猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测
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口蹄疫合成肽疫苗研究进展页数:4
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合成肽疫苗页数:2
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猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测页数:3
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猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点页数:5
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猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验页数:4
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2019年国内口蹄疫合成肽疫苗领军者申联生物研究页数:17
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猪O型口蹄疫抗体水平检测与分析
猪场兽医VETERINARY猪O型口蹄疫抗体水平检测与分析刘 鸽，于会举，张培生，张 倩，宋 敏，杨慧敏，吴圆圆，屈勇刚*(石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003)口蹄疫（food and mouth disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性和高度接触性的偶蹄动物传染病[1-5]，被国际兽医局（OIE)列为必须上报的动物疫病，被我国列为一类动物传染病[6-8]。
FMD属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属，包括7个血清型（A、O、C、SATI、 SATⅡ、SATⅢ和亚洲I型，其中O型口蹄疫是世界上流行最广的一种血清型）和80多个血清亚型，并且各血清型之间无交叉免疫现象[9]。
1514年，FMD被首次报道，现已在全球蔓延，并严重威胁畜牧业的健康发展，给畜牧业造成巨大损失[10-13]。
在应对FMD方面，我国采取疫苗免疫接种和扑杀的综合防治措施，效果明显[14-16]。
近些年，我国强制免疫中广泛使用猪口蹄疫O型灭活疫苗和猪口蹄疫O型合成肽疫苗。
2015年下半年至今，猪肉价格较高，激发了养猪单位中畜牧工作者的工作积极性，极大地促进了养猪事业的发展。
为了解2014年1月—2016年9月北疆地区口蹄疫（FMD)的免疫抗体水平，本试验选择克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台5个不同区域的19个规模化猪场进行猪O型口蹄疫ELISA抗体水平检测并做出初步分析，在一定程度上可为北疆地区口蹄疫防疫工作提供一定的参考。
1 材料与方法1.1 试验材料1.1.1 样品来源2014年1月至2016年9月采自新疆北疆地区的克拉玛依、沙湾、石河子、玛纳斯、奇台5个不同区域的19个规模化猪场不同类型猪群（0～10 d、11～ 20 d、21～30 d仔猪，后备母猪，经产母猪，种公猪），共采集血样980份。
1.1.2 材料和仪器猪O型口蹄疫病毒 ELISA 抗体检测试剂盒（武汉科前生物）、自动酶标仪（美国 Bio Tek 仪器有限公司）、一次性5 mL兽用采血器、微量移液器（Eppendorf公司）、若干个移液枪头（已高压灭菌）、恒温培养箱（光明医疗仪器厂）、平板震荡仪等。
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验
不同试剂盒检测猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗体的对比试验廖美娜;袁敏【摘要】使用口蹄疫O型正向间接血凝抗体试剂盒(IHA)和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒(VP1-ELISA)分别检测接种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不同时间的抗体合格率,以探讨3种抗体检测试剂盒的相关性.结果显示,IHA试剂盒与两种VP1-ELISA的符合率较差,分别为11.7％、12.5％,IHA试剂盒不能用于检测合成肽疫苗免疫抗体;VP1-ELISA试剂盒可以科学评价合成肽疫苗免疫抗体,两种VP1-ELISA试剂盒的平均符合率为93.6％,但是VP1-ELISA (UBI)试剂盒的稳定性高于VP1-ELISA(Z)试剂盒.【期刊名称】《广东畜牧兽医科技》【年(卷),期】2016(041)001【总页数】4页(P24-26,29)【关键词】猪口蹄疫;O型抗体;试剂盒;对比【作者】廖美娜;袁敏【作者单位】河源市龙川县动物卫生监督所赤光分所,广东河源517349;河源市龙川县畜牧兽医渔业局,广东河源517300【正文语种】中文【中图分类】S851.3口蹄疫（Foot-an-mouth isease，FM）是一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，严重危害我国畜牧业的发展[2-3]。
目前，我国对口蹄疫实行预防为主、扑杀为辅的防控政策，对口蹄疫实行强制免疫。
免疫抗体检测是科学评价免疫质量的有效手段，也是制定免疫程序的可靠依据。
在实际工作中，因受到检测方法、检测试剂的不同而导致检测结果常有差异。
近几年，猪口蹄疫O型合成肽疫苗作为一种新型疫苗在市场上得到广泛的应用[4]。
为了选择科学评估此种疫苗免疫质量的检测方法，本试验通过使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫猪群后，采集不同时间的血清，分别使用正向间接血凝试验试剂盒（IHA）和2个厂家生产的猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒（VP1-ELISA），进行了猪口蹄疫O型抗体检测的对比试验。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验
