猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验
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猪口蹄疫0型、A型二价合成肽疫苗(多肽2700 +2800 +MM13)的动物检验陈智英张改平张震亓子明徐雪莫岩杨征勤徐杨(申联生物医药(上海)股份有限公司上海200241 )[摘要]通过接种小鼠、豚鼠和仔猪,检验3个批次猪口蹄疫0型、A型二价合成肽疫苗的安 全性和免疫效力。
检验结果表明:3批疫苗对小鼠、豚鼠未见任何局部和全身反应,对仔猪未出现 任何口蹄疫症状和因注射疫苗引起的毒性反应。
3批疫苗每头份的PD5。
为13. 59$15. 59,疫苗攻 毒保护效力批次间稳定且高于我国口蹄疫疫苗6PD5。
/头份的质量标准。
关键词:口蹄疫& 0型&A型;二价;合成肽疫苗;动物检验口蹄疫(Foot-and-mouth disease,F M D)是偶蹄 动物携带的一种急性、热性和高度接触性传染病,由小R N A病毒科(Picornaviridae) 口蹄疫病毒属(A夕的口蹄疫病毒w而,E M O T)所引起1-该病一旦发生,传播速 度很快,不易控制和消灭,严重危害养殖业健康发展,带来严重的经济损失[23]-世界卫生组织将其列为必 须上报的A类疫病,我国将其列人一类动物疫病。
目前对口啼疫的防治主要依靠疫苗的免疫预防,我国采取的是强制免疫措施。
临床上主要使用 病毒灭活疫苗和合成肽疫苗对易感动物进行防治。
合成肽疫苗存在无须操作全病毒、安全性高、稳定 性好、生产工艺简单等优点,是一种有效预防口蹄疫疫病的疫苗4。
为保证合成肽疫苗在生产实践中安全有效的应用,疫苗的质量控制至关重要。
国际上通用的疫 苗效力检测方法是本动物攻毒试验,欧洲国家多采用 50%保护剂量(50%protective doses,PD50)测定 法,南美国家多采用疫苗保护百分率(percentage of protection against generalized foot infection,PGP)测定法/]。
动物免疫攻毒保护试验是当前检验疫苗 效力的客观、有效手段。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果试验作者:邓广金来源:《湖北畜牧兽医》2009年第07期摘要:为了更好地了解猪口蹄疫O型合成肽疫苗与灭活疫苗免疫后抗体水平之间的差异,在梅州市选择2个规模化养猪场,每个猪场分2组,对试验猪分别免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗和猪口蹄疫O型灭活疫苗,对接种疫苗的试验猪进行免疫应激观察,结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应,说明用合成肽疫苗临床使用的安全性较高;采用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒和正向间接血凝试验分别对使用上述两种口蹄疫疫苗免疫21d后的猪血清进行检测,结果表明:免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗用猪O型口蹄疫VP1抗体检测试剂盒检测,抗体阳性合格率达到92.50%,免疫猪口蹄疫O型灭活疫苗用正向间接血凝试验检测,免疫合格率为35.83%,说明猪口蹄疫O型合成肽疫苗接种后的免疫效果明显优于传统灭活疫苗。
关键词:合成肽疫苗;口蹄疫;抗体;正向间接血凝试验中图分类号:S852.5+2文献标识码:A文章编号:1007-273X(2009)07-0028-02口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害偶蹄兽,偶见于人和其他动物。
临床上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮肤发生水疱和溃疡为主要特征。
