测定白酒中总糖精钠[整理后]

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液相色谱检测低度浓香型酒中的安赛蜜、糖精钠和阿斯巴甜

第 46 卷第 3 期 2019年5月
文章编号:1002-8110（2019）03-0066-02
酿酒 LIQUOR MAKING
Vol.46. № .3 May， 2019
液相色谱检测低度浓香型酒中的安赛蜜、糖精钠（花冠集团酿酒股份有限公司，山东菏泽 274900）
Luzhou-flavor liquor by liquid chromatography was established.Methods: after the sample was pretreated,methanol: ammonium acetate was
used as mobile phase and was separated by gradient elution on Agilent 5TC-C18 column. The method was tested at 214 nm.Result:The
中图分类号：TS262.31；TS207.3
文献标识码：B
Determination of Low Alcohol Luzhou flavor Liquor by HPLC Acesulfame
Potassium，Saccharin Sodium and Aspartame
SHAO Lin,YAO Yuanzi,LI Yue,WANG Rongrong,HUANG Lanxiang,YAO Feifei
白酒市场中的 70%左右。特别是低度浓香型白酒占据浓香型标准品（纯度≥99.9%）和阿斯巴甜标准品（纯度≥99%）均购
白酒的 50%以上。浓香型白酒中的一些多元醇和酮类物质可自 Supelco（美国）标准品公司。甲醇、乙酸铵皆是分析纯，购自
以赋予酒体自然、舒适的甜味[1]。目前的研究中，同时检测多天津科密欧公司。试验用水由实验室纯水机制备。

白酒中三种甜味剂测定的高效液相色谱检测

白酒中三种甜味剂测定的高效液相色谱检测秦冠羽;李哲【摘要】建立一种同时检测白酒中安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜的高效液相色谱检测方法,并对佳木斯地区白酒样品进行检测.样品经前处理,以甲醇:0.02M乙酸铵(V/V)=20:80做为流动相,选用wondasil C-18柱,在220nm波长下检测,该方法定量限0.05 mg/L;样品回收率分别为安赛蜜100.25%~104.12%、糖精钠98.25%~99.25%、阿斯巴甜100.27%~100.40%;相对标准偏差分别为:0.77%~3.57%;0%~0.50%;0.41%~1.69%此方法前处理简单,操作简便,具有较好的准确性和重复性.【期刊名称】《黑龙江科技信息》【年(卷),期】2017(000)021【总页数】2页(P58-59)【关键词】高效液相色谱法;白酒;安赛蜜;糖精钠;阿斯巴甜【作者】秦冠羽;李哲【作者单位】佳木斯市质量技术监督检验检测中心,黑龙江佳木斯 154000;佳木斯市质量技术监督检验检测中心,黑龙江佳木斯 154000【正文语种】中文中国有悠久的历史，几千年的酿造历史，国内外享誉盛名，GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》白酒中不允许添加甜味剂，白酒中添加甜味剂可以增加白酒的口感，可以增加品酒人的愉悦感，另外白酒酿造过程是个发酵的过程，发酵过程中产生的脂类物质，绵软飘香，目前我国白酒生产中只允许添加少量的三氯蔗糖，因此对白酒中甜味剂的检测就变得尤为的重要，目前国内甜味剂的检测方法主要有，高效液相色谱法，高效液相质谱联用法，气相色谱法，本实验只针对于本单位的日本岛津高效液相色谱进行甜味剂的分析，单一甜味检测耗用时间长，浪费成本，并且检测过程繁琐，本次实验建立一种能够同时检测酒中的三种甜味剂的方法，安赛蜜、糖精钠、阿斯巴甜混合检测法，提高了工作效率，节约了成本，易于操作利于推广。

1.1 仪器岛津 LC-20A高效液相色谱仪，配有紫外检测器，色谱工作站，wondasil C-18色谱柱。

液相色谱法测定白酒中安赛蜜和糖精钠含量

液相色谱法测定白酒中安赛蜜和糖精钠含量程春梅;赵燕;师邱毅;张境;宋慧波【摘要】A HPLC method for simultaneous separation and determination of acesulfame-K and saccharin sodium in liquor had beendeveloped.Under boiling water bath conditions,vacuum evaporation of 50.0 g liquor samples was carried out to almost dry by rotary evaporation instrument and then constant volume to 10 mL by use of water for HPLC analysis,an AQ-C18 column（250×4.6 mm） was used with 0.02 mol/LNH4Ac-methanol（90∶10） as eluent,then detected at 230 nm through a photo-diode array detector.The detection limits of acesulfame-K and saccharin sodium were 0.014 mg/kg and 0.019mg/kg respectively,and their recovery rate were 97.5 and 102.0 % respectively.%建立了高效液相色谱测定白酒中安赛蜜、糖精钠的方法。

