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第三节动物的克隆一、关于动物细胞工程的一些问题讨论：1、用胰蛋白酶处理细胞以获得单个细胞的过程中胰蛋白酶是怎么起作用的？胰蛋白酶为什么不会把细胞消化掉？答：细胞外含有多种胞外蛋白，如胶原蛋白等，使细胞间或细胞与培养瓶内壁粘连起来。
胰蛋白酶有消化作用，胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。
处理时间长了的话胰蛋白酶对细胞也是有损害的，胰蛋白酶的处理时间一般控制在一分钟左右，不然所处理的组织细胞就会死亡。
2、动物细胞培养液中加血清的作用是什么？答：由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。
3、美国和日本的两个研究小组2007年11月20日分别发表论文，宣布成功把普通的人体皮肤细胞转化为了具备胚胎干细胞功能的新型“万能细胞”。
万能细胞到底是什么细胞？它的克隆成功有什么意义？答：两个研究小组都是从人体中提取了一种名为“纤维原细胞”的皮肤细胞，然后向其中植入4种新基因，从而制造出一种名为IPS的细胞，它具有类似胚胎干细胞的功能，能够最终培育成人体组织或器官。
“万能细胞”的意义在于它跨越了伦理障碍：干细胞是未分化的原始细胞，通常分为三类，即全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。
其中，全能干细胞主要就是胚胎干细胞。
如果与克隆技术相结合，胚胎干细胞便可发展成遗传特征与病人完全吻合的细胞、组织或器官，以前器官移植治疗方法中经常出现的排异反应问题因此而得到了彻底解决，血细胞、脑细胞、骨骼和内脏等都将可以更换，白血病、帕金森氏症、心脏病等顽疾也有望得到有效治疗与治愈。
一直以来，如果想要获得人类胚胎干细胞，就必须损坏人类胚胎，这一点颇受非议。
这次人体皮肤细胞“直接改造”技术跨越伦理障碍。
4、利用动物细胞技术大规模生产抗体等产品的反应器是否与微生物反应器完全相同？答：由于动物细胞与微生物细胞有很大差异，传统的微生物反应器显然不适用于动物细胞的大规模培养。
克隆技术的是( )A．三者都涉及基因工程技术B．三者都是在细胞或细胞器水平上的操作C．克隆动物属于无性生殖范畴D．人工种子的胚状体是由受精卵发育而成的【解析】乳腺生物反应器采用了基因工程技术，人工种子和克隆动物都采用了细胞工程技术，克隆动物是由重组细胞发育成完整的个体，该个体并非由受精卵发育而来，因此克隆动物属于无性生殖的范畴，人工种子的胚状体是由植物组织培养获得的，并非由受精卵发育而来。
【答案】 C关于哺乳动物细胞体外培养的难易程度，下列表述正确的是( ) A．乳腺癌细胞易于乳腺细胞；胚胎细胞易于脂肪细胞B．乳腺细胞易于乳腺癌细胞；胚胎细胞易于脂肪细胞C．乳腺细胞易于乳腺癌细胞；脂肪细胞易于胚胎细胞D．乳腺癌细胞易于乳腺细胞；脂肪细胞易于胚胎细胞【解析】哺乳动物的乳腺细胞和脂肪细胞都是高度分化的细胞，体外培养难度大，乳腺癌细胞能够恶性增殖，容易进行体外培养，胚胎细胞具有很强的分裂增殖能力，容易进行体外培养，A正确。
【答案】 A1.(1)均能打破物种之间的生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍。
(2)均能按照人的意愿定向改良生物性状。
2．不同点(1)原理不同：细胞工程是细胞(或细胞核)的全能性，细胞膜的流动性及细胞增殖；基因工程是DNA分子组成、结构和遗传密码的统一性。
(2)操作水平不同：细胞工程是细胞或细胞器水平；基因工程是分子水平。
(3)工具酶不同：细胞工程用到纤维素酶和果胶酶(植物体细胞杂交)或胰蛋白酶(动物细胞培养)；基因工程用到限制性核酸内切酶和DNA连接酶。
(4)目的不同：细胞工程是为了改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品；基因工程是创造出人们需要的新的生物类型和生物产品。
3．联系(1)转基因植物的获得离不开植物组织培养。
(2)转基因动物的培育离不开动物细胞培养。
下列生物工程技术中，不属于细胞工程的是( )A．通过试管动物大量繁殖优良动物B．利用含有人胰岛素基因的大肠杆菌生产胰岛素C．通过体细胞克隆技术培养出克隆羊D．将某人的肝癌细胞在实验室中繁殖成一个细胞系【解析】A、C、D三项操作水平为细胞或细胞器水平，属于细胞工程；B项操作水平为DNA分子水平，属于基因工程。