该病具有强烈的传染性,一旦发病,传播速度很快,往往造成大流行,不容易控制和消灭,带来严重的经济损失。
因此,世界动物卫生组织(OIE)一直将该病列为发病必须报告的A类动物疫病名单之首[1]。
目前对该病的防制主要是采用强制免疫、禁运、扑杀、消毒、封锁等措施,而免疫接种是最主要的也是最经济的防控措施。
目前,主要是研制和应用灭活疫苗[2],但该类灭活苗干扰因素多,对野毒与疫苗产生的抗体鉴别困难,而且疫苗的自身缺陷使之无法克服过敏反应和带毒的生物安全隐患问题[3],故许多学者把免疫谱广、免疫持续期长、安全性好的新型疫苗作为目前口蹄疫的主要研制方向。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗是用固相多肽合成技术在体外人工合成含有口蹄疫病毒主要抗原位点的多肽[4],并连接人工合成的可激活辅助性T细胞的短肽,以此作为免疫原与进口佐剂混合乳化制成,能够很好的预防猪O型口蹄疫的发生。
免疫猪O型合成肽疫苗对怀孕、泌乳母猪的影响摘要为研究猪口蹄疫O型合成肽疫苗在母猪免疫上的应用,选择3个猪场怀孕1~90 d的母猪57头,怀孕90~110 d的母猪30头,泌乳母猪41头,使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗(多肽2570+7309)进行免疫。
首免1.5 mL/头,间隔4周后二免2.0 mL/头,跟踪观察120 d。
结果表明:所有免疫母猪均未出现食欲减退、体温升高、流产、产死胎、停乳等不良反应,所有母猪的健康状况均良好,妊娠母猪产活仔率高达99%。
说明猪口蹄疫O型合成肽疫苗(多肽2570+7309)可安全使用于不同阶段的泌乳、怀孕母猪。
关键词怀孕母猪;泌乳母猪;猪口蹄疫O型合成肽疫苗;免疫反应口蹄疫是由口蹄疫病毒所引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要特征是在口腔黏膜、蹄部、乳房、皮肤出现水疱,继而发生溃疡的一类传播速度极快的传染病[1]。
该病流行快,传播广,发病急,危害大,被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病之首,我国也将其列为一类重大动物疫病。
同时,根据《动物防疫法》的要求,口蹄疫也是我国规定的重大动物疫病强制免疫病种之一。
但是在实际过程中,由于口蹄疫疫苗在免疫过程中极易产生较大的免疫反应,妊娠母猪尤为强烈[2-3]。
因此,很多村防疫员和兽医工作者对妊娠母猪都不予免疫,留下了很多免疫空白点和疫病隐患点。
为进一步了解口蹄疫疫苗对妊娠母猪是否有影响,开展了以下免疫试验。
1 材料与方法1.1 试验材料试验对象:选择石屏县3个猪场的健康无病、采食正常的怀孕母猪、泌乳母猪,品种为当地土杂母猪。
疫苗:申联生物医药(上海)有限公司生产的猪口蹄疫O型合成肽疫苗(多肽2570+7309),规格50 mL/瓶。
1.2 试验方法对怀孕母猪、泌乳母猪用猪口蹄疫O型合成肽疫苗共免疫2次,首免后4周进行第2次免疫,具体免疫程序见表1。
2 结果与分析对128头免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗的不同阶段的母猪跟踪观察120 d,结果发现,所有免疫猪口蹄疫O型合成肽疫苗的母猪均没有出现食欲减退、体温升高、流产、产死胎、停乳等不良反应,所有母猪的健康状况均良好[4]。
猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫效果观察作者:陈培赛,林元潮,曾瑞强来源:《兽医导刊》 2013年第12期陈培赛1,林元潮2,曾瑞强2(1. 温州市苍南县畜牧兽医局,浙江苍南 325800 ;2. 温州市苍南县灵溪镇农业综合服务中心,浙江灵溪 325800)口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病,给世界畜牧业造成很大损失。
1974 年国际兽疫局(OIE)将该病列为国际动物卫生法典中18个A 类疾病之首, 在许多国家和地区都有该病的发生与流行。