采用在沸水浴条件下,将白酒样品50.0 g用旋转蒸发仪减压蒸发至近干后用水定容至10 mL,进液相色谱分析;用AQ-C18色谱柱（250×4.6 mm）,以0.02 mol/L的乙酸铵-甲醇（90∶10）为流动相,二极管阵列检测器在波长220 nm进行检测。

高效液相色谱法测定白酒中糖精钠含量的不确定度

T logy科技分析与检测糖精钠，又称糖精，化学名邻苯甲酰磺酰亚胺钠，是食品工业中常用的合成甜味剂，其甜味高，甜度约为蔗糖的450-550倍，常代替蔗糖用在食品中[1]。

为了提高检验结果的准确性，对高效液相色谱法测定白酒中糖精钠各影响因素进行评估。

按照JJF1059-2012《测量不确定度评定与表示》[2]，本文参照 GB 5009.28-2016[3]中的样品前处理和仪器条件对白酒中的糖精钠进行测定，分析计算了本实验室白酒中糖精钠的不确定度，为液相检验项目的质量控制提供科学的依据。

1　材料与方法1.1　仪器与试药试剂高效液相色谱仪（岛津SPD-M20A）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司KQ-700DE）；色谱柱（Hypersil Gold 150 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇（色谱纯）；甲酸（优级纯）；乙酸铵（色谱纯）；亚铁氰化钾（分析纯）；乙酸锌（分析纯）。

1.2　色谱条件流动相：甲醇+乙酸铵溶液= 5+95；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。

1.3　标液的配制准确称取糖精钠0.029 09 g（精确到0.000 1 g），用水溶解并分别定容至25 mL，作为储备液。

吸取糖精钠标准储备溶液1 mL于10 mL容量瓶中,用水定容。

准确吸取糖精钠混合标准中间溶液0、0.10、0.30、0.50、0.70 mL与0.90 mL，用水定容至10 mL，配制成质量浓度分别为0、1.00、3.00、5.00、7.00 mg/L与 9.00 mg/L的混合标准系列工作溶液。

临用现配。

2　数学模型白酒中糖精钠（以糖精计）含量按式（1）计算。

ρ× V1m 1 000f methodX=××（1）式（1）中：X—糖精钠（以糖精计）含量，mg/kg；ρ—由标曲折算的浓度，mg/L；V—稀释倍数；m—试样质量，g；f method—回收率（%）。

白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等甜味剂的测定(上)

白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素的分析方法1 范围1.1本方法规定了食品中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素检验的制样和液相色谱-质谱法。

1.2本方法适用食品、固态化发酵酒及勾兑低度饮料性用白酒糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等的测定。

2 引用文件本方法引用了GB/T5009.28-2003；SN/T1948-2007。

3 总则3.1本方法所采用名词术语和计量单位均符合国家相关标准的规定。

3.2本方法所用的液相色谱-质谱联用仪要按时检定，所用的移液管、刻度吸管、容量瓶、微型进样器等计量器具应按相关检定规程进行校正。

3.3本方法所用的试剂均为色谱纯（HPLC）或经0.22μL膜过滤、所用的水为实验室一级。

4 基本要求4.1分析样品应做平行试验，以实测数据报告其分析结果，不需要按酒精度折算，有效数字要与技术要求相一致。

4.2分析中所用器皿应先用溶剂浸泡并经过过超声处理，再用自来水冲洗干净，然后用实验室一级水冲洗。

5 原理白酒样品处理后,经液相色谱-质谱联用仪进行测定,采用多反应监测离子扫描模式(MRM),以碎片离子的丰度比定性,标准样品定量离子外标法定量。

6 仪器及器材液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源、分析天平、真空泵及真空过滤器、100ml烧杯、25ml容量瓶、2ml样品瓶、25ml吸管等。

7 试剂7.1甲醇7.2水7.3甲酸或乙酸7.4标准溶液7.4.1糖精钠标准储备溶液准确称量糖精钠标准品100mg溶液于100mL的容量瓶内加水定容，即为1000mg/L标准储备溶液。

7.4.2安赛蜜标准储备溶液准确称取100mg安赛蜜加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。

7.4.3甜蜜素标准储备溶液准确称取100mg甜蜜素加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。

