口蹄疫合成肽疫苗研究进展
- 格式：pdf
- 大小：208.15 KB
- 文档页数：4
文档推荐
-
口蹄疫合成肽疫苗研究进展页数:4
-
合成肽疫苗页数:2
-
猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测页数:3
-
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点页数:5
-
猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验页数:4
-
2019年国内口蹄疫合成肽疫苗领军者申联生物研究页数:17
下载文档原格式
合集下载
台州市猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫情况调查与研究
３ 小结 与讨 论 ３ １ 生猪 免 疫或感 染 Ｆ ． ＭＤ抗 原 以 后， 诱导产生 Ｔ细胞参与或介 导特 异 性免疫应答 ， 产生 中和抗体 中和 与调 ２ ０９ ０ ２ ０ ０ ０ 、 ０ ９ ３ １。 ０ ０１ ２、 ０ ９ ｌ ５ ２ ０ ０ ０ 理破坏 Ｆ Ｖ， 由于传 统灭活疫苗 ＭＤ 但 １ １４ 检测试剂盒 ．． 可 猪 口蹄疫病 毒 ＶＰ 结 构蛋 白抗 ２ ３ 免疫后不 同时间抗体检测结果 生产存在 生物 安全 隐患和副 反应 ， １ ． 体 Ｅ ＩＡ 诊 断 试 剂 盒 ： 批 号 为 ＬＳ 从表 中可 以看 出， 首次免疫后 １ 能 引起散 毒及 不 能产 生交叉 保护 等 ５ 阳性 率在 ３％至 ４ ％之 间； 免 问题 Ⅲ 因 此 研 发 一 种 安 全 性 好 ， 疫 ０ ０ 首 ， 免 ２０ ０ ２ ， ０ ８６ ２ 上海优耐特 生物 医药有 限 天 ， 后３ ０天阳性率 明显 升高，均在 ７％ 效果稳定的疫苗就非常必要 。 口蹄 ０ 猪 公司生产。
摘 要 ： 台州市的 ３个区 ２ 对 ４个猪 场使用猪 口蹄疫 Ｏ型合成肽疫苗免疫情况进行 了调 查。临床使用 情况表 明， 与以前使 用的猪 Ｏ型 １蹄疫浓缩苗相 比， ３ 使用该 苗免疫对生猪 的应 激小、 本无免 疫副反 应； 基 疫苗质量较稳定 ， 抗体 检 测结果表 明， 首次免疫后 １ 天效价较低 ， ５ 首免后 ３ ０天检测 阳性 率平均为 ７ ． ％， ５ ８ 高于部 颁标准 ７ ％的抗体 合格 ６ ０ 率； 二免后 １ 天 、０天免疫抗体 阳性率分别平均为 ９ ． ％和 ９ ． ％， ５ ３ ０８ １ ４５ ９ 因此经二次免疫后抗体效价 才稳定上升 ， 免疫
效 果确 实 。
关键词 ： 口蹄疫； 成肽疫 苗； Ｐ ．ＬＳ 调 查研究 合 Ｖ １Ｅ ＩＡ； 中图分类号 ：８ ２４ ￥ ５ ． 文献标识码： 文章编号 ：０ ５ ９４ ２ １ ）１ ０ ４ — ２ Ｂ １０ — ４Ｘ（０ ０ １ －０ ２ ０
口蹄疫疫苗研究进展
口蹄疫疫苗研究进展口蹄疫疫苗的研究进展【综述】【摘要】口蹄疫是被列为A类疫病的家畜传染病之一，接种疫苗是防止该病流行的有效措施。
本文就口蹄疫灭活疫苗、基因工程亚单位疫苗、转基因植物可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因工程弱毒疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗及空病毒衣壳蛋白疫苗的最新研究进展作一综述。
【关键词】 I=1蹄疫；疫苗Progress in Research on Foot--and．-M outh Disease VaccineCHEN Li—xin，JIN Yu—zhu，HU Rong—liang(Department of印idemiology，Institute of Military Veterinary Medicine，Academy ofMilitary Medicine，Changchun 130062，China)【Abstract】 Foot．and．mouth disease is one of the infectious disease class A in animals．Vaccination is an effective measure forprevention of epidemic of the disease． This paper reviewed the development in research on inactivated vaccine，recombinant subunitvaccine，edible transgenic plant vaccine，synthetic peptide vaccine，protein vector-based vaccine，recombinant attenuated vaccine，livevector-based vaccine，DNA vaccine and empty capsid protein vaccine against foot—and-mouth disease．【Key words】 Foot—and—mouth disease；Vaccine口蹄疫(Foot．and—mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot．and．mouth disease virus，FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等，发病率极高，传播速度极快。
口蹄疫合成肽疫苗研究新进展
２ ５—
４ ＂ －日畜牧善匹 ２ ０ １ ５ ． ０ ３
量 免疫 ， 不 可减少 注 射剂 量 。羊 可 以按 牛 的正 常 剂量 的一半 接种 。 母 源 抗体 会 干 扰免 疫 反 应 ，需 合 理 确 定 首
免时问。
角 出现 白沫 、鼻 腔 出血 、对各 种 刺 激反 应 迟 钝
感染 ； 不 良反 应严 重 ， 群众抵 触使 用 ， 限制 了疫 苗
的广 泛应 用 ， 免 疫 密度 严 重 不 足 （ 远达 不 到 ８ ５ ％
基 于 同样 的原 理 ， 已经 完成 了 Ａ型肽 苗 、 Ｏ —
Ａ二 价肽 苗 的研 制 。对 预 防猪 Ａ 型 口蹄 疫效 果
的最低 要求 ） ， 疫 苗浪 费 ， 难 以保 证 防疫效 果 。
技术 优势 ： 免疫 针对 性 强 、 免 疫谱 广 ， 对 缅甸
口腔或 舌部 是否有 水疱 ， 厌食 等等 。
２我 国现 有 口 蹄 疫 疫 苗 的 种 类
