其他杂质会在水相中。

5.取出有机相，加入异丙醇或乙醇等沉淀剂，沉淀核酸分子。

6.离心沉淀，弃去上清液。

7.用乙醇洗涤沉淀，去除残留的盐和有机溶剂。

8.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。

盐析法盐析法是利用核酸分子与盐溶液中的离子交互作用的原理进行分离。

该方法适用于高含量的核酸样本（如DNA或RNA）。

其操作步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。

2.加入适量的盐溶液，使盐浓度达到一定程度。

3.离心分离沉淀，核酸分子会与高浓度盐溶液结合形成沉淀，而其他杂质会在上清液中。

4.取出沉淀，用盐溶液洗涤核酸，去除杂质。

5.干燥沉淀，加入适量的去离子水溶解核酸。

离心法离心法是一种快速分离核酸的方法。

其原理是利用离心力将核酸分子从样本中沉淀下来。

离心法适用于小样本量和快速提取的情况。

具体步骤如下：1.准备生物样本，如细胞裂解液。

2.加入高盐缓冲液，增加核酸与其他组分之间的亲和性差异。

核酸的分讲义离纯化及鉴定技术生化分析详解核酸的分离纯化及鉴定技术在生化分析领域具有重要的应用价值。

核酸是生物体内重要的生物大分子，它们具有保存、传递和表达遗传信息的功能。

为了研究核酸的结构和功能，需要对其进行分离、纯化和鉴定。

本文将详细介绍核酸的分离纯化和鉴定技术的生物化学分析。

1.核酸的提取与分离核酸提取是获得核酸样品的第一步，通过破碎细胞膜和细胞壁来释放核酸。

核酸的提取方法主要包括酸性酚/氯仿提取法、盐酸酚/氯仿提取法以及商业化的核酸提取试剂盒等。

2.核酸的纯化核酸提取后，常常需要对核酸进行纯化。

纯化目的是去除杂质，使核酸得到高纯度、高浓度、完整和可靠的分离。

核酸纯化方法主要有：凝胶柱层析、离心柱层析、沉淀、电泳、凝胶电泳纯化、离心纯化、溶液法纯化等。

3.核酸的鉴定核酸的鉴定一般包括酶切鉴定、PCR扩增鉴定和测序鉴定等。

(1)酶切鉴定酶切鉴定是通过限制性内切酶作用分析核酸的序列和结构。

通过将样品与不同酶切加入，并经过酶切电泳后，观察电泳图的特征带，可以推测样品的核酸类型和纯度。

(2)PCR扩增鉴定PCR扩增鉴定是通过聚合酶链式反应（PCR）扩增特定片段的核酸。

通过选择特异的引物，可以扩增出目标核酸片段，从而确定核酸的存在和纯度。

(3)测序鉴定测序鉴定是通过测序技术研究核酸的序列。

常见的测序技术包括Sanger测序、下一代测序（NGS）和单分子测序等。

通过测序，可以确定核酸的准确序列，从而判断核酸的类型和功能。

整体而言，核酸的分离纯化及鉴定技术是生化分析中核心的内容。

通过这些技术，可以获得高纯度、高质量的核酸样品，并准确地鉴定核酸的存在和序列信息。

这些技术的应用广泛，包括基因组学、生物信息学、分子生物学、疾病诊断和药物研发等领域。

随着生化分析技术的不断发展，核酸的分离纯化及鉴定技术将越来越重要，为科学研究和生物医学领域的发展提供强有力的支持。

核酸分离鉴定实验报告核酸分离鉴定实验报告引言：核酸分离鉴定是一项重要的实验技术，广泛应用于生物学、医学和法医学等领域。

通过分离和鉴定核酸，我们可以了解生物体的基因组结构、基因表达以及遗传变异等信息，为研究生物学问题提供了有力的工具。

本实验旨在通过核酸分离鉴定的方法，对样本中的DNA进行提取、纯化和鉴定。

材料与方法：1. 实验所需材料：- 细胞样本：选择合适的生物样本，如人体组织、血液、植物叶片等。

- 细胞破碎缓冲液：含有细胞破碎酶和蛋白酶抑制剂的缓冲液。

- DNA提取缓冲液：含有离子、洗涤剂和蛋白酶的缓冲液。

- 乙酰酸：用于沉淀DNA。

- 乙醇：用于洗涤DNA。

- 离心管、离心机、恒温水浴等实验仪器。

2. 实验步骤：1）取适量的细胞样本，加入细胞破碎缓冲液，使细胞破碎释放DNA。

2）加入DNA提取缓冲液，与细胞破碎缓冲液中的DNA结合形成DNA-缓冲液复合物。

3）通过离心将DNA-缓冲液复合物沉淀到离心管底部。

4）去除上清液，加入乙酸使DNA沉淀。

5）离心沉淀，去除上清液。

6）加入乙醇洗涤DNA，去除杂质。

7）离心洗涤液，去除乙醇。

8）将离心管倒置晾干，使DNA干燥。

9）加入适量的无菌水溶解DNA。

结果与讨论：经过上述步骤，我们成功地从细胞样本中提取和纯化了DNA。

通过电泳分析，我们可以观察到DNA带状图谱，判断DNA的纯度和完整性。

在电泳图中，我们可以看到DNA分子呈现出明显的带状条带，条带的大小和形态可以反映DNA的大小和形态多样性。

同时，我们可以通过比对DNA的条带与已知DNA标准的条带，来确定DNA的分子量。

在实验过程中，我们需要注意以下几点：1. 细胞破碎缓冲液中的细胞破碎酶和蛋白酶抑制剂的浓度和作用时间要控制好，以充分破坏细胞膜并保护DNA的完整性。

2. DNA提取缓冲液中的离子浓度和pH值要适宜，以促进DNA与缓冲液的结合和沉淀。

3. 乙酸的加入量要适量，过多会导致DNA溶解，过少则不能有效沉淀DNA。

核酸的分离与识别一、实验原理分离提纯核酸的主要过程，一般先要经过以下几个步骤：①细胞组织的破碎；②解聚核蛋白并使蛋白质变性；③除去蛋白质和多糖等杂质；④抽提和沉淀核酸等。

