炭疽实验室检测技术 杨发莲讲解共38页

炭疽防治技术规范
丰台区动物卫生监督所 吴长福
2021/6/10
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炭疽 Anthrax
2001.9.11事件后， 恐怖分子利用炭疽杆菌 进行恐怖主义活动。
2021/6F/1B0 I调查佛州发生的炭疽热事件
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2021/6/10
2005年7月，我国贵州、宁夏、辽宁、 吉林发生人炭疽，1人死亡. 2012年8月，江苏、辽宁发生人炭疽。
冻皮，应分开取样，不得混掺。
4.取样完毕的皮张，在未收到检疫结果通知单前，应保持原 状，不得重新分类、包装、加工和移动。
5. 取样人员，应进行炭疽预防注射和具有一定的防疫知识 。 在工作前，应穿好防护服，工作后，应充分消毒洗手，工 作服须进行103.41kPa高压蒸汽灭菌，要严格遵守防疫卫 生制度。
• 在濒死后可见鼻流出血样泡沫，肛门及阴门流 出不易凝固的血液。
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临床症状
➢ 急性型：常发生于牛、马
• 体 温 升 高 （ 40-42℃ ） ， 精 神 沉郁，食欲减退，瞳孔散大， 恶寒战栗，呼吸困难，脉博加 快。
• 粘膜发紫，病初便秘，腹泻带 血，尿暗红色，泌乳停止，孕 畜流产，濒死期体温急速下降 ，一般经1-2天死亡。
外毒素
水肿因子 保护性抗原 致死因子
抗吞噬，局部水肿 细胞坏死
单独存在不发挥其活性，三者协同发挥毒素效应。
2021/6/10
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流行病学
➢传染源：
• 主要传染源是病畜，其次是带菌动物。
• 病畜处于菌血症时，细菌可随分泌物、排 泄物、破溃的肿胀部渗出液及天然孔的溢 血排出。
• 尸体中含有大量的炭疽杆菌，如处理不当 ，污染环境，可成为持久的疫源地。
咽喉部红肿

对溃疡部位进行组织病理检查，发现炭疽杆 菌的存在。
经抗生素治疗和局部清创处理后，患者病情 好转，最终诊断为皮肤炭疽病。
病例三：食物中毒疑似病例
病史询问
患者曾食用过病死动物，后出现恶心、呕 吐、腹痛、腹泻等症状。
进一步检查
对患者进行呕吐物和排泄物的检查，发现 炭疽杆菌的存在。
初步诊断
患者食物中毒，疑似为炭疽杆菌引起的食 物中毒。
实验室检查
炭疽病的实验室检查包括涂片镜 检、分离培养、抗体检测和基因 检测等，其中涂片镜检是最常用 的诊断方法之一。
诊断标准
根据患者的临床表现、接触史以 及实验室检查结果，综合考虑诊 断为炭疽病。
炭疽的治疗
隔离与治疗
炭疽病患者应立即隔离治疗， 同时对接触者进行医学观察和
预防性治疗。
药物治疗
炭疽病的治疗药物包括抗生素、 抗休克药物、免疫抑制剂和抗炭 疽血清等，应根据患者的具体情 况选择合适的药物。
进一步检查
血液检查显示白细胞和中性粒细 胞升高，肺部CT检查发现肺部炎 症。
最终诊断
经抗生素治疗和症状缓解后，患者 病情好转，最终诊断为炭疽病。
病例二：皮肤溃疡合并感染
病史询问
初步诊断
患者曾接触过病死动物，后出现皮肤溃疡、 疼痛等症状。
患者皮肤溃疡，合并感染，考虑为皮肤炭疽 病。
进一步检查
最终诊断
人群普遍易感，但职业接触动物或 其产品的高危人群更易受感染。
炭疽的临床表现
皮肤炭疽
表现为皮肤无痛性水肿、水疱 、溃疡和黑痂形成等。
肠炭疽
表现为急性胃肠炎、出血性肠 炎和败血症等。
肺炭疽
表现为高热、咳嗽、呼吸困难 等，可并发败血症和脑膜炎。