灭 活疫 苗类 ： 猪 口蹄疫 Ｏ型灭 活疫 苗 。 疫 苗 研究 方 向 ： 毒株选育 、 生 产工 艺 改 进 如
９ ８毒 、 泛亚 毒 、 新猪 毒 和 旧猪毒 等各 种 Ｏ型 流行
病 的首位 。
口蹄疫 一 般 症状 为 ： 发热 、 厌食 、 水疱 （ 口腔
高效 针对 猪 的 Ｔ细胞 位点 。 进一 步提 高疫 苗 的细
胞免 疫功 能 。 独有 的肽 链结 构球 状化 技术 ： 使合 成 肽 的空
间构 型 与天然 抗原 完全 一致 ， 确保 多肽 抗 原 的稳
部、 蹄部 、 乳 房周 围 ） 、 流涎 、 跛 行 。临床 诊 断 中猪 只的 主要 表 现在蹄 部 。 猪只得 此病 的第 一 表现 为 突然跛 行 ， 然 后 喜欢 跪 卧 、 不 愿 走动 ， 蹄 部皮 肤 、
口蹄疫核酸疫苗的研究进展
强且 抗原 相关 表位稳 定 等优点 受 到广泛 关注 。 １ 口蹄 疫 病 毒 的抗 原 性 片 段 Ｆ Ｖ 的抗 原 位 点 多 位 于 衣 壳 蛋 白 的 环 结 构 ＭＤ
研究 表 明 核 酸 疫 苗 不 仅 可 诱 导 体 液 免 疫 反 应 ，还可 以诱 导细 胞 免 疫 应 答 。重 组 质 粒 一 般 通 过 肌 肉 或 者 皮 内 导 入 机 体 后 ， 被 周 围组 织 细 胞 （ 比如 肌 细胞 或 者 表皮 胶 原 细 胞 ） ，抗原 递 呈 细胞 （Ｐ Ａ Ｃ） 或者 其 它 炎 性 细 胞 摄 取 。未 被 摄 取 的 游 离 Ｄ Ａ多数 可 被 降解 ，少数 可能 随循 环 系统 而进 Ｎ
病 。该 病 呈 世 界 性 流 行 ，一 旦 暴 发 将 给 世 界 各 国 的
位 。虽然 不 同血清 型 的病 毒抗 原位点 的组 成有所 不 同 ，Ｖ １的 Ｇ Ｈ 环 已被 公认 包 含 重 要 的抗 原 决 定 Ｐ －
簇 。生 产 核 酸 疫 苗 时 保 护 性 抗 原 基 因 可 以 是 单 个 的 基 因 （ Ｖ １ 也 可 以 是 一 组 基 因 （ １ Ａ、 如 Ｐ） Ｐ 、２
畜 牧业 造成 了 巨大的经 济损 失 ，使得人 们在 应对 它
时 ， 必 须 侧 重 于 早 期 的 防 治 。疫 苗 作 为 预 防 、控 制
传 染病 的发 生 和流行 的主要 手段 ，在 防控 日蹄疫 方 面担任 着重要 角 色 。 口蹄疫 疫苗 主要经 历传 统疫 苗
和基 因工程疫 苗 两个 阶段 。虽然 灭活疫 苗 和弱毒 疫
入 淋 巴 结 或 脾 中 。 有 实 验 已 经 证 明 ， 肌 细 胞 、上 皮 细 胞 和 黏 膜 细 胞 有 较 强 地 摄 取 Ｄ Ａ 分 子 的 能 Ｎ 力 。之 后 被 摄 取 的 重 组 质 粒 在 细 胞 核 内 转 录 ｍＲ Ａ 并 在 细 胞 内 表 达 病 原 体 的 蛋 白 质 抗 原 ，经 Ｎ 加 工 后 形 成 的 多 肽 抗 原 ， 可 与 宿 主 细 胞 主 要 组 织 相 容 性 复 合 物 ＭＨ Ｃ Ｉ和 ＭＨ 分 子 结 合 ， 并 被 Ｃ１ １
研究 表 明 核 酸 疫 苗 不 仅 可 诱 导 体 液 免 疫 反 应 ，还可 以诱 导细 胞 免 疫 应 答 。重 组 质 粒 一 般 通 过 肌 肉 或 者 皮 内 导 入 机 体 后 ， 被 周 围组 织 细 胞 （ 比如 肌 细胞 或 者 表皮 胶 原 细 胞 ） ，抗原 递 呈 细胞 （Ｐ Ａ Ｃ） 或者 其 它 炎 性 细 胞 摄 取 。未 被 摄 取 的 游 离 Ｄ Ａ多数 可 被 降解 ，少数 可能 随循 环 系统 而进 Ｎ
病 。该 病 呈 世 界 性 流 行 ，一 旦 暴 发 将 给 世 界 各 国 的
位 。虽然 不 同血清 型 的病 毒抗 原位点 的组 成有所 不 同 ，Ｖ １的 Ｇ Ｈ 环 已被 公认 包 含 重 要 的抗 原 决 定 Ｐ －
簇 。生 产 核 酸 疫 苗 时 保 护 性 抗 原 基 因 可 以 是 单 个 的 基 因 （ Ｖ １ 也 可 以 是 一 组 基 因 （ １ Ａ、 如 Ｐ） Ｐ 、２
畜 牧业 造成 了 巨大的经 济损 失 ，使得人 们在 应对 它
时 ， 必 须 侧 重 于 早 期 的 防 治 。疫 苗 作 为 预 防 、控 制
传 染病 的发 生 和流行 的主要 手段 ，在 防控 日蹄疫 方 面担任 着重要 角 色 。 口蹄疫 疫苗 主要经 历传 统疫 苗
和基 因工程疫 苗 两个 阶段 。虽然 灭活疫 苗 和弱毒 疫
入 淋 巴 结 或 脾 中 。 有 实 验 已 经 证 明 ， 肌 细 胞 、上 皮 细 胞 和 黏 膜 细 胞 有 较 强 地 摄 取 Ｄ Ａ 分 子 的 能 Ｎ 力 。之 后 被 摄 取 的 重 组 质 粒 在 细 胞 核 内 转 录 ｍＲ Ａ 并 在 细 胞 内 表 达 病 原 体 的 蛋 白 质 抗 原 ，经 Ｎ 加 工 后 形 成 的 多 肽 抗 原 ， 可 与 宿 主 细 胞 主 要 组 织 相 容 性 复 合 物 ＭＨ Ｃ Ｉ和 ＭＨ 分 子 结 合 ， 并 被 Ｃ１ １
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验
表 ３ 保 持 精 子 活 力 ０ ５级 时 的 保 存 天数 ．
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察作者：陈培赛，林元潮，曾瑞强来源：《兽医导刊》 2013年第12期陈培赛1，林元潮2，曾瑞强2（1. 温州市苍南县畜牧兽医局，浙江苍南 325800 ；2. 温州市苍南县灵溪镇农业综合服务中心，浙江灵溪 325800）口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病，给世界畜牧业造成很大损失。
1974 年国际兽疫局（OIE）将该病列为国际动物卫生法典中18个A 类疾病之首, 在许多国家和地区都有该病的发生与流行。
目前对该病的防制主要是采取禁运、紧急屠宰和强制性免疫接种措施，而疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段。
猪口蹄疫O 型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术，在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点（合成肽）并连接人工T 细胞位点，以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成油乳剂疫苗，能够很好的预防猪O 型口蹄疫的发生。
