实验3植物叶片活细胞和叶绿体的分离提取及观察共20页
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叶绿素的提取和分离实验报告叶绿素的提取和分离实验,这可真是个有趣的课题。
想象一下,阳光下的小植物,满身的绿色,就像穿着翠绿衣裳的小精灵。
你可知道,叶绿素可不是简单的东西,它可是植物的“魔法武器”。
今天咱们就来聊聊这个实验,顺便看看怎么把叶绿素提取出来,真是让人充满期待啊。
准备工作可得做足。
找几片新鲜的绿叶,最好是一些比较嫩的,比如菠菜或者其他绿叶蔬菜。
小伙伴们,记得洗干净哦,卫生第一。
然后,撕碎这些叶子,越小越好,这样才能让叶绿素更容易释放出来。
这一过程就像是在给小植物“做美容”,哈哈。
撕的过程中,脑海里不禁浮现出那些清新的味道,真是让人忍不住想咬一口。
咱们要用到一些工具。
把撕碎的叶子放进研钵里,加入一些酒精,建议用乙醇。
酒精可真是个好帮手,它能把叶绿素从叶子里“撇”出来。
用杵子慢慢研磨,直到叶子变成绿油油的糊状。
这一刻,感觉自己就像是个小炼金术士,手里的东西似乎在变得神奇。
油绿的汁液渐渐渗出来,真是让人心花怒放。
这时候,你会发现,液体的颜色开始变得浓郁。
小心翼翼地把混合物过滤到一个试管里,别让那些叶子的渣滓混进来哦,咱们要的可是纯粹的叶绿素。
就像在筛选黄金一样,真是小心翼翼。
一过滤,看到清澈的液体,那一瞬间,心里不禁乐开了花,感觉这就是成功的象征。
可以用薄层色谱法来分离叶绿素。
想象一下,在薄层板上,一滴滴的液体就像小小的水滴,兴奋地准备出发。
小心地把试管里的液体滴在板上,然后将薄层板放入含有溶剂的小容器里。
那一刻,真的感觉自己像是在观看一场精彩的表演。
随着时间的推移,液体在板上缓缓移动,颜色也在不断变化。
简直是科学和艺术的结合,太美了!经过一段时间,取出薄层板,看到上面的色带,一条条的,绿的、黄的、甚至还有些微微的蓝色。
这时候,心里默念:“这就是大自然的调色板!”咱们可以用尺子量量这些颜色的距离,分析一下不同色带的组成,原来叶绿素还有好几种呢。
真是让人意外,看来这小小的绿叶,藏着的秘密可真不少。
实验三叶绿体的分离、提取、观察2011.03.23班级:姓名:一.试验目的1.学习使用差速离心方法分离获取叶绿体。
2.理解叶绿体的分离与保存环境。
3.叶绿体的形态观察、测量、叶绿体悬液的荧光现象观察。
二.实验原理1.叶绿体是植物叶肉细胞内重要的细胞器,是植物光合作用的场所。
分离提取得到的活体叶绿体,既能进行光合作用速率测定,也能进行叶绿体色素的分离提取。
2.差速离心法常用于获取细胞中的某一物质,其原理是在一定转速条件下,不同密度大小的物质沉降速度不一样,最终使有密度差异的物质得以分离。
三.实验用具1.材料与试剂:菠菜叶、0.35mol/L NaCL、95%乙醇、石英砂。
2.器具:离心机、天平、量筒、研钵、玻棒、纱布等四.实验步骤1.选用生长健壮的菠菜叶片洗净后去除中脉,然后放入0—4 ℃冰箱或冰瓶中预冷。
2.取叶片经滤纸吸干水后,称取5g剪成碎片,于10—15 mL0.35mol/L氯化钠溶液中,置于研钵中,加少量石英砂,手工快速研磨,(注意不要用力过猛,也不必研磨过细)。
3.研磨后将匀浆用2层新纱布过滤,滤液盛于烧杯中。
4.将滤液装入预冷过的离心管,经天平平衡后,以1200r/min离心2min,弃去沉淀。
5.上清液再经3000 r/min离心5 min ,倾去上清液,沉淀即为叶绿体。