猪口蹄疫Ｏ型合成肽疫苗免疫效果试验作者：邓广金来源：《湖北畜牧兽医》2009年第07期摘要:为了更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与灭活疫苗免疫后抗体水平之间的差异,在梅州市选择2个规模化养猪场,每个猪场分2组,对试验猪分别免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗,对接种疫苗的试验猪进行免疫应激观察,结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应,说明用合成肽疫苗临床使用的安全性较高;采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验分别对使用上述两种口蹄疫疫苗免疫21d后的猪血清进行检测,结果表明:免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性合格率达到92.50%,免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗用正向间接血凝试验检测,免疫合格率为35.83%,说明猪口蹄疫O型合成肽疫苗接种后的免疫效果明显优于传统灭活疫苗。
关键词:合成肽疫苗;口蹄疫;抗体;正向间接血凝试验中图分类号:S852.5+2文献标识码:A文章编号:1007-273X(2009)07-0028-02口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害偶蹄兽,偶见于人和其他动物。
临床上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮肤发生水疱和溃疡为主要特征。
该病具有强烈的传染性,一旦发病,传播速度很快,往往造成大流行,不容易控制和消灭,带来严重的经济损失。
因此,世界动物卫生组织(OIE)一直将该病列为发病必须报告的A类动物疫病名单之首[1]。
目前对该病的防制主要是采用强制免疫、禁运、扑杀、消毒、封锁等措施,而免疫接种是最主要的也是最经济的防控措施。
目前,主要是研制和应用灭活疫苗[2],但该类灭活苗干扰因素多,对野毒与疫苗产生的抗体鉴别困难,而且疫苗的自身缺陷使之无法克服过敏反应和带毒的生物安全隐患问题[3],故许多学者把免疫谱广、免疫持续期长、安全性好的新型疫苗作为目前口蹄疫的主要研制方向。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗是用固相多肽合成技术在体外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位点的多肽[4],并连接人工合成的可激活辅助性T细胞的短肽,以此作为免疫原与进口佐剂混合乳化制成,能够很好的预防猪O型口蹄疫的发生。
两种方法检测猪O型口蹄疫免疫抗体的对比试验
三、检测方法及结果判定
1. 口蹄疫抗体 O 型竞争 ELISA。严格按试剂盒说明 书进行操作，计算两孔的平均 OD 值后乘以 0.6，该值即 为临界值，表示阻断 40% 反应的对照 OD 值。待测样品 OD 值 > 临界值，判为阴性孔；待测样品 OD 值≦临界 值判为阳性孔，阳性孔的最高稀释倍数即为该样品的抗 体效价，抗体效价 >1 ∶ 16 判定为抗体合格。
表 1 竞争 ELISA 与液相 ELISA 检测猪 O 型 口蹄疫免疫抗体结果
竞争 ELISA 液相 ELISA 双合格情况 检测数 （份） 合格数 合格率 合格数 合格率 合格数 合格率
（份） （%） （份） （%） （份） （%）
48
44 91.7 44 91.7 44 91.7
表 2 猪血清样品抗体检测效价
液相阻断 ELISA 抗体检测是应用双抗体夹心法的 模型，针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗 体分别作为固相抗体和酶标抗体。适用于测定大分子抗 原及对应的抗体，不适用于测定半抗原及小分子单价抗 原及对应的抗体，因为它不能形成两位点夹心。ELISA 是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测 定技术 , 过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为
2. 口蹄疫抗体 O 型液相阻断 ELISA。严格按试剂盒 说明书进行操作，计算两孔的平均 OD 值后乘以 0.5，该 值即为临界值，表示阻断 50% 反应的对照 OD 值。待测 样品 OD 值 > 临界值，判为阴性孔；待测样品 OD 值≦
67
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1 ∶ 11
1 ∶ 45
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1 ∶ 180
1 ∶ 90
1. 口蹄疫抗体 O 型竞争 ELISA。严格按试剂盒说明 书进行操作，计算两孔的平均 OD 值后乘以 0.6，该值即 为临界值，表示阻断 40% 反应的对照 OD 值。待测样品 OD 值 > 临界值，判为阴性孔；待测样品 OD 值≦临界 值判为阳性孔，阳性孔的最高稀释倍数即为该样品的抗 体效价，抗体效价 >1 ∶ 16 判定为抗体合格。
表 1 竞争 ELISA 与液相 ELISA 检测猪 O 型 口蹄疫免疫抗体结果
竞争 ELISA 液相 ELISA 双合格情况 检测数 （份） 合格数 合格率 合格数 合格率 合格数 合格率
（份） （%） （份） （%） （份） （%）
48
44 91.7 44 91.7 44 91.7
表 2 猪血清样品抗体检测效价
液相阻断 ELISA 抗体检测是应用双抗体夹心法的 模型，针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗 体分别作为固相抗体和酶标抗体。适用于测定大分子抗 原及对应的抗体，不适用于测定半抗原及小分子单价抗 原及对应的抗体，因为它不能形成两位点夹心。ELISA 是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测 定技术 , 过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为