目前对该病的防制主要是采取禁运、紧急屠宰和强制性免疫接种措施,而疫苗免疫是最主要的也是最经济的手段。
猪口蹄疫O 型合成肽疫苗采用固相多肽合成技术,在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点(合成肽)并连接人工T 细胞位点,以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成油乳剂疫苗,能够很好的预防猪O 型口蹄疫的发生。
温州市苍南县国土面积1300 平方公里,生猪总存栏数量约10 ~ 12万头,每户存栏数量100 ~ 500 头为主。
我县于2009 年8 月3 日开始试用申联生物医药(上海)有限公司的猪口蹄疫O 型合成肽疫苗,一直坚持使用至今,全县没有出现重大生猪口蹄疫疫情,取得了较好的防控效果,现将我县推广使用合成肽疫苗情况介绍如下。
一、猪口蹄疫O 型合成肽疫苗免疫效果观察1.初试及近年疫苗使用情况统计。
(1)初试情况。
2009 年8 月3 日,我县首先在新华畜牧有限公司进行猪口蹄疫O 型合成肽疫苗与高效灭活疫苗的对比试验。
通过试验发现合成肽疫苗免疫副反应小、抗体检测合格率高,受到了畜牧兽医部门和广大养殖场的高度认同。
(2)推广使用情况。
初试完成后,先在我县9 个规模猪场全面使用,免疫生猪约7 500 头。
10 月份以后,全县开始使用合成肽疫苗至今。
2009 年以来使用的猪口蹄疫疫苗情况见表12. 免疫后效果分析。
(1)免疫应激反应小。
合成肽疫苗接种后不会产生严重的副反应,曾观察到甚至使用了20 ml 注射的剂量也没有不良反应。
猪0型口蹄疫合成肽疫苗的免疫效果试验
摘要
目前在生猪口蹄疫的防控措施上,主要采用的是以免疫为主的防控策略。
苏州市从上世纪末开始,相继推广使用猪0型口蹄疫灭活疫苗、猪0型口蹄疫进口佐剂浓缩苗(206疫苗),为口蹄疫综合防控工作发挥了重大作用。
但是由于疫苗自身的不足,使我市的养殖户产生了抵触拒免心理,在推广上受到了很大阻力。
为寻找一种更优质的疫苗,苏州市动物疾病预防控制中心与几家公司合作选用了猪0型口蹄疫合成肽疫苗,并分别在常熟等地区进行了临床试验,结果表明:新型疫苗能产生很好的免疫保护效力,为广泛使用猪0型口蹄疫合成肽疫苗奠定了基础。
关键词
猪0型口蹄疫合成肽疫苗;口蹄疫;免疫效果试验
口蹄疫是一种偶蹄动物烈性、高度传染性疾病,给世界畜牧业造成很大损失。
国际兽疫局(OIE)将该病列为国际动物卫生法典中A类疾病之首,在许多国家和地区都有该病的发生与流行。
口蹄疫的控制和扑灭,必须推行合理的免疫计划和实施生猪强制免疫。
目前,苏州市养猪业普遍使用的是猪口蹄疫灭活疫苗。
但近年来我市引进并开发了一种以人工合成肽为抗原的新型口蹄疫合成肽疫苗,它是采用固相多肽合成技术,在体外人工合成口蹄疫病毒主要抗原位点(合成肽)并连接人工T细胞位点,以此作为免疫原与进口佐剂混合配制而成的油乳剂疫苗。
我们通过其免疫原性、安全性、抗体持续性进行了实验和临床应用,取得了理想的效果。
1. 材料和方法
1.1 试验动物分组与设计
在海虞镇随机抽取了性能、日龄等比较相近的几个猪圈中的6头仔猪,并对其进行唯一编号,编号分别为:A、B、C、D、E、F。
其中前三头为合成肽试验组,后三头为灭活苗试验组。
所有试验仔猪在1月龄左右时进行初免,在初免结束30天左右进行二免,合成肽试验组每组接种疫苗1ml/头,灭活苗试验组每组接种疫
苗2ml/头。
1.2 疫苗和试剂
猪合成肽O型口蹄疫疫苗,购于申联生物医药(上海)有限公司生产,批号:20080905
猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株),购于中农威特生物科技股份有限公司,批号:2008010
口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体ELISA试剂盒,购于申联生物医药(上海)有限公司,批号:200708034
O型口蹄疫液相阻断ELISA试剂盒,购于中国农业科学院兰州兽医研究所,批号:20071002
