口蹄疫合成肽疫苗研究进展
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口蹄疫合成肽疫苗研究进展页数:4
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合成肽疫苗页数:2
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猪口蹄疫O型合成肽疫苗抗体水平检测页数:3
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猪口蹄疫O型合成肽疫苗及其主要特点页数:5
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猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验页数:4
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2019年国内口蹄疫合成肽疫苗领军者申联生物研究页数:17
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台州市猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫情况调查与研究
３ 小结 与讨 论 ３ １ 生猪 免 疫或感 染 Ｆ ． ＭＤ抗 原 以 后， 诱导产生 Ｔ细胞参与或介 导特 异 性免疫应答 ， 产生 中和抗体 中和 与调 ２ ０９ ０ ２ ０ ０ ０ 、 ０ ９ ３ １。 ０ ０１ ２、 ０ ９ ｌ ５ ２ ０ ０ ０ 理破坏 Ｆ Ｖ， 由于传 统灭活疫苗 ＭＤ 但 １ １４ 检测试剂盒 ．． 可 猪 口蹄疫病 毒 ＶＰ 结 构蛋 白抗 ２ ３ 免疫后不 同时间抗体检测结果 生产存在 生物 安全 隐患和副 反应 ， １ ． 体 Ｅ ＩＡ 诊 断 试 剂 盒 ： 批 号 为 ＬＳ 从表 中可 以看 出， 首次免疫后 １ 能 引起散 毒及 不 能产 生交叉 保护 等 ５ 阳性 率在 ３％至 ４ ％之 间； 免 问题 Ⅲ 因 此 研 发 一 种 安 全 性 好 ， 疫 ０ ０ 首 ， 免 ２０ ０ ２ ， ０ ８６ ２ 上海优耐特 生物 医药有 限 天 ， 后３ ０天阳性率 明显 升高，均在 ７％ 效果稳定的疫苗就非常必要 。 口蹄 ０ 猪 公司生产。
摘 要 ： 台州市的 ３个区 ２ 对 ４个猪 场使用猪 口蹄疫 Ｏ型合成肽疫苗免疫情况进行 了调 查。临床使用 情况表 明， 与以前使 用的猪 Ｏ型 １蹄疫浓缩苗相 比， ３ 使用该 苗免疫对生猪 的应 激小、 本无免 疫副反 应； 基 疫苗质量较稳定 ， 抗体 检 测结果表 明， 首次免疫后 １ 天效价较低 ， ５ 首免后 ３ ０天检测 阳性 率平均为 ７ ． ％， ５ ８ 高于部 颁标准 ７ ％的抗体 合格 ６ ０ 率； 二免后 １ 天 、０天免疫抗体 阳性率分别平均为 ９ ． ％和 ９ ． ％， ５ ３ ０８ １ ４５ ９ 因此经二次免疫后抗体效价 才稳定上升 ， 免疫
效 果确 实 。
关键词 ： 口蹄疫； 成肽疫 苗； Ｐ ．ＬＳ 调 查研究 合 Ｖ １Ｅ ＩＡ； 中图分类号 ：８ ２４ ￥ ５ ． 文献标识码： 文章编号 ：０ ５ ９４ ２ １ ）１ ０ ４ — ２ Ｂ １０ — ４Ｘ（０ ０ １ －０ ２ ０
口蹄疫疫苗研究进展
口蹄疫疫苗研究进展口蹄疫疫苗的研究进展【综述】【摘要】口蹄疫是被列为A类疫病的家畜传染病之一，接种疫苗是防止该病流行的有效措施。
本文就口蹄疫灭活疫苗、基因工程亚单位疫苗、转基因植物可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因工程弱毒疫苗、活载体疫苗、核酸疫苗及空病毒衣壳蛋白疫苗的最新研究进展作一综述。
【关键词】 I=1蹄疫；疫苗Progress in Research on Foot--and．-M outh Disease VaccineCHEN Li—xin，JIN Yu—zhu，HU Rong—liang(Department of印idemiology，Institute of Military Veterinary Medicine，Academy ofMilitary Medicine，Changchun 130062，China)【Abstract】 Foot．and．mouth disease is one of the infectious disease class A in animals．Vaccination is an effective measure forprevention of epidemic of the disease． This paper reviewed the development in research on inactivated vaccine，recombinant subunitvaccine，edible transgenic plant vaccine，synthetic peptide vaccine，protein vector-based vaccine，recombinant attenuated vaccine，livevector-based vaccine，DNA vaccine and empty capsid protein vaccine against foot—and-mouth disease．【Key words】 Foot—and—mouth disease；Vaccine口蹄疫(Foot．and—mouth disease，FMD)是由口蹄疫病毒(Foot．and．mouth disease virus，FMDV)引起的偶蹄动物烈性接触性传染病，主要危害牛、羊、猪等，发病率极高，传播速度极快。
口蹄疫合成肽疫苗研究新进展
２ ５—
４ ＂ －日畜牧善匹 ２ ０ １ ５ ． ０ ３
量 免疫 ， 不 可减少 注 射剂 量 。羊 可 以按 牛 的正 常 剂量 的一半 接种 。 母 源 抗体 会 干 扰免 疫 反 应 ，需 合 理 确 定 首
免时问。
角 出现 白沫 、鼻 腔 出血 、对各 种 刺 激反 应 迟 钝
感染 ； 不 良反 应严 重 ， 群众抵 触使 用 ， 限制 了疫 苗
的广 泛应 用 ， 免 疫 密度 严 重 不 足 （ 远达 不 到 ８ ５ ％
基 于 同样 的原 理 ， 已经 完成 了 Ａ型肽 苗 、 Ｏ —
Ａ二 价肽 苗 的研 制 。对 预 防猪 Ａ 型 口蹄 疫效 果
的最低 要求 ） ， 疫 苗浪 费 ， 难 以保 证 防疫效 果 。
技术 优势 ： 免疫 针对 性 强 、 免 疫谱 广 ， 对 缅甸
口腔或 舌部 是否有 水疱 ， 厌食 等等 。
２我 国现 有 口 蹄 疫 疫 苗 的 种 类
灭 活疫 苗类 ： 猪 口蹄疫 Ｏ型灭 活疫 苗 。 疫 苗 研究 方 向 ： 毒株选育 、 生 产工 艺 改 进 如
９ ８毒 、 泛亚 毒 、 新猪 毒 和 旧猪毒 等各 种 Ｏ型 流行
病 的首位 。
口蹄疫 一 般 症状 为 ： 发热 、 厌食 、 水疱 （ 口腔
高效 针对 猪 的 Ｔ细胞 位点 。 进一 步提 高疫 苗 的细
胞免 疫功 能 。 独有 的肽 链结 构球 状化 技术 ： 使合 成 肽 的空
间构 型 与天然 抗原 完全 一致 ， 确保 多肽 抗 原 的稳
部、 蹄部 、 乳 房周 围 ） 、 流涎 、 跛 行 。临床 诊 断 中猪 只的 主要 表 现在蹄 部 。 猪只得 此病 的第 一 表现 为 突然跛 行 ， 然 后 喜欢 跪 卧 、 不 愿 走动 ， 蹄 部皮 肤 、
口蹄疫核酸疫苗的研究进展
强且 抗原 相关 表位稳 定 等优点 受 到广泛 关注 。 １ 口蹄 疫 病 毒 的抗 原 性 片 段 Ｆ Ｖ 的抗 原 位 点 多 位 于 衣 壳 蛋 白 的 环 结 构 ＭＤ
研究 表 明 核 酸 疫 苗 不 仅 可 诱 导 体 液 免 疫 反 应 ，还可 以诱 导细 胞 免 疫 应 答 。重 组 质 粒 一 般 通 过 肌 肉 或 者 皮 内 导 入 机 体 后 ， 被 周 围组 织 细 胞 （ 比如 肌 细胞 或 者 表皮 胶 原 细 胞 ） ，抗原 递 呈 细胞 （Ｐ Ａ Ｃ） 或者 其 它 炎 性 细 胞 摄 取 。未 被 摄 取 的 游 离 Ｄ Ａ多数 可 被 降解 ，少数 可能 随循 环 系统 而进 Ｎ
病 。该 病 呈 世 界 性 流 行 ，一 旦 暴 发 将 给 世 界 各 国 的
位 。虽然 不 同血清 型 的病 毒抗 原位点 的组 成有所 不 同 ，Ｖ １的 Ｇ Ｈ 环 已被 公认 包 含 重 要 的抗 原 决 定 Ｐ －