2. 口蹄疫抗体 O 型液相阻断 ELISA。严格按试剂盒 说明书进行操作，计算两孔的平均 OD 值后乘以 0.5，该 值即为临界值，表示阻断 50% 反应的对照 OD 值。待测 样品 OD 值 > 临界值，判为阴性孔；待测样品 OD 值≦
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不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估
2010养猪SWINE PRODUCTION (2)不同口蹄疫疫苗免疫效果及检测方法评估秦荣香，曹玉美，陆江，伍少钦，黄爱奎，蒙春宁（广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场，广西南宁530317）中图分类号：S828文献标志码：B文章编号:1002-1957(2010)02-0062-02摘要：为更好地了解猪口蹄疫O 型合成肽疫苗与猪口蹄疫O 型灭活疫苗的免疫效果与合理的检测方法，广西农垦永新畜牧集团有限公司良圻原种猪场在某肥育场进行了此次试验。
试验猪分3组，分别注射不同厂家生产的猪口蹄疫O 型合成肽疫苗和猪口蹄疫O 型OS/99株灭活疫苗，并采用猪O 型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验（HI ）分别对使用上述口蹄疫疫苗免疫效果进行检测。
结果表明，猪注射口蹄疫O 型合成肽疫苗后，用猪O 型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测，抗体阳性率达到100%；用正向间接血凝试验方法检测不到注射合成肽疫苗后产生的抗体效价。
免疫猪口蹄疫O 型OS/99株灭活疫苗后，用VP1抗体检测试剂盒检测，抗体阳性率只有30%；用HI 方法进行检测，抗体阳性率为60%。
关键词：猪口蹄疫O 型合成肽疫苗；猪口蹄疫O 型灭活疫苗；免疫效果；O 型猪口蹄疫VP1抗体检测试剂盒；O 型口蹄疫正向间接血凝试验收稿日期：2010-01-19作者简介：秦荣香（1977-），女，广西桂林人，兽医师，主要从事猪病防治工作.E-mail:qinrongxiang@猪口蹄疫O 型灭活疫苗在临床使用过程中对猪只应激较大，常会出现猪只应激死亡的现象，并且对年轻猪只免疫效果不是很理想，通常情况下只有60%～80%的免疫合格率。
猪口蹄疫O 型合成肽疫苗是用固相多肽合成技术在体外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位点的多肽，并连接人工合成的可激活辅助性T 细胞的短肽，以此作为免疫原，加油佐剂混合乳化制成。
有关研究表明，该疫苗具有较好的免疫原性，副反应较小。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验
表 ３ 保 持 精 子 活 力 ０ ５级 时 的 保 存 天数 ．
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察作者：陈培赛，林元潮，曾瑞强来源：《兽医导刊》 2013年第12期陈培赛1，林元潮2，曾瑞强2（1. 温州市苍南县畜牧兽医局，浙江苍南 325800 ；2. 温州市苍南县灵溪镇农业综合服务中心，浙江灵溪 325800）口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病，给世界畜牧业造成很大损失。
1974 年国际兽疫局（OIE）将该病列为国际动物卫生法典中18个A 类疾病之首, 在许多国家和地区都有该病的发生与流行。
目前对该病的防制主要是采取禁运、紧急屠宰和强制性免疫接种措施，而疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段。
猪口蹄疫O 型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术，在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点（合成肽）并连接人工T 细胞位点，以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成油乳剂疫苗，能够很好的预防猪O 型口蹄疫的发生。
温州市苍南县国土面积1300 平方公里，生猪总存栏数量约10 ～ 12万头，每户存栏数量100 ～ 500 头为主。
我县于2009 年8 月3 日开始试用申联生物医药（上海）有限公司的猪口蹄疫O 型合成肽疫苗，一直坚持使用至今，全县没有出现重大生猪口蹄疫疫情，取得了较好的防控效果，现将我县推广使用合成肽疫苗情况介绍如下。
一、猪口蹄疫O 型合成肽疫苗免疫效果观察1．初试及近年疫苗使用情况统计。
（1）初试情况。
2009 年8 月3 日，我县首先在新华畜牧有限公司进行猪口蹄疫O 型合成肽疫苗与高效灭活疫苗的对比试验。
通过试验发现合成肽疫苗免疫副反应小、抗体检测合格率高，受到了畜牧兽医部门和广大养殖场的高度认同。
（2）推广使用情况。
初试完成后，先在我县9 个规模猪场全面使用，免疫生猪约7 500 头。
10 月份以后，全县开始使用合成肽疫苗至今。
2009 年以来使用的猪口蹄疫疫苗情况见表12. 免疫后效果分析。
（1）免疫应激反应小。
合成肽疫苗接种后不会产生严重的副反应，曾观察到甚至使用了20 ml 注射的剂量也没有不良反应。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及猪口蹄疫灭活疫苗免疫效果试验
将 １ ０ ０头试 验 猪按 照疫 苗 说 明书 进行 免 疫 ， 每 头猪 耳 根后 肌 肉深 层注 射 ｌ 毫升 ， 第 一次 接种
后 间隔 ４Βιβλιοθήκη 再 加强 免疫 ２毫 升 。 ２ ． ３应 激 反 应 判 定 标 准
用猪 口蹄 疫 ０型 合 成 肽疫 苗 和猪 口蹄 疫 ０ 型灭 活疫 苗 在 同一 个猪 场 进行 免 疫注 射 ， 均 用酶
为 ９ ０ ％ ．１ ２ ０天 为 ６ ０ ％， １ ５ ０天 为 ５ ０ ％。 从 表 ２可