温州市苍南县国土面积1300 平方公里，生猪总存栏数量约10 ～ 12万头，每户存栏数量100 ～ 500 头为主。
我县于2009 年8 月3 日开始试用申联生物医药（上海）有限公司的猪口蹄疫O 型合成肽疫苗，一直坚持使用至今，全县没有出现重大生猪口蹄疫疫情，取得了较好的防控效果，现将我县推广使用合成肽疫苗情况介绍如下。
一、猪口蹄疫O 型合成肽疫苗免疫效果观察1．初试及近年疫苗使用情况统计。
（1）初试情况。
2009 年8 月3 日，我县首先在新华畜牧有限公司进行猪口蹄疫O 型合成肽疫苗与高效灭活疫苗的对比试验。
通过试验发现合成肽疫苗免疫副反应小、抗体检测合格率高，受到了畜牧兽医部门和广大养殖场的高度认同。
（2）推广使用情况。
初试完成后，先在我县9 个规模猪场全面使用，免疫生猪约7 500 头。
10 月份以后，全县开始使用合成肽疫苗至今。
2009 年以来使用的猪口蹄疫疫苗情况见表12. 免疫后效果分析。
（1）免疫应激反应小。
合成肽疫苗接种后不会产生严重的副反应，曾观察到甚至使用了20 ml 注射的剂量也没有不良反应。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及猪口蹄疫灭活疫苗免疫效果试验
将 １ ０ ０头试 验 猪按 照疫 苗 说 明书 进行 免 疫 ， 每 头猪 耳 根后 肌 肉深 层注 射 ｌ 毫升 ， 第 一次 接种
后 间隔 ４Βιβλιοθήκη 再 加强 免疫 ２毫 升 。 ２ ． ３应 激 反 应 判 定 标 准
用猪 口蹄 疫 ０型 合 成 肽疫 苗 和猪 口蹄 疫 ０ 型灭 活疫 苗 在 同一 个猪 场 进行 免 疫注 射 ， 均 用酶
为 ９ ０ ％ ．１ ２ ０天 为 ６ ０ ％， １ ５ ０天 为 ５ ０ ％。 从 表 ２可
源 抗体 ； 第 一 次注 射疫 苗后 ２ ８天（ 二 免前 ） 开始第
二 次采 血 。然后 ， 每隔 ３ ０天采血 一次 。直 至抗 体
下 降 。采取前 腔 静脉或 耳静 脉采 血 ３ ～ ４毫 升 。按
６ ． １重 在 预 防 ， 从 饲养 管 理 人 手 ， 抓好 营养 、
卫生 、 人 员 意 识 等 方 面 的工 作 ． 尽 可 能 减 少 内源
头 随机 平均 分 为两 组 ， １组 ，注 射 猪 口蹄 疫 ０型
合 成肽 疫 苗 ； ２组 ， 注射 猪 １ ： ３ 蹄 疫 ０型 灭 活疫 苗 。 两组 仔猪 体重 差异 不显著 （ 见表 １ ） 。
猪 口蹄 疫 Ｏ 型合成 肽 疫苗及 猪 口蹄疫 灭活疫 苗免 疫效 果试验
孟 艳 ， 杨 秀女 ， 武秋 双 ， 郑 丽丽 ， 杨旭 光 （ １ ． 河北 省畜牧 兽 医研 究所 ， 河北保 定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ； ２ ． 河 北省 动物 疫病 预 防控 制 中心 ， 河北 保定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ；
蹄疫感染抗体阴性的 ２ ８ 日龄 左 右 断 奶仔 猪 １ ０ ０
或 服用 纯 中药制 剂 复方 益母 草
猪O型口蹄疫合成肽疫苗和灭活疫苗免疫抗体测定试验研究报告
口蹄疫抗体液相阻断 ELISA 试剂盒，生产厂家中国 农业科学院兰州兽医研究所，产品批号 20180604101-2， 抗原批号 101/22。
口 蹄 疫 病 毒 VP1 结 构 蛋 白 抗 体 ELISA 试 剂 盒，生产厂家武汉科前生物股份有限公司，产品批号 180404。
二、方法
1. 试验动物采血及首次免疫。采集各组试验猪群血 清，评估母源抗体水平，同时每组分别接种对应疫苗， 疫苗注射方法及注射剂量按照使用说明书进行（详见下 表 1），免疫后观察猪群的应激反应，是否有体温升高、 接种部位红肿等不良反应并记录。
一周后自行消退；接种合成肽苗的猪只炎症反应轻微。 本试验过程中，无试验猪只发病、死亡等情况发生。 2. 群体免疫抗体合格率结果（见下表 2）Leabharlann 试验场 博源猪场 鑫发猪场
抗体
母源 首免 二免 母源 首免 二免
表 2 猪 O 型口蹄疫合成肽苗和灭活苗免疫抗体合格率统计表
样品数 26 26 26 20 20 20
表 1 猪群分组及接种疫苗情况
组别 合成肽组 灭活苗组
疫苗类型 O 型口蹄疫合成肽疫苗 O 型口蹄疫灭活疫苗
剂量 1.0 ml/ 头 2.0 ml/ 头
2. 试验动物二次采血及加强免疫。首免后 28 d，采 集各组猪群血清，同时每组进行二次免疫，免疫后观察 猪群的应激反应，并记录。
3. 试验动物三次采血。二次免疫后 28 d，采集各组 猪群血清。
2018 年第 11 期 兽医实验室
猪 O 型口蹄疫合成肽疫苗和灭活 疫苗免疫抗体测定试验研究报告
张治新 1 刘凯 1 王阳 2 李伟 1 杨小萍 1 耿淑惠 1 喻博 1 1. 陕西省山阳县畜牧兽医中心 2. 陕西省商洛市动物疫病预防控制中心
口 蹄 疫 病 毒 VP1 结 构 蛋 白 抗 体 ELISA 试 剂 盒，生产厂家武汉科前生物股份有限公司，产品批号 180404。
二、方法
1. 试验动物采血及首次免疫。采集各组试验猪群血 清，评估母源抗体水平，同时每组分别接种对应疫苗， 疫苗注射方法及注射剂量按照使用说明书进行（详见下 表 1），免疫后观察猪群的应激反应，是否有体温升高、 接种部位红肿等不良反应并记录。
一周后自行消退；接种合成肽苗的猪只炎症反应轻微。 本试验过程中，无试验猪只发病、死亡等情况发生。 2. 群体免疫抗体合格率结果（见下表 2）Leabharlann 试验场 博源猪场 鑫发猪场
抗体
母源 首免 二免 母源 首免 二免
表 2 猪 O 型口蹄疫合成肽苗和灭活苗免疫抗体合格率统计表
样品数 26 26 26 20 20 20
表 1 猪群分组及接种疫苗情况
组别 合成肽组 灭活苗组
疫苗类型 O 型口蹄疫合成肽疫苗 O 型口蹄疫灭活疫苗
剂量 1.0 ml/ 头 2.0 ml/ 头
2. 试验动物二次采血及加强免疫。首免后 28 d，采 集各组猪群血清，同时每组进行二次免疫，免疫后观察 猪群的应激反应，并记录。
3. 试验动物三次采血。二次免疫后 28 d，采集各组 猪群血清。
2018 年第 11 期 兽医实验室
猪 O 型口蹄疫合成肽疫苗和灭活 疫苗免疫抗体测定试验研究报告
张治新 1 刘凯 1 王阳 2 李伟 1 杨小萍 1 耿淑惠 1 喻博 1 1. 陕西省山阳县畜牧兽医中心 2. 陕西省商洛市动物疫病预防控制中心
猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果调查
（ 下表 ） 见 。
口蹄疫 是 一种偶 蹄 动物 烈性 、 高度 传染 性疾 病 。 １７ ９４ 年 国 际兽 疫 局 （ Ｉ 将 该 病 列 为 国 际动 物 卫 生 法典 中 １ Ｏ Ｅ） ８ 个 Ａ类疫病 之 首 。 目前对 该病 的防 控主要 是采 取禁 运 、 紧 急屠 宰 和强 制性 免 疫接 种等 措施 ， 而疫 苗 免疫 是最 主要 的 也是 最经 济 的手段 。 由于 口蹄疫 病毒各 血清 型之 间没 有 但 交叉 保 护 ， 且 型 内毒 株 间也 存 在 抗 原差 异 ， 而 因此 给疫苗 的研 制 造 成 许 多 困难 。虽 然 细胞 疫 苗 具有 较 好 的免 疫 效 力 ， 由于细 胞 苗 的抗 原 生 产难 以准 确定 量 ， 但 无法 克 服疫
１ ． 血 清学 调查 ① 调查 对 象 ： 马店 市永 辉牧 业种 猪 ．２ ２ 驻 场、 驿城 区顺 和猪 场 、 城 区刘 阁办 崔庄 猪场 、 平 正平 饲 驿 遂
的临界值 为 ０３ 但 此次 抽 检 的血 清样 品测 其 Ｏ ． ４， Ｄ值 ９ ％ ０ 在 ２ －． ． ３０之间 ， 明猪 首 次免疫 后 的抗 体水 平较 高 ， ０ 说 完全 符合 要求 。 照产 品使 用 说 明书 ， 按 若在 首免后 ２ ８天 加强免 疫一 次 ， 抗体 水平 和保 护率会 更 高 、 免疫有 效期 会更 长 。 ３３ 猪 １蹄 疫 ０型合 成肽 疫 苗免 疫抗 体 的检 测 ． ： ７ 猪 口蹄 疫 ０型合 成 肽疫 苗 免疫 抗体 的检测 不 能使 用 传 统 的血 凝 试 验 和酶 联免 疫 吸附试 验 ， 因为其 致敏 抗原 非 纯净 病毒 粒
中 图分类 号 ：８ ２５ Ｓ５ ． 文献标 识码 ： Ｂ
．
文章 编号 ：０４ ５ ９（０ ８ ５０ ０ － ２ １０ — ００２０ ） — ０ ７ ０ ０
口蹄疫 是 一种偶 蹄 动物 烈性 、 高度 传染 性疾 病 。 １７ ９４ 年 国 际兽 疫 局 （ Ｉ 将 该 病 列 为 国 际动 物 卫 生 法典 中 １ Ｏ Ｅ） ８ 个 Ａ类疫病 之 首 。 目前对 该病 的防 控主要 是采 取禁 运 、 紧 急屠 宰 和强 制性 免 疫接 种等 措施 ， 而疫 苗 免疫 是最 主要 的 也是 最经 济 的手段 。 由于 口蹄疫 病毒各 血清 型之 间没 有 但 交叉 保 护 ， 且 型 内毒 株 间也 存 在 抗 原差 异 ， 而 因此 给疫苗 的研 制 造 成 许 多 困难 。虽 然 细胞 疫 苗 具有 较 好 的免 疫 效 力 ， 由于细 胞 苗 的抗 原 生 产难 以准 确定 量 ， 但 无法 克 服疫
１ ． 血 清学 调查 ① 调查 对 象 ： 马店 市永 辉牧 业种 猪 ．２ ２ 驻 场、 驿城 区顺 和猪 场 、 城 区刘 阁办 崔庄 猪场 、 平 正平 饲 驿 遂
的临界值 为 ０３ 但 此次 抽 检 的血 清样 品测 其 Ｏ ． ４， Ｄ值 ９ ％ ０ 在 ２ －． ． ３０之间 ， 明猪 首 次免疫 后 的抗 体水 平较 高 ， ０ 说 完全 符合 要求 。 照产 品使 用 说 明书 ， 按 若在 首免后 ２ ８天 加强免 疫一 次 ， 抗体 水平 和保 护率会 更 高 、 免疫有 效期 会更 长 。 ３３ 猪 １蹄 疫 ０型合 成肽 疫 苗免 疫抗 体 的检 测 ． ： ７ 猪 口蹄 疫 ０型合 成 肽疫 苗 免疫 抗体 的检测 不 能使 用 传 统 的血 凝 试 验 和酶 联免 疫 吸附试 验 ， 因为其 致敏 抗原 非 纯净 病毒 粒
中 图分类 号 ：８ ２５ Ｓ５ ． 文献标 识码 ： Ｂ
．
文章 编号 ：０４ ５ ９（０ ８ ５０ ０ － ２ １０ — ００２０ ） — ０ ７ ０ ０
猪口蹄疫O型合成肽疫苗特点及展望
稍 微 降 低 以外 ，疫 苗 的各 项 理 化 指 标 均 检 测 合 格 。使 用 标 准
国 引进 并 开 发 了人 工 合 成 新 型猪 口蹄 疫 ０ 型 合 成 肽 疫 苗 。本
文 主 要 从 几 个 方 面 对 合 成 肽 疫 苗进 行 分 析 。 希 望 人 们 能 更 深
入 地 了解 并使 用 此 类 新 型 口蹄 疫 疫 苗 。
２ ． ２ 被 接 种 动物 应 具 备 的 条 件
导 致 猪 在 临 床 上 出现 过 敏 症 状 的直 接 原 因是 培 养 的 全 病 毒 疫 苗 中存 在 着 异 体 蛋 白 ，对 体 内致 敏 因 子 产 生 变 态 反 应 所 致 。 猪 口蹄 疫 ０ 型合 成 肽 疫 苗 成 分 中纯 多 肽 抗 原 含 量 高 ，在
内不 受 影 响 ，能保 持很 强 的原 有 免 疫 效 力 。
２ 接 种 要 求及 注意 事 项
２ ． １ 疫 苗 的 选 用 和 贮 运
在 选 择 疫 苗 时 ，应 尽 量 选 择 从 国家 定 点 疫 苗 生 产 厂 家 进
购 疫 苗 ，疫 苗 来 源 需 遵 循 国 家 《 兽 用 生 物 制 品 经 营 管 理 办
关 键 词 ：猪 口蹄 疫 ；ｏ 型 ；合 成 肽 疫 苗 ；特 点 ；发 展 前 景
全 国范 围 内 ． Ｅ ｌ 蹄 疫 是 受 关 注 颇 高 的 一 种 疾 病 ，具 有 高 度 传 染 性 ，对 畜 牧 业 危 害很 大 ，被 国 际 兽 疫 局 列 为 Ａ 类 传 染 病 之 首 。 口蹄 疫 是 一 种 偶 蹄 动 物 病 毒 性 传 染 病 ， 由 口蹄 疫 病 毒 引 起 ．临 床 上 主 要 特 征 是 动 物 口部 、蹄 部 皮 肤 发 生 水 疱 、 烂 斑 。 该 病 的具 有 发 病 率 高 但 病 死 率 低 、高 度 传 染 、 传 播 迅 速 的特 点 ，多 种 动 物 都 可 感 染 口蹄 疫 ， 表 现 症 状 有 所 不 同 ， 猪 感 染 口蹄疫 病毒 最 早 症 状 出现 在 蹄 部 ， 出现 跛 行 等 症 状 。
国 引进 并 开 发 了人 工 合 成 新 型猪 口蹄 疫 ０ 型 合 成 肽 疫 苗 。本
文 主 要 从 几 个 方 面 对 合 成 肽 疫 苗进 行 分 析 。 希 望 人 们 能 更 深
入 地 了解 并使 用 此 类 新 型 口蹄 疫 疫 苗 。
２ ． ２ 被 接 种 动物 应 具 备 的 条 件
导 致 猪 在 临 床 上 出现 过 敏 症 状 的直 接 原 因是 培 养 的 全 病 毒 疫 苗 中存 在 着 异 体 蛋 白 ，对 体 内致 敏 因 子 产 生 变 态 反 应 所 致 。 猪 口蹄 疫 ０ 型合 成 肽 疫 苗 成 分 中纯 多 肽 抗 原 含 量 高 ，在