大多为原发性，由吸入 炭疽杆菌芽胞所致，也 可继发于皮肤炭疽。起 病多急骤，但一般先有 2～4日的感冒样症状， 且在缓解后再突然起病， 呈双相型。
临床症状不一，可表现 为急性胃肠炎型和急腹 症型。前者潜伏期12～ 18小时，同食者可同时 或相继出现严重呕吐、 腹痛、水样腹泻，多于 数日内迅速康复。
大多继发于伴有败血症 的各型炭疽，原发性偶 见。临床症状有剧烈头 痛、呕吐、抽搐，明显 脑膜刺激征。
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监测预警系统建设
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完善炭疽病监测网络
01
建立健全炭疽病监测体系，及时发现和报告疫情。
加强实验室检测能力
02
提高实验室检测技术和水平，确保准确、快速地诊断炭疽病。
开展风险评估和预警
03
定期对炭疽病疫情进行风险评估，发布预警信息，指导公众采
取有效防护措施。
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应急处置流程规范
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诊断标准及鉴别诊断
诊断标准
根据流行病学史、临床表现及实验室检查结果进行综合分析。具有流行病学史 是诊断炭疽的重要前提条件之一。皮肤炭疽具有典型的皮肤损害，其诊断不难。
鉴别诊断
皮肤炭疽须与痈、蜂窝织炎、丹毒、恙虫病和野兔热等鉴别；肺炭疽须与各种 细菌性肺炎、病毒性肺炎、支原体肺炎和肺梗死等鉴别；肠炭疽须与急性菌痢、 急腹症、急性胃肠炎和食物中毒等鉴别。
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结果解读与报告出具
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结果解读
结合实验室检查项目结果，分析判断患者是否感染炭疽杆菌及 感染类型。
报告出具
出具规范的实验室诊断报告，包括患者信息、检查项目、结果 及结论等，为临床诊断和治疗提供依据。同时，注意报告的及 时性和准确性，确保患者得到及时有效的治疗。

肠炭疽与急性菌痢、出血性肠炎等鉴别
肠炭疽的临床症状与这些肠道疾病相似，但治疗方法不同，需通过实验室检测和临床表现 进行鉴别。
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治疗与预防措施
治疗方案及原则
早期治疗
抗生素治疗
炭疽感染后应尽早开始治疗，以降低死亡 率。
首选青霉素类抗生素，如阿莫西林、氨苄 西林等。若对青霉素过敏，可选用其他抗 生素，如四环素、氯霉素等。
炭疽
汇报人：XXX 2024-01-19
目录
• 炭疽概述 • 诊断与鉴别诊断 • 治疗与预防措施 • 并发症与危害程度评估 • 患者教育与心理支持 • 总结与展望
01
炭疽概述
定义与病原学
定义
炭疽是由炭疽杆菌引起的一种急 性、热性、败血性人兽共患病。
病原学
炭疽杆菌为革兰氏阳性粗大杆菌 ，两端平齐，排列如竹节状，无 鞭毛，不能运动，在人体内有荚 膜形成并具较强致病性。
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加强炭疽疫苗研发与应用
随着生物技术的不断发展，未来有望研发出更加 安全、有效的炭疽疫苗，提高人群的免疫保护水 平。
推动炭疽治疗手段创新
针对炭疽治疗手段有限的问题，未来将加大研发 力度，探索新的药物和治疗方法，提高患者治愈 率。
完善炭疽疫情监测与报告体系
借助大数据、人工智能等先进技术，完善炭疽疫 情的监测和报告体系，实现疫情的及时发现和快 速处置。
05 患者教育与心理支持
患者教育内容
炭疽的基本知识
01
向患者解释炭疽的病因、传播途径、症状、治疗及预防等相关
知识。
治疗方案和药物使用
02
详细介绍炭疽的治疗方案，包括使用的药物、剂量、用法及可
能产生的副作用等。
自我护理和预防措施

二、炭疽病原检验程序 图1示。
皮肤渗出物、血液、 粪便或呕吐物、土 壤或动物标本
直接涂片 （革兰氏染色）
细菌培养
必要时做PCR
见到革兰氏阳性大 杆菌，可定为临床 诊断病例
未见到革兰氏阳性 大杆菌，继续别的 试验
直接划平板
直接划平板后的标 本可增菌培养
培养12~24h，选可疑 菌落做青霉素敏感和 噬菌体裂解试验

2.注意事项：ELISA实验的结果受操作影响 很大，每个步骤包括加样、温育、洗涤、显色、 酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA 的高灵敏、强特异的优点。因此，应建立实验 项目的标准操作程序(SOP)。报告方式以定量 分析结果的滴度单位表示；检测时应以接种疫 苗前或初报告病例地方的人或动物的血清作为 阴性血清，如有可能也可设阳性血清对照。阴 性血清每次都要和待测标本同时做。





五、实验方法 （一）标本采集 1.采集标本时应遵循的原则:尽可能在抗生素治疗 开始前采集标本，除必要时并在具备操作病毒细菌条 件的实验室内，不得用解剖的方式获得标本。所需的 血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。所有标本均 置无菌容器中 2.血液标本：所有疑似病例，采取血液标本510ml（不加抗凝剂）。 3.皮肤损害处标本：玻片直接在皮肤破损处压蘸； 再用棉签采皮肤损害处渗出物，（不加增菌肉汤）。 4. 粪便与呕吐物标本：有消化道症状的采粪便或 呕吐物标本，注意选取其中混有血液的部分。 5. 痰与咽拭子标本：有呼吸道症状的收集痰液及 咽拭子标本。



