MMFSCNG食品中胆固醇的测定方法

食品中胆固醇含量测定方法的研究胆固醇是一种存在于人体细胞中，同时也存在于很多食物中的脂类，它在维持人体健康方面起着重要作用。

然而，高胆固醇摄入可能会导致心血管疾病的发生。

因此，了解食物中胆固醇含量的测定方法具有重要意义。

1. 传统测定方法传统的食品胆固醇含量测定方法是使用气相色谱法，该方法要求将样品中的胆固醇提取出来，并通过气相色谱仪分离和定量分析。

尽管该方法准确可靠，但其操作繁琐，耗时且昂贵。

因此，寻找更简单便捷的方法变得迫切。

2. 光谱测定方法近年来，一些研究者开始探索使用光谱技术测定食品中胆固醇含量。

例如，红外光谱和紫外-可见光谱可以准确地测定食品中的胆固醇含量。

这些光谱技术不需要样品前处理，操作简便，且可快速获得结果。

然而，这些光谱方法的准确性和可靠性仍需进一步验证。

3. 生物传感器测定方法生物传感器作为一种新兴的测定方法，被广泛应用于食品中营养成分的测定。

胆固醇传感器通过利用特定酶或抗体对胆固醇的选择性反应，来测定食品样品中胆固醇的含量。

此类方法具有操作简单、快速响应和高灵敏度等优点，但受到样品矩阵干扰的影响。

因此，相关研究需要进一步优化和完善。

4. 新兴技术的应用为了更好地测定食品中胆固醇含量，一些新兴技术也开始应用于相关研究中。

例如，质谱法能够快速准确地测定食品样品中的胆固醇含量，并能区别其同位素。

此外，核磁共振技术也可以被用来测定食品胆固醇含量，该方法无需样品前处理，且信息量丰富。

然而，这些新兴技术的耗材成本较高，仍需进一步的研究和开发。

总结起来，食品中胆固醇含量的测定方法不断发展和创新。

传统的气相色谱法虽然准确可靠，但操作繁琐。

一些新兴技术如光谱测定方法、生物传感器测定方法以及质谱法和核磁共振技术等也带来了便捷性和高灵敏度。

然而，这些方法仍需进一步验证和完善，以满足实际应用的需求。

随着科学技术的不断进步，相信未来一定会有更简单、快速和准确的方法用于测定食品中胆固醇含量，从而更好地保障人们身体健康。

食品中胆固醇的测定方法研究胆固醇是一种脂类物质，存在于动物源性食品中，如肉类、蛋类和奶制品中。

大量摄入胆固醇会增加心血管疾病的风险，因此对食品中胆固醇含量的准确测定具有重要意义。

本文将探讨当前用于测定食品中胆固醇的常见方法。

一、霉菌酶法霉菌酶法是目前广泛应用于胆固醇测定的方法之一。

该方法基于霉菌酶对胆固醇的选择性催化作用。

首先，将食品样品中的脂质提取出来，然后通过添加霉菌酶，使胆固醇转化为胆固醇酯。

接下来，通过酶反应或高效液相色谱等分析技术，测定出胆固醇的含量。

这种方法具有操作简单、结果可靠的优点，但也存在一些局限性。

由于霉菌酶只对胆固醇具有选择性催化作用，其他脂类物质可能会对测定结果产生干扰。

此外，该方法对样品的处理时间较长，且需要一些特殊试剂，增加了实验的复杂度。

二、氧化法氧化法是另一种常用的胆固醇测定方法。

这种方法利用氧化剂将胆固醇氧化为胆固酮，然后通过测定反应后的产物来确定胆固醇的含量。

目前常用的氧化剂包括酶、过氧化氢和碳氧化锌等。

氧化法具有测定速度快、操作简单的特点。

它适用于各种食品样品的胆固醇测定，且对其他脂类物质的干扰较小。

然而，氧化法可能会引起一些胆固醇的降解，从而影响测定结果的准确性。

此外，由于氧化剂的使用，需要一些特殊试剂和仪器设备，增加了实验的成本。

三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种基于分子之间相互作用的测定方法。

该方法将胆固醇和其他脂类物质分离，然后通过检测分离出来的胆固醇来确定其含量。

高效液相色谱法可使用不同的检测器，如紫外检测器、荧光检测器和质谱检测器等。

高效液相色谱法具有分离效果好、测定结果准确的优点。

它可以对不同样品中的胆固醇进行定量分析，且对其他脂类物质的干扰较小。

然而，该方法的操作较为复杂，需要较长时间进行样品的处理和分析。

此外，高效液相色谱法需要一些昂贵的仪器设备和试剂，增加了实验的成本。

综上所述，目前主要有霉菌酶法、氧化法和高效液相色谱法等用于食品中胆固醇测定的方法。

法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。

因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。

在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。

二、实验仪器及试材1.仪器：分光光度计、水浴锅2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。

试剂纯度均为分析纯。