重点题型1 真核生物的柠檬酸循环与卡尔文循环【规律方法】1.柠檬酸循环糖酵解生成的丙酮酸进入线粒体基质，在酶的催化下脱掉1个CO 2，生成1个[C 2]，并形成1个NADH 和1个H ＋。
[C 2]进入柠檬酸循环，与草酰乙酸(C 4酸)合成为柠檬酸(C 6酸)；柠檬酸再经多个反应脱掉2个CO 2，生成1个草酰乙酸，并形成3个NADH 、3个H ＋、1个FADH 2和1个ATP 。
生成的草酰乙酸进入下一轮循环。
柠檬酸循环如图：如此丙酮酸被不断地转变为CO 2，其总反应式为：丙酮酸＋4NAD ＋＋FAD ＋ADP ＋Pi ――→酶3CO 2＋4NADH ＋4H ＋＋FADH 2＋ATP注：①柠檬酸循环是从[C 2]开始，而非从丙酮酸开始。
②嵴上也有少量与柠檬酸循环有关的酶。
2.卡尔文循环光合作用的第二阶段，又称碳反应，反应场所为叶绿体基质。
其过程如图：(1)CO 2的摄取期这是循环的开始阶段。
1个CO 2与1个RuBP 结合形成1个六碳分子，这个六碳分子随即分解成2个PGA(三碳酸)，即1CO 2＋1RuBP →2三碳酸。
(2)碳还原期这是循环的关键步骤。
每个PGA 接受来自NADPH 的氢和来自ATP 的磷酸基团，形成G3P(三碳糖)，即2三碳酸――――――――→NADPH 、ATP 2三碳糖。
(3)RuBP 再生期1个碳原子将会被用于合成葡萄糖等而离开循环，剩下的5个碳原子经一系列变化，最后再生成1个RuBP ，循环重新开始。
形成1个离开卡尔文循环的三碳糖，需要3轮循环。
【技能提升】1.下列关于柠檬酸循环过程的叙述，正确的是( )A.细菌不含线粒体，不能进行柠檬酸循环B.柠檬酸循环过程复杂，故释放大量能量C.柠檬酸循环过程产生较多携带氢的特殊分子D.与柠檬酸循环有关的酶存在于线粒体基质中解析 进行需氧呼吸的原核生物也能进行柠檬酸循环；柠檬酸循环只释放少量能量；与柠檬酸循环有关的酶多数分布在线粒体基质中，少数分布在嵴上。
第35讲克隆技术浙江［学考＋选考]考纲确认考点知识内容加试二、克隆技术5.植物的克隆b 6。
动物的克隆a考点一| 植物的克隆技术1．植物细胞的全能性和组织培养方法（1)植物组织培养的原理：植物细胞具有全能性，即植物体的每个生活细胞都具有发育成完整植株的潜能。
（2)植物组织培养程序：配制培养基：配制含有适当营养物质和植物生长调节剂↓的半固体培养基.↓切取外植体：从消毒的根、茎、叶上切取一些小组织块。
↓获得愈伤组织：将组织块置于半固体培养基中培养，切口处细胞在创伤的刺激下发生脱分化,在创口表面形成一种由相对未分化的薄壁细胞团组成的新组织。
↓再生新植株:以适当配比的营养物质和植物生长调节剂诱导愈伤组织,直到再生出新植株.将含有愈伤组织的试管放在摇床上，通过液体悬浮培养,可以分散成单细胞（胚性细胞：细胞质丰富、液泡小、核大),这种单细胞可发育成胚状体，再继续发育可以形成植株。
2．植物细胞的全能性体现(1）相对于动物细胞，植物细胞的全能性更容易（填“难”或“容易"）体现。
（2）不同种类的植物或同种植物的不同基因型个体的细胞全能性表达程度不同。
（3）在长期培养中，培养物的胚胎发生和器官形成能力下降的可能原因：染色体畸变、细胞核变异或非整倍体产生；细胞或组织中的激素平衡被打破;细胞对外源生长物质的敏感性发生改变等.3．细胞培养和器官培养器官发生和形态建成主要是通过平衡植物激素配比进行调控:适量的生长素和细胞分裂素配比,可诱导芽的分化;适量的吲哚乙酸及适当减除某些其他激素，可诱导生根。
4．原生质体培养和植物细胞工程（1）原生质体的培养①制备原生质体的原因：植物细胞壁的存在，使植物组织培养与克隆有一定难度。
②制备原生质体的方法：在0。
5~0。
6 mol/L的甘露醇溶液环境下，用纤维素酶和果胶酶混合液处理。
（2）植物细胞工程：1．植物组织培养关键过程总结名称过程形成体特点培养基光脱分由外植体脱分排列疏松、高生长素与细胞避光（1)取材：含形成层（分生组织)的部分易于诱导形成愈伤组织。
2019-2020年高中生物第二章《克隆技术》教案浙科版选修3一、课标内容1．简述植物的组织培养。
2．简述动物的细胞培养与体细胞克隆。
3．举例说出细胞融合与单克隆抗体。