源 抗体 ； 第 一 次注 射疫 苗后 ２ ８天（ 二 免前 ） 开始第
二 次采 血 。然后 ， 每隔 ３ ０天采血 一次 。直 至抗 体
下 降 。采取前 腔 静脉或 耳静 脉采 血 ３ ～ ４毫 升 。按
６ ． １重 在 预 防 ， 从 饲养 管 理 人 手 ， 抓好 营养 、
卫生 、 人 员 意 识 等 方 面 的工 作 ． 尽 可 能 减 少 内源
头 随机 平均 分 为两 组 ， １组 ，注 射 猪 口蹄 疫 ０型
合 成肽 疫 苗 ； ２组 ， 注射 猪 １ ： ３ 蹄 疫 ０型 灭 活疫 苗 。 两组 仔猪 体重 差异 不显著 （ 见表 １ ） 。
猪 口蹄 疫 Ｏ 型合成 肽 疫苗及 猪 口蹄疫 灭活疫 苗免 疫效 果试验
孟 艳 ， 杨 秀女 ， 武秋 双 ， 郑 丽丽 ， 杨旭 光 （ １ ． 河北 省畜牧 兽 医研 究所 ， 河北保 定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ； ２ ． 河 北省 动物 疫病 预 防控 制 中心 ， 河北 保定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ；
蹄疫感染抗体阴性的 ２ ８ 日龄 左 右 断 奶仔 猪 １ ０ ０
或 服用 纯 中药制 剂 复方 益母 草
不同猪口蹄疫 O 型疫苗免疫效果的对比试验
不同猪口蹄疫 O 型疫苗免疫效果的对比试验王申锋;钱明珠;张海棠【摘要】为研究猪口蹄疫O型合成肽疫苗与猪口蹄疫O型灭活疫苗的免疫效果，试验选择40~45日龄保育猪160头，随机分为两组，分别注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗，免疫后25 d采集血清、检测抗体效价.结果表明，合成肽疫苗组抗体合格率为90%，出现应激反应的比例为0；灭活疫苗组抗体合格率为75%，出现应激反应的比例为3.75%.结论：注射猪口蹄疫O型合成肽疫苗比灭活疫苗的效果好、出现应激反应的仔猪少.【期刊名称】《养猪》【年(卷),期】2012(000)005【总页数】2页(P117-118)【关键词】猪;口蹄疫O型合成肽疫苗;口蹄疫O型灭活疫苗;免疫效果【作者】王申锋;钱明珠;张海棠【作者单位】河南农业职业学院,河南郑州 451450;河南农业职业学院,河南郑州451450;河南科技学院,河南新乡 453003【正文语种】中文【中图分类】S858.282.5+2口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病[1]，偶见于人和其他动物。
临床表现以蹄部（蹄冠、蹄踵、蹄叉）、口腔黏膜以及鼻盘等部位出现大小不等的水泡和溃疡为特征。
本病对成年猪的致死率一般不超过3%，妊娠母猪可发生流产，仔猪常因急性心肌炎而出现突然死亡。
口蹄疫作为人畜共患病，严重危害畜牧业生产，每年造成巨大的经济损失[2]，也严重威胁人的健康。
目前，我国预防和控制口蹄疫实行以疫苗计划免疫为主、疫区封锁和扑杀为辅的综合防制措施。
安全高效的疫苗是有效防制并彻底消除口蹄疫的保障。
我国预防口蹄疫使用的疫苗有灭活疫苗、合成肽疫苗，其中灭活疫苗普遍使用，对防控口蹄疫起到了重要作用，但存在免疫效果不佳和副反应问题[3]；合成肽疫苗具有很好的免疫原性和安全性，且抗体持续期长、质量稳定[4]，但因这样或那样的问题，一直没有形成像灭活疫苗一样廉价有效的产品[5]。
2种猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后抗体水平的动态变化
NN N N NN N N NN N N N 40 N N NN N N NN N N
N 40 N N NNNN NNNN Y 41 N N NNNN NNNN
96 h N N N N
NNNN
NN N N
NNNN
24 h - - - -
48 h - - - 三次免疫
72 h - - - -
-
-
-
-
-
1001 0
10 801 4 ? 151 3b
10010 881 5 ? 141 3ab
10010 1001 2 ? 215a
10010 991 8 ? 310a
10010
注: 同列数据阻断率之间比较, 不同字母者表示差异显著 (P < 01 05), 有相同字母者表示差异不显著 (P > 01 05 )。
%
12 941 1 ? 121 9a
1001 0 821 3 ? 231 6a
841 6 651 7 ? 381 5a
841 6 9613 ? 81 9a
1001 0
3 讨论
合成肽疫苗是近 10多年来发展起来的一种新型 人工疫苗, 它是以合成的一段免疫原性肽抗原配以适 当的载体或 /和佐剂制成的疫苗。相对于传统的弱毒 苗和灭活苗以及其他几种新型的疫苗, 肽类疫苗具有 以下特点: 合成肽疫苗是一种纯粹抗原性疫苗具有安 全、无毒、稳定及副反应小等优点; 由于其分子结构 小而简单, 很少会出现严重的并发症及医源性感染问 题; 第三是可精确定位, 合成 T、 B 细胞抗原表位并 能可进行不同组合, 有望制成针对多种病原的超级疫 苗 [ 1] 。猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗正是 基于上述理念 研制成功, 其主要含有口蹄疫 O 型病毒 VP1 B 细胞 表位 ( VP1环 ) 和 T 细胞表位的 7种寡肽, 将这些 寡肽和钥孔鏚血蓝蛋白 ( KLH ) 偶联, 然后 混合于 弗氏完全佐剂中, 制备成合成肽疫苗, 能够产生足够 的抗体, 保护 牛和猪不发病 [ 2] 。本试验中针 对猪口 蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫后的副反应进行观 察, 发 现除接种猪除短时间的发热及减料外, 并无常规口蹄 疫疫苗接种后的高热不退、食欲废绝、呼吸困难、流
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[ 3] W aldm ann O , Petermann H G .V ariation s of t he virus of t he f oot and mout h di sease[ J] .Bakt eri ol Parasi tenkd Infekt ionsk r H yg , 1952 , 157(8):551-555 .
