硝酸纤维素膜基础知识
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NC膜、PVDF膜、尼龙膜的应用及差别硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),NC膜在Northern Blot、Southern Blot、Western Blot中都需要用到,杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。
固相杂交技术目前较为常用,先将待测核酸结合到一定的固相支持物上,再与液相中的标记探针进行杂交。
固相支持物常用硝酸纤维素膜。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。
PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。
大于20000的蛋白选用0.45um的膜,小于20000的蛋白选用0.2um 的膜。
PVDF膜使用是需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。
PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜,对核酸和蛋白质具有很强的结合能力,能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。
NC膜、PVDF膜、尼龙膜的差别:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。
1. 就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp 的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。
2. 就温度适应性而言:尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹。
就韧性而言:尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆,易破碎;PVDF膜较强。
NC膜、PVDF膜、xx膜的应用及差别硝酸纤维素膜(nitrocellulosefiltermembrane,简称NC膜),NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到,杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。
固相杂交技术目前较为常用,先将待测核酸结合到一定的固相支持物上,再与液相中的标记探针进行杂交。
固相支持物常用硝酸纤维素膜。
PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidenefluoride)是蛋白质印迹法中常用的一种固相支持物。
PVDF膜是疏水性的,膜孔径有大有小,随着膜孔径的不断减小,膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。
大于200的蛋白选用0.45um的膜,小于200的蛋白选用0.2um的膜。
PVDF膜使用是需预处理,用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团,使其更容易与带负电的蛋白结合。
PVDF膜具有较高的机械强度,是印迹法中的理想固相支持物材料。
尼龙膜是一种合成的长链聚酰胺薄膜,对核酸和蛋白质具有很强的结合能力,能代替硝酸纤维素薄膜用于分子印迹和杂交实验。
NC膜、PVDF膜、xx膜的差别:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。
1.就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm2,可结合短至10bp的核酸片段;硝酸纤维素膜结合DNA和RNA能力可达80-100μg/cm2,对于200bp 的核酸片段结合能力不强;PVDF膜结合DNA和RNA能力可达125-300μg/cm2。
2.就温度适应性而言:尼龙膜经烘烤或紫外线照射后,核酸中的部分嘧啶碱基可与膜上的正电荷结合;硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合DNA,结合不牢固;PVDF膜结合牢固,耐高温,特别适合于蛋白印迹。
