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分析检测6起副溶血性弧菌食源性疾病聚集事件分离株病原学特征分析李东迅，舒高林，王维钧，张 阳，谷 田，牛桓彩*（北京市昌平区疾病预防控制中心，北京 102206）摘 要：目的：分析北京市昌平区2018—2019年6起副溶血性弧菌食源性疾病聚集事件分离株的血清型、耐药性、毒力基因和分子特征。
方法：对6起事件中的23株副溶血性弧菌进行血清学分型、毒力基因检测、微量肉汤稀释药敏实验和脉冲场凝胶电泳。
结果：21株人源分离株鉴定为3种血清型（O3:K6、O4:K8和O4:KUT），主要为O3:K6型，毒力基因均为tlh+、tdh+、trh-；2株食品分离株血清型为O8:K20，毒力基因为tlh+、tdh-、trh-。
药敏结果显示，对头孢唑啉12株菌敏感，5株耐药，6株中介；对氨苄西林1株菌中介，其余菌株敏感；对其他15种抗生素23株菌均敏感。
PFGE聚类分析显示，23株副溶血性弧菌分为8种PFGE带型，5起事件的人源分离株属于优势PFGE带型PT06。
结论：6起事件中的副溶血性弧菌血清型主要为O3:K6，多数菌株属于优势带型PT06，无多重耐药菌出现，人源分离株均携带毒力基因tlh和tdh。
关键词：副溶血性弧菌；血清型；脉冲场凝胶电泳；耐药性；毒力基因Traceability Analysis of 6 Vibrio parahaemolyticus FoodPoisoning IncidentsLI Dongxun, SHU Gaolin, WANG Weijun, ZHANG Yang, GU Tian, NIU Huancai*(Changping District Center for Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China) Abstract: Objective: To analyze the serotype, drug resistance, virulence genes and PFGE characteristics of strains isolated from 6 Vibrio parahaemolyticus food poisoning incidents in Changping district of Beijing in 2018—2019. Method: Serotyping, virulent genes detection, broth microdilution method and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) typing tests were performed on 23 Vibrio parahaemolyticus strains in 6 incidents. Result: The 21 human isolated strains were identified as three serotypes (O3:K6, O4:K8, and O4:KUT), O3:K6 was the dominant serotype, and the virulence genes were tlh+, tdh+, trh-. The 2 strains collected from food samples were O8:K20, and the virulence genes were tlh+, tdh-, trh-. 12 strains are sensitive to cefazolin, 5 strains are resistant, and 6 strains are intermediate. There was 1 strain showed intermediate to ampicillin, while all strains were sensitive to the other 15 antibiotics. The 23 strains of Vibrio parahaemolyticus were analyzed by PFGE clustering to obtain 8 PFGE patterns, the pandemic pattern PT06 was found in 5 incidents. Conclusion: The dominant serotypes of Vibrio parahaemolyticus strains isolated from 6 incidents were O3:K6 and the predominant PFGE patterns was PT06. There were no multi-antibiotic resistance. All human isolated strains had the virulence gene tlh and tdh.Keywords:Vibrio parahaemolyticus; serotypes; pulsed field gel electrophoresis; drug resistance; virulence genes副溶血性弧菌主要存在于海产品、盐渍食品中，感染后会引起腹泻、呕吐、发烧、血便等急性胃肠炎症状，是引起水产类食物中毒的主要病原菌[1-3]。