二、教学要求第一节什么是克隆（选学）第二节植物的克隆第三节动物的克隆三、教学建议1．课时建议（共计9课时）（1）“第二节植物的克隆”的教学重点是植物细胞的全能性、植物组织培养程序和植物细胞工程；教学难点是植物组织培养程序。
在教学过程中可运用启发式教学，激励学生主动去探索，在探究过程中体验科学研究与发展的本质。
教师要注意激发学生的创新思维和创造能力，注意提高学生的批判性思维。
由于学生在必修模块中已经学习过有关细胞全能性及细胞分化的知识，因而可利用必修内容中的实例“胡萝卜根的组织培养”引导学生思考，接下来以图文结合的形式介绍植物组织培养的基本过程、概念、已取得的进展和尚未解决的问题，使学生认同科学是一个不断发展的过程，激发学生探索生命科学奥秘的兴趣。
（2）“第三节动物的克隆”的教学重点是动物细胞组织培养、细胞核移植和动物的克隆繁殖；教学难点是细胞株系、细胞核移植和动物的克隆繁殖。
在讲授有关“动物的克隆”的有关内容时，由于已经有“植物的克隆”为基础，学生易于理解，因此可以讲授为主，辅之与自学、指导、讨论、探究等相结合的教学方式。
重点围绕三个问题：为什么要进行动物细胞的培养？什么是动物细胞的培养？怎样进行动物细胞的培养？明确动物细胞培养的过程及条件，区分原代培养与传代培养的概念。
动物体细胞核移植技术及克隆动物，既是动物细胞工程的重点内容，又是近几年来的热点问题，学生对此有一定的了解，如何做到在原有基础上提高呢？可从动物体细胞核移植技术在克隆动物中的作用——克隆动物的核心技术介绍，使学生在学习及思维的过程中对核移植技术有较深入地理解。
2019-2020年高中生物第二章《生物科学与工业》教案浙科版选修2一、课标内容1．举例说出发酵与食品生产。
2019最新浙科版生物选修3第一节《什么是克隆》教案【教学目标】知识与能力方面：1.说出有性生殖和无性生殖的含义。
2．简述克隆的含义及在不同水平上的克隆技术的含义。
3.描述克隆技术的发展历程。
4.举例说出克隆的基本条件。
过程与方法方面：通过克隆技术的发展历程的学习,认识生物科技进步的基本规律。
情感态度、价值观方面：认同生物科技的发展,体会S、T、S三者之间的关系。
【教学重点】克隆技术的概念,克隆技术的发展历史。
【教学难点】克隆技术的三个水平。
【教学方法】讲授法。
【教学课时】1课时。
【教学过程】（导入新课）我们在必修课中已经学过了生物的有性生殖过程,请同学们回忆一下,高等动物物如何进行有性生殖？生答：先进行减数分裂,然后进行受精作用。
师总结：也就是说,先由雌雄亲本分别产生有性生殖细胞,之后经过两性生殖细胞的融合,合子发育为新个体。
这种有性生殖对生物的进化带来什么优势？生答：使生物后代具有更大的变异性,更能适应多变的环境。
虽然有性生殖具有更大的优势,但是实际上,自然界还是有很多的生物进行无性生殖,在英文中有一个单词CLONE就是指的通过无性繁殖获得的群体,即无性繁殖系。
（提出问题）如何理解克隆？（学生活动）阅读教材P18,找出克隆的三个水平的含义。
（总结归纳）克隆这个词语经过发展,现在一般可以具有三个水平的含义。
分子水平:由一个模板分子直接形成一个新一代分子,一般指DNA分子通过复制进行克隆。
实际上现在所讲的基因克隆并不单单指DNA的复制,而是特指基因工程中基因的复制、分离过程。
细胞水平：一个母细胞通过细胞增殖获得子代细胞,例如,在微生物培养时,由一个大肠杆菌形成一个菌落的过程。
个体水平:特指生物个体的无性生殖过程。
（提出问题）克隆技术是什么（学生活动）阅读教材P18-P19,找出克隆技术的定义,并总结三个水平的克隆技术（总结归纳）克隆技术是指从众多的基因或细胞群体中通过无性生殖和选择获得目的基因或特性类型细胞的技术操作。
第33讲克隆技术考点克隆技术一、植物的克隆1。
植物克隆(1)技术基础:植物组织培养（2）理论基础：植物细胞的全能性--原因：植物体的每个生活细胞都具有完整的全套遗传物质。
（3）植物细胞的全能性的实现条件：离体；适当的营养（包括水、无机盐、维生素、蔗糖、氨基酸等）;适宜条件(无菌、温度、湿度、光照等)以及生长调节物质。
（4)植物激素的作用：诱导愈伤组织的形成和生长；诱导和控制再分化过程。
2。
植物组织培养（1)程序：半固体培养基的配制→小组织块的切取→愈伤组织的获得→新植株的再生。
(2)填写基本操作过程图:错误!错误!错误!错误!错误!―→错误!图中①脱分化，②再分化，A表示愈伤组织，B表示胚状体或丛状苗。
3。