簇 。生 产 核 酸 疫 苗 时 保 护 性 抗 原 基 因 可 以 是 单 个 的 基 因 （ Ｖ １ 也 可 以 是 一 组 基 因 （ １ Ａ、 如 Ｐ） Ｐ 、２
畜 牧业 造成 了 巨大的经 济损 失 ，使得人 们在 应对 它
时 ， 必 须 侧 重 于 早 期 的 防 治 。疫 苗 作 为 预 防 、控 制
传 染病 的发 生 和流行 的主要 手段 ，在 防控 日蹄疫 方 面担任 着重要 角 色 。 口蹄疫 疫苗 主要经 历传 统疫 苗
和基 因工程疫 苗 两个 阶段 。虽然 灭活疫 苗 和弱毒 疫
入 淋 巴 结 或 脾 中 。 有 实 验 已 经 证 明 ， 肌 细 胞 、上 皮 细 胞 和 黏 膜 细 胞 有 较 强 地 摄 取 Ｄ Ａ 分 子 的 能 Ｎ 力 。之 后 被 摄 取 的 重 组 质 粒 在 细 胞 核 内 转 录 ｍＲ Ａ 并 在 细 胞 内 表 达 病 原 体 的 蛋 白 质 抗 原 ，经 Ｎ 加 工 后 形 成 的 多 肽 抗 原 ， 可 与 宿 主 细 胞 主 要 组 织 相 容 性 复 合 物 ＭＨ Ｃ Ｉ和 ＭＨ 分 子 结 合 ， 并 被 Ｃ１ １
研究 表 明 核 酸 疫 苗 不 仅 可 诱 导 体 液 免 疫 反 应 ，还可 以诱 导细 胞 免 疫 应 答 。重 组 质 粒 一 般 通 过 肌 肉 或 者 皮 内 导 入 机 体 后 ， 被 周 围组 织 细 胞 （ 比如 肌 细胞 或 者 表皮 胶 原 细 胞 ） ，抗原 递 呈 细胞 （Ｐ Ａ Ｃ） 或者 其 它 炎 性 细 胞 摄 取 。未 被 摄 取 的 游 离 Ｄ Ａ多数 可 被 降解 ，少数 可能 随循 环 系统 而进 Ｎ
病 。该 病 呈 世 界 性 流 行 ，一 旦 暴 发 将 给 世 界 各 国 的
位 。虽然 不 同血清 型 的病 毒抗 原位点 的组 成有所 不 同 ，Ｖ １的 Ｇ Ｈ 环 已被 公认 包 含 重 要 的抗 原 决 定 Ｐ －
簇 。生 产 核 酸 疫 苗 时 保 护 性 抗 原 基 因 可 以 是 单 个 的 基 因 （ Ｖ １ 也 可 以 是 一 组 基 因 （ １ Ａ、 如 Ｐ） Ｐ 、２
畜 牧业 造成 了 巨大的经 济损 失 ，使得人 们在 应对 它
时 ， 必 须 侧 重 于 早 期 的 防 治 。疫 苗 作 为 预 防 、控 制
传 染病 的发 生 和流行 的主要 手段 ，在 防控 日蹄疫 方 面担任 着重要 角 色 。 口蹄疫 疫苗 主要经 历传 统疫 苗
和基 因工程疫 苗 两个 阶段 。虽然 灭活疫 苗 和弱毒 疫
入 淋 巴 结 或 脾 中 。 有 实 验 已 经 证 明 ， 肌 细 胞 、上 皮 细 胞 和 黏 膜 细 胞 有 较 强 地 摄 取 Ｄ Ａ 分 子 的 能 Ｎ 力 。之 后 被 摄 取 的 重 组 质 粒 在 细 胞 核 内 转 录 ｍＲ Ａ 并 在 细 胞 内 表 达 病 原 体 的 蛋 白 质 抗 原 ，经 Ｎ 加 工 后 形 成 的 多 肽 抗 原 ， 可 与 宿 主 细 胞 主 要 组 织 相 容 性 复 合 物 ＭＨ Ｃ Ｉ和 ＭＨ 分 子 结 合 ， 并 被 Ｃ１ １
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验
表 ３ 保 持 精 子 活 力 ０ ５级 时 的 保 存 天数 ．
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
～
３ １ ～３ １ （ ３ 。 ． ０ ． ８ｄ 表 ）
监测。
２ ２ 用 液 相 阻 断 Ｅ ＩＡ试 剂 对 浓 缩 灭 活 疫 苗 免疫 后 的 血 ． ＬＳ 清进行检测 ， 由表 ２可 以看 出 ， 免 ３周 抗 体 水 平仍 不 高 且 首 抗 体合 格 率 较 低 ， 免 ２周 后 抗 体 水 平 升 高 ， 抗 体 合 格 率 二 但 并 不 是 很 理想 。
口蹄 疫病 毒 Ｖ １ 构 蛋 白抗 体 Ｅ ＩＡ试 剂 盒 （ 海 优 耐 特 Ｐ 结 Ｓ Ｌ 上 生 物 医 药有 限 公 司 生 产 ） 。 １ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 分组 ： 种 猪 场 试 验 的 每 头 母 猪 所 生 的 仔 猪 归 为 一 ．． 在 组， 一共 ６组 。 Ａ、 Ｃ三 组 为 合 成 肽 疫 苗 免 疫 组 ， Ｅ、 Ｂ、 Ｄ、 Ｆ三 组 为浓 缩 灭 活苗 免 疫组 １２２ 免 疫 时 间 和 剂 量 ： ．． 口蹄 疫 ４ 日龄 首 免 ， ０日龄 二 次 ０ ９
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 试验 动 物 ： 择 昆 山 市 种 猪 场 梅 山 猪 中 相 同 待 生 产 ．． 选 日 、 期 生产 性 能 相 近 的 ６头 母 猪 ， 其 生 产 的 仔 猪 按 其 免 疫 对 程 序进 行 初 免 、 免 ， 每 头 仔 猪 唯 一 编 号 。 并 在 有 关 乡镇 二 对 选 择 了若 干 具有 不 同 免 疫 背 景 的 猪 场 进 行 了 合 成 肽 免 疫 与
１ ２ ３ 检 测方 法 按 试剂 盒说 明书 进 行 （ 程 略 ） ．． 过 。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察作者：陈培赛，林元潮，曾瑞强来源：《兽医导刊》 2013年第12期陈培赛1，林元潮2，曾瑞强2（1. 温州市苍南县畜牧兽医局，浙江苍南 325800 ；2. 温州市苍南县灵溪镇农业综合服务中心，浙江灵溪 325800）口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病，给世界畜牧业造成很大损失。
1974 年国际兽疫局（OIE）将该病列为国际动物卫生法典中18个A 类疾病之首, 在许多国家和地区都有该病的发生与流行。
目前对该病的防制主要是采取禁运、紧急屠宰和强制性免疫接种措施，而疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段。
猪口蹄疫O 型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术，在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点（合成肽）并连接人工T 细胞位点，以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成油乳剂疫苗，能够很好的预防猪O 型口蹄疫的发生。
温州市苍南县国土面积1300 平方公里，生猪总存栏数量约10 ～ 12万头，每户存栏数量100 ～ 500 头为主。
我县于2009 年8 月3 日开始试用申联生物医药（上海）有限公司的猪口蹄疫O 型合成肽疫苗，一直坚持使用至今，全县没有出现重大生猪口蹄疫疫情，取得了较好的防控效果，现将我县推广使用合成肽疫苗情况介绍如下。
一、猪口蹄疫O 型合成肽疫苗免疫效果观察1．初试及近年疫苗使用情况统计。
（1）初试情况。
2009 年8 月3 日，我县首先在新华畜牧有限公司进行猪口蹄疫O 型合成肽疫苗与高效灭活疫苗的对比试验。
通过试验发现合成肽疫苗免疫副反应小、抗体检测合格率高，受到了畜牧兽医部门和广大养殖场的高度认同。
（2）推广使用情况。
初试完成后，先在我县9 个规模猪场全面使用，免疫生猪约7 500 头。
10 月份以后，全县开始使用合成肽疫苗至今。
2009 年以来使用的猪口蹄疫疫苗情况见表12. 免疫后效果分析。
（1）免疫应激反应小。
合成肽疫苗接种后不会产生严重的副反应，曾观察到甚至使用了20 ml 注射的剂量也没有不良反应。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗及猪口蹄疫灭活疫苗免疫效果试验
将 １ ０ ０头试 验 猪按 照疫 苗 说 明书 进行 免 疫 ， 每 头猪 耳 根后 肌 肉深 层注 射 ｌ 毫升 ， 第 一次 接种
后 间隔 ４Βιβλιοθήκη 再 加强 免疫 ２毫 升 。 ２ ． ３应 激 反 应 判 定 标 准
用猪 口蹄 疫 ０型 合 成 肽疫 苗 和猪 口蹄 疫 ０ 型灭 活疫 苗 在 同一 个猪 场 进行 免 疫注 射 ， 均 用酶
为 ９ ０ ％ ．１ ２ ０天 为 ６ ０ ％， １ ５ ０天 为 ５ ０ ％。 从 表 ２可
源 抗体 ； 第 一 次注 射疫 苗后 ２ ８天（ 二 免前 ） 开始第
二 次采 血 。然后 ， 每隔 ３ ０天采血 一次 。直 至抗 体