就韧性而言:尼龙膜较强;硝酸纤维素膜较脆,易破碎;PVDF膜较强。
3.就重复性而言:⑴、尼龙膜可反复用于分子杂交,杂交后,探针分子可经碱变性被洗脱下来;硝酸纤维素膜不能重复使用;PVDF膜可以重复使用。
胶体金硝酸纤维素膜吸水1. 引言1.1 胶体金介绍胶体金是一种具有广泛应用前景的纳米材料,其具有优异的光学性质和化学活性,使其在生物医学、催化剂、传感器等领域有着重要的应用。
胶体金的制备方法多样,包括溶剂热法、还原法等。
在溶液中,胶体金可以形成稳定的胶体颗粒,具有可调控的形貌和尺寸,因此被广泛用于制备各种功能性材料。
在材料科学领域,胶体金的研究备受关注,并展现出了极大的潜力。
1.2 硝酸纤维素膜介绍硝酸纤维素膜是一种由硝酸纤维素通过溶液浸渍、干燥而成的薄膜状材料。
硝酸纤维素是一种具有优良物理性质和生物相容性的天然高分子材料,具有很高的机械强度和热稳定性。
硝酸纤维素膜常被用于医疗领域,如制备生物支架、药物缓释等方面。
硝酸纤维素膜的制备通常通过湿法工艺,将硝酸纤维素溶解于适当的溶剂中,在基板上形成均匀的薄膜,并通过干燥或者其他方法使其固化。
硝酸纤维素膜的厚度、孔隙结构和表面化学性质可以根据应用需求进行调整和控制。
硝酸纤维素膜具有较大的比表面积和孔隙率,有利于吸附和扩散水分子。
其多孔结构和高度结晶化的形态使得硝酸纤维素膜具有较强的吸水性能,可以广泛应用于水处理、湿敷等领域。
与其他材料相比,硝酸纤维素膜不仅具有优异的吸水性能,还具有生物相容性好、可降解等优点,因此在生物医学、环境保护等领域具有潜在的广阔应用前景。
1.3 研究背景胶体金是一种具有优异光学性能和表面增强拉曼散射活性的纳米材料,广泛应用于传感、光催化和生物医学等领域。
硝酸纤维素膜是由硝酸纤维素纳米颗粒组成的薄膜,具有优异的透气性和可降解性,被广泛应用于药物包裹和食品包装等领域。
通过深入研究胶体金硝酸纤维素膜在吸水方面的性能特点和机制,可以为其在医疗、环境保护和工业生产等领域的实际应用提供理论基础。
对胶体金硝酸纤维素膜的吸水性能进行系统研究具有重要的科学意义和应用前景。
2. 正文2.1 制备胶体金硝酸纤维素膜制备胶体金硝酸纤维素膜是一个复杂而关键的过程。
nc膜是什么意思酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),是蛋白印迹最广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。
在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。
NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。
硝酸纤维素NC膜的使用很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在去离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;硝酸纤维素 NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。
转移到硝酸纤维素NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间,不过要注意的是纯的硝纤膜在比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途,因为经不起多次“折磨”。
选择硝纤NC膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。
另外还要注意选择纯的NC 膜。
混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。
另外,由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时最好使用较温和的Tween20,而且浓度不要超过0.3%(据说0.05%效果最好)。
一般而言,NC膜越纯,其蛋白结合能力就越高,所以要增加WB的灵敏度和分辨率,提高所使用膜的纯度是个可以考虑的选择。
如果NC膜搀杂一些醋化纤维素,会影响蛋白质结合。
ADVANTEC生产的硝酸纤维素滤膜由于是纯NC膜,比较脆,需要小心操作。
注意事项:1.由于硝酸纤维素膜是亲水膜,故不需要在乙醇、甲醇等溶液中浸泡活化。
2.硝酸纤维素膜比较脆,容易破碎,操作要小心。
3.本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