植物细胞培养和器官培养（1)植物细胞培养程序：愈伤组织→用摇床进行液体悬浮培养→单个胚性细胞→在适宜培养基中培养→细胞团→球形胚→心形胚→胚状体→完整植株。
（2)器官发生和形态建成的实现：通过平衡的植物激素配比进行调控。
如适量的生长素和细胞分裂素配比，可诱导芽的分化；适量的吲哚乙酸及适当减除其他某些激素，可诱导生根。
4.原生质体培养与植物细胞工程（1)原生质体的获得方法：在0。
5～0.6 mol/L的甘露醇溶液环境(较高渗透压)下,用纤维素酶和果胶酶混合液处理根尖、叶片、愈伤组织或悬浮培养细胞，除去细胞壁，获得球形的原生质体。
（2）植物细胞工程的操作过程外源遗传物质错误!转基因细胞错误!新植株5.植物克隆技术的应用（1)实现工厂化的植物快速繁殖（2)生产脱毒苗，恢复品种的性状（3）生产重要的次生代谢产物，如药物、色素、香料、杀虫剂等（4）育种(植物细胞工程）：转基因作物，突变体选择，单倍体育种二、动物的克隆1。
动物细胞、组织培养(1)动物克隆的技术基础是动物的细胞和组织培养.（2)动物（成纤维）细胞培养的过程:（3)动物细胞培养必需传代的原因：细胞培养到一定时期，细胞会因为密度过大造成接触抑制,或者因为代谢消耗引起营养枯竭，不能正常生长.(4)原代培养和传代培养的含义①原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养的过程。
第三节动物的克隆1．简述动物细胞、组织培养。
(重点) 2.描述细胞系及细胞株的含义。
3．简述动物的克隆培养法。
4.掌握动物细胞核移植的概念和核移植的程序。
(难点)一、动物细胞的培养和克隆形成1．动物细胞培养(1)将动物体内的一部分组织取出，经过机械消化或胰酶消化，使其分散成单个的细胞，然后，在人工控制的培养条件下，使这些细胞得以生存并保持生长、分裂乃至接触抑制和有规律的衰老、死亡等生命活动现象。
(2)动物细胞培养的流程：取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入特殊培养液中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
2．动物组织培养动物组织在体外及人工条件下维持生活状态或生长特性。
由于细胞的运动、变化和培养物的组织成分发生变化，长期的培养结果最终成了简单的细胞培养。
综合细胞培养和组织培养的含义和规律，两者在一定程度上可以看作是同义语，因此可将它们统称为组织培养(组培)。
3．细胞系与细胞株细胞系泛指可传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系。
1．动物细胞培养中，出现遗传物质改变的细胞被称为什么？提示：细胞系。
4．克隆培养法(1)概念：把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍成一个新的细胞群体的技术。
(2)细胞克隆的最基本要求：必须肯定所建成的克隆来源于单个细胞。
(3)提高细胞克隆形成率的措施：选择适宜的培养基、添加血清、以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱、调节pH等。
二、细胞的融合技术及其应用1．细胞融合与细胞杂交(1)细胞融合①概念：是指将两个或多个动物细胞融合为一个细胞的现象。
②原理：细胞膜的流动性。
③诱导融合的方法 a ．物理方法和化学方法：电激法、聚乙二醇等。
b ．生物方法：灭活的病毒(如仙台病毒)。
(2)细胞杂交①概念：基因型不同的细胞间的融合就是细胞杂交。
②过程③应用：由于细胞杂交中染色体容易丢失，利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物(蛋白质)减少的对应关系可以进行基因定位。
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第二节动物的克隆1。
动物克隆的技术基础主要是动物细胞与组织培养.2。
动物细胞培养的过程：错误!错误!错误!错误!错误!―→错误!―→错误!3.动物细胞培养的原理是细胞增殖。
4。
动物细胞培养一般选用胚胎或幼龄动物的组织，细胞在培养过程中会出现细胞贴壁（生长）和细胞的接触抑制现象.5.原代培养物在首次传代时就成为细胞系；通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞,称为细胞株。
