叶绿体的分离和观察

实验二叶绿体的分离与荧光观察一、实验目的了解叶绿体分离的一般原理和方法，并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。

二、实验原理1、叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行,?以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。

利用差速离心法将匀浆液离心，从而使叶绿体得到分离。

分离过程最好在0〜5C的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。

2、有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。

有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光（或间接荧光），如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。

本实验利用荧光显微镜对叶绿体的荧光进行观察。

三、实验步骤1. 选取新鲜的嫩白菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称3g放于玻璃研钵中，加入10ml0.35mol/LNaCI溶液，匀浆3〜5min。

2. 匀浆液用2层尼龙布过滤于50ml烧杯中。

3•将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。

弃去沉淀。

4•将上清液在3000r/min下离心5min。

弃去上清，沉淀即为叶绿体。

5. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮，做两张临时装片：①取一滴叶绿体悬液滴于载片上，加盖片观察；②取一滴叶绿体悬液滴于载片上，再滴加1-2滴0.01%吖啶橙荧光染料，加盖片观察：①在普通光镜下观察；②在荧光显微镜下观察：先用明视野（白炽光灯下）和用低倍镜头观察，找到适当的标本后，再转高倍镜头，并将白炽光灯转换成以汞灯激发光作光源，用暗视野观察。

6. 撕取白菜叶片下表皮一小片置于滴有清水的载片上，盖上盖玻片，在普通光镜下观察气孔的形状，保卫细胞里面的叶绿体；随后转置荧光显微镜下观察。

四、结果与分析参考文献《细胞生物学实验》李玲李雪峰着湖南科学技术出版社百度文库《叶绿体的分离与荧光观察》。

叶绿体的分离与分析叶绿体是一种重要的细胞器，每个植物细胞都有数以千计的叶绿体。

叶绿体是通过植物细胞合成光合色素来进行光合作用的所在地。

在植物细胞中，叶绿体起着重要的作用，因此研究叶绿体极其重要。

在本文中，将探讨叶绿体的分离与分析。

1. 叶绿体的分离通过分离叶绿体，可以进一步了解叶绿体的结构和功能，有助于深入研究植物的光合作用和光合产物的合成等重要的生理过程。

分离叶绿体是将细胞质中的叶绿体与其他细胞器分离，提纯出纯净的叶绿体。

下面是几种常见的叶绿体分离方法：1.1 钙盐法分离利用钙盐的沉淀作用可以分离出叶绿体。

在植物细胞中，叶绿体的密度比较小，而且易于在高浓度的钙离子存在下形成沉淀，所以通过钙盐法可以较为迅速地分离出叶绿体。

该方法的缺点是得到的叶绿体杂质较多。

1.2 筛分离法该方法是通过分离细胞中各个部分的大小差异达到分离叶绿体的目的。

通过串联不同大小的筛子，可以分离出纯净的叶绿体。

该方法的优点是简单易行，缺点是得到的叶绿体数量较少，不适合大规模生产。

1.3 离心法分离利用离心力的大小差异可以将细胞质中的不同组分分离，通过离心机的不同离心速度可以分离出叶绿体。

分离出的叶绿体纯度较高，但操作复杂，不适合大规模生产。

2. 叶绿体的分析通过对叶绿体的分析，可以了解到叶绿体的结构、功能、组成和代谢等方面的信息。

以下是叶绿体的常见分析方法：2.1 原位荧光标记法通过在叶绿体上标记荧光染料可以观察到叶绿体的运动轨迹和分布情况。

该方法操作简单，但对叶绿体数量有一定要求，不适合大规模使用。

2.2 融合蛋白质分析法利用融合蛋白质技术将叶绿体膜上的蛋白质与其他蛋白质融合在一起，可以通过蛋白质电泳等方法分析融合蛋白质的组成和含量等信息。

该方法对蛋白质的要求较高，但可以进行大规模生产。

2.3 代谢产物分析法通过分析叶绿体合成代谢产物的量和种类等信息，可以了解到叶绿体的代谢活动情况。

该方法可以通过色谱等方法进行分析，可以定量和定性分析代谢产物。

实验十一叶绿体的分离和荧光观察一．实验目的了解细胞匀浆和差速离心分级分离细胞组分的原理。

了解提取叶绿体的基本原理及其过程，通过光学显微镜的观察了解体外分离的叶绿体的一般形态，增加对叶绿体的感性认识。

掌握吖啶橙染色叶绿体的方法。

掌握显微数码拍照的方法。

二．实验内容提取叶绿体，吖啶橙染色，观察染色结果。

显微数码拍照。

三．实验原理将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。

在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。

依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部。

叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/LNacl或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行。

