核酸的分离提取及定量.

核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。

2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。

3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。

4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。

二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。

核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。

DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。

酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。

盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。

RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。

Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。

核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。

紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。

A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。

琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。

三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。

大肠杆菌菌液。

2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。

酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。

无水乙醇、75%乙醇。

3M 醋酸钠（pH 52）。

Trizol 试剂。

异丙醇。

RNA 酶抑制剂。

琼脂糖。

50×TAE 电泳缓冲液。

核酸染料（如 EB 或 GelRed）。

核酸提取原理及方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从细胞或组织中分离出核酸并净化的过程。

核酸提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。

一、核酸提取原理。

核酸提取的原理主要包括细胞破碎、核酸溶解和净化三个步骤。

首先，细胞膜和细胞壁需要被破坏，以释放细胞内的核酸。

其次，核酸需要被有效地溶解，使其能够被提取出来。

最后，通过净化步骤去除蛋白质、多糖和其他杂质，从而得到纯净的核酸样品。

二、核酸提取方法。

1. 酚氯仿法。

酚氯仿法是最常用的核酸提取方法之一。

其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性，将细胞裂解液中的蛋白质等杂质分离出去，从而得到纯净的核酸。

这种方法操作简单，适用于提取大量样品。

2. 硅胶柱法。

硅胶柱法利用硅胶膜对核酸的亲和力进行提取和分离。

通过将样品加入硅胶柱后，核酸能够与硅胶膜结合，而其他杂质则被洗脱掉。

这种方法提取的核酸纯度高，适用于对纯度要求较高的实验。

3. 磁珠法。

磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取新方法。

通过在磁珠表面修饰亲核酸的功能基团，使得核酸能够与磁珠结合。

利用磁场的作用，可以将核酸与磁珠分离出来，从而实现核酸的提取和纯化。

这种方法操作简便，且适用于高通量提取。

三、注意事项。

在进行核酸提取时，需要注意以下几点：1. 样品的质量和保存对提取结果有重要影响，因此在提取前需要确保样品的完整性和纯度；2. 根据不同的实验目的和样品特点选择合适的提取方法，以确保提取效果；3. 在操作过程中要注意无菌操作，避免外源性核酸的污染；4. 核酸提取后，应根据实验需求储存或立即进行下一步实验。

总结，核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，掌握核酸提取的原理和方法对于科研工作者来说至关重要。

不同的提取方法有着各自的特点和适用范围，选择合适的提取方法能够提高实验效率和结果的准确性。

在实验操作中要严格按照操作规程进行，确保提取的核酸样品质量和纯度。

分离纯化核酸时的注意事项：防止物理因素的降解：1.尽量简化操作步骤，缩短提取时间，以减少变性机会。

2.防止热变性，避免高温。

一般0-4℃。

3.防止机械剪切作用动作轻缓；搅拌温和；加山梨醇等增加渗透压。

防止化学因素的降解：1.避免强酸强碱作用，抽提液pH要保持在4-10之间。

2.保持提取液一定的离子强度，以调节核酸的溶解度和保持二级结构的稳定性。

防止核酸酶的降解防止DNA酶的降解：通常加入酶的抑制剂、蛋白质的变性剂和去垢剂来实现。

1.加入金属离子螯合剂抑制DNA酶2.去垢剂及某些RNase抑制剂，对DNA酶也有一定抑制作用。

防止RNA酶的降解：RNase很难抑制，且无处不在，汗液、唾液中均有。

很耐热，80℃处理15分钟不能灭活。

操作注意事项：1.带一次性手套、口罩；2.器皿试剂高压灭菌或用DEPC（乙二基焦炭酸）处理。

但含有Tris的试剂不宜用，因DEPC可与胺类迅速发生化学反应。

3.尽早除去蛋白质（含RNase）,并加抑制剂。

常用的抑制RNase活性的方法有：1.核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin,人胎盘中分离的一种蛋白）优点：效果好，不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。