6.沉淀用2 mL 0.35mol/L氯化钠溶液悬浮,备用。
7.用滴管取少量悬浮液于载玻片上,加盖玻片后,吸水纸吸去多余的溶液,置显微镜下镜检观察。
可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。
测量叶绿体的长轴和短轴,分别测量5~10个叶绿体,求其平均值。
8.称取叶片5g剪成碎片,加10—15 mL95%乙醇及少量石英砂,于研钵中快速研磨,然后2层纱布过滤,取滤液,将其装入离心管,以2500r/min离心3min,收集上清液于试管中。
9.叶绿体荧光现象的观察:用强的柱状光源照射盛装叶绿素提取液的试管,然后顺着光源方向观察提取液颜色,并和对着光管观察是的情况进行比较。
实验名称:叶绿体色素的提取、分离、理化性质系别:机械工程系班级:机械11实验者:潘霖学号:2011010389同组姓名:肖鹤翀实验日期:2011.10.22Ⅰ提取与分离一、实验目的:1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。
2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。
二、实验原理:叶绿体是进行光合作用的细胞器。
叶绿体中的叶绿素a,叶绿素b,胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。
这些色素都不溶于水,而溶于有机溶剂,故可用乙醇等有机溶剂提取。
提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。
薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层,将此吸附剂薄层作为固定相,把待分离的样品溶液点在薄层板的下端,然后用一定量的溶剂作流动相,将薄层板的下端浸入到展开剂当中。
由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同,吸附力强的物质相对移动慢一些,而吸附力弱的物质则相对移动快一些,从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。
植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法,其中柱层析适用于大量制备。
本实验采用薄层层析色谱法,其中固定相用硅胶预制板。
三、实验材料与试剂:1.新鲜的菠菜叶片。
2.体积分数为95%的乙醇,碳酸钙粉末,展开剂(石油醚:丙酮:苯=7:5:1,体积比)。
3.研钵,漏斗,三角瓶,剪刀,点样毛细管,层析缸,硅胶预制板,滤纸。
四、实验步骤:(一)色素提取液的制备1.取新鲜叶片4~5片,洗净,擦干叶表面,去除中脉剪碎,放入研钵中。
2.向研钵中加入少量CaCO3粉末,再加2~3ml体积分数为95%的乙醇,充分研磨至糊状,再加10~15ml体积分数为95%的乙醇,上清液用漏斗过滤出,残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次,一同过滤于三角瓶中,即制成叶绿体色素提取液。
提取液应避光保存,因提取量较大,可用于其他相关实验(如后面的叶绿素理化性质的验证)。
(二)叶绿体色素的分离1.取硅胶预制板一个,用点样毛细管吸取上述提取液,平行于硅胶板的短边,距下边缘1cm处用毛细管划线,保证划线细直。