（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。

（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。

（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。

（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。

（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。

（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。

（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。

三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。

皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。

皂化完毕，取出比色管，冷却。

加入3mL 25%氯化钠溶液后再加入10mL石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。

取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。

2.样品和标准胆固醇含量测定另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。

包括样品管，各管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。

食品中胆固醇的测定食物中胆固醇的测定方法主要有气相色谱法和比色法。

色谱法必须具备气相色谱仪，此仪器价格昂贵，故在国内不易普及，因此选用经济、简便、实用的比色法进行食物中胆固醇的测定。

比色法1.原理固醇类化合物与酸试剂作用，可脱水，发生聚合反应并产生强的颜色反应。

2.适用范围此方法适用于动物性食物中胆固醇的测定。

3.仪器（1）实验室常用设备（2）分光光度计（3）电热恒温水浴4.试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水，均为蒸馏水。

（1）石油醚（2）无水乙醇（3）浓硫酸（4）冰乙酸(优级纯）（5）磷酸（6）胆固醇标准（美国Sigma公司）标准储备液：准确称取胆固醇100mg，（胆固醇标准开启后放在干燥器内）溶于冰乙酸中，并定溶至100ml。

其浓度为1g/L。

可保存2个月。

标准工作液：取标准储备液10ml，用冰乙酸定溶至100ml。

其浓度为0.1g/L。

此液用时临时配制。

（7）铁矾显色液：储备液：溶解4.463克硫酸铁铵〔FeNH4（SO4）2·12H2O〕于100ml 85%磷酸中贮于干燥器内，此溶液在室温中稳定。

* 铁矾储备液须在实验前两周配制，因硫酸铁铵不易溶解，每天要进行短时间的振摇待溶质完全溶于磷酸后再定溶到体积。

工作液：吸取储备液10ml用浓硫酸稀释到100ml。

贮于干燥器内。

（8）氢氧化钾50%溶液：溶解50g氢氧化钾于水中，定溶至100ml。

（9）氯化钠5%溶液：溶解5克氯化钠于水中，定溶至100ml。

（10）纯氮（99.99%）5.操作步骤5.1样品脂肪的提取与测定：根据食物种类分别用索氏提取法、研磨法和罗高氏法提取脂肪，并计算出每100克食物中脂肪含量。

5.2样品胆固醇的测定：准确称取提取的油脂3-4滴（约含胆固醇300-500μg）取样量可按样品中胆固醇的浓度增减。

置于25ml试管内，加入4ml无水乙醇，0.5ml50%氢氧化钾，在65℃恒温水浴中皂化1小时。

气相色谱-质谱法检测食品中胆固醇含量的研究董晓尉【期刊名称】《食品安全导刊》【年(卷),期】2016(000)021【总页数】1页(P69-69)【作者】董晓尉【作者单位】金华市食品药品检验检测研究院【正文语种】中文胆固醇作为人体中维持个人机体正常生理功能所必须的重要物质，而人体内所需的胆固醇含量约为140 g，若人体每天摄入胆固醇的量过高则会形成高脂血症，从而引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病，预防动脉粥样硬化及心脑血管疾病的重要措施是适度控制外源性胆固醇摄入。

气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）具有色谱分离效率高，定性、定量准确及质谱的灵敏度高、进样量少、分析速度快等特点，适用于易挥发或易衍生化合物的检测和分析。