使用注意事项：（1）置于含5mmol/L二硫苏糖醇（DDT）的50%甘油中，-20℃储存。

（2）最大活性的发挥要求有巯基试剂。

（3）冻融数次后应弃之不用。

（4）在变性裂解哺乳动物细胞提取RNA的初始步骤中不宜使用，在其后RNA纯化步骤中应用。

用酚抽提可除去蛋白质抑制剂，故纯化过程中应补加。

2．糖核苷复合物（vanadyl-ribinucleaside complex）由氧钒（IV）离子和4种核糖中的任意一种形成的复合物，是一种过渡态类似物，它能与多种RNase结合并几乎能百分百地抑制RNA酶的活性。

缺点：强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译。

可用0.1%羟基喹啉的苯酚（用0.01mol/L E(pH>7.8)平衡）多次抽提除去。

核酸提取的原则和流程嘿，朋友！今天咱们来聊聊核酸提取这个超有趣又超级重要的事儿。

一、核酸提取的原则1. 保证核酸的完整性这就像是保护一件精美的艺术品一样。

你想啊，如果核酸断成了一节一节的，那它就像一幅被撕得七零八落的画，可就没法好好发挥作用了。

我们得小心翼翼地处理样本，避免那些物理因素，像过度的震荡、剪切力，就好比你不能拿着那幅画胡乱摇晃，不然画就毁了。

还有化学因素，不合适的酸碱度就像给这幅画泼上了腐蚀性的液体，会把核酸给弄坏的。

温度也很关键呢，太热或者太冷都可能让核酸像脆弱的花朵在恶劣天气里一样受到伤害。

2. 纯度要高这纯度啊，就像是你做饭时用的原料得特别干净一样。

如果核酸提取出来混着好多杂质，就像你煮的粥里混着沙子，那怎么能行呢？杂质会干扰后续对核酸的各种研究和检测。

比如说那些蛋白质杂质，就像不速之客，它们可能会和核酸“抢地盘”，影响核酸在实验中的表现。

还有其他的小分子杂质，就像捣乱的小虫子，在我们想要精准研究核酸的时候，它们在旁边搅和得一团糟。

3. 得率要高想象一下你在果园里摘果子，你肯定希望把树上的果子尽可能多地摘下来呀。

核酸提取的得率高，就意味着我们能从样本里拿到更多可用的核酸。

要是得率低，就像你去果园忙活了半天，只摘到寥寥几个果子，那多不划算啊。

这得率和我们最初选择的样本量、提取的方法以及操作的精细程度都有关系呢。

二、核酸提取的流程1. 样本采集这是核酸提取的第一步，就像盖房子打地基一样重要。

不同的样本来源可有不同的采集方法哦。

如果是采集血液样本，护士就像专业的探险家一样，用针管精准地抽取适量的血液。

那动作必须熟练又小心，要是抽多了，病人可能会不舒服，抽少了又可能不够用。

要是采集的是组织样本，医生就像是技艺精湛的工匠，用特殊的工具精准地切取需要的组织部分。

这时候啊，旁边的助手就会在旁边提醒，“这个部位取的量要合适哦，不然会影响核酸的量呢。

”采集的样本要尽快处理，就像刚摘下来的新鲜水果得赶紧吃或者做成罐头保存一样，不然核酸可能会开始降解啦。

核酸提取方法核酸提取是分子生物学实验中的重要步骤，它是从生物样本中提取出核酸（DNA或RNA）的过程。

核酸提取的质量和纯度对后续实验结果具有重要影响，因此选择合适的核酸提取方法至关重要。