下 降 。采取前 腔 静脉或 耳静 脉采 血 ３ ～ ４毫 升 。按
６ ． １重 在 预 防 ， 从 饲养 管 理 人 手 ， 抓好 营养 、
卫生 、 人 员 意 识 等 方 面 的工 作 ． 尽 可 能 减 少 内源
头 随机 平均 分 为两 组 ， １组 ，注 射 猪 口蹄 疫 ０型
合 成肽 疫 苗 ； ２组 ， 注射 猪 １ ： ３ 蹄 疫 ０型 灭 活疫 苗 。 两组 仔猪 体重 差异 不显著 （ 见表 １ ） 。
猪 口蹄 疫 Ｏ 型合成 肽 疫苗及 猪 口蹄疫 灭活疫 苗免 疫效 果试验
孟 艳 ， 杨 秀女 ， 武秋 双 ， 郑 丽丽 ， 杨旭 光 （ １ ． 河北 省畜牧 兽 医研 究所 ， 河北保 定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ； ２ ． 河 北省 动物 疫病 预 防控 制 中心 ， 河北 保定 ０ ７ １ ０ ０ ０ ；
蹄疫感染抗体阴性的 ２ ８ 日龄 左 右 断 奶仔 猪 １ ０ ０
或 服用 纯 中药制 剂 复方 益母 草
猪O型口蹄疫合成肽疫苗和灭活疫苗免疫抗体测定试验研究报告
口蹄疫抗体液相阻断 ELISA 试剂盒，生产厂家中国 农业科学院兰州兽医研究所，产品批号 20180604101-2， 抗原批号 101/22。
口 蹄 疫 病 毒 VP1 结 构 蛋 白 抗 体 ELISA 试 剂 盒，生产厂家武汉科前生物股份有限公司，产品批号 180404。
二、方法
1. 试验动物采血及首次免疫。采集各组试验猪群血 清，评估母源抗体水平，同时每组分别接种对应疫苗， 疫苗注射方法及注射剂量按照使用说明书进行（详见下 表 1），免疫后观察猪群的应激反应，是否有体温升高、 接种部位红肿等不良反应并记录。
一周后自行消退；接种合成肽苗的猪只炎症反应轻微。 本试验过程中，无试验猪只发病、死亡等情况发生。 2. 群体免疫抗体合格率结果（见下表 2）Leabharlann 试验场 博源猪场 鑫发猪场
抗体
母源 首免 二免 母源 首免 二免
表 2 猪 O 型口蹄疫合成肽苗和灭活苗免疫抗体合格率统计表
样品数 26 26 26 20 20 20
表 1 猪群分组及接种疫苗情况
组别 合成肽组 灭活苗组
疫苗类型 O 型口蹄疫合成肽疫苗 O 型口蹄疫灭活疫苗
剂量 1.0 ml/ 头 2.0 ml/ 头
2. 试验动物二次采血及加强免疫。首免后 28 d，采 集各组猪群血清，同时每组进行二次免疫，免疫后观察 猪群的应激反应，并记录。
3. 试验动物三次采血。二次免疫后 28 d，采集各组 猪群血清。
2018 年第 11 期 兽医实验室
猪 O 型口蹄疫合成肽疫苗和灭活 疫苗免疫抗体测定试验研究报告
张治新 1 刘凯 1 王阳 2 李伟 1 杨小萍 1 耿淑惠 1 喻博 1 1. 陕西省山阳县畜牧兽医中心 2. 陕西省商洛市动物疫病预防控制中心
口 蹄 疫 病 毒 VP1 结 构 蛋 白 抗 体 ELISA 试 剂 盒，生产厂家武汉科前生物股份有限公司，产品批号 180404。
二、方法
1. 试验动物采血及首次免疫。采集各组试验猪群血 清，评估母源抗体水平，同时每组分别接种对应疫苗， 疫苗注射方法及注射剂量按照使用说明书进行（详见下 表 1），免疫后观察猪群的应激反应，是否有体温升高、 接种部位红肿等不良反应并记录。
一周后自行消退；接种合成肽苗的猪只炎症反应轻微。 本试验过程中，无试验猪只发病、死亡等情况发生。 2. 群体免疫抗体合格率结果（见下表 2）Leabharlann 试验场 博源猪场 鑫发猪场
抗体
母源 首免 二免 母源 首免 二免
表 2 猪 O 型口蹄疫合成肽苗和灭活苗免疫抗体合格率统计表
样品数 26 26 26 20 20 20
表 1 猪群分组及接种疫苗情况
组别 合成肽组 灭活苗组
疫苗类型 O 型口蹄疫合成肽疫苗 O 型口蹄疫灭活疫苗
剂量 1.0 ml/ 头 2.0 ml/ 头
2. 试验动物二次采血及加强免疫。首免后 28 d，采 集各组猪群血清，同时每组进行二次免疫，免疫后观察 猪群的应激反应，并记录。
3. 试验动物三次采血。二次免疫后 28 d，采集各组 猪群血清。
2018 年第 11 期 兽医实验室
猪 O 型口蹄疫合成肽疫苗和灭活 疫苗免疫抗体测定试验研究报告
张治新 1 刘凯 1 王阳 2 李伟 1 杨小萍 1 耿淑惠 1 喻博 1 1. 陕西省山阳县畜牧兽医中心 2. 陕西省商洛市动物疫病预防控制中心
猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果调查
（ 下表 ） 见 。
口蹄疫 是 一种偶 蹄 动物 烈性 、 高度 传染 性疾 病 。 １７ ９４ 年 国 际兽 疫 局 （ Ｉ 将 该 病 列 为 国 际动 物 卫 生 法典 中 １ Ｏ Ｅ） ８ 个 Ａ类疫病 之 首 。 目前对 该病 的防 控主要 是采 取禁 运 、 紧 急屠 宰 和强 制性 免 疫接 种等 措施 ， 而疫 苗 免疫 是最 主要 的 也是 最经 济 的手段 。 由于 口蹄疫 病毒各 血清 型之 间没 有 但 交叉 保 护 ， 且 型 内毒 株 间也 存 在 抗 原差 异 ， 而 因此 给疫苗 的研 制 造 成 许 多 困难 。虽 然 细胞 疫 苗 具有 较 好 的免 疫 效 力 ， 由于细 胞 苗 的抗 原 生 产难 以准 确定 量 ， 但 无法 克 服疫
１ ． 血 清学 调查 ① 调查 对 象 ： 马店 市永 辉牧 业种 猪 ．２ ２ 驻 场、 驿城 区顺 和猪 场 、 城 区刘 阁办 崔庄 猪场 、 平 正平 饲 驿 遂
的临界值 为 ０３ 但 此次 抽 检 的血 清样 品测 其 Ｏ ． ４， Ｄ值 ９ ％ ０ 在 ２ －． ． ３０之间 ， 明猪 首 次免疫 后 的抗 体水 平较 高 ， ０ 说 完全 符合 要求 。 照产 品使 用 说 明书 ， 按 若在 首免后 ２ ８天 加强免 疫一 次 ， 抗体 水平 和保 护率会 更 高 、 免疫有 效期 会更 长 。 ３３ 猪 １蹄 疫 ０型合 成肽 疫 苗免 疫抗 体 的检 测 ． ： ７ 猪 口蹄 疫 ０型合 成 肽疫 苗 免疫 抗体 的检测 不 能使 用 传 统 的血 凝 试 验 和酶 联免 疫 吸附试 验 ， 因为其 致敏 抗原 非 纯净 病毒 粒
中 图分类 号 ：８ ２５ Ｓ５ ． 文献标 识码 ： Ｂ
．
文章 编号 ：０４ ５ ９（０ ８ ５０ ０ － ２ １０ — ００２０ ） — ０ ７ ０ ０
口蹄疫 是 一种偶 蹄 动物 烈性 、 高度 传染 性疾 病 。 １７ ９４ 年 国 际兽 疫 局 （ Ｉ 将 该 病 列 为 国 际动 物 卫 生 法典 中 １ Ｏ Ｅ） ８ 个 Ａ类疫病 之 首 。 目前对 该病 的防 控主要 是采 取禁 运 、 紧 急屠 宰 和强 制性 免 疫接 种等 措施 ， 而疫 苗 免疫 是最 主要 的 也是 最经 济 的手段 。 由于 口蹄疫 病毒各 血清 型之 间没 有 但 交叉 保 护 ， 且 型 内毒 株 间也 存 在 抗 原差 异 ， 而 因此 给疫苗 的研 制 造 成 许 多 困难 。虽 然 细胞 疫 苗 具有 较 好 的免 疫 效 力 ， 由于细 胞 苗 的抗 原 生 产难 以准 确定 量 ， 但 无法 克 服疫
１ ． 血 清学 调查 ① 调查 对 象 ： 马店 市永 辉牧 业种 猪 ．２ ２ 驻 场、 驿城 区顺 和猪 场 、 城 区刘 阁办 崔庄 猪场 、 平 正平 饲 驿 遂
的临界值 为 ０３ 但 此次 抽 检 的血 清样 品测 其 Ｏ ． ４， Ｄ值 ９ ％ ０ 在 ２ －． ． ３０之间 ， 明猪 首 次免疫 后 的抗 体水 平较 高 ， ０ 说 完全 符合 要求 。 照产 品使 用 说 明书 ， 按 若在 首免后 ２ ８天 加强免 疫一 次 ， 抗体 水平 和保 护率会 更 高 、 免疫有 效期 会更 长 。 ３３ 猪 １蹄 疫 ０型合 成肽 疫 苗免 疫抗 体 的检 测 ． ： ７ 猪 口蹄 疫 ０型合 成 肽疫 苗 免疫 抗体 的检测 不 能使 用 传 统 的血 凝 试 验 和酶 联免 疫 吸附试 验 ， 因为其 致敏 抗原 非 纯净 病毒 粒
中 图分类 号 ：８ ２５ Ｓ５ ． 文献标 识码 ： Ｂ
．
文章 编号 ：０４ ５ ９（０ ８ ５０ ０ － ２ １０ — ００２０ ） — ０ ７ ０ ０
猪口蹄疫O型合成肽疫苗特点及展望
稍 微 降 低 以外 ，疫 苗 的各 项 理 化 指 标 均 检 测 合 格 。使 用 标 准
国 引进 并 开 发 了人 工 合 成 新 型猪 口蹄 疫 ０ 型 合 成 肽 疫 苗 。本
文 主 要 从 几 个 方 面 对 合 成 肽 疫 苗进 行 分 析 。 希 望 人 们 能 更 深