一、实验目的1. 学习叶绿体的分离方法。
2. 观察叶绿体的形态和结构。
3. 了解叶绿体在植物细胞中的分布。
二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器,主要分布在植物的叶片细胞中。
叶绿体含有叶绿素等色素,能够吸收光能并将其转化为化学能。
本实验通过研磨植物叶片,利用叶绿体在水中溶解度低、在丙酮中溶解度高的特性,将叶绿体从细胞中分离出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:新鲜植物叶片(如菠菜叶)。
2. 实验仪器:研钵、研杵、蒸馏水、丙酮、载玻片、盖玻片、显微镜、酒精灯、镊子等。
四、实验步骤1. 取新鲜植物叶片,用剪刀剪成小块。
2. 将叶片放入研钵中,加入适量蒸馏水。
3. 用研杵充分研磨叶片,使细胞破裂,叶绿体释放出来。
4. 将研磨液过滤,去除叶片碎片。
5. 取少量过滤液,加入等体积的丙酮,充分混合。
6. 静置一段时间,待叶绿体在丙酮中沉淀。
7. 用镊子取出沉淀,滴在载玻片上。
8. 将载玻片放在显微镜下观察叶绿体的形态和结构。
五、实验结果与分析1. 观察到载玻片上的叶绿体呈绿色,呈扁平的椭球形或球形。
2. 叶绿体在显微镜下具有明显的网状结构,其中包含类囊体、叶绿素等成分。
3. 通过比较实验前后叶绿体的形态和结构,可以判断叶绿体在植物细胞中的分布。
六、实验讨论1. 实验过程中,为什么加入丙酮可以使叶绿体沉淀?答:叶绿体在水中溶解度低,在丙酮中溶解度高,加入丙酮可以使叶绿体从溶液中沉淀出来。
2. 实验过程中,为什么研磨叶片时需要加入蒸馏水?答:蒸馏水可以破坏细胞结构,使叶绿体释放出来,同时保持实验液的清洁。
3. 实验过程中,为什么需要过滤研磨液?答:过滤可以去除叶片碎片,保证实验结果的准确性。
4. 实验过程中,为什么需要观察叶绿体的形态和结构?答:通过观察叶绿体的形态和结构,可以了解叶绿体的基本特征,进一步了解其在植物细胞中的分布和功能。
七、实验结论本实验成功分离出植物叶片中的叶绿体,并观察到叶绿体的形态和结构。
提取叶绿素实验报告提取叶绿素实验报告引言:叶绿素是植物体内的一种重要色素,它在光合作用中起着关键的作用。
为了深入了解叶绿素的结构和功能,我们进行了一次提取叶绿素的实验。
本篇报告将详细介绍实验的目的、过程和结果,并对实验结果进行分析和讨论。
实验目的:本次实验的目的是通过提取叶绿素,观察叶绿素的溶解性和吸收光谱特性,从而了解叶绿素的结构和功能。
实验材料和方法:1. 实验材料:- 新鲜的叶片样本(如菠菜、植物苗等)- 丙酮、乙醇、二氧化碳等有机溶剂- 室温下的蒸馏水- 研钵、研杵、滤纸等实验器材2. 实验步骤:1) 将新鲜的叶片样本切碎,并放入研钵中。
2) 加入适量的丙酮,用研杵研磨叶片,使叶绿素溶解在丙酮中。
3) 将研磨后的混合液过滤,得到含有叶绿素的丙酮溶液。
4) 将丙酮溶液转移至离心管中,离心5分钟,使悬浮在溶液中的杂质和叶绿素分离。
5) 将上清液转移到另一个离心管中,加入适量的乙醇,使叶绿素重新溶解。
6) 将乙醇溶液通过滤纸过滤,得到纯净的叶绿素提取物。
7) 将提取物转移到试管中,用分光光度计测量其吸光度,得到吸收光谱。
实验结果:通过实验,我们成功提取到了叶绿素,并得到了其吸收光谱。
在可见光波长范围内,叶绿素的吸光度呈现出两个峰值,分别位于绿色和红色光波段。
其中,绿色峰值的波长大约在430-450nm左右,红色峰值的波长大约在640-660nm 左右。
