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ICS：65.020.30DB 备案号：四川省地方标准DB51/T 676—2007牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法Determination of chloramphenicol residues in milkby high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 制样 (1)3.1 样品的制备 (1)3.2 样品的保存 (1)4 测定方法 (1)4.1 方法提要或原理 (1)4.2 试剂和材料 (1)4.3 仪器和设备 (2)4.4 测定步骤 (2)4.5 结果计算和表述 (3)5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 (4)5.1 灵敏度 (4)5.2 准确度 (4)5.3 精密度 (4)附录 A （资料性附录）氯霉素特征离子质量色谱图、特征离子质谱图 (5)I前言本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制本标准附录是资料性附录本标准由四川省畜牧食品局提出并归口本标准由四川省质量技术监督局批准本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所本标准主要起草人：彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚II牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法1 范围本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）测定方法。
本标准适用于牛奶中氯霉素的残留量测定。
检出限为0.05µg/L。
2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
乳及乳粉中氯霉素残留量的测定方法超高效液相色谱-串联质谱法标准操作程序1 安全提示本试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，操作时须小心谨慎！如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。
2 方法提要本标准操作程序是本实验室参照GB/T 18932.19-2003和《残留检测质量控制指南》的有关要求制定。
本方法适用于乳及乳粉中氯霉素残留量的测定和确证。
3 实验部分3.1 原理试样中氯霉素残留用乙酸乙酯提取后，用正己烷脱脂、HLB固相萃取柱净化后，用超高效液相色谱-串联质谱联用仪检测，外标法定量。
3.2 检测限、测定低限、线性范围、回收率范围和精密度表1 方法的检测限、测定低限、线性范围、回收率范围和精密度化合物名称检测限（μg/kg）测定低限（μg/kg）线性范围（μg/L）回收率（%）RSD（%）氯霉素0.1 0.2 3.3 仪器和设备3.3.1 液相色谱-质谱联用仪。
3.3.2分析天平：感量0.1mg、0.01g。
3.3.3机械振荡器。
3.3.4 离心机。
3.3.5 涡旋混匀器。
3.3.6 固相萃取仪。
3.3.7 氮吹浓缩仪。
3.3.8 移液枪：50 ~1000μL。
3.4 试剂与材料除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为高纯水。
3.4.1 试剂3.4.1.1 乙腈。
3.4.1.2 乙酸乙酯。
3.4.1.3 甲醇。
3.4.1.4 氯化钠。
3.4.2 溶液3.4.2.1 氯化钠溶液（4%）：取20 g氯化钠，用适量水溶解后，用水定容至500 mL。
3.4.2.2 乙腈-水溶液（1 + 4）：取20mL乙腈与80 mL水混合均匀。
3.4.2.3 乙腈-水溶液（1 + 7）：取20mL乙腈与140 mL水混合均匀3.4.3 标准物质与标准溶液3.4.3.1 标准物质表2 标准物质列表标准物质英文名称纯度氯霉素Chloramphenicol ≥99.0%3.4.3.2氯霉素标准溶液：储备液100 μg/m L，用甲醇溶解定容，储存在4±4℃。
河南畜牧兽医２００７年（第２８卷）第２期综合版专论综述专论综述高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留的研究综述李红１，张莹蕾２，李永军１，马伟华１（１．河南省乳品工程技术研究中心，河南郑州４５０００８；２．河南三鹿花花牛乳业有限公司）中图分类号：Ｓ８５９．８４文献标识码：Ｂ文章编号：１００４－５０９０（２００７）０３－００１１－０１氯霉素抗菌谱较广，能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，由于其价格低廉、抗菌性能好，是预防和治疗牛乳房炎等疾病的主要药物，但其残留对人体健康的危害不容忽视，它能够导致严重的再生障碍性贫血，并且其发生与使用剂量和频率无关。
因此，近年来美国和欧盟对动物食品中的氯霉素残留量都制定了严格的限制指标，残留量不得超过０．１μｇ／ｋｇ。
我国农业部已禁止使用该药，无论内销还是出口的畜产品，氯霉素残留都是必检项目。
到现在为止，氯霉素残留的检测已相继建立了气相色谱、液相色谱、薄层色谱、放射性分析、微生物法及免疫学检测等方法。
高效液相色谱法是一种快速有效的分离分析技术，它引入了气相色谱理论，在技术上采用高压泵、高效固定和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。
高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留都要经过提取、层析柱净化、浓缩以及残留药物分离和检测。
该文就从这四个方面对高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素的残留进行概述。
１样品的提取与净化１．１样品的提取牛奶中含有大量蛋白质、脂肪、糖类、维生素、无机盐、水分等，这些样品基质的存在不但干扰待测物的检测，而且污染仪器和降低设备使用寿命，因此需要选择合理有效的提取方法。
为了从牛奶样品中提取氯霉素，首先要使蛋白质变性，破坏其胶体状态。
从牛奶中提取氯霉素使用最多的是乙酸乙酯和乙腈，乙酸乙酯既能有效提取氯霉素，又能减少牛奶中蛋白质等水溶性杂质被萃取到溶剂中。
乙腈能够有效除去牛奶中的蛋白质，但萃取效率没有乙酸乙酯高。
使用高氯酸溶液能有效地净化残留物，减少对氯霉素的干扰。