由于色谱的高分离能力和质谱的鉴别特性，对复杂的混合物样品进行分离、定性和定量分析一次完成，是一种完美的现代检测分析方法。

胆固醇的介绍胆固醇是一种环戊烷多氢菲的衍生物，其又称为胆甾醇。

化学式为C27H46O，是存在动物组织中的一种白色蜡状物质。

胆固醇不溶于水，易溶于氯仿、乙醚等溶剂，其溶解性与脂肪类似。

胆固醇是动物不可缺少的重要物质，不仅参与形成组织细胞的细胞膜，而且是合成维生素D，胆汁酸以及甾体激素的主要原料。

胆固醇同时也是合成几种重要荷尔蒙及胆酸的材料。

高胆固醇的危害人体每天都需要摄入大量的各类食品，如果长期食用胆固醇含量极高的食品会使人体血液中胆固醇的含量升高。

人体每天摄入胆固醇的正常值在0～5.2mmol/L，如果超过这个水平就表现为高胆固醇，而高胆固醇会诱发高血压、心脑血管疾病、肾衰竭疾病、心脏病和牙周病等疾病的发生。

基本原理气相色谱是利用被测物质各组分在不同两相间的微小化学性质差异对物质进行分离的一种方法，这些物质在两相作相对运动时进行反复多次的分配，使不同组分由于原来只有微小的性质差异产生很大的效果而得到分离。

实际为通过样品组分沸点之间的差异先后进柱，然后在气体流动相和固定相之间分配系数的差异进一步分离。

MM_FS_CNG_0356食品胆固醇分光光度法MM_FS_CNG_0356食品中胆固醇的测定方法1.适用范围本方法适用于各类动物性食品中胆固醇的测定。

2.原理概要当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。

因此可先对食品样品进行提取和皂化，用硫酸铁铵试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。

3.主要试剂和仪器3.1.主要试剂石油醚；无水乙醇；浓硫酸；冰乙酸：优级纯；磷酸；胆固醇标准物质；胆固醇标准液；胆固醇标准储备液（1mg／mL）：精确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，并定容至100mL。

此液至少在2个月内保持稳定；胆固醇标准常备液（100μg／mL）：吸取胆固醇标准储备液10mL，用冰乙酸定容至100mL。

此液用时临时配制；铁矾显色剂；铁矾储备液：溶解4.463g硫酸铁铵[ FeNH4（SO4）2·H2O]于100mL85％磷酸中，贮于干燥器内，此液在室温中稳定；铁矾显色液：吸取铁矾储备液10mL，用浓硫酸定容至100mL。

贮于干燥器内，以防吸水；50％氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL；5％氯化钠溶液：称取5g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL；钢瓶氮气：纯度99.99％。

3.2.仪器实验室常用设备；721型分光光度计；电热恒温水浴；电动振荡器；具玻塞试管：体积10mL、25mL。

4.过程简述4.1.胆固醇标准线吸取胆固醇标准常备液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0mL分别置于10mL试管内，在各管内加入冰乙酸使总体积皆达4mL。

沿管壁加入2mL铁矾显色液，混匀，在15～90min内，在560～575nm波长下比色。

以胆固醇标准浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标做标准曲线。

4.2.样品测定4.2.1.食品脂肪的提取与测定根据食品种类分别用索氏脂肪提取法、研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪。