破碎细胞的方法有物理法（如超声波、匀浆和组织捣碎等）、化学和生化的方法（如去污剂、蛋白质变性剂和溶菌酶等）。

本实验采用组织捣碎的方法，捣碎之前加入柠檬酸钠抑制DNA降解酶的作用。

在细胞核内，核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物——核糖核蛋白（RNP）和脱氧核糖核蛋白（DNP）形式存在的，利用在0.14mol/L盐溶液中RNP溶解而DNP溶解度最小的性质将两者分开。

另外，DNP能溶于水和高浓度盐溶液。

在核酸提纯的过程中，除去蛋白质是很关键的一步。

要除去蛋白质首先是使核蛋白解聚和蛋白质变性，常用的方法有：浓盐法（10%NaCI）、去污剂和有机溶剂法等。

本实验中，1.71mol/L的NaCl使蛋白质变性，而后用氯仿抽提除去蛋白质。

利用氯仿-异戊醇解聚分离蛋白质，从而分离DNA和蛋白质。

经上述分离纯化处理后的核酸盐溶液，再利用其不溶于有机溶剂的性质，使其在适当浓度的亲水有机溶剂（如乙醇）中成絮状沉淀析出。

二、仪器试剂(1)主要仪器电动组织捣碎机、大容量离心机、冰箱、具塞磨口玻璃锥形瓶、真空干燥器、烧杯等。

(2)主要试剂NaCI(0.1mol/L)、pH=7.0柠檬酸钠混合盐溶液(0.05mol/L)、NaCI溶液(1.71mol/L)、氯仿-异戊醇溶液(体积比为24:1)、95%乙醇、无水乙醇等。

三、实验步骤、现象与结果实验操作实验目的实验现象(1)猪脾细胞核的提取取猪肝40克，冰浴迅速剪成小块。

加80mL0.1mol/L NaCl和0.05mol/L、pH=7.0的柠檬酸钠混合液，在组织捣碎机内，用慢档捣碎3次，每次5s，间隔30s。

上述匀浆液以转速300/mim离心20min，收集沉淀(含细胞核)，弃去上清液。

冰浴猪肝或猪脾可以起到防止变质的作用，搅拌捣碎起到破坏细胞组织，使DNP释放出来。

核酸的提取、纯化和电泳检测摘要质粒是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。

提取和纯化质粒DNA的方法很多，目前常用的有：碱变性提取法、煮沸法、羟基磷灰石柱层析法、EB-氯化铯密度梯度离心法等等，其中碱变性法是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的，本实验采用碱变性法提取E.coli DH5α中Puc19质粒DNA，并通过RNase消化及酚-氯仿抽提除去质粒DNA溶液中的RNA以及RNase等一些可溶性蛋白，最后获得纯度较高的质粒DNA。

细菌基因组DNA呈环状裸露于拟核区，本实验中细菌染色体DNA的提取采用试剂盒的方式。

本实验的目的在于掌握碱变性法提取质粒DNA及染色体DNA提取的原理、各种试剂的作用和方法，掌握DNA的纯化方法，即用RNase消化RNA以及用酚、氯仿抽提法除去质粒中的蛋白质，学习并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化及纯度检测的实验原理，凝胶的制备及电泳方法及相应的方法操作。

关键词质粒DNA 碱变性提取法琼脂糖凝胶电泳细菌染色体DNA引言1.核酸分离纯化1.1总原则保证核酸一级结构的完整性化学损伤——缩短化学试剂作用时间，以减少其对核酸的损失；物理损伤——动作轻柔以减少机械剪切力；尽量低温操作以减少高温损伤；生物降解——加入相应酶抑制剂，防止生物降解排除其他分子的污染蛋白质——苯酚/氯仿/蛋白酶KRNA污染——RNase其他DNA——区别变性与复性有机溶剂——萃取、乙醇沉淀与洗涤金属离子——乙醇沉淀与洗涤1.2核酸纯化应达到的要求核酸样品不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子其他生物大分子的污染应降到最低程度排除其他核酸分子的污染1.3核酸提取的一般过程破碎细胞（防止核酸酶的作用）破碎抽提核酸(裂解细胞释放内容物)——关键步骤核酸的纯化除去杂质（蛋白质、脂类、核酸）4°C最佳和最简单；-70°C是长期保存的良好温度，为一次性保存；-20°C核酸样品的保存（主要条件时温度和介质）-TE缓冲液最常用2.质粒DNA的提取及纯化——碱变性提取法（碱裂解/变性法）RNase消化及酚-氯仿抽提2.1 质粒DNA的制备方法质粒(Plasmid)是独立存在于染色体外、能自主复制并能稳定遗传的一种环状双链DNA分子，分布于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，但在细菌细胞中含量最多。