6。
把一个细胞从群体中分离出来培养，使之繁殖成一个新的细胞群体的技术称为克隆培养法。
一、动物细胞的培养和克隆形成1．动物细胞的培养(1）过程(填图)：(2)培养瓶内细胞生长特点:①贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁生长。
②接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞停止分裂增殖的现象。
（3)原代培养与传代培养：①原代培养：从机体取出后立即进行的细胞或组织培养为原代细胞。
②传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养(10代以外的培养）。
2．细胞系和细胞株(1)细胞系：可连续传代的细胞。
原代培养物在首次传代时就成为细胞系，能连续培养下去的细胞系称为连续细胞系,不能连续培养下去的细胞系称为有限细胞系.二倍体细胞通常为有限细胞系。
列叙述正确的是()A．三者都涉及基因工程技术B．三者都是在细胞或细胞器水平上的操作C．克隆动物属于无性生殖范畴D．人工种子的胚状体是由受精卵发育而成的【解析】乳腺生物反应器采用了基因工程技术，人工种子和克隆动物都采用了细胞工程技术，克隆动物是由重组细胞发育成完整的个体，该个体并非由受精卵发育而来，因此克隆动物属于无性生殖的范畴，人工种子的胚状体是由植物组织培养获得的，并非由受精卵发育而来。
【答案】 C关于哺乳动物细胞体外培养的难易程度，下列表述正确的是()A．乳腺癌细胞易于乳腺细胞；胚胎细胞易于脂肪细胞B．乳腺细胞易于乳腺癌细胞；胚胎细胞易于脂肪细胞C．乳腺细胞易于乳腺癌细胞；脂肪细胞易于胚胎细胞D．乳腺癌细胞易于乳腺细胞；脂肪细胞易于胚胎细胞【解析】哺乳动物的乳腺细胞和脂肪细胞都是高度分化的细胞，体外培养难度大，乳腺癌细胞能够恶性增殖，容易进行体外培养，胚胎细胞具有很强的分裂增殖能力，容易进行体外培养，A正确。
【答案】 A1.(1)均能打破物种之间的生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍。
(2)均能按照人的意愿定向改良生物性状。
2．不同点(1)原理不同：细胞工程是细胞(或细胞核)的全能性，细胞膜的流动性及细胞增殖；基因工程是DNA分子组成、结构和遗传密码的统一性。
(2)操作水平不同：细胞工程是细胞或细胞器水平；基因工程是分子水平。
(3)工具酶不同：细胞工程用到纤维素酶和果胶酶(植物体细胞杂交)或胰蛋白酶(动物细胞培养)；基因工程用到限制性核酸内切酶和DNA连接酶。
(4)目的不同：细胞工程是为了改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品；基因工程是创造出人们需要的新的生物类型和生物产品。
3．联系(1)转基因植物的获得离不开植物组织培养。
(2)转基因动物的培育离不开动物细胞培养。
下列生物工程技术中，不属于细胞工程的是()A．通过试管动物大量繁殖优良动物B．利用含有人胰岛素基因的大肠杆菌生产胰岛素C．通过体细胞克隆技术培养出克隆羊D．将某人的肝癌细胞在实验室中繁殖成一个细胞系【解析】A、C、D三项操作水平为细胞或细胞器水平，属于细胞工程；B 项操作水平为DNA分子水平，属于基因工程。
【答案】 B花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病，野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。
用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。
再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。
流程如下图。
据图回答下列问题：(1)过程①所需的酶是____________________ 。
(2)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是______________________。
原生质体经过________再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。