并计算出每100g食品中的脂肪含量。

4.2.2.食品胆固醇的测定将提取的油脂3～4滴（约含胆固醇300～500 μg），置于25mL试管内，准确记录其重量。

食品安全国家标准食品中胆固醇的测定1范围本标准规定了食品中胆固醇的测定方法㊂本标准适用于食品中胆固醇的测定,第一法气相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品以及植物油脂中胆固醇的测定;第二法高效液相色谱法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品㊁乳及乳制品等各类动物性食品中胆固醇的测定;第三法比色法适用于肉及肉制品㊁蛋及蛋制品等动物性食品中胆固醇的测定㊂第一法气相色谱法2原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用气相色谱法检测,外标法定量㊂3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂3.1试剂3.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂3.1.2无水乙醇(C2H5OH)㊂3.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂3.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂3.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂3.1.6氢氧化钾(K O H)㊂3.2试剂配制3.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂3.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂3.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂3.4标准溶液配制3.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L)称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂3.4.2胆固醇标准系列工作液分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂4仪器和设备4.1气相色谱仪:配有氢火焰离子化检测器(F I D)㊂4.2电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂4.3匀浆机㊂4.4皂化装置㊂5分析步骤5.1试样制备5.1.1肉及肉制品等各类固体试样取样品的可食部分200g进行均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂5.1.2植物油脂㊁乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂5.2样品处理5.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(准确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂5.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂5.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,待气相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂5.3测定5.3.1仪器参考条件a)色谱柱:D B-5弹性石英毛细管柱,柱长30m,内径0.32mm,粒径0.25μm,或同等性能的色谱柱;b)载气:高纯氮气,纯度ȡ99.999%;恒流2.4m L/m i n;c)柱温(程序升温):初始温度为200ħ,保持1m i n,以30ħ/m i n速率升至280ħ,保持10m i n;d)进样口温度280ħ;e)检测器温度:290ħ;f)进样量:1μL;g)进样方式:不分流进样,进样1m i n后开阀;h)空气流量:350m L/m i n;i)氢气流量:30m L/m i n㊂5.3.2标准曲线的制作分别取胆固醇标准系列工作液注入气相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂5.3.3测定试样溶液注入气相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂根据保留时间定性,外标法定量㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.1㊂6分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(1)计算:(1)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液最终定容的体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂8其他当称样量为0.5g,定容体积为5.0m L,方法的检出限为0.3m g/100g,定量限为1.0m g/100g㊂第二法高效液相色谱法9原理样品经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,石油醚和无水乙醚混合提取,提取液浓缩至干,无水乙醇溶解定容后,采用高效液相色谱仪检测,外标法定量㊂10试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的一级水㊂10.1试剂10.1.1甲醇(C H3O H):色谱纯㊂10.1.2无水乙醇(C2H5O H)㊂10.1.3石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂10.1.4无水乙醚(C4H10O)㊂10.1.5无水硫酸钠(N a2S O4)㊂10.1.6氢氧化钾(K O H)㊂10.2试剂配制10.2.160%氢氧化钾溶液:称取60g氢氧化钾,缓慢加水溶解,并定容至100m L㊂10.2.2石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比):将石油醚和无水乙醚等体积混合均匀㊂10.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂10.4标准溶液配制10.