内不 受 影 响 ，能保 持很 强 的原 有 免 疫 效 力 。
２ 接 种 要 求及 注意 事 项
２ ． １ 疫 苗 的 选 用 和 贮 运
在 选 择 疫 苗 时 ，应 尽 量 选 择 从 国家 定 点 疫 苗 生 产 厂 家 进
购 疫 苗 ，疫 苗 来 源 需 遵 循 国 家 《 兽 用 生 物 制 品 经 营 管 理 办
关 键 词 ：猪 口蹄 疫 ；ｏ 型 ；合 成 肽 疫 苗 ；特 点 ；发 展 前 景
全 国范 围 内 ． Ｅ ｌ 蹄 疫 是 受 关 注 颇 高 的 一 种 疾 病 ，具 有 高 度 传 染 性 ，对 畜 牧 业 危 害很 大 ，被 国 际 兽 疫 局 列 为 Ａ 类 传 染 病 之 首 。 口蹄 疫 是 一 种 偶 蹄 动 物 病 毒 性 传 染 病 ， 由 口蹄 疫 病 毒 引 起 ．临 床 上 主 要 特 征 是 动 物 口部 、蹄 部 皮 肤 发 生 水 疱 、 烂 斑 。 该 病 的具 有 发 病 率 高 但 病 死 率 低 、高 度 传 染 、 传 播 迅 速 的特 点 ，多 种 动 物 都 可 感 染 口蹄 疫 ， 表 现 症 状 有 所 不 同 ， 猪 感 染 口蹄疫 病毒 最 早 症 状 出现 在 蹄 部 ， 出现 跛 行 等 症 状 。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
２ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 研 究 进 展
２．１ 抗 原 位 点 的 选 择 早在１９８２年，第一 例 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 诞 生 的
时候，其研 制 者 Ｂｉｔｔｌｅ Ｊ Ｌ 等 便 ［１］ 将 由 人 工 合 成 的 ＦＭＤＶ Ｏ 型 ＶＰ１第１４１～１６０位氨基酸合成肽段以 共价 键 结 合 于 钥 孔 戚 血 蓝 蛋 白 （ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅ－ ｍａｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）上 制 备 合 成 肽 疫 苗，试 验 证 明，其 能够诱导足够的抗体并对牛和猪起到保护作用。这 使其成为 ＦＭＤ 乃至整 个 动 物 疫 病 合 成 肽 疫 苗 研 究 的开端。他们随 后 又 按 照 相 同 方 法，将 能 够 引 起 实 验动物产生较强免 疫 应 答 的 抗 原 表 位 定 格 于 第 １４１ ～１６０位和２００～２１３ 位 氨 基 酸 范 围 以 内［２］。Ｆｒａｎ－ ｃｉｓ Ｍ Ｊ等［３］的研 究 中 发 现 在 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 第 １４６～ １５６ 位 肽 段 上 不 但 含 有 中 和 表 位，且 其 末 端 处 的 羟
２．２ 空 间 构 象 的 研 究 为了使合成肽段经折叠后能够形成一定的空间
构象，更 接 近 天 然 抗 原 表 位，Ｄｉｍａｒｃｈ Ｒ 等 在 ［８］ 之 前 只 合 成 ２０ 个 氨 基 酸 小 肽 研 究 的 基 础 上 ，又 串 联 增 加 了 第 ２００～２１３ 位 氨 基 酸 ，并 首 次 采 用 两 个 脯 氨 酸 和 一个丝氨酸（Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ）作 为 衔 接，其 结 果 显 示 合 成肽疫 苗 的 免 疫 原 性 获 得 极 大 增 强。Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ 等 报 ［９］ 道了 以 多 抗 原 肽 系 统 向 免 疫 系 统 提 呈 ＦＭ－ ＤＶ ＶＰ１ １４０～１６０位点 的 二 聚 体、四 聚 体 和 八 聚 体 结构比仅串联 重 复 结 构 具 有 更 强 的 免 疫 原 性，且 四 聚体比二聚体要强５倍～１０倍。Ｂｅｎｋｉｒａｎｅ Ｎ 等［１０］ 利用 Ｄ 氨基酸合成了一系列针对 ＦＭＤＶ Ｇ－Ｈ 环 区 域 的 主 要 抗 原 多 肽 ，称 之 为 反 转 型 多 肽 （ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒ－ ｓｏ，ＲＩ）。配 以 含 有 单 磷 酰 脂 Ａ 的 小 单 层 脂 质 体 为 佐剂，免疫 研 究 表 明，其 比 天 然 Ｌ－型 肽 诱 导 的 血 清 抗体滴度水平更 高、更 持 久 且 更 加 稳 定。 随 后，Ｂｒｉ－ ａｎｄ Ｊ Ｐ 等 在 ［１１］ 相关试验中发现 ＲＩ多肽诱导动物所 产生的保 护 性 抗 体 与 天 然 抗 原 或 Ｌ－氨 基 酸 合 成 肽 也具有良好的反应性。
在预测的１７个抗 原 决 定 簇 中 有 ６ 个 能 与 免 疫 血 清 发生 反 应，分 别 为 ＶＰ１ １－１２、１７－２９、１９４－２１１，ＶＰ２ ４０－５０，ＶＰ３ ２６－３９ 及 ＶＰ４ ３０－４１ 位 氨 基 酸。 该 成 果 为 Ａｓｉａ１ 型 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 研 究 奠 定 了 基础。Ｙａｎｇ Ｄ 等［７］利用一株特异 性 单 克 隆 抗 体，通 过噬菌体展示系 统 筛 选 出 了 一 段 在 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 各 亚型间均 高 度 保 守 的 线 性 抗 原 表 位，为 今 后 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 亚型间 交 叉 保 护 性 合 成 肽 疫 苗 的 研 制 提 供 了宝贵思路。
多种方式接种，再 配 以 适 当 佐 剂 使 机 体 产 生 更 为 有 效的免疫应答；③ 利 用 非 疫 苗 用 抗 原 肽 建 立 的 诊 断 方法可对疫苗免疫和自然感染动物进行有效区分； ④合成肽疫苗 安 全 可 靠，便 于 长 期 贮 存，质 量 可 控， 能有效避免不良 反 应 的 发 生，且 投 入 少，成 本 低，更 适宜规模生 产。ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 弥 补 了 目 前 传 统 ＦＭＤ 疫苗所存在的 诸 多 不 足，成 为 ＦＭＤ 疫 苗 发 展 的主要趋势之一。