(4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和________植株的根尖，通过________、________、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。
(5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。
下图是用该引物对双亲及再生植株1～4进行PCR扩增的结果。
据图判断，再生植株1～4中一定是杂种植株的有________。
(6)对杂种植株进行________接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。
【解析】熟记植物体细胞杂交过程，准确解读信息是解题关键。
(1)获取植物细胞的原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞。
(2)根据题干信息可知，供体使用的是叶肉细胞的原生质体，所以可将融合的细胞是否含叶绿体作为初步筛选杂种细胞的标志。
(3)原生质体因没有了细胞壁，在低渗溶液中容易吸水涨破，加入甘露醇可保持一定的渗透压，以保持原生质体的完整性。
原生质体需再生出细胞壁形成杂种细胞，然后经分裂、脱分化形成愈伤组织。
(4)若要分析再生植株的染色体变异类型，需对再生植株细胞和双亲细胞的染色体形态与数目进行比较。
植物细胞有丝分裂装片的制作包括解离、漂洗、染色和制片四个步骤。
(5)由图可知，植株1、2、4的条带中除了具有花椰菜的DNA 片段外，还有来自黑芥的DNA片段，所以是杂种植株。
(6)对杂种植株进行病原体(黑腐病菌)接种实验，若不患黑腐病，即为高抗性杂种植株。
【答案】(1)纤维素酶和果胶酶(2)叶绿体(3)保持原生质体完整性细胞壁(4)双亲(或花椰菜和黑芥) 解离漂洗(5)1、2、4(6)黑腐病菌1．在多莉羊的克隆过程中，没有运用的技术手段是()A．细胞培养B．体细胞核移植C．胚胎移植D．基因工程【解析】考查克隆羊产生的过程。
多莉羊的培育过程是：将一只母羊(A 羊)卵细胞的细胞核吸出，获得去核卵细胞。
将另一只母羊(B羊)的乳腺上皮细胞的细胞核注入到去核卵细胞中并进行电刺激，形成一个同时含有B羊核遗传物质和A羊细胞质的重组卵细胞。
融合后的细胞经过体外细胞培养形成早期胚胎，然后移植到第三只羊(C羊)的子宫中继续发育。
该过程既涉及到体细胞核移植，又涉及胚胎移植，这两项技术操作都需细胞培养作为手段。
【答案】 D2．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是()A．纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性B．植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性C．原生质体融合和动物细胞融合——生物膜的流动性D．紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂【解析】B项中动物细胞培养利用的是细胞增殖原理，其余各项均是相符的。
【答案】 B3．如图列举了几种植物的育种方式，据图分析下列说法中正确的是()A．丁过程证明已经分化的植物细胞具有全能性B．经乙过程处理，愈伤组织发生定向的变异C．甲、丙两种育种方式与传统杂交育种相比，其优点是能克服不同物种间远缘杂交的不亲和性D．丙方式将外源目的基因导入植物细胞，只能以受精卵作为受体，因为受精卵大，容易操作【解析】离体的植物细胞经脱分化后可表现出全能性，已经分化的细胞全能性并不能表达；经乙处理的细胞发生了基因突变，但突变是不定向的；甲、丙过程分别采用了细胞工程技术和基因工程技术，都克服了远缘杂交不亲和的障碍；将目的基因导入植物细胞时，常采用卵细胞和体细胞作为受体细胞。
【答案】 C4．关于番茄—马铃薯杂种植株，下列叙述不正确的是()A．若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞含n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞内含(m＋n)条染色体B．过程②结束后需要淘汰自身融合的细胞C．过程③不存在细胞分裂D．这项技术已经广泛应用到杂种植物的培育中【解析】番茄与马铃薯的体细胞融合后染色体数目不会减少，应为m＋n。