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L):称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.1m g),用无水乙醇溶解并定容至50m L,放置0ħ~4ħ密封可贮藏半年㊂10.4.2胆固醇标准系列工作液:分别吸取标准储备液(1.0m g/m L)25μL㊁50μL㊁100μL㊁500μL㊁2000μL,用无水乙醇定容至10m L,该标准系列工作液的浓度分别为2.5μg/m L㊁5μg/m L㊁10μg/m L㊁50μg/m L㊁200μg/m L㊂现用现配㊂11仪器和设备11.1匀浆机㊂11.2高效液相色谱仪:配有紫外检测器或相当的检测器㊂11.3电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂12分析步骤12.1试样制备12.1.1肉及肉制品等各类固体试样样品取可食部分200g,使用绞肉机或匀浆机将试样均质㊂将试样装入密封的容器里,防止变质和成分变化㊂试样应在均质化24h内尽快分析㊂12.1.2乳品等液体试样取混匀后的均匀液体试样装入密封容器里待测㊂12.2样品处理12.2.1皂化称取制备后的样品0.25g~10g(精确至0.001g,胆固醇含量约为0.5m g~5m g),于250m L圆底烧瓶中,加入30m L无水乙醇,10m L60%氢氧化钾溶液,混匀㊂将试样在100ħ磁力搅拌加热电热套皂化回流1h,不时振荡防止试样黏附在瓶壁上,皂化结束后,用5m L无水乙醇自冷凝管顶端冲洗其内部,取下圆底烧瓶,用流水冷却至室温㊂12.2.2提取定量转移全部皂化液于250m L分液漏斗中,用30m L水分2次~3次冲洗圆底烧瓶,洗液并入分液漏斗,再用40m L石油醚-无水乙醚混合液(1+1,体积比)分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,振摇2m i n,静置,分层㊂转移水相,合并三次有机相,用水每次100m L洗涤提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化,提取液通过约10g无水硫酸钠脱水转移到150m L平底烧瓶中㊂12.2.3浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干,用无水乙醇溶解并定容至5m L,溶液通过0.45μm过滤膜,收集滤液于进样瓶中,待高效液相色谱仪测定㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂12.3测定12.3.1仪器参考条件a)色谱柱:C18反相色谱柱,柱长4.6mm,内径150mm,粒径5μm,或同等性能的色谱柱;b)柱温:38ħ;c)流动相:甲醇;d)流速:1.0m L/m i n;e)测定波长:205n m;f)进样量:10μL㊂12.3.2标准曲线的制作分别取10μL胆固醇标准工作液注入高效液相色谱仪,在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积),以浓度为横坐标㊁峰面积为纵坐标,制作标准曲线㊂12.3.3测定将10μL试样溶液注入高效液相色谱仪,测定峰面积,由标准曲线得到试样溶液中胆固醇的浓度㊂胆固醇标准溶液的色谱图见图A.2㊂13分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(2)计算:(2)X=ρˑVmˑ1000ˑ100式中:X 试样中胆固醇的含量,单位为毫克每百克(m g/100g);ρ 试样溶液中胆固醇的浓度,单位为微克每毫升(μg/m L);V 试样溶液定容体积,单位为毫升(m L);m 试样质量,单位为克(g);1000㊁100 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂14精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂15其他当称样量为1g,定容体积为5m L,方法的检出限为0.64m g/100g,定量限为2.1m g/100g㊂第三法比色法16原理样品进行脂肪提取后的油脂,经无水乙醇-氢氧化钾溶液皂化,用石油醚提取,浓缩后加入冰乙酸,以硫酸铁铵试剂作为显色剂,采用分光光度计,在560n m~575n m波长下检测,外标法定量㊂17试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6682规定的三级水㊂17.1试剂17.1.1无水乙醇(C2H5O H)㊂17.1.2石油醚:沸程30ħ~60ħ㊂17.1.3硫酸(H2S O4)㊂17.1.4冰乙酸(C2H4O2):优级纯㊂17.1.5磷酸(H3P O4)㊂17.1.6硫酸铁铵[F e N H4(S O4)2㊃H2O]㊂17.1.7钢瓶氮气(N2):纯度99.99%㊂17.1.8海砂㊂17.1.9氢氧化钾(K O H)㊂17.1.10氢氧化钠(N a O H)㊂17.1.11盐酸(H C l)㊂17.1.12乙醚(C2H5O)㊂17.2试剂配制17.2.1铁矾储备液:称取4.463g硫酸铁铵[F e N H4(S O4)2㊃H2O]于100m L磷酸中(如果不能充分溶解,超声后取上清液),贮藏于干燥器内,此液在室温中稳定㊂17.2.2铁矾显色液:吸取铁矾储备液10m L,用硫酸定容至100m L㊂贮藏于干燥器内,以防吸水㊂17.2.350%氢氧化钾溶液:称取50g氢氧化钾,用水溶解,并定容至100m L㊂17.2.45%氯化钠溶液:称取5g氯化钠,用水溶解,并定容至100m L㊂17.2.5盐酸溶液(1+1):将盐酸与水等体积混合均匀㊂17.2.6氢氧化钠溶液(240g/L):称取24g氢氧化钠,用水溶解并定容至100m L㊂17.2.7海砂:取用水洗去泥土的海砂或河砂,先用盐酸溶液(1+1)煮沸0.5h,用水洗至中性再用氢氧化钠溶液(240g/L)煮沸0.5h,用水洗至中性,经100ħʃ5ħ干燥备用㊂17.3标准品胆固醇标准品(C27H46O,C A S号:57-88-5):纯度ȡ99%㊂17.4标准溶液配制17.4.1胆固醇标准储备液(1.0m g/m L):称取胆固醇标准品0.10g(精确至0.1m g),用冰乙酸溶解并定容至100m L㊂放置4ħ密封可贮藏半年㊂17.4.2胆固醇标准工作液(100μg/m L):吸取胆固醇标准储备液(1.0m g/m L)10m L,用冰乙酸定容至100m L㊂现用现配㊂18仪器和设备18.1匀浆机㊂18.2分光光度计㊂18.3电子天平:感量为1m g和0.1m g㊂19分析步骤19.1胆固醇标准曲线的制作吸取胆固醇标准工作液0.0m L㊁0.5m L㊁1.0m L㊁1.5m L㊁2.0m L分别置于10m L试管中,在各管内加入冰乙酸使总体积均达4m L㊂沿管壁加入2m L铁矾显色液,混匀,在15m i n~90m i n内,在560n m~575n m波长下比色㊂以胆固醇标准浓度为横坐标,吸光度为纵坐标制作标准曲线㊂19.2测定19.2.1食品中脂肪的提取与测定根据食品种类分别用索氏脂肪提取法,研磨浸提法和罗高氏法提取脂肪㊂并计算出每100g食品中的脂肪含量㊂19.2.2食品中胆固醇的测定将提取的油脂3滴~4滴(约含胆固醇300μg~500μg),置于25m L试管中,准确记录其质量㊂加入4m L无水乙醇,0.5m L50%氢氧化钾溶液,混匀,装上冷凝管,在65ħ恒温水浴锅中皂化1h㊂皂化时每隔20m i n~30m i n振摇一次使皂化完全㊂皂化完毕,取出试管,用流水冷却㊂加入3m L5%氯化钠溶液,10m L石油醚,盖紧玻璃塞,在电动振荡器上振摇2m i n,静置分层(一般约需1h以上)㊂取上层石油醚液2m L,置于10m L具塞玻璃试管内,在65ħ水浴中用氮气吹干,加入4m L冰乙酸,2m L铁矾显色液,混匀,放置15m i n后在560n m~575n m波长下比色,测得吸光度,在标准曲线上查出相应的胆固醇含量㊂不同试样的前处理需要同时做空白试验㊂20分析结果的表述试样中胆固醇的含量按式(3)计算:X=AˑCˑV1V2ˑmˑ1000 (3)式中:X 试样中胆固醇含量,单位为毫克每百克(m g/100g);A 测得的吸光度值在胆固醇标准曲线上的胆固醇含量,单位为微克(μg);C 试样中脂肪含量,单位为克每百克(g/100g);V1 石油醚总体积,单位为毫升(m L);V2 取出的石油醚体积,单位为毫升(m L);m 称取食品油脂试样量,单位为克(g);1000 换算系数㊂计算结果应扣除空白㊂结果保留三位有效数字㊂21精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%㊂22其他方法的检出限为2.4m g/100g,定量限为7.2m g/100g㊂附录A胆固醇标准的色谱图A.1胆固醇标准溶液的气相色谱图见图A.1㊂图A.1胆固醇标准溶液的气相色谱图A.2胆固醇标准溶液的高效液相色谱图见图A.2㊂图A.2胆固醇标准溶液的高效液相色谱图。