入 地 了解 并使 用 此 类 新 型 口蹄 疫 疫 苗 。
２ ． ２ 被 接 种 动物 应 具 备 的 条 件
导 致 猪 在 临 床 上 出现 过 敏 症 状 的直 接 原 因是 培 养 的 全 病 毒 疫 苗 中存 在 着 异 体 蛋 白 ，对 体 内致 敏 因 子 产 生 变 态 反 应 所 致 。 猪 口蹄 疫 ０ 型合 成 肽 疫 苗 成 分 中纯 多 肽 抗 原 含 量 高 ，在
内不 受 影 响 ，能保 持很 强 的原 有 免 疫 效 力 。
２ 接 种 要 求及 注意 事 项
２ ． １ 疫 苗 的 选 用 和 贮 运
在 选 择 疫 苗 时 ，应 尽 量 选 择 从 国家 定 点 疫 苗 生 产 厂 家 进
购 疫 苗 ，疫 苗 来 源 需 遵 循 国 家 《 兽 用 生 物 制 品 经 营 管 理 办
关 键 词 ：猪 口蹄 疫 ；ｏ 型 ；合 成 肽 疫 苗 ；特 点 ；发 展 前 景
全 国范 围 内 ． Ｅ ｌ 蹄 疫 是 受 关 注 颇 高 的 一 种 疾 病 ，具 有 高 度 传 染 性 ，对 畜 牧 业 危 害很 大 ，被 国 际 兽 疫 局 列 为 Ａ 类 传 染 病 之 首 。 口蹄 疫 是 一 种 偶 蹄 动 物 病 毒 性 传 染 病 ， 由 口蹄 疫 病 毒 引 起 ．临 床 上 主 要 特 征 是 动 物 口部 、蹄 部 皮 肤 发 生 水 疱 、 烂 斑 。 该 病 的具 有 发 病 率 高 但 病 死 率 低 、高 度 传 染 、 传 播 迅 速 的特 点 ，多 种 动 物 都 可 感 染 口蹄 疫 ， 表 现 症 状 有 所 不 同 ， 猪 感 染 口蹄疫 病毒 最 早 症 状 出现 在 蹄 部 ， 出现 跛 行 等 症 状 。
国 引进 并 开 发 了人 工 合 成 新 型猪 口蹄 疫 ０ 型 合 成 肽 疫 苗 。本
文 主 要 从 几 个 方 面 对 合 成 肽 疫 苗进 行 分 析 。 希 望 人 们 能 更 深
入 地 了解 并使 用 此 类 新 型 口蹄 疫 疫 苗 。
２ ． ２ 被 接 种 动物 应 具 备 的 条 件
导 致 猪 在 临 床 上 出现 过 敏 症 状 的直 接 原 因是 培 养 的 全 病 毒 疫 苗 中存 在 着 异 体 蛋 白 ，对 体 内致 敏 因 子 产 生 变 态 反 应 所 致 。 猪 口蹄 疫 ０ 型合 成 肽 疫 苗 成 分 中纯 多 肽 抗 原 含 量 高 ，在
内不 受 影 响 ，能保 持很 强 的原 有 免 疫 效 力 。
２ 接 种 要 求及 注意 事 项
２ ． １ 疫 苗 的 选 用 和 贮 运
在 选 择 疫 苗 时 ，应 尽 量 选 择 从 国家 定 点 疫 苗 生 产 厂 家 进
购 疫 苗 ，疫 苗 来 源 需 遵 循 国 家 《 兽 用 生 物 制 品 经 营 管 理 办
关 键 词 ：猪 口蹄 疫 ；ｏ 型 ；合 成 肽 疫 苗 ；特 点 ；发 展 前 景
全 国范 围 内 ． Ｅ ｌ 蹄 疫 是 受 关 注 颇 高 的 一 种 疾 病 ，具 有 高 度 传 染 性 ，对 畜 牧 业 危 害很 大 ，被 国 际 兽 疫 局 列 为 Ａ 类 传 染 病 之 首 。 口蹄 疫 是 一 种 偶 蹄 动 物 病 毒 性 传 染 病 ， 由 口蹄 疫 病 毒 引 起 ．临 床 上 主 要 特 征 是 动 物 口部 、蹄 部 皮 肤 发 生 水 疱 、 烂 斑 。 该 病 的具 有 发 病 率 高 但 病 死 率 低 、高 度 传 染 、 传 播 迅 速 的特 点 ，多 种 动 物 都 可 感 染 口蹄 疫 ， 表 现 症 状 有 所 不 同 ， 猪 感 染 口蹄疫 病毒 最 早 症 状 出现 在 蹄 部 ， 出现 跛 行 等 症 状 。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察
口蹄 疫 是 一 种 偶 蹄 动 物 烈 性 、 高 度 传染性 疾 病 ，给世 界 畜牧业 造成 很 大 损失 。１ ９ ７ ４ 年 国际 兽疫 局 （ Ｏ Ｉ Ｅ ） 将 该 病 列 为 国 际动 物 卫 生 法 典 中 １ ８ 个 Ａ类疾病之首 ， 在 许 多 国家 和 地 区 都 有 该 病 的 发 生 与 流 行 。 目前 对
．
苗 免 疫 是 最 主 要 的 也 是 最 经 济 的手 段 。 猪 口蹄 疫 Ｏ型 合 成 肽 疫 苗采 用 固 相 多肽 合 成 技 术 ，在 体 外 人 工 合
１ ． 初 试及近 年疫苗使 用情况统计 。
全 县 每 年 都 有 几 十 起 严 重 的 免 疫 应 激 反 应 ，正 常 的 情 况 高 效 灭 活 疫 苗 也会造 成 生猪半 天 以上 不 吃饲料 。 免疫 应 激 反 应 小 极 大 地 提 高 了养 殖 户 口蹄 疫 免 疫 的 积 极 性 ，从 而 提 高 了强制 免疫 密度 。
一
（ １ ）免疫 应激 反应小。合成 肽
疫 苗 接种 后 不 会 产生 严 重 的副 反 应 ，
曾观察到甚至使用了 ２ ０ ｒ ｎ ｌ 注射的剂 量也 没有不 良反应。我县使 用 ４年
猪 口蹄 疫 Ｏ 型 合 成 肽 以 来 ， 尚未 接 到 严 重 免 疫 副 反 应 的 该 病的防制 主要是采取禁 运、紧急 屠 宰 和 强制 性 免 疫 接 种 措 施 ，而 疫 疫苗免疫效果观察 报 告 。而 在 使 用 高效 灭 活 疫 苗期 间 ，
质量 ； 同 时 在 此 期 间 ， 公鸡 经 常 出 现 拉 稀 ，肠 道 问题 ，可 以 配 合 鱼 肝
易形 成生物膜堵塞水 线管道或者乳 壳变薄 ，破蛋率 增加 ，降低种 蛋合 浓缩鱼肝油 ，增强公 鸡活力和精子 头 ，可使用我公司产品倍清泡水线，
口蹄疫疫苗研究的进展
口蹄疫（Foot-and-mouth dis-ease，FMD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，以传播迅速、感染率高为其特点。
世界各国对本病的研究极为重视，世界动物卫生组织（Of-fice International Des Epizooties，OIE）将其列为A类传染病之首。
长期以来，FMD疫苗接种作为特异性免疫预防本病的有效手段之一，并在防治中被广泛应用，收到了显著的效果。
随着现代分子生物学技术的发展，FMD疫苗的研制不断深入，已从传统疫苗向新型疫苗方向发展。
1灭活疫苗1930年Frenkel H S等[1]首次成功地实现了FMDV的体外培养，满足了疫苗的规模化生产，并实现了对病毒量化研究。
1931年4月在柏林微生物学会首次召开了专题学术会议，确定了FMD疫苗研究的方向。
1962年英国的Mowat和Chapman等开始用乳仓鼠肾传代细胞(BHK-21)培养FMDV，生产灭活疫苗并迅速商业化。
目前应用的灭活剂，主要有乙酰乙烯亚胺(N-acetylethylenimine，AEI)，灭活曲线为线性。
主要作用于核酸，蛋白抗原性保持较好，但毒性较大。
后来改用二乙烯亚胺(Binary ethyleneimine，BEI)，其毒性较小，被广泛应用[2-5]。
FMD疫苗的免疫佐剂有氢氧化铝胶、司班、轻型矿物油。
由于疫苗佐剂的不断地更新，已由最初的水佐剂发展成现在的油佐剂，其他一些佐剂也相继问世并取得了一定的效果[6-8]。
尽管FMD灭活疫苗在FMD预防和控制上发挥了重要作用，但是灭活疫苗本身也存在许多安全隐患，国外学者先后用分子生物学方法证明欧洲暴发的FMD是因使用了灭活不彻底的抗原制备的疫苗所引起。
2活疫苗常规FMD活疫苗，是把原始强毒用生物学方法在生物媒介（如乳鼠、乳兔、鸡胚、细胞等）进行连续传代驯化。
口蹄疫疫苗研究进展
口蹄疫疫苗研究进展摘要：口蹄疫是世界性重大动物疫病之一。
接种疫苗是预防该病的重要手段之一。
而研制高质量、安全有效的疫苗，不但是决定疫苗免疫效果的关键，也是成功预防、控制直至最终消灭口蹄疫的先决条件。
目前，除传统疫苗仍然在口蹄疫防控中扮演重要角色以外，国内外诸如亚单位疫苗、栽体疫苗、核酸疫苗、基因缺失疫苗、合成肽疫苗、可饲疫苗和多表位疫苗等的研究和探索已全面展开，有望为口蹄疫的有效防控提供新的途径。
关键词：口蹄疫；疫苗；进展口蹄疫(Foot--and--mouth disease，FMD)是由FMD病毒(FMDV)引起的牛、羊、猪等偶蹄动物发生的一种急性、热性、高度接触性传染病，被0IE列为“A类烈性传染病”之首。
口蹄疫的平均致死率仅为1％，但是被感染动物会100％发病，且传播效力极高，使实际畜产量锐减。
根据0IE规定，一旦暴发FMD，所有感染和接触的动物都必需宰杀并销毁尸体。
目前，除大洋洲和北美，口蹄疫已侵袭过所有大陆。