中
申联一免组 S HS L 1I
申联二免组 SH SL 2I
对照组 C on t rol
OD 值 OD
V alue
0 .33 0 .82 2 .06 2 .49 2 .05 2 .20 1 .88
阳性率/ % Posi ti ve rate
免疫抑制性疾病除直接造成与其他传染病相同 的危害外 , 更严重的是受感染畜禽的免疫功能受到 损害 , 结果导致机体抵抗力下降而易受其他病原的 继发感染 , 引起多种综合征[ 8-10] 。同时 , 还造成对疫 苗接种的副反应增强 , 甚至使免疫失败 。 之前有过 数次试验均受免疫抑制性疾病影响未能取得满意的 试验结果 , 本试验对于试验猪免疫抑制性疾病的细 致排查筛选 , 对最终良好的免疫结果起到了重要的
在整个试验阶段 , 全部试验猪在两次注射疫苗 前后均未观察到应激反应 , 说明了该疫苗免疫副反 应小 , 是推广该疫苗的有利条件 。
试验证明 , 对于猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫 的生猪 , 用 VP 1 EL ISA 和 LP B-EL ISA 均能较为准 确的检测其抗体水平 , 试验相关性较好 。
动DO物I :医10学.16进 437展/j .,c2n0ki0.910,0370-(5803)8: .1201069-.1081.8029 P rogress in Vet eri nary Medicine
猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检测＊
陈方志1 ,2 , 邱伯根3 , 刘道新2 , 谈志详2 , 范仲鑫2 , 邱立新2 , 鲁杏华2 , 何世成2 , 唐小明2 , 黄建龙2 , 汪洪冰2
3 讨论
两种猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫过的 4 组共 计 80 头试验猪 , 首免后 4 周内即 100 %达到抗体阳 性 , 且抗体一直维持在一个较高的水平 。 这说明两 种合成肽疫苗的免疫原性都很好 , 进入动物体内后 迅速诱导免疫应答 , 产生了大量抗体 。 申联组的抗 体水平较中牧组略高 , 且抗体水平均一性好 , 波动不 大 ;抗体持续期也略好于中牧组 , 首免后 9 周仍呈上 升趋势 , 而中牧两个试验组抗体水平分别在第 5 周 和第 7 周开始呈现缓慢下降趋势 。 但无论哪个组 , 抗体水平均能令人满意 , 即使一次免疫 , 也足以维持 阳性水平以上的抗体直至生猪出栏 。
(1 .湖南农业大学动物医 学院 , 湖南长沙 410128;2.湖南省动物疫病预防控制中心 , 湖南长沙 410007 ; 3.湖南省兽医局 , 湖 南长沙 410006)
摘 要 :为了解猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免疫效果 , 选用了两个厂家生产的猪口蹄疫 O 型合成肽疫 苗 , 对 80 头试验仔猪进行了免疫注射 , 并在 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周龄采血 , 通过 ELISA 检测抗体水平的变 化 。 结果显示 , 猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体 ;疫苗的免疫副作用小 ;使用 VP1 ELISA 和 L PB-EL ISA 检测猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好 。 关键词 :猪 ;口蹄疫 O 型合成肽疫苗 ;抗体 ;酶联免疫吸附试验
对照组 , 无免疫应答 , 抗体水平随母源抗体的逐 步消失而下降至阳性阈值以下 。详见表 1 。
采样周龄 S ampli ng w eek age
6 7 8 9 11 13 20
表 1 V P1 ELIS A 检测 结果 Table 1 Result s of V P1 E LIS A det ection
阳性率/ % Posi ti ve rat e
60 100 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
1 .01 1 .85 2 .28 2 .42 2 .80 3 .25 2 .62
阳性率/ % Posit ive r a te
80 100 100 83 .3 100 100 100