本文将介绍几种常用的核酸提取方法，帮助您选择适合您实验需求的方法。

1.酚氯仿提取法。

酚氯仿提取法是最常用的核酸提取方法之一。

它适用于从细胞或组织样本中提取核酸。

该方法的原理是利用酚和氯仿的不同密度，将细胞或组织中的蛋白质和脂质沉淀到有机相中，从而分离出核酸。

酚氯仿提取法简单、快速，适用于大批量样本的提取。

2.硅胶柱法。

硅胶柱法是一种基于硅胶膜的离心柱层析技术，适用于从血液、组织、细胞培养物等样本中提取核酸。

该方法通过硅胶膜的亲和作用，使DNA或RNA能够在柱子中特异性地吸附，然后经过洗脱步骤将核酸从硅胶柱中纯化出来。

硅胶柱法提取的核酸纯度高，适用于需要高纯度核酸的实验。

3.磁珠法。

磁珠法是利用磁珠与核酸的亲和作用，将核酸特异性地吸附到磁珠表面，然后利用外加磁场将磁珠与其他杂质分离。

该方法操作简便，无需离心步骤，适用于高通量核酸提取。

磁珠法提取的核酸质量好，适用于高灵敏度的实验。

4.酶解法。

酶解法是利用蛋白酶和蛋白酶K等酶类将蛋白质降解，从而释放出核酸。

该方法操作简单，适用于从血液、组织等样本中提取核酸。

酶解法提取的核酸适用于一些特殊实验，如PCR、RT-PCR等。

5.离心法。

离心法是利用超速离心将细胞或组织破碎，然后通过差速离心将核酸从其他细胞成分中分离出来。

该方法操作简单，适用于从大量样本中提取核酸。

离心法提取的核酸适用于一些基础实验。

总结。

选择合适的核酸提取方法需要根据实验样本的来源、实验需求以及实验室条件等因素综合考虑。

在实际操作中，可以根据不同实验目的选择不同的核酸提取方法，以确保提取的核酸质量和纯度满足实验要求。

希望本文介绍的核酸提取方法能够为您的实验工作提供帮助。

第1篇一、实验目的1. 掌握核酸分离与鉴定的原理和方法。

2. 了解核酸的组成和结构。

3. 学会使用实验仪器和试剂，进行核酸的分离与鉴定。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括DNA和RNA。

DNA主要存在于细胞核中，负责遗传信息的存储和传递；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质的合成和调控。

核酸的分离与鉴定是分子生物学研究的基础。

核酸分离与鉴定主要包括以下步骤：1. 核酸提取：利用细胞破碎技术，将细胞内的核酸释放出来。

2. 核酸纯化：去除杂质，得到纯净的核酸。

3. 核酸鉴定：通过物理、化学或生物学方法，鉴定核酸的种类和结构。

本实验以酵母细胞为实验材料，采用碱法提取RNA，并通过紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法进行鉴定。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母细胞2. 试剂：0.04mol/L NaOH溶液、酸性乙醇溶液、琼脂糖凝胶、缓冲液、核酸染料、DNA/RNA Marker等四、实验步骤1. 核酸提取（1）称取1g干酵母细胞，加入2ml 0.04mol/L NaOH溶液，研磨至匀浆状。