7.4.4糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜混合标准溶液（100mg/L）7.4.4.1混合标准溶液：分别吸取以上糖精钠、安赛蜜、甜蜜素标准储备溶液各10mL于100mL 容量瓶加水定容，即为100mg/L的糖精钠、安赛蜜、甜蜜素混合标准溶液。

白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等甜味剂的测定(下)

0.18
0.52
0.01
16.00
56.00
28.64
7.14
0.02
91.33
91.33
5.57
1.38
0.05
85.20
85.20
2.37
3.61
0.10
86.83
86.83
4.10
4.46
0.20
94.03
94.03
0.86
2.20
0.50
104.55
104.55
0.69
3.84
1.00
105.70
1.04
0.20
84.97
108.92
0.43
0.75
0.50
70.95
104.06
0.32
1.03
1.00
95.94
95.94
0.31
0.64
2.00
94.65
94.65
0.06
0.42
4.00
82.89
93.65
0.31
0.57
说明：
1、通过对白酒样品采取挥干和直接进样进行对比试验。
2、此方法标准曲线的线性范围是分为两段进行的（分两段比分一段要优越），若待测样品
接近真实值，而经挥干处理后的样品实测值约偏低。
2、安赛蜜含量≥0.02mg/L 时，回收率在 80%-125%之间，相对标准偏差(RSD)在某种程度 5%
以内；糖精钠含量≥0.02mg/L 时，回收率 80%-110%之间，相对标准偏差在某种程度 5%以内；
甜蜜素含量≥0.02mg/L 时，回收率 90%-100%之间，相对标准偏差在某种程度 5%以内。

白酒中食品添加剂检测方法的研究探讨_武金华

华夏酒报/2012年/12月/4日/第C42版科技白酒中食品添加剂检测方法的研究探讨武金华姜淑芬孙启栋赵文杰（泰山酒业集团股份有限公司）消费者日益关注食品添加剂的使用和食用的安全性。

本文旨在探讨利用高效液相色谱检测白酒中糖精钠、阿斯巴甜等甜味剂含量的方法，对提高白酒产品的安全性和进行质量把关具有重要意义。

1白酒中糖精钠的测定材料与方法1.1仪器与试剂仪器：安捷伦1200高效液相色谱仪、紫外检测器（可变波长检测器VWD）、高效液相色谱柱。

试剂：甲醇：经0.45μm滤膜过滤、水：实验室一级用水、氨水：氨水加等体积水混合。

乙酸胺溶液（0.02mol/L）：称取1.54g乙酸胺，加水至1000mL溶解，经0.45μm滤膜过滤。

糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851g经120℃烘干4小时后的糖精钠，加水溶解定容至100mL。

糖精钠含量1.0mg/mL，作为储备溶液。

糖精钠标准使用溶液：吸取糖精钠标准储备液10mL放入100mL容量瓶中，加水经0.45μm 滤膜过滤，该溶液每毫克相当于0.10mg的糖精钠。

取糖精钠标准使用溶液（100ppm）1mL＋9mL 水依次配制系列浓度梯度标样为：1#：0.625ppm；2#：1.25ppm；3#：2.5ppm；4#：5ppm；5#：10ppm1.2试样处理1.2.1 标样取糖精钠标准使用液依次稀释，配制成0.625ppm、1.250ppm、2.500ppm、5.000ppm、10.000ppm 梯度标样。

1.2.2 酒样处理称取25.00g待测酒样，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调PH约7，加水定容至50mL，经0.45μm滤膜过滤，等待进样。

1.3高效液相色谱条件的确定1.3.1流动相比例的确定选用方法一甲醇：乙酸胺溶液（0.02mol/L）（3＋97）和方法二甲醇：乙酸胺溶液（0.02mol/L）（5＋95）进行试验，在其余色谱条件完全相同的情况下，甲醇和乙酸胺比例为5：95时糖精钠峰形较好，分离也较好。