2001年英国暴发口蹄疫损失约90亿英镑，绵羊是此病的有力传播者；我国部分地区于2005年及2009年分别暴发Asia I型和A 型FMD，不仅造成了巨大的直接经济损失，而且严重危害奶业的健康发展以及相关产品的对外贸易。
FMD是由FMDV引起的，其基因组是一条单股正链RNA，属于小核糖核酸病毒，是在发现烟草花叶病毒后发现的第一个脊椎动物病毒。
FMDV分为O、A、C、Asia 1、SATl、SAT2和SAT3共7个血清型，型间无交叉免疫反应。
目前，大多数流行口蹄疫的国家采取以常规疫苗免疫为主的措施预防口蹄疫。
近年来，随着分子生物学技术的飞速发展，FMDV新型疫苗不断涌现。
本文综述了口蹄疫常规疫苗和新型疫苗的现状，并对口蹄疫疫苗的发展进行了展望。
1 常规疫苗1.1 灭活疫苗灭活疫苗是指用物理或化学方法使口蹄疫病毒丧失感染力而保留抗原性，再添加佐剂后制成的。
1925年Belin首次用甲醛灭活牛舌皮组织病料制成了灭活疫苗；1934年Schmidt 发现了能增强灭活苗免疫效力的氢氧化铝胶佐剂，使免疫效果日趋完善。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察
收稿 日期 ： ２ ０ １ ３ ． １ １ ６
作者简介 ： 陈培赛 （ １ ９ ７ ４一） ， 男， 汉族 ， 高级兽 医师 ， 从事 重大动
物疫病防控。
１ ０
浙 江畜牧 兽 医
２ ０ １ ４年 第 １期
份猪 血清 样 品的抗 体 检测 情 况 。为方 便 对 比 ， 将 所 有样 品按 合成 肽疫 苗免 疫抗 体 阴性 、 阳性 分为 两组 ，
２ ０ １ ４年 第 １ 期
浙江 畜牧兽 医
９
猪 口蹄 疫 Ｏ型 合 成肽 疫 苗 免疫 效 果 观察
陈培赛 ， 林元 潮 ， 曾瑞 强
（ １ ． 苍 南县 畜牧兽 医局 ， 浙 江苍 南 ３ ２ ５ ８ ０ ０ ； ２ ． 苍 南县 灵 溪镇农 业综 合服 务 中心 ）
摘要： ２ ０ ０ ８ 年前， 温州市苍南县猪口蹄疫防疫主要采用常规灭活疫苗免疫预防， 免疫预防后时有出现食
重 不 良反 应 ， 最高剂量一次使用 ２ ０ ｍＬ 。而在 使 用
公 司生产 的猪 口蹄疫 Ｏ型合 成 肽疫 苗 ， 取得 了 良好 的防控效 果 ， 现将有 关情 况介 绍如 下 。
１ 猪 口蹄 疫 。 型 合成肽 疫 苗免疫效 果观 察
高 效灭 活疫 苗期 间 ， 每 年 都有 数 起 严 重 免 疫应 激 反
欲减退 、 呕吐 、 体温升高等不 良反应 ， 一定程 度上加 大 了基 层防疫员 的工作 难度 。这 就需要选 择一 种 副反应 小、 安全 、 高效 的口蹄疫疫苗用于猪 口蹄疫 的强制免疫 。苍南县 自２ ０ ０ ９年 以来在生 猪 口蹄疫 强制免疫中大面
积使用猪 口蹄疫 ０型合成肽疫苗 ， 有效提 高 了免疫 密度 和免疫质 量。 同时从 ９ ９ ２份血 清样 品检 测数 据统计 分析 ， 猪 口蹄 疫 Ｏ型合成肽疫苗和猪瘟疫苗分点 同时免疫后互不干扰 ， 效果 良好 。
口蹄疫疫苗研究进展
口蹄疫疫苗研究进展摘要对口蹄疫疫苗的研制历史和不同疫苗的特性进行了综述，以期为疫苗的合理应用提供技术帮助。
关键词口蹄疫；疫苗；研究进展口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）所引起的偶蹄家畜的急性传染病，羊、猪和牛都可患此病，有时还可以传染给人，其特征是在口腔黏膜和鼻、蹄、乳头等部位皮肤形成水泡和烂斑。
本病传播迅速，危害性强，被世界动物卫生组织（OIE）列为国际动物贸易间必须检疫的A类动物传染病，我国农业部也将其划定为一类动物传染病，本病也是最具政治经济色彩的烈性动物疫病。
因此，各国都在致力于控制和消灭口蹄疫的工作，而对大多数国家来说，疫苗免疫是防控本病的关键措施。
口蹄疫疫苗的研制最早由Belin（1927）在20世纪初期提出，到20世纪40年代达到了广泛研究的程度。
第一个应用的灭活疫苗是Waldmann等（1937）用人工感染的牛舌上皮和水泡液中的病毒制得，应用牛舌上皮细胞需要收集足够的细胞材料，并且整个收集过程要求保持无菌，这促进了对适宜细胞系的研究。
1947～1954年Frenkel在牛舌上皮细胞增殖FMD获得成功，方法简单，价格低廉。
1965年Telling和Elsworth开始用发酵罐大量生产悬浮细胞，现在几乎所有的FMD疫苗都以这种方法生产。
口蹄疫疫苗的灭活最初使用甲醛，但研究证明该方法有活病毒残留，而且甲醛灭活FMDV后，有效免疫抗原146S病毒粒子损失较大。
1959年Brown和Crick首先用乙酰乙烯亚胺（AEI）灭活病毒制造疫苗[1]，1975年Bahnemann首创了口蹄疫的二乙烯亚胺（BEl）灭活苗[2]，现今广泛应用的灭活剂主要还是以乙酰乙烯亚胺（AEI）、二乙烯亚胺（BEl）和β－丙内脂为基础。
目前应用于商品疫苗大规模生产FMD病毒抗原的技术有3种：①牛舌上皮组织生产的Frenkel培养法；②在转瓶单层BHK-21传代细胞上生产的单层培养法；③在发酵罐中BHK-21传代细胞上生产的悬浮培养法。
口蹄疫基因工程疫苗研究进展
口蹄疫基因工程疫苗研究进展宋昌霖１，２（１．甘肃农业大学，兰州 ７３００７０；２．中牧实业股份有限公司兰州生物药厂，兰州 ７３００４６）摘要：口蹄疫是感染偶蹄动物的急性、热性、高度接触性传染病，预防的该病的首要方式为疫苗接种。
传统口蹄疫疫苗存在长期带毒、毒力返强等不安全因素，因此新型疫苗的研制迫在眉睫。
就新型口蹄疫疫苗的研究进展进行了综述。
关键词：口蹄疫；新型疫苗；构建；效力中图分类号：Ｓ８５１．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０１４）０５－００７３－０１ 口蹄疫（Ｆｏｏｔａｎｄｍｏｕｔｈｄｉｓｅａｓｅ，ＦＭＤ）是猪、牛、羊等主要家畜和其他家养、野生偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病，曾多次在世界范围内暴发流行，造成巨大政治、经济损失。
鉴于此，世界动物卫生组织（ＯＩＥ）将其列为Ａ类传染病之首。
疫苗接种是预防口蹄疫的重要手段，安全、高效的疫苗是预防口蹄疫发生先决条件。
传统口蹄疫疫苗多为灭活疫苗和弱毒疫苗，但此类疫苗由于面临长期带毒、毒性较大、产生抗体缓慢和毒力返强等不安全因素，国内外研究者致力于研究新型疫苗以解决传统口蹄疫所产生的问题。
本文就新型口蹄疫苗研究进展作详细阐述。
１ 活载体疫苗口蹄疫活载体疫苗是利用基因杂交技术将ＦＭＤＶ的主要抗原基因插入某种缺陷病毒的基因组中构建而成的重组病毒，该重组病毒能在动物细胞内表达ＦＭ ＤＶ抗原蛋白，刺激机体产生免疫反应。
如腺病毒、痘病毒以及由痘病毒衍生而来的非复制型载体［１］。
因为口蹄疫病毒是通过呼吸道感染的，而且容易形成持续感染，所以研制黏膜免疫疫苗也是重点，例如沙门氏菌、分枝结核杆菌作载体的活载体疫苗。
活载体疫苗是近年口蹄疫新型疫苗研究的热点之一。
１．１ 口蹄疫重组腺病毒载体疫苗贾俊涛等［２］等究选择Ｏ型ＦＭＤＶＶＰＩ基因上保守序列作为可能的干扰位点，合成了ｓｉＲＮＡ，重组表达载体ｐＳｈｕｔｔｌｅ－ＶＰｌ。
将ｒＡｄｅｎｏ－ＶＰｌ感染ＩＢＲＳ－２细胞后，１２ｈ后再加入１００ＴＣＩＤ５０的ＦＭＤＶＯ／ＨＫＮ／２００３。
兽医公共卫生-国内口蹄疫流行毒株及疫苗研究进展
对我国形成威胁的外来口蹄疫病毒 主要来自东南亚、南亚和西亚- 中东等 地区。
该 3 个区域是目前全球 FMD 疫情 发生最为频繁的地区，主要流行O型、 A 型和Asia1 型 。
全球口蹄疫流行圈和血清型分布 来源：OIE
外来流行毒株与传入路线
（何继军等，中国动物检疫，2018）
源自东南亚毒株： A 型东南亚97（A/Sea97）毒株G1 分支和G2 分支， 分别于2009 年和 2013 年传入我国；O 型缅甸 98 （O/Mya-98）毒株， 于 2010 年传入我国 。
猪口蹄疫 O 型、A 型 二 价 灭 活 疫 苗 （Re-O/MYA98/JSCZ/2013 株 +Re-A/WH/09 株）
Re-A/WH/09 株是利用高复制力型的 3'UTR 和 3D 基因构建了制苗种毒拯救框架，同时对 A 型 Sea-97 毒株结构蛋白 P1 基因进行突变修饰，改变了影响病毒 结构稳定性的关键氨基酸编码，并将其克 隆至上述病毒 拯救框架，制备出 Sea-97 株重组病毒 Re-A/WH/09；
缺点：亚单位苗与全病毒疫苗比免疫原性差，需经多次免疫才能获得有效保护。
2. 核酸疫苗
将病原基因克隆入真核表达载体上，经筛选后，获得正确的重组质粒，免疫动物后，外 源病原基因可在动物机体表达，激活针对该病原的免疫应答反应，这类疫苗称为核酸疫苗。