离心后可得沉淀的叶绿体。

四．实验方法与步骤1．取嫩叶3g，洗净去柄去叶脉，剪碎放入研钵中。

2．加4ml0.35mol/LNacl，研磨匀浆，尼龙布过滤于离心管中1ml。

3．1000rpm离心2分钟弃去沉淀。

4．3000rpm离心15分钟，弃去上清液，将沉淀用少量0.35mNacl悬浮。

5．提取叶绿体观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。

6．撕取叶表皮观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。

a．在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色椒榄形，在高倍镜下看到叶绿体内部含有较深的绿色的绿色小颗粒即基粒。

b．在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光。

c．加入吖啶橙染后，叶绿体可发也桔红色荧光。

而其中混有的细胞核发出绿色荧光菠菜叶手切片观察。

d．在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞：为边缘吐锯齿表的鳞片状细胞。

保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。

叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。

5．显微数码拍照。

五．实验结果。

实验三叶绿体的分离、提取、观察2011.03.23班级：姓名：一．试验目的1．学习使用差速离心方法分离获取叶绿体。

2．理解叶绿体的分离与保存环境。

3．叶绿体的形态观察、测量、叶绿体悬液的荧光现象观察。

二．实验原理1．叶绿体是植物叶肉细胞内重要的细胞器，是植物光合作用的场所。

分离提取得到的活体叶绿体，既能进行光合作用速率测定，也能进行叶绿体色素的分离提取。

2．差速离心法常用于获取细胞中的某一物质，其原理是在一定转速条件下，不同密度大小的物质沉降速度不一样，最终使有密度差异的物质得以分离。

三．实验用具1．材料与试剂：菠菜叶、0.35mol/L NaCL、95%乙醇、石英砂。

2．器具：离心机、天平、量筒、研钵、玻棒、纱布等四．实验步骤1．选用生长健壮的菠菜叶片洗净后去除中脉，然后放入0—4 ℃冰箱或冰瓶中预冷。

2．取叶片经滤纸吸干水后，称取5g剪成碎片，于10—15 mL0.35mol/L氯化钠溶液中，置于研钵中，加少量石英砂，手工快速研磨，(注意不要用力过猛，也不必研磨过细)。

3．研磨后将匀浆用2层新纱布过滤，滤液盛于烧杯中。

4．将滤液装入预冷过的离心管，经天平平衡后，以1200r/min离心2min，弃去沉淀。

5．上清液再经3000 r/min离心5 min ，倾去上清液，沉淀即为叶绿体。

6．沉淀用2 mL 0.35mol/L氯化钠溶液悬浮，备用。

7．用滴管取少量悬浮液于载玻片上，加盖玻片后，吸水纸吸去多余的溶液，置显微镜下镜检观察。

可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。

测量叶绿体的长轴和短轴，分别测量5~10个叶绿体，求其平均值。

8．称取叶片5g剪成碎片，加10—15 mL95%乙醇及少量石英砂，于研钵中快速研磨，然后2层纱布过滤，取滤液，将其装入离心管，以2500r/min离心3min，收集上清液于试管中。

9．叶绿体荧光现象的观察：用强的柱状光源照射盛装叶绿素提取液的试管，然后顺着光源方向观察提取液颜色，并和对着光管观察是的情况进行比较。

一、实验目的1. 学习叶绿体的分离方法。

2. 观察叶绿体的形态和结构。

3. 了解叶绿体在植物细胞中的分布。

二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，主要分布在植物的叶片细胞中。

叶绿体含有叶绿素等色素，能够吸收光能并将其转化为化学能。

本实验通过研磨植物叶片，利用叶绿体在水中溶解度低、在丙酮中溶解度高的特性，将叶绿体从细胞中分离出来。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜叶）。