张俊鹏，刘文婷，石甜，等. 一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用[J]. 食品工业科技，2024，45（1）：137−144. doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018ZHANG Junpeng, LIU Wenting, SHI Tian, et al. Biological Characteristics, Genome-wide Characteristics of A Bacteriophage of Vibrio parahaemolyticus and Its Application in Food[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(1): 137−144. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023020018· 生物工程 ·一株副溶血弧菌噬菌体生物学特性、全基因组特征及其在食品中的应用张俊鹏1，刘文婷1，石 甜1，王华娟1，王宏勋2，周 敏1, *（1.武汉轻工大学食品科学与工程学院，湖北武汉 430000；2.武汉轻工大学生命科学与技术学院，湖北武汉 430000）摘 要：目的：分析1株副溶血性弧菌噬菌体474x1的生物学特性、全基因组及在食品中的抑菌效果。
方法：以副溶血性弧菌474菌株为宿主菌，从海鲜市场基围虾分离噬菌体474x1，利用透射电镜观察其形态，并绘制一步生长曲线，分析474x1对温度及pH 的敏感性。
分析474x1全基因组序列，根据474x1末端酶大亚基构建系统进化树。
通过测定菌落总数评价噬菌体对虾肉中副溶血弧菌的抑制效果。
结果：分离到１株新型的副溶血弧菌噬菌体，命名为474x1，该噬菌体能够裂解23株副溶血弧菌中的19株（19/23=82.61%）。
水产品中副溶血性弧菌检测实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增法1范围本文件规定了水产品中副溶血性弧菌检测实时荧光重组酶介导链替换核酸扩增（recombinase-aid Amplification，RAA）法的试剂材料、仪器设备、检测程序、操作步骤、结果判定和报告、检出限及防止污染措施。
本文件适用于水产品中副溶血性弧菌检测。
本文件适用于水产品副溶血性弧菌的快检初筛。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB 4789.7 食品安全国家标准食品微生物学检验副溶血性弧菌检验GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB 19489实验室生物安全通用要求GB/T 27403 实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。
3.1重组酶介导链替换核酸扩增 recombinase-aid Amplification, RAA一种利用重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶代替了传统PCR的热循环解链过程，在恒温下（一般为37℃～42℃），进行核酸扩增的技术。
4原理RAA法利用重组酶、单链结合蛋白和DNA聚合酶代替了传统PCR的热循环解链过程。
根据副溶血性弧菌的特异性基因序列，结合荧光探针检测法对水产养殖及水体中副溶血性弧菌进行判定。
经实时荧光RAA 扩增后，根据样品在30 min内是否出现扩增曲线，可判定样品结果。
5试剂材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，实验用水符合GB/T 6682的要求。
所有试剂均用无DNA 酶污染的容器分装。
试剂材料有：a)探针和引物根据副溶血性弧菌的特异性基因序列设计探针和引物。
表1 副溶血性弧菌探针和引物b)试剂1）RAA反应缓冲液：20% PEG，280 mmol/L醋酸镁（MgAc2）。
doi :10.3969/j.issn.1002-7386.2022.22.034·综述与讲座·副溶血性弧菌致病性和检测方法研究进展陈媛媛 王亚男 刘士朋项目来源:河北省医学研究重点课题(编号:20211149)作者单位:100029 北京市,中日友好医院(陈媛媛);河北省宁晋县医院(王亚男);河北医科大学公共卫生学院环境与人群健康重点实验室(刘士朋)通讯作者:刘士朋 E⁃mail:17100880@ 【摘要】 本文对副溶血性弧菌的生物学性状、致病性特点、污染食品规律、食物中毒事件、检测标准等进行综述,重点介绍了溶血毒素和检测方法,提出预防副溶血性弧菌食物中毒5要点和关键措施,以期更好地预防副溶血性弧菌食物中毒的发生。