液相色谱法测定食品中的糖精钠、安赛蜜、苯甲酸、山梨酸

关键词：液相色谱；苯甲酸；山梨酸；糖精钠和安赛蜜；添加剂
食品很容易因为温湿度、环境等出现变质，给企业带来巨大经济损失，也会制约食品行业发展。防腐剂的添加很好地延长了食品的保质期，因此被广泛添加到食品中。目前常添加的有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、丙酸及其盐、脱氢乙酸等。甜味剂能够改善口感进而增加食欲，常用的甜味剂有糖精钠、安赛蜜、阿斯巴甜、纽甜与阿力甜等 [1]。近些年的研究表明食品添加剂超量使用也会危害人体健康，食品安全国家标准对防腐剂和甜味剂的添加量作出明确规定，以保证食品安全 [2]。本文采用液相色谱法同时测定食品中所添加的苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、糖精钠和安赛蜜。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂
件为：甲醇 + 乙酸铵溶液 =8+92。
次，结果表明样品的平均回收率在
2.2 标准曲线的建立与分析
78.3% ～ 117.4%，相对标准偏差
准确称取标准品（精确到 0.000 1 g），（RSD）在 1.6% ～ 4.1%。
0.60
自动标尺色谱图
AU 安赛蜜-10.680 苯甲酸-12.412
管中，加入 25 mL 水涡旋振荡，加入以空白样品为基质制备基质空白标准
2 mL 10.6% 的亚铁氰化钾溶液涡旋溶液，用空白标准基质配制成梯度为 1、
20 s 混匀，再加入 2 mL 22% 的乙酸 5、10、25、50、100 mg/L 与 200 mg/L
锌溶液涡旋 1 min 后定容至刻度线，的混合系列标准工作液 , 使用前配
0 -1×106
校正曲线图
0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14 0.16 0.18 0.20 含量

白酒中甜味剂的检测

白酒中甜味剂的检测现有研究表明，传统优质白酒的醇甜感是由其本身含有的多元醇或酮等甜味物质所致，如2，3一丁二醇、丙三醇、双乙酰等。

为了适应新的消费需求，增加白酒的甜味、回甜感，又能有效提高生产效率成为众多白酒企业竞相研究的课题。

现在不少企业为了改善口感，向生产的白酒中添加各种甜味剂，而国家标准明确规定固态法白酒中不允许添加非发酵产生的呈香呈味物质。

固液和液态法白酒中仅允许用香醅串香或用食品添加剂调味调香，而不允许添加任何甜味剂。

据调研发现，现从市场中抽查的白酒中可能检出的甜味剂有以下7种：糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜、三氯蔗糖和甜菊糖苷。

而有些被检出甜味剂的白酒企业声称在白酒生产或勾兑过程中并未人为添加各种甜味剂，也无法对检出的甜味剂来源作出解释。

本文主要针对市场上常检出的几种甜味剂的性质、检测方法及白酒生产过程中甜味剂的可能来源进行了简单介绍。

1白酒中常见的甜昧剂简介1.1糖精钠糖精钠，又称可溶性糖精，是一种白色结晶性粉末的甜味剂，甜度为蔗糖的300~500倍，非能量甜味剂，不参与人体的代谢吸收，但大量食用会对肝脏和神经系统造成危害。

1.2安赛蜜又名乙酰磺胺酸钾、AK糖，为白色结晶状粉末，极易溶于水，不吸湿，甜度为蔗糖的200倍，具有无营养、无热量，在人体内不代谢不吸收的特点，但因其对肝脏和神经系统能够造成危害，因此，对于安赛蜜，在《GB 2760-2014食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中对安赛蜜在相应食品中的添加量进行了严格限制。

1.3甜蜜素白色针状、片状结晶或结晶状粉末，又名环己胺磺酸钾，是由氨基磺酸与环己胺及氢氧化钠反应而制成的非营养型合成甜味剂。

其甜度为蔗糖的30倍，水溶性好，酸稳定性强，成本较低，但据研究表明，食用甜蜜素和糖精的混合物可致膀胱癌。

美国、英国、日本和加拿大等国已全面禁止使用此甜昧剂。

我国允许在一些食品中添加，GB 2760—2014t4中对各种食品中的限量作出了相应规定。

《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测

《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准编制说明一、标准制定背景我院从2010年来承担了我省每年的白酒风险监测和监督抽查工作，发现生产企业违规添加甜味剂的检出率在2%左右，小作坊的检出率更高，白酒中滥用甜味剂已成为行业潜规则。

一些白酒生产企业为迎合消费者需求，在白酒中加入甜味剂以增加白酒的甜味和回甜感来改善口感，从而赚取高额利润。

在实际检测工作中发现现有国家标准针对不同甜味剂采用不同的检测方法，检测效率低，前处理较繁琐，且容易出现假阳性。

据报道目前我国白酒中甜味剂的添加呈现出多样少量的特点，企业加到白酒中的甜味剂仅需微量甚至痕量即可改善白酒的口感，因此传统的色谱法并不能有效地对白酒中的微量甜味剂进行监控。

本标准拟建立高效液相色谱-串联质谱法同时检测白酒中四种甜味剂，该检测手段拥有灵敏度高、特异性好等优点，通过同时检测改善目前检测工作繁琐低效的现状，大大提高工作效率，减少误判，准确定量。