王晓虎等构建了单独含 FMDV VP1、 VP4基因及同时含两种基因的的重组核酸疫苗，将3 种核酸疫苗免疫动物后，检测免疫原性，结果显示，这3 种疫苗质粒均能刺激机体产生中和 抗体，且具有一定的保护效力。VP1单表达组和联合组保护率均为28.6%， 共表达组和融合表 达组保护率均为 42.9%，灭活疫苗组保护率为100%， 空载体组保护率为0。
该 3 个区域是目前全球 FMD 疫情 发生最为频繁的地区，主要流行O型、 A 型和Asia1 型 。
全球口蹄疫流行圈和血清型分布 来源：OIE
外来流行毒株与传入路线
（何继军等，中国动物检疫，2018）
源自东南亚毒株： A 型东南亚97（A/Sea97）毒株G1 分支和G2 分支， 分别于2009 年和 2013 年传入我国；O 型缅甸 98 （O/Mya-98）毒株， 于 2010 年传入我国 。
猪口蹄疫 O 型、A 型 二 价 灭 活 疫 苗 （Re-O/MYA98/JSCZ/2013 株 +Re-A/WH/09 株）
Re-A/WH/09 株是利用高复制力型的 3'UTR 和 3D 基因构建了制苗种毒拯救框架，同时对 A 型 Sea-97 毒株结构蛋白 P1 基因进行突变修饰，改变了影响病毒 结构稳定性的关键氨基酸编码，并将其克 隆至上述病毒 拯救框架，制备出 Sea-97 株重组病毒 Re-A/WH/09；
缺点：亚单位苗与全病毒疫苗比免疫原性差，需经多次免疫才能获得有效保护。
2. 核酸疫苗
将病原基因克隆入真核表达载体上，经筛选后，获得正确的重组质粒，免疫动物后，外 源病原基因可在动物机体表达，激活针对该病原的免疫应答反应，这类疫苗称为核酸疫苗。
王晓虎等构建了单独含 FMDV VP1、 VP4基因及同时含两种基因的的重组核酸疫苗，将3 种核酸疫苗免疫动物后，检测免疫原性，结果显示，这3 种疫苗质粒均能刺激机体产生中和 抗体，且具有一定的保护效力。VP1单表达组和联合组保护率均为28.6%， 共表达组和融合表 达组保护率均为 42.9%，灭活疫苗组保护率为100%， 空载体组保护率为0。
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２ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 研 究 进 展
２．１ 抗 原 位 点 的 选 择 早在１９８２年，第一 例 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 诞 生 的
时候，其研 制 者 Ｂｉｔｔｌｅ Ｊ Ｌ 等 便 ［１］ 将 由 人 工 合 成 的 ＦＭＤＶ Ｏ 型 ＶＰ１第１４１～１６０位氨基酸合成肽段以 共价 键 结 合 于 钥 孔 戚 血 蓝 蛋 白 （ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅ－ ｍａｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）上 制 备 合 成 肽 疫 苗，试 验 证 明，其 能够诱导足够的抗体并对牛和猪起到保护作用。这 使其成为 ＦＭＤ 乃至整 个 动 物 疫 病 合 成 肽 疫 苗 研 究 的开端。他们随 后 又 按 照 相 同 方 法，将 能 够 引 起 实 验动物产生较强免 疫 应 答 的 抗 原 表 位 定 格 于 第 １４１ ～１６０位和２００～２１３ 位 氨 基 酸 范 围 以 内［２］。Ｆｒａｎ－ ｃｉｓ Ｍ Ｊ等［３］的研 究 中 发 现 在 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 第 １４６～ １５６ 位 肽 段 上 不 但 含 有 中 和 表 位，且 其 末 端 处 的 羟
２．２ 空 间 构 象 的 研 究 为了使合成肽段经折叠后能够形成一定的空间
构象，更 接 近 天 然 抗 原 表 位，Ｄｉｍａｒｃｈ Ｒ 等 在 ［８］ 之 前 只 合 成 ２０ 个 氨 基 酸 小 肽 研 究 的 基 础 上 ，又 串 联 增 加 了 第 ２００～２１３ 位 氨 基 酸 ，并 首 次 采 用 两 个 脯 氨 酸 和 一个丝氨酸（Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ）作 为 衔 接，其 结 果 显 示 合 成肽疫 苗 的 免 疫 原 性 获 得 极 大 增 强。Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ 等 报 ［９］ 道了 以 多 抗 原 肽 系 统 向 免 疫 系 统 提 呈 ＦＭ－ ＤＶ ＶＰ１ １４０～１６０位点 的 二 聚 体、四 聚 体 和 八 聚 体 结构比仅串联 重 复 结 构 具 有 更 强 的 免 疫 原 性，且 四 聚体比二聚体要强５倍～１０倍。Ｂｅｎｋｉｒａｎｅ Ｎ 等［１０］ 利用 Ｄ 氨基酸合成了一系列针对 ＦＭＤＶ Ｇ－Ｈ 环 区 域 的 主 要 抗 原 多 肽 ，称 之 为 反 转 型 多 肽 （ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒ－ ｓｏ，ＲＩ）。配 以 含 有 单 磷 酰 脂 Ａ 的 小 单 层 脂 质 体 为 佐剂，免疫 研 究 表 明，其 比 天 然 Ｌ－型 肽 诱 导 的 血 清 抗体滴度水平更 高、更 持 久 且 更 加 稳 定。 随 后，Ｂｒｉ－ ａｎｄ Ｊ Ｐ 等 在 ［１１］ 相关试验中发现 ＲＩ多肽诱导动物所 产生的保 护 性 抗 体 与 天 然 抗 原 或 Ｌ－氨 基 酸 合 成 肽 也具有良好的反应性。
在预测的１７个抗 原 决 定 簇 中 有 ６ 个 能 与 免 疫 血 清 发生 反 应，分 别 为 ＶＰ１ １－１２、１７－２９、１９４－２１１，ＶＰ２ ４０－５０，ＶＰ３ ２６－３９ 及 ＶＰ４ ３０－４１ 位 氨 基 酸。 该 成 果 为 Ａｓｉａ１ 型 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 研 究 奠 定 了 基础。Ｙａｎｇ Ｄ 等［７］利用一株特异 性 单 克 隆 抗 体，通 过噬菌体展示系 统 筛 选 出 了 一 段 在 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 各 亚型间均 高 度 保 守 的 线 性 抗 原 表 位，为 今 后 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 亚型间 交 叉 保 护 性 合 成 肽 疫 苗 的 研 制 提 供 了宝贵思路。
多种方式接种，再 配 以 适 当 佐 剂 使 机 体 产 生 更 为 有 效的免疫应答；③ 利 用 非 疫 苗 用 抗 原 肽 建 立 的 诊 断 方法可对疫苗免疫和自然感染动物进行有效区分； ④合成肽疫苗 安 全 可 靠，便 于 长 期 贮 存，质 量 可 控， 能有效避免不良 反 应 的 发 生，且 投 入 少，成 本 低，更 适宜规模生 产。ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 弥 补 了 目 前 传 统 ＦＭＤ 疫苗所存在的 诸 多 不 足，成 为 ＦＭＤ 疫 苗 发 展 的主要趋势之一。
李 婷 婷 等 ：口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 研 究 进 展
７７
基残基可能形成了 Ｔ 细 胞 表 位，无 需 载 体 与 佐 剂 的 协助即可自行激发机体中和抗体的产生。而 Ｚａｍｏ－ ｒａｎｏ Ｐ 等［４］进一步 证 明 了 在 １３５～１６０ 区 域 内 有 至 少４ 个 不 连 续 的 抗 体 中 和 位 点 的 存 在 ，分 别 为１３５～ １４４、１４０～１４９、１４５～１５４ 和 １５０～１６０ 位 氨 基 酸，并 制备了合 成 肽 疫 苗。 后 来，Ｗａｎｇ Ｃ Ｙ 等 将 ［５］ 外 源 Ｔｈ位点引入 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 中，拓 宽 了 合 成 肽 疫 苗在多个物种 的 免 疫 原 性，并 使 其 对 不 同 病 毒 株 的 交叉反应性得到了进一步优化。Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｗ 等 运 ［６］ 用生物信息学方法通过软件系统对 Ａｓｉａ１型 ＦＭＤＶ 结构蛋白序列的抗原位点进行了分析。经试验验证