MMFSCNG0029 肉肉制品胆固醇气相色谱法MM_FS_CNG_0029肉与肉制品的胆固醇含量测定1．适用范围本方法适用于肉与肉制品中胆固醇含量的测定。

2．原理概要肉与肉制品中的脂类经皂化后，胆固醇作为不皂化物被提取出来，并与一定量的内标物混合后一起注入气相色谱柱，求出胆固醇与内标物的峰面积比，根据工作曲线计算胆固醇的重量，以求得肉与肉制品中胆固醇含量。

3．主要仪器和试剂3.1 试剂3.1.1 无水乙醚。

3.1.2 氯仿。

3.1.3 1 mol/L 氢氧化钾/乙醇溶液。

3.1.4 无水硫酸钠。

3.1.5 胆固醇：1.0 mg/mL 氯仿溶液。

3.1.6 内标溶液：3.1.6.1 5-α胆甾烷/氯仿标准溶液：1.0 mg/mL。

3.1.6.2 菜油醇/氯仿标准溶液：3.0 mg/mL。

3.1.6.3 胆固醇与5-α胆甾烷混合液：上述两种标准液等体积混合。

3.2 仪器3.2.1 实验室常规仪器。

3.2.2 气相色谱仪，配有 FID 检测器。

4．过程简述4.1 不皂化物的提取称取1.00 g脂肪，置于10 mL容量瓶中用氯仿定容并摇匀。

准确量取该试液1～5 mL、置于25 mL具塞试管中，准确加入0.5～1 mL内标物溶液(3.1.6.1)，然后将氯仿蒸干。

加入1 mol/L氢氧化钾溶液5 mL，装上冷凝管，在85～95℃水浴上缓缓皂化1 h。

取下冷却至室温，全部移入50 mL分液漏斗中，用水10 mL洗具塞试管，洗液并入分液漏斗，加乙醚10 mL轻轻振摇，静置分层后，将水相放入原试管中，加乙醚10 mL振摇，待分层后，将乙醚移入分液漏斗内。

再用10 mL乙醚提取一次，此时分液漏斗中共有30 mL溶液。

用水2～3 mL洗涤乙醚液，分层后，弃去水相，用无水硫酸钠10 g干燥后，将乙醚层移入另一具塞试管中，通氮气吹干后，加入乙醇1 mL。

4.2 色谱条件4.2.1 色谱分离条件选择：对胆固醇峰要求其理论塔板数不少于1600；胆固醇与菜油醇二者峰分辨率不小于2.2；胆固醇的保留时间在8～12 min之间；胆固醇峰强度为满量程的 0.25～0.5。