李 婷 婷 等 ：口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 研 究 进 展
７７
基残基可能形成了 Ｔ 细 胞 表 位，无 需 载 体 与 佐 剂 的 协助即可自行激发机体中和抗体的产生。而 Ｚａｍｏ－ ｒａｎｏ Ｐ 等［４］进一步 证 明 了 在 １３５～１６０ 区 域 内 有 至 少４ 个 不 连 续 的 抗 体 中 和 位 点 的 存 在 ，分 别 为１３５～ １４４、１４０～１４９、１４５～１５４ 和 １５０～１６０ 位 氨 基 酸，并 制备了合 成 肽 疫 苗。 后 来，Ｗａｎｇ Ｃ Ｙ 等 将 ［５］ 外 源 Ｔｈ位点引入 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 中，拓 宽 了 合 成 肽 疫 苗在多个物种 的 免 疫 原 性，并 使 其 对 不 同 病 毒 株 的 交叉反应性得到了进一步优化。Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｗ 等 运 ［６］ 用生物信息学方法通过软件系统对 Ａｓｉａ１型 ＦＭＤＶ 结构蛋白序列的抗原位点进行了分析。经试验验证
２．４ 免 疫 佐 剂 的 优 化 Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ等 在 ［２０］ 研 究 中 尝 试 应 用 了 多 种 佐
１ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 优 势
与传统疫苗相比，ＦＭＤ 合成肽疫苗的设计研发 直接锁定 ＦＭＤＶ 不 同 血 清 型 病 毒 株 抗 原 表 位 氨 基 酸序列的自身特点，其主要具备以下优势：① 既可以 随时根据流行毒株的变化情况对抗原肽进行调整， 也可使用一些保守序列或多种不同保护性抗原序列 进行抗原肽的 合 成，从 而 使 合 成 肽 疫 苗 所 诱 导 产 生 的免疫应答更具 有 特 异 性 以 及 广 谱 性；② 除 传 统 免 疫 途 径 外 ，合 成 肽 疫 苗 还 可 通 过 鼻 内 、口 腔 和 皮 肤 等
摘 要：口蹄疫（ＦＭＤ）是一种严 重 威 胁 世 界 畜 牧 业 发 展 和 国 际 进 出 口 贸 易 的 重 大 传 染 病。 尽 管 ＦＭＤ 传 统 疫 苗 在 免 疫 效 力 上 具 有 一 定 优 势 ，但 其 自 身 仍 存 在 诸 多 弊 端 及 隐 患 。 随 着 分 子 生 物 学 技 术 的 飞 速 发 展 ， 及其在兽医领域不断取得的创新性应用，ＦＭＤ 合成肽疫苗作为新型基因 工 程 疫 苗 的 一 种，以 其 具 有 更 为 广 谱的特异性、更加安全稳定、经济实 用 等 特 点，现 已 成 为 ＦＭＤ 研 究 领 域 的 主 要 热 点 及 方 向。 论 文 从 抗 原 位 点的选择、空间构象的研究、疫苗载体的探索以及免疫佐剂的优化等多方面对 ＦＭＤ 合成肽疫苗的发展过程 及其研究进展进行了深入探讨，旨在为 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 发 展 以 及 其 他 病 原 微 生 物 合 成 肽 疫 苗 的 深入研究提供借鉴。 关 键 词 ：口 蹄 疫 ；合 成 肽 疫 苗 ；抗 原 表 位
收 稿 日 期 ：２０１１－１２－２２ 基金项目：国家科技支撑计划（２００６ＢＡＤ０６Ａ１７－０８）；现代农业产业技术体系（奶 牛）建 设 专 项 资 金 资 助 （ＣＡＲＳ－３７）；黑 龙
江 省 重 大 科 技 计 划 （ＧＡ０６Ｂ２０２，ＧＡ０９Ｂ３０２）
作 者 简 介 ：李 婷 婷 （１９８５－ ），女 ，黑 龙 江 五 常 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 兽 医 免 疫 学 和 生 物 制 品 学 研 究 。 ＊ 通 讯 作 者
２．３ 疫 苗 载 体 的 探 索 为提高抗原的递 呈 速 度 及 效 果，赵 凯 等 以 ［１２］ 猪
自体免疫球 蛋 白 ＩｇＧ Ｈ 链 作 为 外 源 抗 原 载 体 制 备 合成肽疫苗，对豚鼠、猪 等 起 到 了 保 护 作 用。Ｙｉ Ｊ Ｚ 等 用 ［１３］ 牛ＩｇＧ 重链恒定区作为载体蛋白，在其 Ｎ 端 和 Ｃ 端分别连上 Ｏ 型和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 抗原决定簇串
联片段，其 结 果 使 抗 Ｏ 型 和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 双 价 基 因 工程合成肽疫苗的 免 疫 效 果 大 大 提 高。Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｌ 等 报 ［１４］ 道，与 ＧＳＴ 融合表达相比，以缺失ｃ／ｅ１区域 ７５～８２ 位 氨 基 酸 的 乙 肝 病 毒 核 心 为 载 体 表 达 的 ＦＭＤＶ 表位串 联 肽 具 有 更 高 的 抗 原 肽 特 异 性 和 病 毒特异性抗体滴度。同年，Ｓｕ Ｃ Ｘ 等 则 ［１５］ 以结核 分 支杆 菌 热 休 克 蛋 白 ７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ７０， ＨＳＰ７０）作为载体融合表达了一种 ＦＭＤＶ 多表位合 成肽，不但诱导了更为显著的体液和细胞免疫应 答， 而且 促 进 了 ＩＬ－４ 和 ＩＦＮ－γ 的 分 泌。 随 后，Ｄｕ Ｙ Ｊ 等 以 ［１６］ 腺病毒为载体将 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 上 ３ 段 不 同 氨 基酸残基序列与猪ＩＦＮ－α进行融合表达。 其免疫反 应结果要明显高于３段残基序列与干扰素的混合物 组。Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｄ Ｌ Ｖ 等［１７］尝 试 以 惰 性 纳 米 磁 珠 为载体，制备的 多 种 合 成 肽 疫 苗 均 可 诱 导 动 物 产 生 显著 的 细 胞 免 疫 和 体 液 免 疫 反 应。Ｃｈｅｎ Ｙ Ｓ 等［１８］ 将不同直径大小 的 金 纳 米 颗 粒 （ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ， ＧＮＰｓ）作 为 一 种 体 积 依 赖 性 载 体 引 入 到 合 成 肽 疫 苗 的研制中，结果证明 ＧＮＰｓ的最优直径为８ｎｍ ～１７ ｎｍ，且免 疫 血 清 中 抗 体 含 量 为 以 相 同 抗 原 肽 连 接 ＫＬＨ 载体所诱 导 产 生 抗 体 反 应 的 ３ 倍。Ａｌｅｊａｎｄｒａ Ｖ 等 以 ［１９］ 水 疱 性 口 炎 病 毒 糖 蛋 白 （ＶＳＶ－Ｇ）作 为 载 体，将 ＦＭＤＶ 结 构 蛋 白 主 要 抗 原 位 点 ＡＳＡ（ＶＰ１ １３９～１４９ 位 氨 基 酸 ）的 串 联 二 聚 体 合 成 肽 与 其 相 连，免疫牛后结果显示，暴露在 ＶＳＶ－Ｇ 序 列 Ｎ 末 端 的 ＦＭＤＶ－ＶＰ１主要中和 抗 原 位 点 能 够 作 为 有 效 的 肽疫苗突破常规的免疫局限。