（三）具体程序 1.包被抗原：用包被缓冲液将已知抗原稀释至0.3 μg／ml，每孔加0.1 ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶 液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。 洗涤缓冲液配方为：Tris 2.42克，1mol/L HCI 13mL,吐温-20（0.05%）0.5mL, 加蒸馏水至1000mL。 2.待检血清反应：加1:8稀释(稀释液为生理盐水) 的待检样品0.1 ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育60分钟，洗涤3次，每次3分钟。(同时做空白、阴 性及阳性孔对照)

条件下亦可产生，为炭疽毒素的组成成分之一， 具有免疫原性，能使机体产生抗炭疽杆菌的保 护力。
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抗原结构
庄汗澜、牟兆钦等探讨了保护性抗原（PA） 的免疫机制，发现： 1、PA免疫后，动物产生抗PA抗体、血中吞噬 细胞被激活，抗PA抗体除中和作用外，在体 内能直接杀灭炭疽芽孢杆菌； 2、PA免疫动物抑制入侵的炭疽芽孢出芽，在 炭疽强毒芽孢攻击后1-3天内，PA免疫兔的肝、 脾、淋巴结切片中只见少量芽孢而无繁殖体， 而对照兔组织内细菌以繁殖体为主；
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培养特性与生化反应
在某些培养基上，炭疽杆菌在培养6h 开始产生紫红色色素，在碱性条件下为 红色，24h达高峰，色素的生物学功能 不详，据认为与培养基的硫酸亚铁含量 有关。
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抗原结构
炭疽芽孢杆菌的抗原组成主要包 括荚膜抗原、菌体抗原、芽孢抗原及 保护性抗原等四种成分。
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抗原结构
荚膜多肽抗原：
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病原学
形态与染色 炭疽杆菌在机体内或含血清或碳酸氢钠特殊培
养基中可形成荚膜。荚膜抗腐败能力大于菌体，因 此在腐尸检片中可见到称为菌影的无内容物的荚膜。 荚膜是由质粒DNA编码，无毒菌株不产生荚膜。
荚膜成分为D-多聚谷氨酸，由荚膜质粒控制，与 炭疽杆菌治病力有关，在体内能抑制白细胞的吞噬 和消化，在体外能阻断菌体胞壁上的噬菌体受体， 有助于病菌在体内繁殖扩散和建立感染。
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抗原结构
芽孢抗原： 由芽孢的外膜、芽孢壳等组成的芽孢特异
性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。最 新研究发现炭疽芽孢抗原在炭疽芽孢感染、致 病和免疫上也起作用。芽孢外膜的胶原样糖蛋 白是免疫显性抗原，能刺激机体产生强烈免疫 应答。
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处理方法
诊断及处理方法
诊断：耳静脉消毒后采血液、或采水肿液，涂片镜检，用 姬姆萨或荚膜染色法染色，显微镜检查若发现单个或1～4 个短链排列的竹节状的大杆菌，即可确诊。或用环状沉淀 法进行血清学检验。 处理：宰前检疫发现炭疽病畜时，应采取不放血方法扑杀， 销毁或深埋。同群动物全群测温，体温正常者急宰，胴体、 内脏高温处理后出厂。被污染的场地、用具用5%～10％ 氢氧化钠或20％漂白粉液消毒。
染疫物的处理
一、染疫动物的扑杀：烈性传染病或烈性人畜共患病的染疫动物立即扑杀；新 发生的某种传染病，将最初疫点内的患病与可疑患病动物全部扑杀；疫区解除 封锁前，为了尽快拔除疫点，可将带病原的或检疫阳性的动物扑杀；某些慢性 传染病，如结核、布病等每年检疫，阳性动物扑杀。
二、畜禽尸体无害化处理 工作人员做好自身防护工作。运送尸体应用特制的运尸车。装车前将尸体各天 然孔用蘸有消毒液的湿纱布、棉花严密填塞，小动物和禽类可用塑料袋盛装， 以免流出粪便、分泌物、血液等污染周围环境。尸体污染的环境彻底消毒。 1、掩埋法：选择远离住宅、农牧场、水源、草原及道路的僻静之处，土质干 而多孔、地势高，水位低处，尸体上、下都应铺石灰。 2、焚烧法：毁灭尸体最彻底的方法，可在焚尸炉中进行。如无焚尸炉，则可 挖掘焚尸坑。 3、化制法：不仅对尸体做到无害化处理，并保留了有价值的畜产品，如工业 用油脂及骨肉粉。需在有一定设备的化制站进行，恶性传染病高压灭菌、普通 传染病切块后煮沸。 4、发酵法：利用生物热发酵进行。
深化
临诊检疫 初步检疫
实验室检疫 准确检疫
镜检法 环状沉淀法
学生分组操作
炭疽病病料采集、镜检 环状沉淀法操作技术
炭疽病病料采集、镜检
疑为炭疽动物，除慢性者外，其他不论是最急性者或急性者均予生前将耳部消 毒后取血液，病变部取水肿液或渗出液等直接涂于载玻片上，自然干燥后，将玻片 涂面相对叠好，中间用火柴杯隔开，以线捆扎，外用塑料纸包好。或用灭菌脱脂棉 滤纸、布片吸取血液等放于小试管中，待检。