2013年贵州省卫生厅组织了食品安全地方标准审评委员会专家组召开了评审会议，通过了《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准的立项，项目批准文号为：黔卫函【2014】26号。

二、主要工作过程（一）标准起草小组的成立《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准任务下达后，我院于2014年2月成立了以贵州省产品质量监督检验院、贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司两家单位组成的标准起草小组，对职责进行分工，确定工作计划，由贵州省产品质量监督检验院负责起草。

（二）收集资料及市场调研标准起草小组按标准的编制计划，组织技术人员对白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法进行了方法资料查找收集，了解了目前我省白酒的生产情况，主要香型为酱香型白酒居多，同时生产的还有浓香型白酒、兼香型白酒、少量清香型白酒和普通白酒。

离子色谱测定白酒中甜蜜素、糖精钠和安赛蜜

且灵敏度高。关键词：离子色谱；白酒；蜜素；甜糖精钠；安赛蜜
中图分类号：Ｓ６．，Ｓ０．Ｔ２２３Ｔ２７３文献标识码：Ｂ
ＩｎＣｈｏａｏｒｐｙｆｒＤｅｅｍｉａｉｎｏｏｉｍｃａｔ，ＳｃｈｒｎｏｒｍｔｇａｈｏｔｒｎｔｏｆＳｄｕＣｙｌｍａｅａｃａｉ
ＩｎａＲ１一分析柱，ｏＰｃＡＧ１一为保护柱，氢氧化钠作为淋洗液，并用梯度淋洗方式，流速ｏＰｃＡＳ７ｃＩｎａＲ７Ｃ１ＯＬｒｎ样品经适当稀释过滤后进行直接进样色谱分析。方法的线性范围广、关性好，验快速、确，．／ｉ，ａｒａ该相检准
１材料与方法
１１实验仪器及色谱条件．
仪器型号：Ｃ一００型离子色谱仪（ｉｅ，国）ＩＳ３０Ｄｏｘ美ｎ；色谱柱：ｏＰｃＳ７Ｃ阴离子交换分析柱，５ＩｎａＡ１一２０×４ｍ；ｍＩＰｃＧ７Ｃ保护柱，０×４ｍ；淋洗液：ａＨ，－５ｎｏａＡ１一ｎ５ｍＮＯ０１ｍｉ
衍生化，仅须过滤和过前处理小柱，直接进样分析［将该方法６１。
用于实际样品的检测，分离效果好，分析速度快，结果令人满
意。
足，一般都采用甜蜜素、糖精钠、安赛蜜复配方式，以发挥各自
协同效应，使产品口感得到改善。Ｇ２６ — ０７的规定，按Ｂ７０２０甜昧剂允许使用范围不包括白酒ｆ浓香型白酒的国家标准也１］，规定不得添加非自身发酵物质口。但由于白酒生产原料、工艺

白酒中总酸、总酯的测定

吸取酒样 50.0mL 于 250mL 锥形瓶中，加 2 滴酚酞指示剂，以氢氧化钠标准滴定溶液滴定至粉红色（切勿过量），记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数（也可作为总酸含量计算）。再准确加入氢氧化钠标准滴定溶液 25.00mL（若样品总酯含量高时，可加入 50.00mL），摇匀，放入几颗沸石或玻璃珠，装上冷凝管（冷却水温度宜低于 15℃），于沸水浴上回流 30min（溶液沸腾时，冷凝管滴下第一滴冷凝液开始计时），取下，冷却。然后，用硫酸标准滴定溶液进行滴定，使微红色刚好完全消失为其终点，记录消耗硫酸标准滴定溶液的体积。同时吸取乙醇（无酯）溶液 50.0mL，按上述方法同样操作做空白试验，记录消耗硫酸标准滴定溶液的体积。结果计算：样品中的总酯含量计算
表四
硫酸标准滴定溶液的浓度
1 H 2 SO4 [c （ 2 ）]/(mol/L)
1 0.5 0.1
工作基准试剂无水碳酸钠的质量 m/g
1.9 0.95 0.2
1 H 2 SO4 硫酸标准滴定溶液的浓度[c（ 2 ）]，数值以摩尔每升（mol/L）表
示，按下式计算：
c
m 100 (v1 v2 ) M
C1
C V 25.0
4 、乙醇（无酯）溶液[40%（体积分数）] ：量取 95%乙醇 600mL 于 1000mL 回流瓶中，加入 3.5mol/L 氢氧化钠标准溶液 5mL，加热回流皂化 1h。然后移入蒸馏器中重蒸，再配成 40%（体积分数）乙醇溶液。 5 、酚酞指示剂（10g/L）：（同总酸测定）。分析步骤：
C V 60 50.0
X ——样品中总酸的质量浓度（以乙酸计），单位为克每升（g/L）； C ——氢氧化钠标准滴定溶液的实际浓度，单位为摩尔每升（mol/L）； V ——测定时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为（mL ）； 60——乙酸的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol） [M(CH3COOH)=60]； 50.0——吸取样品的体积，单位为毫升（mL）；所得结果应表示至两位小数。精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值，不应超过平均值的 2%。

