石蜡切片技术原理40页PPT
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石蜡切片实验原理石蜡切片实验是一种常用的组织学实验方法,通过将组织样本制成切片,以便在显微镜下观察细胞和组织的形态结构。
石蜡切片实验的主要原理包括以下几个步骤:1. 取材:根据实验需求,选择合适的材料来源和部位。
例如,观察植物细胞有丝分裂时,常选择洋葱根尖作为材料,因为此处细胞分裂速度快且便于切取。
确保材料新鲜,避免长时间放置导致蛋白质分解、细胞自溶和细菌滋生,以保证观察到的组织结构能反映活体时的形态。
2. 固定:将切好的新鲜组织小块浸入适当浓度的固定液中,如中性甲醛固定液。
固定液可以迅速凝固或沉淀细胞和组织中的物质成分,终止细胞的一切代谢过程,防止细胞自溶或组织变化,尽可能保持其活体时的结构。
3. 洗涤和脱水:固定后,将组织样本用磷酸缓冲液洗涤,去除多余的固定液和杂质。
然后进行脱水,通常使用系列梯度酒精(如70%、95%和100%)进行脱水。
4. 透明:将脱水后的组织样本放入透明剂中,如二甲苯,使组织透明,便于切片。
5. 浸蜡:将透明后的组织样本放入蜡液中,如石蜡,进行浸蜡。
石蜡可以填充组织间隙,使切片更加完整。
6. 包埋:将浸蜡后的组织样本放入包埋盒中,固定并密封。
7. 切片:将包埋好的组织样本放入切片机中,切成薄片(通常厚度为4-6微米)。
8. 贴片:将切好的切片粘附在载玻片上,可用甘油蛋白贴片剂辅助。
9. 脱蜡:将贴片后的切片放入二甲苯中,脱去多余的石蜡。
10. 染色:采用适当的染色方法,如苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法),对切片进行染色。
这种方法适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色,可以长期保存。
11. 脱水、透明、封片:染色后,将切片依次放入系列梯度酒精、磷酸缓冲液、甘油中进行脱水、透明。
最后,用封片胶封片,完成石蜡切片制作。
石蜡切片实验原理就是这样啦。
这种方法不仅适用于观察正常细胞和组织,还广泛应用于病理学和法医学等领域,以研究、观察和判断细胞和组织的形态变化。