诊断
根据患者的病史、临床表现和实验室检查结果进行诊断。实验室检查包括细菌学检查（如涂片镜检、细菌 培养等）和血清学检查（如抗体检测等）。同时，结合流行病学史和接触史也有助于诊断。
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炭疽杆菌生物学特性
形态与染色特性
形态
炭疽杆菌为革兰氏阳性粗大杆菌，两端平齐，呈竹节状排列。
染色特性
炭疽杆菌革兰氏染色呈阳性，菌体易被碱性染料着色。
防护措施和动物实验条件。
实验人员防护装备穿戴要求
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实验服
穿戴专用实验服，避免皮肤暴 露。
口罩
佩戴N95或更高级别的口罩， 防止吸入炭疽杆菌。
手套
穿戴双层手套，确保手部不直 接接触炭疽杆菌。
护目镜或面罩
保护眼睛和面部不受飞溅物污 染。
实验废弃物处理规定
废弃物分类 将实验废弃物按照感染性、化学性、 放射性等不同类别进行分类收集。
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观察疗效及调整治疗方案 治疗过程中应密切观察患者病情变化，及时调整 治疗方案。
辅助治疗措施介绍
局部处理
对皮肤炭疽，应保持局部清洁，避免挤压，可用 碘伏或双氧水消毒。
对症治疗
高热者可给予物理降温或药物降温；疼痛明显者 可给予镇痛药；保持水、电解质平衡等。
支持治疗
患者应卧床休息，加强营养支持，提高机体免疫 力。
患者护理与康复指导
心理护理
关心患者心理状况，消除其恐惧、 焦虑情绪，树立战胜疾病的信心。
饮食护理
给予高热量、高蛋白、高维生素 的易消化食物，鼓励患者多饮水。
皮肤护理
保持皮肤清洁干燥，避免搔抓患 处；穿着宽松、柔软的衣服，减 少摩擦。
康复指导
患者出院后应继续休息一段时间， 避免过度劳累；注意个人卫生， 防止再次感染；定期复查随访。

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流行病学特点
传染源
易感人群
患病的动物和人是主要传染源，特别 是病死动物及其制品。
人群普遍易感，但从事畜牧业、屠宰 业、皮毛加工业等职业的人群更容易 感染。
传播途径
主要通过接触传播，如接触患病动物 或其制品、食用未煮熟的病肉等。此 外，还可通过呼吸道吸入炭疽杆菌芽 孢而感染。
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临床表现与分型
• 皮肤炭疽：最常见，约占95%。病变多见于面、颈、肩、手和脚等裸露部位 皮肤。初为斑疹或出血疹，第2日为疱疹，内含黄色液体，周围组织硬而肿胀 。第3～4日中心呈现出血性坏死稍下陷，四周有成群小水疱，水肿区继续扩 大。第5～7日坏死区溃破成浅溃疡，血样渗出物结成硬而黑似炭块状焦痂， 痂下有肉芽组织生成。焦痂坏死区的直径大小不等，其周围皮肤常有浸润性水 肿。
• 脑膜型炭疽：常继发于伴有败血症的各型炭疽。原发性偶见。临床症状有剧烈 头痛、呕吐、抽搐，明显脑膜刺激征。病情凶险，发展特别迅速，患者可于起 病2～4日内死亡。脑脊液大多呈血性。
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诊断标准及鉴别诊断
诊断标准
根据患者的流行病学史、临床表现和 实验室检查结果进行诊断。具体标准 包括：疑似病例、确诊病例和病原学 诊断病例。
一般治疗措施
隔离治疗
炭疽患者应严格隔离，避免传染给他人。同时，医护人员需做好防 护措施，防止自身感染。
对症支持治疗
根据患者具体症状，给予相应的对症支持治疗，如补液、维持电解 质平衡、营养支持等。
并发症处理
炭疽患者可能出现多种并发症，如败血症、感染性休克等，需及时识 别并处理。
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抗菌药物治疗原则及药物选择
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分子生物学检测方法
PCR技术
利用特异性引物对炭疽杆菌DNA进行扩增，通过凝胶电泳等方法检测扩增产物， 具有高灵敏度和特异性。