关于白酒中糖精钠含量测定的国标方法的讨论

ＣＡＯＮｉｎｇ—ｙａｎｇ，ＤＯＮＧＪｉａｏ，ＨＥＹｏｎｇ—ｋｅ（１．ＳｈｅｎｙａｎｇＦｏｏｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＬｉａｏｎｉｎｇ１１００３６，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈｅｎｙａｎｇＰｒｏｄｕｃｔＱｕａｌｉｔｙＳｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎａｎｄＩｎｓｐｅｃｔｉｏｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＳｈｅｎｙａｎｇＬｉａｏｎｉｎｇ１１００００，Ｃｈｉｎａ；３．ＳｈｅｎｙａｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＬｉａｏｎｉｎｇ１１０１４２，Ｃｈｉｎａ）
ｄｏｉ：１０．３９６９６．ｉｓｓｎ．１６７４—５０６Ｘ．２０１８．０３—０２４
白酒是以粮谷为主要原料，用大曲、小曲或麸曲及酒母等为糖化发酵剂，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏而制成的。白酒中本身含有一些多元醇或酮如２，３一丁二醇、丙三醇等甜味物质，使得白酒具有醇甜感。白酒中也存在许多不同阈值的苦味物质，引起白酒苦味的主要物质有杂醇类、醛类、酚类化合物、硫化物、多肽、氨基酸和无机盐等。一些生产企业为了改善白酒口感会人为添加一些甜味剂，如安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、三氯蔗糖等。糖精钠是一种白色晶体，甜度为蔗糖的３００—５００倍，在人体内不被分解，长期食用
严制定检出限和定量限，更利于食品安全的严格监管。
关键词：糖精钠；白酒；试样提取；检出限

利用HPLC串联DAD-FLD检测器测定白酒中糖精钠的方法研究

48 食品安全导刊 2013年4月刊ANAlySIS & TEST 分析与检测糖精钠，又称可溶性糖精，是糖精的钠盐，无色结晶或稍带白色的结晶性粉末，一般含有两个结晶水，易失去结晶水而成无水糖精，呈白色粉末，无臭或微有香气，味浓甜带苦。

其甜度是蔗糖的500倍左右。

耐热及耐碱性弱，酸性条件下加热甜味渐渐消失，溶液大于0.026％则味苦。

针对其毒性，FAO/WHO （1984）暂定ADI为0～0.0025g/kg体重。

为增加白酒口感，某些白酒生产企业也会在产品中添加糖精钠。

在检测白酒中糖精钠时发现，有一种未知的化合物与糖精钠的保留时间极近，难以区分，这就会对检测结果造成影响。

本文利用高效液相色谱法（HPLC）将二极管阵列检测器和荧光检测器串联检测白酒中糖精钠的含量，使两个检测器相互验证，能够大大提高定性的准确性。

与GB/T5009.28比较，该方法改变了紫外检测器单一波长的检测方式，可避免单纯用紫外检测器检测时受干扰物影响而产生的假阳性或定量偏高的情况，为白酒中糖精钠的检测提供新的思路。

实验内容1.材料与试剂糖精钠标准品[GBW(E)100008，利用HPLC 串联DAD-FLD 检测器测定白酒中糖精钠的方法研究□ 张鸿军辽宁省朝阳市产品质量监督检验所1.00mg/mL ]，国家标准物质研究中心；甲醇（色谱纯）；乙酸胺（分析纯）；氨水（分析纯）。

2.主要仪器与设备Agilent1260高效液相色谱系统，配有二极管阵列检测器和荧光检测器，以及自动进样系统。

3.实验条件色谱柱：Z O R B A X S B -C 18（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：甲醇∶乙酸胺溶液（0.02mol/L）=7∶93，流速1.0mL/min，柱温30℃，进样量10μL；检测器：二极管阵列检测器（214n m）和荧光检测器（激发波长230nm，发射波长415nm）。