中 , 每栏随机选取 6 头 , 前腔静脉真空管采血 。 分离 血清 , 使用 EL ISA 试剂盒检测 P RV 、CSF V 、F MDV 抗体 ;应用 PC R 方法检测 P RRS 、P CV-2 抗原 。 在 无 P RV 、P RRSV 、PCV-2 、CSFV 病原 , 且 FM DV 母 源抗体水平低于阳性阈值的栏舍中选取共 90 头仔 猪进行试验 。 1 .2 .2 试验猪的分组及免疫 试验猪分为 5 组 :中 牧一免组 ;中牧二免组 ;申联一免组 ;申联二免组 ;对 照组 。其中对照组 10 头 , 其余每组 20 头 。参考疫 苗说明书 , 4 周龄进行首免 , 二免组于 8 周龄进行加 强免疫 , 每次每头份 1 m L 。 1 .2 .3 样品采集 试验猪 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周 龄 , 每组随机选取 6 头 ～ 8 头试验猪采血 , 将采集的 血样编号分离血清 。 1 .2 .4 抗体检测 使用上海优耐特公司生产的猪 口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体 EL ISA 试验诊断试 剂盒对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒说 明书进行 。
每批次血清随机抽取一部分 , 使用兰州兽医研 究所生产的 O 型口蹄疫抗体液相阻断 EL ISA 检测 试剂盒 , 对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒 说明书进行 。 1 .2 .5 试验结果相 关性效验 利用 SPSS 软件调 用 Pearso n 函 数对 VP1 EL ISA 试 验结 果与 LP BELISA 试验结 果进 行分 析 , 了解两 个试 验的 相关 性。
1 材料与方法
1 .1 材料 1 .1 .1 试验用动物 湖南省益阳市南县广田猪场 4 周龄仔猪 , 共 90 头 。 1 .1 .2 试剂 猪口蹄 疫病毒 VP1 结构蛋 白抗体 ELISA(VP 1 EL ISA)试验诊断试剂盒为优耐特公司 产品 ;O 型 口 蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断 E LISA (LP BELISA)检测试剂盒为兰州兽医研究所产品 ;猪口蹄 疫 O 型合成肽疫苗为申联生物医药(上海)有限公 司产品(批号 20080907);猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗 为中牧实业股份有限公司产品(批号 0807007)。 1 .2 方法 1 .2 .1 试验猪的选取 从 17 栏 4 周龄健康仔猪
2 .0 , 并持续保持在一个较高的水平 。 申联一免组 , 免疫后抗体上升平稳上升 , 第 3 周
达到 100 %阳性率 , 第 9 周虽有所回落 , 但抗体水平 仍然很高 。申联二免组 , 抗体首免后即开始快速上 升 , 第 3 周阳性率达到 100 %, 此后抗体水平上升放 缓 , 直至二免后 , 再度加速上升 , 第 11 周平均 OD 值 达到 3 .25 。
0 .156 。 中牧一免组 , 免疫后第 4 周 , 抗体阳性 率达到
100 %;第 5 周达到高峰和开始缓慢回落 , 但阳性率 始终保持在 100 %, 并且抗 体水平较高 。 中牧二免 组 , 首免后抗体上升平缓 , 第 4 周阳性率达到 100 %; 二免后抗体水平上升迅速 , 1 周后 OD 值 普遍超过
[ 2] Frenkel H S .Cu lti vat ion of t he f oot-and-m ou t h disease vi rus in explant ed epi th eliu m of t he bovine t ongu e.IX .G row t h charact eri sti cs of t he viru s in large s cal e ti ssue cult ures[ J] .A m J V et Res , 1956, 17(62):40-44 .
只免疫动物抗体滴度低于 1 ∶4 , 即无保护效果 。 使用 Pearson 函数 对液相阻断 E LISA 与 VP1
结构蛋白抗体 EL ISA 试验结果进行相关性比对 , 结 果显示相关指数 R =0 .873 , 属于显著正相关 。
11 8
动物医学进展 2009 年 第 30 卷 第 8 期(总第 193 期)
作用 。 本次试验是在规模化养殖生产 线上进行的 , 较
为切合生产实际 , 对生产实践中疫苗接种具有指导 价值 。但本次试验仅从免疫抗体水平方面进行检测 和探讨 , 对于疫苗的免疫机理 、实际保护效力等方面 还有待进一步研究 。 参考文献 :
[ 1] 殷 震 , 刘景华 .动物病毒学[ M] .北京 :科学出版社 , 1997 :479499 .