实验分析与讨论:1. 叶绿素的溶解性:通过实验我们发现,叶绿素在丙酮中具有良好的溶解性。
这是因为丙酮是一种极性有机溶剂,能够有效溶解叶绿素的疏水性结构。
而乙醇则起到了将叶绿素重新溶解的作用。
2. 叶绿素的吸收光谱特性:叶绿素的吸收光谱特性是由其分子结构所决定的。
叶绿素分子中的大环结构(叶绿素a)和侧链结构(叶绿素b)使其能够吸收可见光中的特定波长,从而实现光能的转化。
绿色峰值的波长对应着叶绿素吸收蓝光的能力,而红色峰值的波长则对应着叶绿素吸收红光的能力。
叶绿体分离的实验报告叶绿体分离的实验报告引言:叶绿体是植物细胞中的一种重要细胞器,其主要功能是进行光合作用,将光能转化为化学能,为植物提供能量。
叶绿体分离是一种常用的实验方法,通过分离叶绿体,可以更好地研究其结构和功能。
本实验旨在探究叶绿体分离的方法和步骤,并观察叶绿体的形态和特征。
材料与方法:1. 鲜嫩的植物叶片:本实验选择了菠菜叶片作为实验材料,因其叶绿体含量丰富。
2. 0.5% EDTA溶液:用于破坏叶片细胞壁,释放叶绿体。
3. 0.4 M 蔗糖溶液:用于制备蔗糖梯度离心液。
4. 离心管和离心机:用于离心分离叶绿体。
5. 高速离心管:用于收集纯化后的叶绿体。
实验步骤:1. 取一片新鲜的菠菜叶片,并用去离子水清洗干净,去除表面的杂质。
2. 将叶片切碎,放入离心管中,并加入适量的0.5% EDTA溶液。
3. 将离心管放入冰箱中静置20分钟,使叶绿体充分释放。
4. 取出离心管,用玻璃棒轻轻搅拌叶片,使细胞破裂,释放叶绿体。
5. 将离心管置于冰上,使用低速离心机以3000 rpm离心10分钟,沉淀下来的为叶绿体。
6. 将上清液倒掉,用去离子水洗涤沉淀2-3次,以去除杂质。
7. 加入适量的0.4 M 蔗糖溶液,将离心管置于高速离心机中,以12000 rpm离心20分钟,使叶绿体沉积在梯度液体中。
8. 将上清液倒掉,离心管内的梯度液体分为不同层次,叶绿体沉积在较低的层次中。
9. 使用移液管将叶绿体取出,放入高速离心管中。
10. 使用高速离心机以15000 rpm离心10分钟,将叶绿体沉淀下来。
11. 倒掉上清液,收集纯化后的叶绿体。
结果与讨论:通过本实验,我们成功地分离出了菠菜叶片中的叶绿体。
观察分离后的叶绿体,可以发现其呈现绿色,具有椭圆形状,大小约为2-5微米。
叶绿体在显微镜下呈现出明显的双膜结构,其中内膜形成了许多类似硬币的结构,称为类囊体。
类囊体中含有叶绿素,是进行光合作用的关键结构。
此外,叶绿体内还含有DNA和一些酶,用于合成光合作用所需的物质。
实验报告实验名称:叶绿体色素的提取、分离及其理化性质日期:2011年11月2日小组成员:——(2010******)——(2010******)专业:生物科学生物科学与生物技术班级:************摘要本实验对叶绿体中的色素进行了提取、分离和理化性质的鉴定。
实验采用纸层析法进行分离,并从叶绿体色素的荧光现象、皂化作用、Mg2+的取代以及色素光谱对其理化性质进行了鉴定。
一、实验目的1.以植物叶片组织为材料,提取叶绿体色素;2.以纸层析法分离其成分;3.鉴定叶绿体色素的理化性质。
二、实验原理1.提取: 叶绿体中含有叶绿素(叶绿素a与b)和类胡萝卜素(胡萝卜素和叶黄素),这两类色素均不溶于水,而溶于有机溶剂,故常用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。