1.3仪器
微量移液器、酶标仪
1.4方法
VP1结构蛋白抗体ELISA检测方法按试剂盒说明书进行。
液相阻断ELISA检测方法按试剂盒说明书进行。
2.结果
2.1 VP1结构蛋白抗体ELISA检测结果见表1。
表1:VP1结构蛋白抗体ELISA检测抗体的消长规律
疫苗种类OD值
VP1结构蛋白平均OD值
首免3.周首免4周二免2周二免5周二免9周
合成肽疫苗
A 1.024 1.387 1.913 1.905 1.882 合格率% 76.2 100 100 100 100
B 1.124 1.258 1.788 1.874 1.737 合格率% 65.1 84.5 100 100 100
C 1.113 1.331 1.925 1.847 1.693 合格率% 66.2 82.5 100 100 100
注:本次试验阳性的OD值判定界为0.5到2.0之间,阳性对照孔平均OD值×0.23=临界值,若被检样品孔OD值≥临界值时,判为阳性。
由表1可见:合成肽疫苗首免3周平均抗体水平较高,且抗体水平合格率达80%以上,二免2周后抗体一直维持在较高水平,且合格率达100%。
2.2 液相阻断ELISA检测抗体结果见表2。
表2:液相阻断ELISA检测抗体的消长规律
疫苗种类平均
效价
液相阻断ELISA检测抗体的平均效价
首免3周首免4周二免2周二免5周二免9周
灭活浓缩疫苗
D 49.3 72.3 188.9 284 229.9 合格率% 22.2 44.5 55.6 67.5 68.5
E 16 63.5 211.3 284.1 205.3 合格率% 11.1 30.2 66.6 66.7 77.8
F 38.4 68.4 204.9 285.1 215.3 合格率% 15.9 35.9 58.7 66.9 72.5
注:抗体效价≥128,判为阳性
由表2可见,首免后3周抗体水平仍处于较低水平且抗体合格率也较低,二免2周后抗体水平升高,但是抗体水平及检测的抗体合格率并不是很理想。
3.小结与讨论
3.1 本次试验中,使用猪口蹄疫O型合成肽疫苗免疫后不良反应较猪口蹄疫O型合成肽疫苗要小的多,基本上无任何不良反应。
猪O型口蹄疫合成肽疫苗的多肽抗原纯度高,生产过程中不需要灭活剂灭活,不存在异体蛋白,是一种单一的抗原,能够有效的避免异体蛋白引发的过敏反应。
3.2 从免疫效果来看,由上表的实验数据明显可以看出两者的差距,合成肽疫苗所产生的抗体水平高,且持续时间长。
而抗体水平高的主要原因就是合成肽疫苗的核心成分即口蹄疫病毒VP1蛋白的合成及细胞位点的结合系采用全球最先进的合成仪控制,抗原含量精确稳定。
据资料报道,目前应用细胞生产口蹄疫灭活苗,其灭活剂BEI只灭活口蹄疫病毒,对培养液中的酶等没有明显作用,而酶在疫苗存放过程中可能会逐渐裂解灭活的口蹄疫病毒,使其效力逐渐减退。
而猪口蹄疫O型合成肽疫苗则完全克服了这一缺点,从而使其产品质量非常稳定。
3.3 从接种的剂量上来看,合成肽疫苗一般注射1ml可以保证动物体产生坚强的保护力。
而猪口蹄疫O型灭活疫苗要诱发有效的免疫应答,通常需要较大量的抗原,
因此,为保证免疫效果而采用2ml注射;其次,猪口蹄疫O型灭活疫苗随着时间的延长,抗原成分会不断被酶降解,免疫效力大大降低,临床应用中也证明了这一点。
因此,也需要足够量的抗原,这就造成在增加注射剂量的同时,免疫副反应也相应的增大。
3.4 从检测方面来看,合成肽的检测试剂盒比浓缩灭活苗检测的液相阻断试剂盒方便、高效、且成本低。
口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果明显优于灭活苗,在首免4周后抗体大幅提升,免疫期维持时间长,发生的应激反应小,几乎没有任何不良反应,且注射剂量小,在用专用的VP1结构蛋白抗体ELISA检测抗体时,合格率高,且检测抗体结果所需的时间短,于目前我市防控口蹄疫采取一年春秋两次防疫具有重大的意义。
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