(3)pH7.6,mol/L的磷酸缓冲液.
(4)0.2mol/L丁酸溶液:取18ml正丁酸,用 1mol/L氢氧化纳溶液中和至pH=7.6,并稀 释至1000ml。
(5)15%三氯乙酸溶液。
(6)10%氢氧化钠溶液。
(7)10%盐酸溶液。
3. 器材
玻璃皿 试管及试管架 漏斗 剪刀及镊子 恒温水浴
氨基酸与茚三酮反应,在滤纸上呈现紫红色斑 点。
实验二 脂肪酸的β-氧化
实验目的
1.了解脂肪酸的β-氧化作用; 2. 通过测定和计算反应液内丁酸氧化生
成丙酮的量,掌握测定β-氧化作用的方 法及其原理。
实验原理
根据β—氧化学说,机体组织能将脂肪酸氧化 生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合 成乙酰乙酸。在肝脏内,乙酰乙酸可脱羧生成 丙酮,也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的 中间产物。在正常情况下,其产量甚微;患糖 尿病或食用高脂肪膳食时,血中酮体含量增高, 尿中也能出现酮体。
根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠 之差,可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。
试剂和器材
1. 材料
动物:家兔
2. 试剂
(1)Locke氏溶液:取0.9g氯化钠、0.042g氯化 钾、0.024g
氯化钙、0.015g碳酸氢钠及0.1g葡萄糖,溶于 水中,稀释到100ml
(2)0.1mol/L碘溶液:称取12.7g碘和约25g碘化钾, 溶于水中,稀释到1000ml,混匀,用标准硫代硫酸 钠溶液标定.
烧杯。 针、线、喷雾器。
操作方法
1. 酶液的制备 将兔击晕,迅速解剖,取出肝脏,在低
温条件下剪碎。用表面皿称取1.5g肝脏, 放入匀浆器中,再加入3ml磷酸缓冲液。 研成匀浆后,倒入离心管中,在 2500r/min的条件下,离心5min,取上清 液,即为制备的酶液。