2. 实验仪器：研钵、研杵、蒸馏水、丙酮、载玻片、盖玻片、显微镜、酒精灯、镊子等。

四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片，用剪刀剪成小块。

2. 将叶片放入研钵中，加入适量蒸馏水。

3. 用研杵充分研磨叶片，使细胞破裂，叶绿体释放出来。

4. 将研磨液过滤，去除叶片碎片。

5. 取少量过滤液，加入等体积的丙酮，充分混合。

6. 静置一段时间，待叶绿体在丙酮中沉淀。

7. 用镊子取出沉淀，滴在载玻片上。

8. 将载玻片放在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。

五、实验结果与分析1. 观察到载玻片上的叶绿体呈绿色，呈扁平的椭球形或球形。

2. 叶绿体在显微镜下具有明显的网状结构，其中包含类囊体、叶绿素等成分。

3. 通过比较实验前后叶绿体的形态和结构，可以判断叶绿体在植物细胞中的分布。

六、实验讨论1. 实验过程中，为什么加入丙酮可以使叶绿体沉淀？答：叶绿体在水中溶解度低，在丙酮中溶解度高，加入丙酮可以使叶绿体从溶液中沉淀出来。

2. 实验过程中，为什么研磨叶片时需要加入蒸馏水？答：蒸馏水可以破坏细胞结构，使叶绿体释放出来，同时保持实验液的清洁。

3. 实验过程中，为什么需要过滤研磨液？答：过滤可以去除叶片碎片，保证实验结果的准确性。

4. 实验过程中，为什么需要观察叶绿体的形态和结构？答：通过观察叶绿体的形态和结构，可以了解叶绿体的基本特征，进一步了解其在植物细胞中的分布和功能。

七、实验结论本实验成功分离出植物叶片中的叶绿体，并观察到叶绿体的形态和结构。

叶绿体的分离纯化及荧光观察叶绿体是植物细胞中的一种细胞器，它是进行光合作用的主要场所。

叶绿体具有一定的自复制能力，可以独立分离出来，纯化叶绿体样品可以方便地进行进一步的实验研究。

本文将详细介绍叶绿体的分离、纯化以及荧光观察的方法。

一、叶绿体的分离1.实验材料准备为了分离叶绿体，我们需要充足的植物组织样品。

可以选择新鲜的叶片或者细胞培养物作为实验材料。

同时，需要准备好一系列试剂，例如缓冲液、葡萄糖、EDTA、PEG等。

2.组织破碎和提取液的准备首先，将植物组织样品冷冻在液态氮中，然后用超声波处理器将样品破碎。

接下来，将破碎的样品用缓冲液溶解，加入适量的葡萄糖和EDTA。

将溶解后的样品在低温条件下离心，然后取出上清液。

3.叶绿体的沉淀将提取液中的上清液用PEG逐渐沉淀叶绿体。

首先加入PEG溶液，并轻轻搅拌。

然后，将样品在低温条件下离心，离心后会出现一个绿色的沉淀。

这个沉淀就是叶绿体。

4.叶绿体的洗涤和纯化将叶绿体的沉淀用缓冲液洗涤数次，然后用离心将叶绿体沉淀下来。

最后，将沉淀的叶绿体用缓冲液悬浮，即可得到纯化的叶绿体样品。

二、叶绿体的荧光观察1.荧光探针的准备为了观察叶绿体的荧光，我们需要准备好合适的荧光探针。

通常使用的探针有二苯基苯酚（DPBF）和二聚(4-乙基-5-（4-甲基吡啶氧基）-2-溴脱氧葡萄糖（DAB）等。

2.荧光探针的添加将纯化的叶绿体置于含有荧光探针的溶液中，静置一段时间。

荧光探针会与叶绿体中的一些分子发生作用，从而产生荧光。

3.荧光观察使用荧光显微镜观察叶绿体的荧光。

将样品放置于荧光显微镜下，设置合适的激发波长和观察波长。

然后观察荧光显微镜中的图像，即可看到叶绿体的荧光。

4.结果分析通过观察叶绿体的荧光，可以得到关于叶绿体活性和光合作用效率的信息。

例如，如果观察到荧光强度较高，可以推测叶绿体的光合作用效率较低。

总结：叶绿体的分离、纯化及荧光观察是研究植物生物学和光合作用的重要方法之一、通过正确的操作流程和合适的实验材料，可以得到纯化的叶绿体样品，并通过荧光观察了解叶绿体的活性和光合作用效率。