２．１ 抗 原 位 点 的 选 择 早在１９８２年，第一 例 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 诞 生 的
时候，其研 制 者 Ｂｉｔｔｌｅ Ｊ Ｌ 等 便 ［１］ 将 由 人 工 合 成 的 ＦＭＤＶ Ｏ 型 ＶＰ１第１４１～１６０位氨基酸合成肽段以 共价 键 结 合 于 钥 孔 戚 血 蓝 蛋 白 （ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅ－ ｍａｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）上 制 备 合 成 肽 疫 苗，试 验 证 明，其 能够诱导足够的抗体并对牛和猪起到保护作用。这 使其成为 ＦＭＤ 乃至整 个 动 物 疫 病 合 成 肽 疫 苗 研 究 的开端。他们随 后 又 按 照 相 同 方 法，将 能 够 引 起 实 验动物产生较强免 疫 应 答 的 抗 原 表 位 定 格 于 第 １４１ ～１６０位和２００～２１３ 位 氨 基 酸 范 围 以 内［２］。Ｆｒａｎ－ ｃｉｓ Ｍ Ｊ等［３］的研 究 中 发 现 在 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 第 １４６～ １５６ 位 肽 段 上 不 但 含 有 中 和 表 位，且 其 末 端 处 的 羟
２．２ 空 间 构 象 的 研 究 为了使合成肽段经折叠后能够形成一定的空间
构象，更 接 近 天 然 抗 原 表 位，Ｄｉｍａｒｃｈ Ｒ 等 在 ［８］ 之 前 只 合 成 ２０ 个 氨 基 酸 小 肽 研 究 的 基 础 上 ，又 串 联 增 加 了 第 ２００～２１３ 位 氨 基 酸 ，并 首 次 采 用 两 个 脯 氨 酸 和 一个丝氨酸（Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ）作 为 衔 接，其 结 果 显 示 合 成肽疫 苗 的 免 疫 原 性 获 得 极 大 增 强。Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ 等 报 ［９］ 道了 以 多 抗 原 肽 系 统 向 免 疫 系 统 提 呈 ＦＭ－ ＤＶ ＶＰ１ １４０～１６０位点 的 二 聚 体、四 聚 体 和 八 聚 体 结构比仅串联 重 复 结 构 具 有 更 强 的 免 疫 原 性，且 四 聚体比二聚体要强５倍～１０倍。Ｂｅｎｋｉｒａｎｅ Ｎ 等［１０］ 利用 Ｄ 氨基酸合成了一系列针对 ＦＭＤＶ Ｇ－Ｈ 环 区 域 的 主 要 抗 原 多 肽 ，称 之 为 反 转 型 多 肽 （ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒ－ ｓｏ，ＲＩ）。配 以 含 有 单 磷 酰 脂 Ａ 的 小 单 层 脂 质 体 为 佐剂，免疫 研 究 表 明，其 比 天 然 Ｌ－型 肽 诱 导 的 血 清 抗体滴度水平更 高、更 持 久 且 更 加 稳 定。 随 后，Ｂｒｉ－ ａｎｄ Ｊ Ｐ 等 在 ［１１］ 相关试验中发现 ＲＩ多肽诱导动物所 产生的保 护 性 抗 体 与 天 然 抗 原 或 Ｌ－氨 基 酸 合 成 肽 也具有良好的反应性。
在预测的１７个抗 原 决 定 簇 中 有 ６ 个 能 与 免 疫 血 清 发生 反 应，分 别 为 ＶＰ１ １－１２、１７－２９、１９４－２１１，ＶＰ２ ４０－５０，ＶＰ３ ２６－３９ 及 ＶＰ４ ３０－４１ 位 氨 基 酸。 该 成 果 为 Ａｓｉａ１ 型 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 研 究 奠 定 了 基础。Ｙａｎｇ Ｄ 等［７］利用一株特异 性 单 克 隆 抗 体，通 过噬菌体展示系 统 筛 选 出 了 一 段 在 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 各 亚型间均 高 度 保 守 的 线 性 抗 原 表 位，为 今 后 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 亚型间 交 叉 保 护 性 合 成 肽 疫 苗 的 研 制 提 供 了宝贵思路。
多种方式接种，再 配 以 适 当 佐 剂 使 机 体 产 生 更 为 有 效的免疫应答；③ 利 用 非 疫 苗 用 抗 原 肽 建 立 的 诊 断 方法可对疫苗免疫和自然感染动物进行有效区分； ④合成肽疫苗 安 全 可 靠，便 于 长 期 贮 存，质 量 可 控， 能有效避免不良 反 应 的 发 生，且 投 入 少，成 本 低，更 适宜规模生 产。ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 弥 补 了 目 前 传 统 ＦＭＤ 疫苗所存在的 诸 多 不 足，成 为 ＦＭＤ 疫 苗 发 展 的主要趋势之一。
李 婷 婷 等 ：口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 研 究 进 展
７７
基残基可能形成了 Ｔ 细 胞 表 位，无 需 载 体 与 佐 剂 的 协助即可自行激发机体中和抗体的产生。而 Ｚａｍｏ－ ｒａｎｏ Ｐ 等［４］进一步 证 明 了 在 １３５～１６０ 区 域 内 有 至 少４ 个 不 连 续 的 抗 体 中 和 位 点 的 存 在 ，分 别 为１３５～ １４４、１４０～１４９、１４５～１５４ 和 １５０～１６０ 位 氨 基 酸，并 制备了合 成 肽 疫 苗。 后 来，Ｗａｎｇ Ｃ Ｙ 等 将 ［５］ 外 源 Ｔｈ位点引入 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 中，拓 宽 了 合 成 肽 疫 苗在多个物种 的 免 疫 原 性，并 使 其 对 不 同 病 毒 株 的 交叉反应性得到了进一步优化。Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｗ 等 运 ［６］ 用生物信息学方法通过软件系统对 Ａｓｉａ１型 ＦＭＤＶ 结构蛋白序列的抗原位点进行了分析。经试验验证