60 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V al ue
0 .35 1 .29 1 .27 2 .29 2 .76 2 .69 2 .13
阳性率/ % Posit ive r a te
80 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
0 .46 1 .01 1 .81 2 .26 2 .16 2 .75 1 .80
中图分类号 :S852.659.6;S858 .28
文献标识码 :B
文章编号 :1007-5038(2009)08-0116-03
口蹄疫(F oo t-and-mo ut h disease , F MD)是偶蹄 动物的一种急性 、烈性 、高度接触性传染病 , 严重威 胁畜牧业的发展和人类的健康 , 被世界动物卫生组 织列为 A 类传染病之首[ 1] 。防控 FM D , 传统灭活疫 苗起到 了 重 要 作 用 , 但 其 安 全 性 和 免 疫 效 果 不 佳[ 2-3] 。 新型的猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗相对于传 统疫苗具有生物安全性好 , 免疫副作用小 , 可有效区 分猪口蹄疫 O 型合 成 肽疫 苗 免疫 的 动物 和感 染 FM DV 的动 物 , 对 多种 O 型 FM DV 毒 株 适应 性 好[ 4-7] 的优点 。但是猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免 疫抗体水平 、免疫持续期等相关数据尚显不足 , 影响 了推广应用 。本试研对这些问题进行了研究 , 以期 为猪口蹄疫 O 型合成肽 疫苗防控猪口蹄疫提供理 论支持 。
中
申联一免组 S HS L 1I
申联二免组 SH SL 2I
对照组 C on t rol
OD 值 OD
V alue
0 .33 0 .82 2 .06 2 .49 2 .05 2 .20 1 .88
阳性率/ % Posi ti ve rate
免疫抑制性疾病除直接造成与其他传染病相同 的危害外 , 更严重的是受感染畜禽的免疫功能受到 损害 , 结果导致机体抵抗力下降而易受其他病原的 继发感染 , 引起多种综合征[ 8-10] 。同时 , 还造成对疫 苗接种的副反应增强 , 甚至使免疫失败 。 之前有过 数次试验均受免疫抑制性疾病影响未能取得满意的 试验结果 , 本试验对于试验猪免疫抑制性疾病的细 致排查筛选 , 对最终良好的免疫结果起到了重要的
在整个试验阶段 , 全部试验猪在两次注射疫苗 前后均未观察到应激反应 , 说明了该疫苗免疫副反 应小 , 是推广该疫苗的有利条件 。
试验证明 , 对于猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫 的生猪 , 用 VP 1 EL ISA 和 LP B-EL ISA 均能较为准 确的检测其抗体水平 , 试验相关性较好 。
动DO物I :医10学.16进 437展/j .,c2n0ki0.910,0370-(5803)8: .1201069-.1081.8029 P rogress in Vet eri nary Medicine
猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗抗体水平检测＊
陈方志1 ,2 , 邱伯根3 , 刘道新2 , 谈志详2 , 范仲鑫2 , 邱立新2 , 鲁杏华2 , 何世成2 , 唐小明2 , 黄建龙2 , 汪洪冰2
3 讨论
两种猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫过的 4 组共 计 80 头试验猪 , 首免后 4 周内即 100 %达到抗体阳 性 , 且抗体一直维持在一个较高的水平 。 这说明两 种合成肽疫苗的免疫原性都很好 , 进入动物体内后 迅速诱导免疫应答 , 产生了大量抗体 。 申联组的抗 体水平较中牧组略高 , 且抗体水平均一性好 , 波动不 大 ;抗体持续期也略好于中牧组 , 首免后 9 周仍呈上 升趋势 , 而中牧两个试验组抗体水平分别在第 5 周 和第 7 周开始呈现缓慢下降趋势 。 但无论哪个组 , 抗体水平均能令人满意 , 即使一次免疫 , 也足以维持 阳性水平以上的抗体直至生猪出栏 。
(1 .湖南农业大学动物医 学院 , 湖南长沙 410128;2.湖南省动物疫病预防控制中心 , 湖南长沙 410007 ; 3.湖南省兽医局 , 湖 南长沙 410006)
摘 要 :为了解猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免疫效果 , 选用了两个厂家生产的猪口蹄疫 O 型合成肽疫 苗 , 对 80 头试验仔猪进行了免疫注射 , 并在 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周龄采血 , 通过 ELISA 检测抗体水平的变 化 。 结果显示 , 猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体 ;疫苗的免疫副作用小 ;使用 VP1 ELISA 和 L PB-EL ISA 检测猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗免疫抗体试验相关性较好 。 关键词 :猪 ;口蹄疫 O 型合成肽疫苗 ;抗体 ;酶联免疫吸附试验
对照组 , 无免疫应答 , 抗体水平随母源抗体的逐 步消失而下降至阳性阈值以下 。详见表 1 。
采样周龄 S ampli ng w eek age
6 7 8 9 11 13 20
表 1 V P1 ELIS A 检测 结果 Table 1 Result s of V P1 E LIS A det ection
阳性率/ % Posi ti ve rat e
60 100 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
1 .01 1 .85 2 .28 2 .42 2 .80 3 .25 2 .62
阳性率/ % Posit ive r a te
80 100 100 83 .3 100 100 100