【关键词】 副溶血性弧菌;食物中毒;耐热性溶血毒素;耐热性溶血毒素相关溶血毒素;检测标准【中图分类号】 R 378.3 【文献标识码】 A 【文章编号】 1002-7386(2022)22-3491-05Study on pathogenicity and detection method of Vibrio parahaemolyticus CHEN Yuanyuan ∗,WANG Yanan ,LIU Shipeng.∗China⁃Japan Friendship Hospital ,Beijing 100029,China【Abstract 】 This article systematically reviews related aspects in Vibrio parahaemolyticus (VP ),including biological characteristics ,pathogenic characteristics ,contaminated food conditions ,food Posisoning incidents detection standard ,etc.,focusing on hemolytic toxins and detection methods.Five key points for preventing VP⁃related food poisoning and treatment measures are proposed aiming to to better prevent the occurrence.【Key words 】 vibrio parahaemolyticus ;food poisoning ;thermostable direct hemolysin ;thermostable related hemolysin ;testing standards 副溶血性弧菌(vibrio parahaemolyticus)是一种常见的病原菌,主要栖息在海水中,存在于近海海水、海产品及盐渍食品中。
副溶血弧菌临床分离株毒力特征与多位点序列分型研究的开题报告一、研究背景和意义副溶血弧菌是一种革兰氏阴性菌，属于水生动物共生菌，常存在于沿海河口等水域中。
在困难环境下，副溶血弧菌容易产生外膜脂多糖、溶血素、蛋白酶、生物膜等生物胶囊物质，从而导致人畜与其接触的食物中含有大量的细菌浸润组织和血液，从而引起各种肠胃炎、败血症、肝硬化等疾病，因此为公共卫生安全所关注。
本研究旨在探究全球范围内副溶血弧菌临床分离株的毒力特征和多位点序列分型，为防治副溶血弧菌感染提供理论基础和实践指导。
二、研究内容1. 收集全球范围内副溶血弧菌临床分离株2. 对副溶血弧菌进行毒力特征分析利用PCR方法，检测细菌外膜脂多糖、溶血素、蛋白酶、生物膜等生物胶囊物质的产生情况，对各种因素产生的毒性进行定量研究。
3. 对副溶血弧菌进行多位点序列分型利用居群发生学理论和分子进化结构，分析副溶血弧菌群体的遗传多样性和进化关系，建立分型系统，对菌株进行分型。
4. 分析毒力特征和多位点序列分型的关系通过统计分析，探究副溶血弧菌不同基因型和毒力位点之间的联系，发现相关的毒性位点和菌株群体间的遗传关系，阐明菌株毒力改变的原因和机制。
5. 对副溶血弧菌感染的防治进行讨论基于分析结果，探究副溶血弧菌感染的预测和预防方法，为实际防治工作提供理论指导。
三、研究方法1. 菌株来源通过文献检索和各区域公共卫生监测资料收集，选择全球范围内的副溶血弧菌临床分离株作为研究材料。
2. 菌株培养及提取基因组DNA按照常规方法，在充分消毒和严格操作下，对菌株进行培养和DNA 提取。
3. PCR检测毒素基因在PCR反应体系中，使用相应引物检测多种毒素基因是否存在。
4. 多位点序列分析通过不同遗传标记物的分析比对，进行多位点序列分析，探究菌株的遗传多样性和系统进化结构。
5. 统计学分析对检测结果进行统计学处理，探索毒力位点和菌株群体间的遗传关系，发现毒性位点和基因型之间的联系。
副溶血弧菌的分子检测与基因分型研究的开题报告
一、研究背景：
副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus，简称VP）是一种常见的海洋性食源性病原菌，在全球范围内造成了严重的公共卫生问题。
其主要感染方式是通过食品传播，
尤其是生食或未经充分加热的海产品。
VP感染可引起剧烈的胃肠道症状，包括腹泻、呕吐、腹痛等，并可能导致严重的系统性感染和败血症。
目前，VP的检测和鉴定主要依靠生物学方法和分子生物学方法，其中分子检测和基因分型能够快速、准确地诊断VP的种类和亚型，对于控制食源性疾病的传播和预防VP感染具有重要意义。
二、研究目的和内容：
本研究的主要目的是在分子水平上检测和基因分型VP，并为控制VP感染提供科学依据。
具体内容包括以下方面：
（1）基于PCR技术建立VP的分子检测方法，选用VP引物及相关标准菌株进行验证，包括灵敏度、特异性和可靠性的验证等；
（2）利用多重PCR和单酶切位点扩增多态性（RFLP）技术进行VP的基因分型，对不同来源的VP菌株进行分类和亚型分析，探索VP的种间和品种多样性；
（3）利用以上检测和分型结果，对不同来源的VP菌株进行比较和分析，并研究其遗传流行病学特征和毒力因子表达变化，为VP病原与品种和菌株变异之间的关系提供科学依据。
三、研究意义：
本研究将为VP的分子检测和基因分型提供新的手段和途径，为VP感染流行病
学与传播规律的研究提供参考，并为VP的控制和预防提供科学依据。
同时，本研究对于深入探究海洋生物多样性、底栖生物群落与病原体之间的相互作用，也具有重要的
理论和应用价值。