4.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
玻璃纤维膜 nc膜原理
玻璃纤维膜和NC膜(硝酸纤维素膜)的原理如下:
1. 玻璃纤维膜的原理:
玻璃纤维膜是一种由连续玻璃纤维组成的非织造布,其原理基于玻璃纤维的优异性能和结构特点。
玻璃纤维具有高强度、高模量、耐高温、耐腐蚀等特性,因此玻璃纤维膜具有优良的抗拉强度、抗撕裂性、耐磨损性和化学稳定性。
此外,玻璃纤维膜还具有良好的透气性和过滤性能,能够有效地过滤和分离气体、液体中的固体颗粒和杂质。
玻璃纤维膜的应用范围广泛,包括工业过滤、环保治理、医疗卫生、食品加工等领域。
在过滤和分离过程中,玻璃纤维膜通过其独特的纤维结构和表面性质,实现对固体颗粒和杂质的拦截和吸附,从而达到过滤和净化的目的。
2. NC膜(硝酸纤维素膜)的原理:
NC膜是一种由硝酸纤维素制成的薄膜材料,其原理基于硝酸纤维素的溶解和再生过程。
硝酸纤维素是一种高分子化合物,具有良好的溶解性和成膜性。
在制造过程中,硝酸纤维素溶解在适当的溶剂中,形成均匀的溶液。
然后,通过流延、刮涂或喷涂等方法,将溶液涂布在基材上,经过干燥和固化后形成薄膜。
NC膜具有优良的机械性能、化学稳定性和生物相容性,因此广泛应用于生物分离、免疫检测、药物筛选等领域。
在生物分离和免疫检测中,NC膜作为固相支持体,能够固定和吸附生物分子(如蛋白质、核酸等),从而实现生物分子的分离、纯化和检测。
总之,玻璃纤维膜和NC膜的原理分别基于玻璃纤维的优异性能和硝酸纤维素的溶解再生过程。
这两种膜材料具有不同的特点和应用领域,但都能够在过滤、分离和检测等方面发挥重要作用。
硝酸纤维素膜(NC膜)的简介和生产原理概念硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),在胶体金试纸中用做C/T 线的承载体,同时也是免疫反应的发生处.NC膜是生物学试验中zui重要的耗材之一.NC膜的生产原理匀浆配比购买回来的原料硝酸纤维素粒子是一种非常普遍的有机化学物,溶解形成混浆,在该浆体内,通过加入一定比例的试剂来调整zui后形成的膜的性质,一般主要包含表面活性剂/高分子聚合物/盐离子/成型剂等溶解的一个缓冲体系内。
不同的厂家加入的溶液配方不一样,导致了产品的差异.滚筒铺膜配好的匀浆通过滚筒,形成了一张薄膜,平摊在十分光滑的平面载体上。
过程与造纸非常相似.成型当匀浆内的成型剂开始挥发,膜逐步干燥成型。
同时在这个过程中由于温度比较高,有些厂家在这个过程采取了在密闭腔体内成型,同时补充配方溶液的形式,来避免一些有效成分的蒸发.切割通过以上步骤生产出来的膜是呈一个宽度极大的产品,宽度的大小直接和滚筒的大小相关,滚筒越大生产越方便,但设备的成本也越高.宽膜要经过切割才能成为我们购买到的25mm或18mm(或20mm)宽的膜,而长度上,成品卷膜和宽膜的长度是相同的.理论上可以让厂家切成你需要的任意宽度,但这样会造成原料的浪费和人力成本的增加,后来厂商在和试纸生产厂家的协调过程中,综合用料成本和生产便利性基本确定了上面说的宽度,以次为标准。
从生产过程,我们可以得知,NC膜本身已经添加了表面活性剂来改善亲水能力,而且已经存在有一定的缓冲系统(虽然对纸条测试影响不会很大)。
NC膜的选择膜的选择涉及到一个膜的分类标准问题,一个供应商可能提供这个膜是8um,但另一个供应商告诉你膜是135s的.这之间的区别与是什么?um指的是膜孔径,而从上面膜的生产过程,我们可以看出,膜的孔径实际上是没有办法界定的.由于干燥成型等过程的非均一,膜的孔径也是非均一的。
膜孔径的说法实际上是沿用了一直以来的一个形象称呼。
硝酸纤维素膜NC膜目录概念NC膜的生产原理NC膜的供应商及现状NC膜的选择膜的质控方式膜的深入探讨和应用技巧NC膜的应用举例概念NC膜的生产原理NC膜的供应商及现状NC膜的选择膜的质控方式膜的深入探讨和应用技巧NC膜的应用举例概念硝酸纤维素膜(nitrocellulose filter membrane,简称NC膜),在胶体金试纸中用做C/T线的承载体,同时也是免疫反应的发生处。
NC膜是生物学试验中最重要的耗材之一。
NC膜的生产原理匀浆配比购买回来的原料硝酸纤维素粒子是一种非常普遍的有机化学物,溶解形成混浆,在该浆体内,通过加入一定比例的试剂来调整最后形成的膜的性质,一般主要包含表面活性剂/高分子聚合物/盐离子/成型剂等溶解的一个缓冲体系内。
不同的厂家加入的溶液配方不一样,导致了产品的差异。
滚筒铺膜配好的匀浆通过滚筒,形成了一张薄膜,平摊在十分光滑的平面载体上。
过程与造纸非常相似。
成型当匀浆内的成型剂开始挥发,膜逐步干燥成型。