4.测定(1)标准曲线分别配置浓度为20mg/mL，30mg/mL，40mg/mL，50mg/mL，60mg/mL的糖精钠标准工作液，经0.22μm微孔滤膜过滤，供高效液相色谱测定，并绘制标准曲线，用以定量。

两种国家标准方法在HPLC 法测定白酒中糖精钠检出限的比较

分析与检测
两种国家标准方法在 HPLC 法测定白酒中糖精钠检出限的比较
□ 曹张欢四川省内江市食品药品检验检测中心
摘要：白酒是以粮谷为主要原料，用大曲、小曲或麸曲及酒母等为糖化发酵剂，经蒸煮、糖化、发酵、蒸馏而制成的。白酒中本身含有一些甜味物质使得白酒具有醇甜感，中也存在许多苦味物质，一些生产企业为了改善白酒口感会人为添加一些甜味剂，如安赛蜜、糖精钠、甜蜜素或三氯蔗糖等。糖精钠是一种白色晶体，甜度为蔗糖的 300 ～ 500 倍，在人体内不被分解，长期食用会对身体产生危害，GB 2760-2014《食品国家安全标准食品添加剂使用标准》中规定白酒中不得白酒中不得添加糖精钠。
1.2.2 依据 GB 5009.28-2016 甲醇，乙酸铵，甲酸，糖精钠标准溶液 1 μg/mL。 1.3 仪器测定条件
1.3.1 依据 GB/T 5009.140-2003 色谱柱：岛津 C18 柱（柱长 250mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm）。流动相：0.02 mol/L 硫酸铵（800 mL）+ 甲醇（150 mL）+ 乙腈（50 mL）+10% 硫酸溶液（1 mL）；流速： 0.7 mL/min；检测波长：214 nm；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。 1.3.2 依据 GB5009.28-2016 色谱柱：岛津 C18 柱（柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 μm）。流动相 : 甲醇 +0.02 mol/L 乙酸铵（5+95）；流速：1.0 mL/min；检测波长：230 nm；进样量：10 μL；柱温：30 ℃。 1.4 样品处理方法
方法检出限是应用在某个具体基体内的分析物的可测定量。方法检出限可定义分析物质能将分析物测定信号区别于特定基体背景（噪音）的最低浓度或量。换句话说，方法检出限就是方法中测定出大于相关不确定度的最低量（Taylor，1989）。在分析方法检出限时需要考虑到所有基体的干扰。由于仪器分析过程都会有背景噪音，常用的方法就是利用已经低浓度的分析物与空白样品的测量信号进行比较，确定出能够可靠测定出的最小的浓度，最典型的可接受的信噪比是 2 ∶ 1 或 3 ∶ 1。此次对比实验采用 3 倍信噪比测定白酒中糖精钠的方法检出限。

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受到“勾兑门”影响，古井贡酒近期股价连续下跌，相比8月22日股价该股股价已跌去 13%。
项目一测定白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰
任务要求

五个工作日内完成所有检测项目，检测报告做出结果判定。

任务

了解相关检测项目的检测意义查找白酒的卫生标准和相关检测项目的检测标准初步制定白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰的检测方案。列出需要的仪器和试剂。编写实验原始记录和检测报告制作ppt，以备下节课讲解
白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰的测定意义

甲醇：在白酒酿造过程中，常常有少量甲醇生成。有毒，误饮5～10毫升能双目失明，大量饮用会导致死亡。总酸：是指白酒中含有的有机酸，其绝大部分为挥发酸，总酸具有香气，是白酒中的呈香、呈味物质，起到调味作用。己酸乙酯是浓香型白酒的主体香气成分，其含量高低影响白酒的风格。优质浓香型白酒的特点是己酸乙酯香气突出，而且口味纯正，绵甜干净。
≤0.15g/kg以糖精计算 ≤0.04g/100mL ≤2mg/L
分析方法的选择

分析要求的准确度和精密度分析方法的难易和速度样品的特性实验室是否具备相关的试剂、仪器分析成本
查资料时间到了，开始行动吧！
总酸的测定方法

GB/T10345-2007，7总酸，有两个方法：7.1 指示剂法和7.2电位滴定法。 7.1需要用到的试剂和仪器有：酚酞指示剂、氢氧化钠、滴定管、锥形瓶 7.2需要用到的试剂和仪器有：氢氧化钠、电位滴定仪