２．４ 免 疫 佐 剂 的 优 化 Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ等 在 ［２０］ 研 究 中 尝 试 应 用 了 多 种 佐
１ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 优 势
与传统疫苗相比，ＦＭＤ 合成肽疫苗的设计研发 直接锁定 ＦＭＤＶ 不 同 血 清 型 病 毒 株 抗 原 表 位 氨 基 酸序列的自身特点，其主要具备以下优势：① 既可以 随时根据流行毒株的变化情况对抗原肽进行调整， 也可使用一些保守序列或多种不同保护性抗原序列 进行抗原肽的 合 成，从 而 使 合 成 肽 疫 苗 所 诱 导 产 生 的免疫应答更具 有 特 异 性 以 及 广 谱 性；② 除 传 统 免 疫 途 径 外 ，合 成 肽 疫 苗 还 可 通 过 鼻 内 、口 腔 和 皮 肤 等
摘 要：口蹄疫（ＦＭＤ）是一种严 重 威 胁 世 界 畜 牧 业 发 展 和 国 际 进 出 口 贸 易 的 重 大 传 染 病。 尽 管 ＦＭＤ 传 统 疫 苗 在 免 疫 效 力 上 具 有 一 定 优 势 ，但 其 自 身 仍 存 在 诸 多 弊 端 及 隐 患 。 随 着 分 子 生 物 学 技 术 的 飞 速 发 展 ， 及其在兽医领域不断取得的创新性应用，ＦＭＤ 合成肽疫苗作为新型基因 工 程 疫 苗 的 一 种，以 其 具 有 更 为 广 谱的特异性、更加安全稳定、经济实 用 等 特 点，现 已 成 为 ＦＭＤ 研 究 领 域 的 主 要 热 点 及 方 向。 论 文 从 抗 原 位 点的选择、空间构象的研究、疫苗载体的探索以及免疫佐剂的优化等多方面对 ＦＭＤ 合成肽疫苗的发展过程 及其研究进展进行了深入探讨，旨在为 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 发 展 以 及 其 他 病 原 微 生 物 合 成 肽 疫 苗 的 深入研究提供借鉴。 关 键 词 ：口 蹄 疫 ；合 成 肽 疫 苗 ；抗 原 表 位
收 稿 日 期 ：２０１１－１２－２２ 基金项目：国家科技支撑计划（２００６ＢＡＤ０６Ａ１７－０８）；现代农业产业技术体系（奶 牛）建 设 专 项 资 金 资 助 （ＣＡＲＳ－３７）；黑 龙
江 省 重 大 科 技 计 划 （ＧＡ０６Ｂ２０２，ＧＡ０９Ｂ３０２）
作 者 简 介 ：李 婷 婷 （１９８５－ ），女 ，黑 龙 江 五 常 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 兽 医 免 疫 学 和 生 物 制 品 学 研 究 。 ＊ 通 讯 作 者
２．３ 疫 苗 载 体 的 探 索 为提高抗原的递 呈 速 度 及 效 果，赵 凯 等 以 ［１２］ 猪
自体免疫球 蛋 白 ＩｇＧ Ｈ 链 作 为 外 源 抗 原 载 体 制 备 合成肽疫苗，对豚鼠、猪 等 起 到 了 保 护 作 用。Ｙｉ Ｊ Ｚ 等 用 ［１３］ 牛ＩｇＧ 重链恒定区作为载体蛋白，在其 Ｎ 端 和 Ｃ 端分别连上 Ｏ 型和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 抗原决定簇串
联片段，其 结 果 使 抗 Ｏ 型 和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 双 价 基 因 工程合成肽疫苗的 免 疫 效 果 大 大 提 高。Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｌ 等 报 ［１４］ 道，与 ＧＳＴ 融合表达相比，以缺失ｃ／ｅ１区域 ７５～８２ 位 氨 基 酸 的 乙 肝 病 毒 核 心 为 载 体 表 达 的 ＦＭＤＶ 表位串 联 肽 具 有 更 高 的 抗 原 肽 特 异 性 和 病 毒特异性抗体滴度。同年，Ｓｕ Ｃ Ｘ 等 则 ［１５］ 以结核 分 支杆 菌 热 休 克 蛋 白 ７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ７０， ＨＳＰ７０）作为载体融合表达了一种 ＦＭＤＶ 多表位合 成肽，不但诱导了更为显著的体液和细胞免疫应 答， 而且 促 进 了 ＩＬ－４ 和 ＩＦＮ－γ 的 分 泌。 随 后，Ｄｕ Ｙ Ｊ 等 以 ［１６］ 腺病毒为载体将 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 上 ３ 段 不 同 氨 基酸残基序列与猪ＩＦＮ－α进行融合表达。 其免疫反 应结果要明显高于３段残基序列与干扰素的混合物 组。Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｄ Ｌ Ｖ 等［１７］尝 试 以 惰 性 纳 米 磁 珠 为载体，制备的 多 种 合 成 肽 疫 苗 均 可 诱 导 动 物 产 生 显著 的 细 胞 免 疫 和 体 液 免 疫 反 应。Ｃｈｅｎ Ｙ Ｓ 等［１８］ 将不同直径大小 的 金 纳 米 颗 粒 （ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ， ＧＮＰｓ）作 为 一 种 体 积 依 赖 性 载 体 引 入 到 合 成 肽 疫 苗 的研制中，结果证明 ＧＮＰｓ的最优直径为８ｎｍ ～１７ ｎｍ，且免 疫 血 清 中 抗 体 含 量 为 以 相 同 抗 原 肽 连 接 ＫＬＨ 载体所诱 导 产 生 抗 体 反 应 的 ３ 倍。Ａｌｅｊａｎｄｒａ Ｖ 等 以 ［１９］ 水 疱 性 口 炎 病 毒 糖 蛋 白 （ＶＳＶ－Ｇ）作 为 载 体，将 ＦＭＤＶ 结 构 蛋 白 主 要 抗 原 位 点 ＡＳＡ（ＶＰ１ １３９～１４９ 位 氨 基 酸 ）的 串 联 二 聚 体 合 成 肽 与 其 相 连，免疫牛后结果显示，暴露在 ＶＳＶ－Ｇ 序 列 Ｎ 末 端 的 ＦＭＤＶ－ＶＰ１主要中和 抗 原 位 点 能 够 作 为 有 效 的 肽疫苗突破常规的免疫局限。
２．１ 抗 原 位 点 的 选 择 早在１９８２年，第一 例 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 诞 生 的
时候，其研 制 者 Ｂｉｔｔｌｅ Ｊ Ｌ 等 便 ［１］ 将 由 人 工 合 成 的 ＦＭＤＶ Ｏ 型 ＶＰ１第１４１～１６０位氨基酸合成肽段以 共价 键 结 合 于 钥 孔 戚 血 蓝 蛋 白 （ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅ－ ｍａｃｙａｎｉｎ，ＫＬＨ）上 制 备 合 成 肽 疫 苗，试 验 证 明，其 能够诱导足够的抗体并对牛和猪起到保护作用。这 使其成为 ＦＭＤ 乃至整 个 动 物 疫 病 合 成 肽 疫 苗 研 究 的开端。他们随 后 又 按 照 相 同 方 法，将 能 够 引 起 实 验动物产生较强免 疫 应 答 的 抗 原 表 位 定 格 于 第 １４１ ～１６０位和２００～２１３ 位 氨 基 酸 范 围 以 内［２］。Ｆｒａｎ－ ｃｉｓ Ｍ Ｊ等［３］的研 究 中 发 现 在 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 第 １４６～ １５６ 位 肽 段 上 不 但 含 有 中 和 表 位，且 其 末 端 处 的 羟
２．２ 空 间 构 象 的 研 究 为了使合成肽段经折叠后能够形成一定的空间
构象，更 接 近 天 然 抗 原 表 位，Ｄｉｍａｒｃｈ Ｒ 等 在 ［８］ 之 前 只 合 成 ２０ 个 氨 基 酸 小 肽 研 究 的 基 础 上 ，又 串 联 增 加 了 第 ２００～２１３ 位 氨 基 酸 ，并 首 次 采 用 两 个 脯 氨 酸 和 一个丝氨酸（Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ）作 为 衔 接，其 结 果 显 示 合 成肽疫 苗 的 免 疫 原 性 获 得 极 大 增 强。Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ 等 报 ［９］ 道了 以 多 抗 原 肽 系 统 向 免 疫 系 统 提 呈 ＦＭ－ ＤＶ ＶＰ１ １４０～１６０位点 的 二 聚 体、四 聚 体 和 八 聚 体 结构比仅串联 重 复 结 构 具 有 更 强 的 免 疫 原 性，且 四 聚体比二聚体要强５倍～１０倍。Ｂｅｎｋｉｒａｎｅ Ｎ 等［１０］ 利用 Ｄ 氨基酸合成了一系列针对 ＦＭＤＶ Ｇ－Ｈ 环 区 域 的 主 要 抗 原 多 肽 ，称 之 为 反 转 型 多 肽 （ｒｅｔｒｏ－ｉｎｖｅｒ－ ｓｏ，ＲＩ）。配 以 含 有 单 磷 酰 脂 Ａ 的 小 单 层 脂 质 体 为 佐剂，免疫 研 究 表 明，其 比 天 然 Ｌ－型 肽 诱 导 的 血 清 抗体滴度水平更 高、更 持 久 且 更 加 稳 定。 随 后，Ｂｒｉ－ ａｎｄ Ｊ Ｐ 等 在 ［１１］ 相关试验中发现 ＲＩ多肽诱导动物所 产生的保 护 性 抗 体 与 天 然 抗 原 或 Ｌ－氨 基 酸 合 成 肽 也具有良好的反应性。