同时在这个过程中由于温度比较高,有些厂家在这个过程采取了在密闭腔体内成型,同时补充配方溶液的形式,来避免一些有效成分的蒸发。
切割通过以上步骤生产出来的膜是呈一个宽度极大的产品,宽度的大小直接和滚筒的大小相关,滚筒越大生产越方便,但设备的成本也越高.宽膜要经过切割才能成为我们购买到的25mm或18mm(或20mm)宽的膜,而长度上,成品卷膜和宽膜的长度是相同的.理论上可以让厂家切成你需要的任意宽度,但这样会造成原料的浪费和人力成本的增加,后来厂商在和试纸生产厂家的协调过程中,综合用料成本和生产便利性基本确定了上面说的宽度,以次为标准。
从生产过程,我们可以得知,NC膜本身已经添加了表面活性剂来改善亲水能力,而且已经存在有一定的缓冲系统(虽然对纸条测试影响不会很大)。
NC膜的供应商及现状现在有销售的NC膜品牌型号如下:PALL(美国)MILLIPORE(美国),M135(有背衬/无背衬两种)M180(有背衬/无背衬两种)WHATMAN and SS,Puraband impurabandSARTORIUS(德国),CN140伊能(国产),8um 6umMDI(印度),8um 6um说到这些供应商,不得不谈谈发展的历史. SS是膜行业的鼻祖,这点所有的膜公司都承认。
文章导读硝酸纤维素是一种白色的聚合物,这种物质其实有很多称呼,比如又被人们称为纤维素硝酸脂,其英文简称是nc,这种化学物质有很多特点,比如被阳光照射之后容易变色,还具有容易燃烧的特点,所以其实硝酸纤维素是一种危险品,平时使用的时候一定要谨慎,下面为大家介绍硝酸纤维素的正确使用方法。
硝酸纤维素膜的应用技巧:1.蛋白与膜的结合原理蛋白与膜的结合原理,已知的结合力包括疏水作用力H键静电作用力等,确切的结合原理并不明确,主要靠假说来支撑.主要有两种假说:1)首先两者靠静电作阻力结合,然后靠H键和疏水作用来维持长时间结合.2)首先两者靠疏水作用结合,然后靠静电作用来维持长时间结合.两条假说,都表明其结合过程分为两步,首先结合和后面长时间结合.由于结合原理的不明确性,导致在这方面的工作非常依赖实践经验.2.膜对结合的影响1)膜孔径有些技术人员倾向使用膜孔径来区分不同的膜,但是请注意这只仅仅限于同一厂家的产品,如果是不同厂家的产品,这种比较是无意义的.膜孔径与层析速度的关系,已在上文描述.随着膜孔径减小,膜的实际可用表面积递增,膜结合蛋白的量也递增.估量表面积的参数为表面积比率(实际可用表面积与所用膜平面积的比率).另外,膜孔径越小,层析速度也越小,那么金标复合物通过T线的时间也就越长,反应也就越充分.综合以上两点,结论为膜孔径越小灵敏度越高.但是同时也减慢了跑板速度,增加了非特异性结合的机会,也就是假阳性越高.所以要按照试验结果挑选适合实际项目的膜,找到合适的平衡点.2)不同厂家的膜差异这个差异主要来源于两点:1>生产膜时,使用的聚合物和表面活性剂的来源,类型,数量不同.同理,在膜处理中这两类物质一般会对性能产生较大影响.2>处理过程不同.3.生物原料,缓冲溶液的试剂和配方1)生物原料,作为CT线的生物原料使用情况各异,所以这里只做略述.首先,单克隆抗体与膜的结合优于多克隆抗体,主要时由于多克隆抗体有很多不同的表面位点,而各位点与膜的最佳结合条件都有细微的差别,毫无疑问就增加了优化难度.其次,分子量越大,蛋白越难结合到固相材料上.2)缓冲液大家最关心的可能就是希望获得一个性能优良的配方,包括缓冲液,封闭液等等处理溶液配方.其实也无法提供给一个万用配方清单.因为不同的反应体系需要不同的配方来支持,而不同机构的反应体系又有差异.想获”鱼”先学”渔”.为了不误导大家,在下面涉及到配方的问题上,仅提供思路,具体配方请自己摸索.缓冲液的构成一般是:PBS(或其他缓冲体系)+作用物质(针对某一特定问题)+PH调整.在参考过以前的各种资料后,个人意见为配方原则为宜简不宜繁,根据自己的需要添加作用物质,原来的很多需要添加的作用物质,由于膜制造技术的改进已经不再需要.推荐的缓冲体系为0.01MPBSPH7-7.2,该缓冲体系对多种抗原抗体都有良好的适应性.作用物质的情况大致罗列如下:少量NACL,减少信号强度,消假阳.有机醇(甲醇,异丙醇等),润湿膜,减少膜带有的静电,利于结合包被.个人不推荐,因制膜工艺改进.表面活动剂(TW20,TX100),增加亲水力,可避免线条中空现象,也可增色.糖,保护剂,减缓老化速度,也可以增加亲水力同上.调PH到某个位置,可以消假阳.4.点样环境环境湿度对点膜过程非常重要.最佳湿度一般在45-65%.。
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