中 , 每栏随机选取 6 头 , 前腔静脉真空管采血 。 分离 血清 , 使用 EL ISA 试剂盒检测 P RV 、CSF V 、F MDV 抗体 ;应用 PC R 方法检测 P RRS 、P CV-2 抗原 。 在 无 P RV 、P RRSV 、PCV-2 、CSFV 病原 , 且 FM DV 母 源抗体水平低于阳性阈值的栏舍中选取共 90 头仔 猪进行试验 。 1 .2 .2 试验猪的分组及免疫 试验猪分为 5 组 :中 牧一免组 ;中牧二免组 ;申联一免组 ;申联二免组 ;对 照组 。其中对照组 10 头 , 其余每组 20 头 。参考疫 苗说明书 , 4 周龄进行首免 , 二免组于 8 周龄进行加 强免疫 , 每次每头份 1 m L 。 1 .2 .3 样品采集 试验猪 6 、7 、8 、9 、11 、13 、20 周 龄 , 每组随机选取 6 头 ～ 8 头试验猪采血 , 将采集的 血样编号分离血清 。 1 .2 .4 抗体检测 使用上海优耐特公司生产的猪 口蹄疫病毒 VP1 结构蛋白抗体 EL ISA 试验诊断试 剂盒对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒说 明书进行 。
每批次血清随机抽取一部分 , 使用兰州兽医研 究所生产的 O 型口蹄疫抗体液相阻断 EL ISA 检测 试剂盒 , 对血清进行口蹄疫抗体检测 , 操作按试剂盒 说明书进行 。 1 .2 .5 试验结果相 关性效验 利用 SPSS 软件调 用 Pearso n 函 数对 VP1 EL ISA 试 验结 果与 LP BELISA 试验结 果进 行分 析 , 了解两 个试 验的 相关 性。
1 材料与方法
1 .1 材料 1 .1 .1 试验用动物 湖南省益阳市南县广田猪场 4 周龄仔猪 , 共 90 头 。 1 .1 .2 试剂 猪口蹄 疫病毒 VP1 结构蛋 白抗体 ELISA(VP 1 EL ISA)试验诊断试剂盒为优耐特公司 产品 ;O 型 口 蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断 E LISA (LP BELISA)检测试剂盒为兰州兽医研究所产品 ;猪口蹄 疫 O 型合成肽疫苗为申联生物医药(上海)有限公 司产品(批号 20080907);猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗 为中牧实业股份有限公司产品(批号 0807007)。 1 .2 方法 1 .2 .1 试验猪的选取 从 17 栏 4 周龄健康仔猪
2 .0 , 并持续保持在一个较高的水平 。 申联一免组 , 免疫后抗体上升平稳上升 , 第 3 周
达到 100 %阳性率 , 第 9 周虽有所回落 , 但抗体水平 仍然很高 。申联二免组 , 抗体首免后即开始快速上 升 , 第 3 周阳性率达到 100 %, 此后抗体水平上升放 缓 , 直至二免后 , 再度加速上升 , 第 11 周平均 OD 值 达到 3 .25 。
0 .156 。 中牧一免组 , 免疫后第 4 周 , 抗体阳性 率达到
100 %;第 5 周达到高峰和开始缓慢回落 , 但阳性率 始终保持在 100 %, 并且抗 体水平较高 。 中牧二免 组 , 首免后抗体上升平缓 , 第 4 周阳性率达到 100 %; 二免后抗体水平上升迅速 , 1 周后 OD 值 普遍超过
[ 2] Frenkel H S .Cu lti vat ion of t he f oot-and-m ou t h disease vi rus in explant ed epi th eliu m of t he bovine t ongu e.IX .G row t h charact eri sti cs of t he viru s in large s cal e ti ssue cult ures[ J] .A m J V et Res , 1956, 17(62):40-44 .
只免疫动物抗体滴度低于 1 ∶4 , 即无保护效果 。 使用 Pearson 函数 对液相阻断 E LISA 与 VP1
结构蛋白抗体 EL ISA 试验结果进行相关性比对 , 结 果显示相关指数 R =0 .873 , 属于显著正相关 。
11 8
动物医学进展 2009 年 第 30 卷 第 8 期(总第 193 期)
作用 。 本次试验是在规模化养殖生产 线上进行的 , 较
为切合生产实际 , 对生产实践中疫苗接种具有指导 价值 。但本次试验仅从免疫抗体水平方面进行检测 和探讨 , 对于疫苗的免疫机理 、实际保护效力等方面 还有待进一步研究 。 参考文献 :
[ 1] 殷 震 , 刘景华 .动物病毒学[ M] .北京 :科学出版社 , 1997 :479499 .
60 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V al ue
0 .35 1 .29 1 .27 2 .29 2 .76 2 .69 2 .13
阳性率/ % Posit ive r a te
80 83 .3 100 100 100 100 100
OD 值 OD
V alue
0 .46 1 .01 1 .81 2 .26 2 .16 2 .75 1 .80
中图分类号 :S852.659.6;S858 .28
文献标识码 :B
文章编号 :1007-5038(2009)08-0116-03
口蹄疫(F oo t-and-mo ut h disease , F MD)是偶蹄 动物的一种急性 、烈性 、高度接触性传染病 , 严重威 胁畜牧业的发展和人类的健康 , 被世界动物卫生组 织列为 A 类传染病之首[ 1] 。防控 FM D , 传统灭活疫 苗起到 了 重 要 作 用 , 但 其 安 全 性 和 免 疫 效 果 不 佳[ 2-3] 。 新型的猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗相对于传 统疫苗具有生物安全性好 , 免疫副作用小 , 可有效区 分猪口蹄疫 O 型合 成 肽疫 苗 免疫 的 动物 和感 染 FM DV 的动 物 , 对 多种 O 型 FM DV 毒 株 适应 性 好[ 4-7] 的优点 。但是猪口蹄疫 O 型合成肽疫苗的免 疫抗体水平 、免疫持续期等相关数据尚显不足 , 影响 了推广应用 。本试研对这些问题进行了研究 , 以期 为猪口蹄疫 O 型合成肽 疫苗防控猪口蹄疫提供理 论支持 。