（2）加入4ml 0.04mol/L NaOH溶液，混匀，转移至离心管中。

（3）沸水浴加热30min，冷却后离心（2000r/min，15min）。

（4）取上清液，加入等体积的酸性乙醇溶液，混匀，静置2h。

（5）离心（2000r/min，15min），弃去上清液。

（6）加入70%乙醇洗涤沉淀，离心（2000r/min，15min），弃去上清液。

2. 核酸鉴定（1）紫外分光光度法：取适量RNA溶液，在260nm和280nm波长下测定吸光度值，计算RNA浓度。

（2）琼脂糖凝胶电泳：将提取的RNA与DNA/RNA Marker混合，加样至琼脂糖凝胶孔中，电泳（100V，30min）。

观察电泳结果，判断RNA的纯度和完整性。

五、实验结果与分析1. 紫外分光光度法测定结果显示，RNA浓度为0.5mg/ml。

2. 琼脂糖凝胶电泳结果显示，RNA条带清晰，无杂质带，表明RNA纯度和完整性良好。

核酸提取原理及方法核酸提取是指从细胞、组织或病毒中分离纯化出来的DNA或RNA分子。

核酸提取的过程包括以下几个步骤。

1. 细胞破碎：首先需要将目标细胞破碎，破碎细胞的方法可以选择机械破碎、化学破碎或酶解等。

机械破碎可以通过高速离心、超声波处理等方法实现，化学破碎则可以使用表面活性剂或蛋白酶K等物质，酶解则是利用特定酶降解细胞壁。

2. 蛋白质消化：细胞内的蛋白质需要消化在提取核酸的过程中，可以使用蛋白酶、高盐离心等方法使蛋白质失活和沉淀。

高盐离心可通过加入高盐溶液，使蛋白质和核酸形成络合物，然后离心，使蛋白质沉淀，核酸在上清液中。

3. 去除杂质：在提取的过程中，会存在一些杂质如RNA、酶和多肽，这些物质会影响纯化核酸的质量和浓度。

可以通过酶切、RNA去除试剂等方法去除这些杂质。

酶切是利用特定的核酸酶对RNA进行消化，RNA去除试剂则是通过特定试剂与RNA结合形成沉淀，然后进行离心分离。

4. 纯化：纯化的目的是除去核酸提取过程中的其他杂质，获得纯净的核酸分子。

常用的纯化方法有酚/氯仿法、琼脂糖凝胶电泳法、硅胶纯化法和离心柱纯化法等。

酚/氯仿法是利用酚和氯仿疏水性差异的原理，将核酸分子转移到酚相中，然后进行重溶解和沉淀分离。

琼脂糖凝胶电泳法则是利用琼脂糖凝胶孔径大小的差异，通过电场的作用将核酸分子从琼脂糖凝胶中分离出来。

硅胶纯化法是利用硅胶对DNA和RNA分子的亲和性，将核酸与硅胶结合，然后通过洗脱和浓缩得到纯化的核酸。

离心柱纯化法则是利用柱体内特定的亲和基质，选择性地结合核酸分子，然后洗脱和收集纯化的核酸。

5. 检测：最后核酸提取的纯度和浓度可以通过吸光度测量或荧光染料法进行检测。

吸光度测量通过核酸溶液吸收紫外光的特性来计算核酸的浓度和纯度。

荧光染料法则是利用特定荧光染料与核酸结合形成荧光复合物，通过荧光信号的强度来计算核酸的浓度和纯度。

综上所述，核酸提取的方法和原理主要包括细胞破碎、蛋白质消化、去除杂质、纯化和检测等步骤。

实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。

提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。

本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。

核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。

这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。

2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。

为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。

高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。

细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。

【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。

2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。

RNase在用前适量加入。

(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。

核酸提取的方法
核酸提取是指从生物样品中分离纯化核酸的过程，常用的核酸提取方法主要有以下几种：
1.酚-氯仿法（Phenol-Chloroform Extraction）：将生物样品与
酚-氯仿混合，通过离心分离出有机相和水相，有机相中含有
核酸，可以经过乙醇沉淀得到纯化的核酸。

2.硅胶柱法（Silica Column Extraction）：将生物样品经过裂解，混合硅胶柱柱料，利用硅胶吸附核酸，经过洗脱步骤得到纯化的核酸。

3.离心柱法（Spin Column Extraction）：使用离心柱将生物样
品吸附于柱载体上，利用离心力和洗涤缓冲液来分离和纯化核酸。

4.磁珠法（Magnetic Bead Extraction）：利用磁珠表面特定基
团与核酸进行非特异性吸附结合，通过磁性分离方法来分离和纯化核酸。

这些方法在细胞、血液、组织等生物样品的核酸提取中被广泛应用，根据实验需求和样品类型可以选择合适的方法。