２．４ 免 疫 佐 剂 的 优 化 Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ等 在 ［２０］ 研 究 中 尝 试 应 用 了 多 种 佐
１ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 优 势
与传统疫苗相比，ＦＭＤ 合成肽疫苗的设计研发 直接锁定 ＦＭＤＶ 不 同 血 清 型 病 毒 株 抗 原 表 位 氨 基 酸序列的自身特点，其主要具备以下优势：① 既可以 随时根据流行毒株的变化情况对抗原肽进行调整， 也可使用一些保守序列或多种不同保护性抗原序列 进行抗原肽的 合 成，从 而 使 合 成 肽 疫 苗 所 诱 导 产 生 的免疫应答更具 有 特 异 性 以 及 广 谱 性；② 除 传 统 免 疫 途 径 外 ，合 成 肽 疫 苗 还 可 通 过 鼻 内 、口 腔 和 皮 肤 等
摘 要：口蹄疫（ＦＭＤ）是一种严 重 威 胁 世 界 畜 牧 业 发 展 和 国 际 进 出 口 贸 易 的 重 大 传 染 病。 尽 管 ＦＭＤ 传 统 疫 苗 在 免 疫 效 力 上 具 有 一 定 优 势 ，但 其 自 身 仍 存 在 诸 多 弊 端 及 隐 患 。 随 着 分 子 生 物 学 技 术 的 飞 速 发 展 ， 及其在兽医领域不断取得的创新性应用，ＦＭＤ 合成肽疫苗作为新型基因 工 程 疫 苗 的 一 种，以 其 具 有 更 为 广 谱的特异性、更加安全稳定、经济实 用 等 特 点，现 已 成 为 ＦＭＤ 研 究 领 域 的 主 要 热 点 及 方 向。 论 文 从 抗 原 位 点的选择、空间构象的研究、疫苗载体的探索以及免疫佐剂的优化等多方面对 ＦＭＤ 合成肽疫苗的发展过程 及其研究进展进行了深入探讨，旨在为 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 发 展 以 及 其 他 病 原 微 生 物 合 成 肽 疫 苗 的 深入研究提供借鉴。 关 键 词 ：口 蹄 疫 ；合 成 肽 疫 苗 ；抗 原 表 位
收 稿 日 期 ：２０１１－１２－２２ 基金项目：国家科技支撑计划（２００６ＢＡＤ０６Ａ１７－０８）；现代农业产业技术体系（奶 牛）建 设 专 项 资 金 资 助 （ＣＡＲＳ－３７）；黑 龙
江 省 重 大 科 技 计 划 （ＧＡ０６Ｂ２０２，ＧＡ０９Ｂ３０２）
作 者 简 介 ：李 婷 婷 （１９８５－ ），女 ，黑 龙 江 五 常 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 兽 医 免 疫 学 和 生 物 制 品 学 研 究 。 ＊ 通 讯 作 者
２．３ 疫 苗 载 体 的 探 索 为提高抗原的递 呈 速 度 及 效 果，赵 凯 等 以 ［１２］ 猪
自体免疫球 蛋 白 ＩｇＧ Ｈ 链 作 为 外 源 抗 原 载 体 制 备 合成肽疫苗，对豚鼠、猪 等 起 到 了 保 护 作 用。Ｙｉ Ｊ Ｚ 等 用 ［１３］ 牛ＩｇＧ 重链恒定区作为载体蛋白，在其 Ｎ 端 和 Ｃ 端分别连上 Ｏ 型和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 抗原决定簇串
联片段，其 结 果 使 抗 Ｏ 型 和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 双 价 基 因 工程合成肽疫苗的 免 疫 效 果 大 大 提 高。Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｌ 等 报 ［１４］ 道，与 ＧＳＴ 融合表达相比，以缺失ｃ／ｅ１区域 ７５～８２ 位 氨 基 酸 的 乙 肝 病 毒 核 心 为 载 体 表 达 的 ＦＭＤＶ 表位串 联 肽 具 有 更 高 的 抗 原 肽 特 异 性 和 病 毒特异性抗体滴度。同年，Ｓｕ Ｃ Ｘ 等 则 ［１５］ 以结核 分 支杆 菌 热 休 克 蛋 白 ７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ７０， ＨＳＰ７０）作为载体融合表达了一种 ＦＭＤＶ 多表位合 成肽，不但诱导了更为显著的体液和细胞免疫应 答， 而且 促 进 了 ＩＬ－４ 和 ＩＦＮ－γ 的 分 泌。 随 后，Ｄｕ Ｙ Ｊ 等 以 ［１６］ 腺病毒为载体将 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 上 ３ 段 不 同 氨 基酸残基序列与猪ＩＦＮ－α进行融合表达。 其免疫反 应结果要明显高于３段残基序列与干扰素的混合物 组。Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｄ Ｌ Ｖ 等［１７］尝 试 以 惰 性 纳 米 磁 珠 为载体，制备的 多 种 合 成 肽 疫 苗 均 可 诱 导 动 物 产 生 显著 的 细 胞 免 疫 和 体 液 免 疫 反 应。Ｃｈｅｎ Ｙ Ｓ 等［１８］ 将不同直径大小 的 金 纳 米 颗 粒 （ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ， ＧＮＰｓ）作 为 一 种 体 积 依 赖 性 载 体 引 入 到 合 成 肽 疫 苗 的研制中，结果证明 ＧＮＰｓ的最优直径为８ｎｍ ～１７ ｎｍ，且免 疫 血 清 中 抗 体 含 量 为 以 相 同 抗 原 肽 连 接 ＫＬＨ 载体所诱 导 产 生 抗 体 反 应 的 ３ 倍。Ａｌｅｊａｎｄｒａ Ｖ 等 以 ［１９］ 水 疱 性 口 炎 病 毒 糖 蛋 白 （ＶＳＶ－Ｇ）作 为 载 体，将 ＦＭＤＶ 结 构 蛋 白 主 要 抗 原 位 点 ＡＳＡ（ＶＰ１ １３９～１４９ 位 氨 基 酸 ）的 串 联 二 聚 体 合 成 肽 与 其 相 连，免疫牛后结果显示，暴露在 ＶＳＶ－Ｇ 序 列 Ｎ 末 端 的 ＦＭＤＶ－ＶＰ１主要中和 抗 原 位 点 能 够 作 为 有 效 的 肽疫苗突破常规的免疫局限。