由于杂种植株没有像人们想象的那样达到预期效果，所以还未被广泛应用，细胞融合后会产生如“马铃薯—马铃薯”“番茄—番茄”细胞，需进行自身融合淘汰，③为杂交细胞再生细胞壁，不进行细胞分裂。
【答案】 D5．(多选)下列事实能体现细胞全能性的是()A．棉花根尖细胞经诱导形成幼苗B．单细胞的DNA在体外大量扩增C．动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体D．小鼠体细胞经诱导培育成小鼠【解析】细胞全能性是指已分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能，所以判断是否体现细胞全能性的依据是看其能否发育成完整个体，选项中只有A、D项符合。
B项DNA的扩增和C项杂交瘤细胞的培养分别属于分子和细胞水平上的克隆，不能体现细胞全能性。
【答案】AD6．(多选)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。
下列相关叙述正确的是()A．设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列B．用PCR技术扩增目的基因时不必知道基因的全部序列C．PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶D．一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞【解析】设计引物时应当考虑需扩增的目的基因与载体两端的序列进行互补配对，A项错误；利用PCR技术扩增目的基因只需要知道基因两端的序列，据此设计合适的引物即可，不必知道基因的全部序列，B项正确；PCR体系中应该用耐高温的DNA聚合酶，而不是从受体细胞中提取的普通DNA聚合酶，C 项错误；需根据目的基因的编码产物的特性来选择合适的受体细胞，如果是分泌蛋白，则最好选用真核细胞作为受体细胞，D项正确。
【答案】BD7．有性生殖的生物产生后代需进行受精作用，植物体细胞杂交要进行原生质体的融合，单克隆抗体的制备需进行动物细胞融合，可见细胞的融合技术有着广泛的应用。
下列为细胞融合的简略过程，据图回答相关问题：细胞融合(1)若a、b分别是基因型为Hhrr、hhRr两个烟草品种的花粉，且这两对基因分别位于两对同源染色体上。
由于一对隐性纯合基因(rr或hh)的作用，在光照强度大于800 lx时都不能生长，要想从融合细胞的培养液中分离出基因型为HhRr 的杂种细胞，较为简便的筛选方法是________________________________________________________________________________________________________________。
(2)若a、b表示两种植物体细胞，则由d细胞形成杂种植株的原理是______________________________________________________________。
这种育种方法的优点是______________________________________。
(3)若a、b分别为骨髓瘤细胞和效应B细胞，则d细胞特点是________________________。
由d细胞产生的抗体与普通血清抗体相比较，具有______________________的特点。
一般不能通过直接培养效应B细胞的方法生产单克隆抗体的主要原因是________________________________________ ______________________________________________________________。
(4)下列各图表示单克隆抗体制备过程的各阶段图解，请用箭头把代表各图解的字母按单克隆抗体制备过程的顺序连接起来，顺序是______________________________________________________________。
【解析】(1)基因型为Hhrr的烟草可产生Hr及hr花粉，基因型为hhRr 烟草可产生hR及hr花粉，故融合细胞的基因型可存在HhRr、Hhrr、hhRr及hhrr 和各类型花粉自身融合类型，在这些所有的融合类型中，在光照大于800 lx下能生长的只有HhRr，故可用该光照作为选择条件。