在预测的１７个抗 原 决 定 簇 中 有 ６ 个 能 与 免 疫 血 清 发生 反 应，分 别 为 ＶＰ１ １－１２、１７－２９、１９４－２１１，ＶＰ２ ４０－５０，ＶＰ３ ２６－３９ 及 ＶＰ４ ３０－４１ 位 氨 基 酸。 该 成 果 为 Ａｓｉａ１ 型 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 研 究 奠 定 了 基础。Ｙａｎｇ Ｄ 等［７］利用一株特异 性 单 克 隆 抗 体，通 过噬菌体展示系 统 筛 选 出 了 一 段 在 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 各 亚型间均 高 度 保 守 的 线 性 抗 原 表 位，为 今 后 Ｏ 型 ＦＭＤＶ 亚型间 交 叉 保 护 性 合 成 肽 疫 苗 的 研 制 提 供 了宝贵思路。
多种方式接种，再 配 以 适 当 佐 剂 使 机 体 产 生 更 为 有 效的免疫应答；③ 利 用 非 疫 苗 用 抗 原 肽 建 立 的 诊 断 方法可对疫苗免疫和自然感染动物进行有效区分； ④合成肽疫苗 安 全 可 靠，便 于 长 期 贮 存，质 量 可 控， 能有效避免不良 反 应 的 发 生，且 投 入 少，成 本 低，更 适宜规模生 产。ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 弥 补 了 目 前 传 统 ＦＭＤ 疫苗所存在的 诸 多 不 足，成 为 ＦＭＤ 疫 苗 发 展 的主要趋势之一。
李 婷 婷 等 ：口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 研 究 进 展
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基残基可能形成了 Ｔ 细 胞 表 位，无 需 载 体 与 佐 剂 的 协助即可自行激发机体中和抗体的产生。而 Ｚａｍｏ－ ｒａｎｏ Ｐ 等［４］进一步 证 明 了 在 １３５～１６０ 区 域 内 有 至 少４ 个 不 连 续 的 抗 体 中 和 位 点 的 存 在 ，分 别 为１３５～ １４４、１４０～１４９、１４５～１５４ 和 １５０～１６０ 位 氨 基 酸，并 制备了合 成 肽 疫 苗。 后 来，Ｗａｎｇ Ｃ Ｙ 等 将 ［５］ 外 源 Ｔｈ位点引入 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 中，拓 宽 了 合 成 肽 疫 苗在多个物种 的 免 疫 原 性，并 使 其 对 不 同 病 毒 株 的 交叉反应性得到了进一步优化。Ｚｈａｎｇ Ｚ Ｗ 等 运 ［６］ 用生物信息学方法通过软件系统对 Ａｓｉａ１型 ＦＭＤＶ 结构蛋白序列的抗原位点进行了分析。经试验验证
２．４ 免 疫 佐 剂 的 优 化 Ｆｒａｎｃｉｓ Ｍ Ｊ等 在 ［２０］ 研 究 中 尝 试 应 用 了 多 种 佐
１ 口 蹄 疫 合 成 肽 疫 苗 的 优 势
与传统疫苗相比，ＦＭＤ 合成肽疫苗的设计研发 直接锁定 ＦＭＤＶ 不 同 血 清 型 病 毒 株 抗 原 表 位 氨 基 酸序列的自身特点，其主要具备以下优势：① 既可以 随时根据流行毒株的变化情况对抗原肽进行调整， 也可使用一些保守序列或多种不同保护性抗原序列 进行抗原肽的 合 成，从 而 使 合 成 肽 疫 苗 所 诱 导 产 生 的免疫应答更具 有 特 异 性 以 及 广 谱 性；② 除 传 统 免 疫 途 径 外 ，合 成 肽 疫 苗 还 可 通 过 鼻 内 、口 腔 和 皮 肤 等
摘 要：口蹄疫（ＦＭＤ）是一种严 重 威 胁 世 界 畜 牧 业 发 展 和 国 际 进 出 口 贸 易 的 重 大 传 染 病。 尽 管 ＦＭＤ 传 统 疫 苗 在 免 疫 效 力 上 具 有 一 定 优 势 ，但 其 自 身 仍 存 在 诸 多 弊 端 及 隐 患 。 随 着 分 子 生 物 学 技 术 的 飞 速 发 展 ， 及其在兽医领域不断取得的创新性应用，ＦＭＤ 合成肽疫苗作为新型基因 工 程 疫 苗 的 一 种，以 其 具 有 更 为 广 谱的特异性、更加安全稳定、经济实 用 等 特 点，现 已 成 为 ＦＭＤ 研 究 领 域 的 主 要 热 点 及 方 向。 论 文 从 抗 原 位 点的选择、空间构象的研究、疫苗载体的探索以及免疫佐剂的优化等多方面对 ＦＭＤ 合成肽疫苗的发展过程 及其研究进展进行了深入探讨，旨在为 ＦＭＤ 合 成 肽 疫 苗 的 进 一 步 发 展 以 及 其 他 病 原 微 生 物 合 成 肽 疫 苗 的 深入研究提供借鉴。 关 键 词 ：口 蹄 疫 ；合 成 肽 疫 苗 ；抗 原 表 位
收 稿 日 期 ：２０１１－１２－２２ 基金项目：国家科技支撑计划（２００６ＢＡＤ０６Ａ１７－０８）；现代农业产业技术体系（奶 牛）建 设 专 项 资 金 资 助 （ＣＡＲＳ－３７）；黑 龙
江 省 重 大 科 技 计 划 （ＧＡ０６Ｂ２０２，ＧＡ０９Ｂ３０２）
作 者 简 介 ：李 婷 婷 （１９８５－ ），女 ，黑 龙 江 五 常 人 ，硕 士 研 究 生 ，主 要 从 事 兽 医 免 疫 学 和 生 物 制 品 学 研 究 。 ＊ 通 讯 作 者
２．３ 疫 苗 载 体 的 探 索 为提高抗原的递 呈 速 度 及 效 果，赵 凯 等 以 ［１２］ 猪
自体免疫球 蛋 白 ＩｇＧ Ｈ 链 作 为 外 源 抗 原 载 体 制 备 合成肽疫苗，对豚鼠、猪 等 起 到 了 保 护 作 用。Ｙｉ Ｊ Ｚ 等 用 ［１３］ 牛ＩｇＧ 重链恒定区作为载体蛋白，在其 Ｎ 端 和 Ｃ 端分别连上 Ｏ 型和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 抗原决定簇串
联片段，其 结 果 使 抗 Ｏ 型 和 Ａ 型 ＦＭＤＶ 双 价 基 因 工程合成肽疫苗的 免 疫 效 果 大 大 提 高。Ｚｈａｎｇ Ｙ Ｌ 等 报 ［１４］ 道，与 ＧＳＴ 融合表达相比，以缺失ｃ／ｅ１区域 ７５～８２ 位 氨 基 酸 的 乙 肝 病 毒 核 心 为 载 体 表 达 的 ＦＭＤＶ 表位串 联 肽 具 有 更 高 的 抗 原 肽 特 异 性 和 病 毒特异性抗体滴度。同年，Ｓｕ Ｃ Ｘ 等 则 ［１５］ 以结核 分 支杆 菌 热 休 克 蛋 白 ７０（Ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ７０， ＨＳＰ７０）作为载体融合表达了一种 ＦＭＤＶ 多表位合 成肽，不但诱导了更为显著的体液和细胞免疫应 答， 而且 促 进 了 ＩＬ－４ 和 ＩＦＮ－γ 的 分 泌。 随 后，Ｄｕ Ｙ Ｊ 等 以 ［１６］ 腺病毒为载体将 ＦＭＤＶ ＶＰ１ 上 ３ 段 不 同 氨 基酸残基序列与猪ＩＦＮ－α进行融合表达。 其免疫反 应结果要明显高于３段残基序列与干扰素的混合物 组。Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｄ Ｌ Ｖ 等［１７］尝 试 以 惰 性 纳 米 磁 珠 为载体，制备的 多 种 合 成 肽 疫 苗 均 可 诱 导 动 物 产 生 显著 的 细 胞 免 疫 和 体 液 免 疫 反 应。Ｃｈｅｎ Ｙ Ｓ 等［１８］ 将不同直径大小 的 金 纳 米 颗 粒 （ｇｏｌｄ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ， ＧＮＰｓ）作 为 一 种 体 积 依 赖 性 载 体 引 入 到 合 成 肽 疫 苗 的研制中，结果证明 ＧＮＰｓ的最优直径为８ｎｍ ～１７ ｎｍ，且免 疫 血 清 中 抗 体 含 量 为 以 相 同 抗 原 肽 连 接 ＫＬＨ 载体所诱 导 产 生 抗 体 反 应 的 ３ 倍。Ａｌｅｊａｎｄｒａ Ｖ 等 以 ［１９］ 水 疱 性 口 炎 病 毒 糖 蛋 白 （ＶＳＶ－Ｇ）作 为 载 体，将 ＦＭＤＶ 结 构 蛋 白 主 要 抗 原 位 点 ＡＳＡ（ＶＰ１ １３９～１４９ 位 氨 基 酸 ）的 串 联 二 聚 体 合 成 肽 与 其 相 连，免疫牛后结果显示，暴露在 ＶＳＶ－Ｇ 序 列 Ｎ 末 端 的 ＦＭＤＶ－ＶＰ１主要中和 抗 原 位 点 能 够 作 为 有 效 的 肽疫苗突破常规的免疫局限。