2.分离: 当溶剂沿支持物不断向前推进时,由于叶绿体中不同色素分子结构不同,在两相(流动相与固定相)间具有不同的分配系数,因此它们移动速率不同。
对叶绿体色素进行层析可将不同色素分离。
3.理化性质的观察: 叶绿素是一种二羧酸酯,在碱作用下,发生皂化反应;在弱酸作用下,叶绿素中镁可被氢原子取代而成为褐色的去镁叶绿素,后者遇铜则成为绿色的铜代叶绿素,叶绿素具有荧光,故从与入射光相垂直的方向观察叶绿素溶液呈血红色。
叶绿素的化学性质不稳定,易受强光氧化,特别是当叶绿素与蛋白质分离后,破坏更快。
三、实验材料及用具1.材料:菠菜;2.用具:天平、研钵、三角漏斗、滤纸、层析缸、毛细管、分光镜、量筒、烧杯、试管等;3.试剂:丙酮、碳酸钙、层析液(石油醚:丙酮=25:3),20%KOH-甲醇、乙醚、1%HCl、醋酸铜。
四、实验步骤1.叶绿体色素的提取1)取新鲜菠菜叶片2克,擦干,去中脉,剪碎放入研钵;2)加入少许石英砂和CaCO3,再加入无水丙酮10ml,研磨成匀浆,再加丙酮15ml;3)用漏斗滤去残渣,得叶绿体色素提取液(置于暗处)。
2.纸层析分离叶绿体色素1)层析样纸制备:将优质滤纸剪成3cm×9cm的长条,将一端剪成中央留约1cm×0.5cm的窄条;2)点样:用细玻璃棒蘸取叶绿体色素提取液点于层析纸的窄条上端中央部,晾干后在原处重复点样7-8次;3)展层:在层析缸中加入3-5ml层析推动液,然后将已点样的层析纸插入缸的側壁槽内,调节纸条使窄条1/2部分浸入推动液中,盖好盖子,于阴暗处展层约10min,即可在层析纸上分辨出4种不同的清楚色层。
叶绿体的分离、纯化及荧光观察实验目的:1、通过植物细胞叶绿体的分离与纯化,了解细胞器分离与纯化的原理和方法2、熟悉荧光显微镜的使用方法,观察叶绿体的自发荧光和间接荧光实验原理:差速离心法用于分离大小不同的物体。
在差速离心中细胞器沉降的顺序为:细胞核、线粒体、溶酶体与过氧化物酶体、内质网与高尔基体、醉后为核糖核蛋白复合体。
密度梯度离心法是用一定的介质在离心管内形成连续的密度梯度,将细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部,通过离心力的作用使细胞或细胞器分层、分离,最后不同密度的细胞或细胞器位于与自身密度相同的沉降区带中。
叶绿体是一种比较大的细胞器,利用差速离心即可分离收集,然后用密度梯度离心纯化,便可用于各种研究。
实验用品:新鲜菠菜、提取缓冲液、蔗糖溶液、0.01%吖啶橙、离心机、电子天平、荧光显微镜、剪刀、研钵、移液管、漏斗、滴管、10ml离心管实验步骤:1、选取新鲜嫩绿菠菜叶,去叶梗及粗脉,洗净擦干,称30克放于150ml 0.35M.Nacl溶液中2、将液、叶同装入组织捣碎机中,匀浆3-5分钟,转速5000r/min3、将匀浆用纱布(6层)过滤于500ml烧杯中4、取滤液4ml在1000r/min下离心2min5、取上层清液在3000r/min下离心5min(沉淀为叶绿体和细胞核混合物)6、将沉淀用2-3mlMnacl液悬浮7、取一滴悬液滴片,加盖玻片后显微镜下观察8、另取一滴悬液滴片,再滴加一滴0.01%吖啶橙染料,混匀,盖上盖玻片,在荧光显微镜下观察实验结果:普通显微镜下,叶绿体呈橄榄形,绿色,高倍镜下可看到基粒(深绿色小颗粒)。
荧光显微镜下,叶绿体自发荧光为“火红色”,次生荧光为“橘红色”分析与讨论:1、捣碎叶片式时时间不宜过长,否则会破坏叶绿体2、用荧光显微镜找到物象后,要先拍照后观察,因为荧光会逐渐变弱。