色谱柱
检测器

色谱分析基本知识

定性方法：保留值定量方法：峰面积与样品中待测组分的含量成正比色谱法中所用试剂均为色谱纯。色谱纯一般是指色谱专用溶剂或者试剂，在低波长处的透光率比较好.色谱分析中必须要用色谱纯试剂，以确保在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。
1、2、3、4…9分别是什么物质？
会查白酒卫生标准和白酒的标准分析方法看懂标准会选择标准分析方法
预期达到的教学目标

白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰的测定意义

糖精钠：常用甜味剂，允许使用，但禁止添加到婴儿食品、病人食品等视频中。有部分企业使用自来水、食用酒精、复合甜味剂等违禁添加剂非法制售勾兑白酒。应符合GB 2760-2011《食品添加剂使用标准》的要求。锰：白酒生产大致有这么几个过程，蒸粮，发酵，蒸酒，贮存，勾兑，灌装，在勾兑添加食用酒精，由于食用酒精的质量较差，用高锰酸钾处理酒精，脱去杂味，处理时添加量控制不到位，又没有重蒸馏，而出现锰超标。

第一步：登陆，先查找卫生标准，再查找检测标准。输入关键词，搜索标准，从中找出合适的方法，如有国标优先选择国标。第二步：根据在“第一步”中查到的标准号到食品伙伴网，搜索查询、下载该标准。
限量要求

总酸酒精度糖精钠甲醇锰
酒精度的测定

GB/T10345-2007 密度瓶法和酒精计法
糖精钠的测定方法

GB/T 5009.28-2003，三种方法：高效液相色谱法、薄层色谱法、离子选择电极测定方法。其中薄层色谱法只能定性和半定量，不能定量分析，不能满足检测需求。不能选择该方法作为检测方法。 GB/T 23495-2009高效液相色谱法与GB/T 5009.28-2003相同
锰的测定方法

GB/T5009.48-2003中4.6锰有两个方法原子吸收法和比色法。
甲醇的测定

GB/T5009.48-2003，气相色谱法和比色法
原始记录格式要求

检验项目名称、样品名称、检测方法标准号、检测方法、所用试剂的名称与浓度、称量记录、实验步骤、数据记录表格、计算公式、检验员、校验人原始记录如有记录错误，应画改后签名，每张原始记录画改不能超过三处。
酒精计法测定酒精度

酒度计的原理是根据密度计的原理设计的。乙醇的密度小于水，酒精（乙醇）度越大，酒的密度也越小而浮力也越小。酒度计就是根据这种差异而算出乙醇的含量的。
Hello，俺是色谱图！
色谱峰
信号基线
Байду номын сангаас时间
样品注入时间
色谱分析基本知识

固定相——色谱柱
流动相——气体或液进样系统——手动进样、自动进样
白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰的测定意义

酒精度：表示酒中乙醇的体积百分比。酒精度偏高或偏低的主要原因是企业生产工艺控制不严格或生产工艺水平较低，无法有效控制酒精度的高低；另一方面，一些小型白酒企业为了降低成本，赚取更大利润，故意标高酒精度，以提高销售价格，欺骗消费者。
查询标准方法

编制相关的原始记录及检验报告
测定白酒中总酸、酒精度、糖精钠、甲醇、锰(第二讲)
本节课内容

每个小组派一名同学，讲解实验方案对实验方案进行点评、讨论、修改讲解实验中将要涉及到的知识要点
知识要点

气相色谱法gas chromatography（GC）高效液相色谱法high performance liquid chromatography（HPLC）原子吸收光谱法atomic absorption spectrometry（AAS）样品前处理
色谱定量方法

归一化法外标法内标法
糖精钠的测定P98 (GB/T 23495-2009)

色谱分析中，样品中的共存组分常会对待测组分造成干扰，所以必须通过适当的样品前处理，减小或消除干扰组分, 浓缩待测组分以适于低浓度检测分析的需要。样品前处理：称取10g酒样至烧杯中，水浴中加热除去乙醇后，转移至25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节至中性，用水定容。摇匀。过0.45 滤膜，滤液装瓶，上机检测。原理：糖精钠易溶于水，所以用水做溶剂；酒的主要成分是乙醇，乙醇易挥发，所以用水浴加热的方式去除乙醇，从而消除掉乙醇可能带来的干扰。
检验报告

检验报告内容一般包括样品名称、送检单位、生产日期、检验员签字、主管负责人签字、检验单位盖章等。
课后作业

制订最终的实验方案，提交word和ppt两个版本的实验方案。下节课每个小组轮流以ppt的形式讲解实验方案。

实验方案内容：1、方法原理2、试剂配制3、所需仪器（色谱法要写出色谱柱和检测器的类型）4、样品前处理方法5、仪器测定条件6、检测结果计算方法7、实验分工