水产品中氯霉素的快速检测 胶体金免疫层析法(KJ201905)

水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。

因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。

目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。

高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。

具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。

然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。

最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。

HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。

液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。

与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。

它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。

然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。

酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。

ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。

具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。

然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。

最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。

ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。

综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。

这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。

胶体金免疫层析产品快速测定水产品中的氯霉素残留
王媛;钱蓓蕾;于慧娟;蔡友琼;黄冬梅
【期刊名称】《中国渔业质量与标准》
【年(卷),期】2013(003)001
【摘要】分析比较了3种测定水产品中氯霉素残留的商品化胶体金快速检测产品,其灵敏度、精密度、符合性和稳定性均能满足目前对氯霉素监控的限量要求.胶体金免疫产品操作简单、结果准确、重复性好,适合水产品中氯霉素残留的现场筛选.【总页数】5页(P82-86)
【作者】王媛;钱蓓蕾;于慧娟;蔡友琼;黄冬梅
【作者单位】中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090;中国水产科学研究院东海水产研究所,上海200090
【正文语种】中文
【中图分类】S94
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论文作者签名：＿＿＿＿＿
论文导师签名：＿＿＿＿＿ 日 期： 年 月 日
广东药学院硕士研究生学位论文
序言
1. 氯霉素残留检测研究发展
氯霉素(Chloramphenicol，CAP)是由 Ehrlich 等在 1947 年首次从微生物代谢物中 分离的一种广谱抗生素。目前可用人工方法合成，已广泛用于动物各种传染性疾病的 治疗[1]。氯霉素对革兰阳性、阴性细菌均有抑制作用，且对后者的作用较强。其中对 伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用比其他抗生素强，对立克次体 感染如斑疹伤寒也有效，但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。
广东药学院 硕士学位论文 胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究 姓名：徐欢 申请学位级别：硕士 专业：中药学 指导教师：田素娟
20100501
广东药学院硕士研究生学位论文
胶体金免疫层析方法快速检测食品中氯霉素的残留研究
徐欢(中药学) 导师:田素娟 教授
摘要
目的：氯霉素作为一种高效广谱的抗生素，广泛用于动物各种传染性疾病的治疗，但 是因其毒副作用较强，许多国家和地区相继禁止或严格限制使用氯霉素，传统的氯霉 素残留分析方法需要昂贵的仪器和专业技术人员，且周期长、成本高，不能满足现场 和快速检测的要求。因此，建立高效、灵敏、经济的氯霉素残留分析方法是很有必要 的。胶体金免疫层析试纸条检测法是利用抗原和抗体的特异性结合反应对微量抗原或 抗体进行测定的方法，本论文旨在研制氯霉素免疫胶体金层析试纸条，应用于畜产品 中氯霉素残留的快速检测，具有重要的现实意义和极高的商业开发价值。 方法：通过体外扩大培养杂交瘤细胞，将细胞接种到小鼠体内，采用体内诱生法制备 出含抗氯霉素特异性单克隆抗体的腹水。腹水经辛酸-硫酸铵法、亲和柱层析法进行纯 化。纯化后用全抗原对三株单抗从蛋白浓度、效价以及交叉反应等指标进行质量鉴定； 采用柠檬酸三钠还原法制备了不同粒径的胶体金，将具有氯霉素特异性的免疫胶体金 均匀灌注在 BT50 型玻璃纤维膜，烘干后即为胶体金垫。经比较试验选用 Whatman 公 司的 AE98Fast 硝酸纤维素膜作为层析膜；控制线采用 20 倍稀释的羊抗鼠 IgG；用浓 度为 1mg/mL 的氯霉素包被原（CAP-BSA）喷涂检测线，最后组装成试纸条。 结果：选取 4D10 作为制备探针抗体，其蛋白浓度为 2.89mg/mL，经 ELISA 法测定抗 体效价为 1：1.024×106，利用改良竞争 ELISA 法测定单抗与各抗生素的交叉反应，抗 氯霉素单克隆抗体(CAP-McAb)与氯霉素琥珀酸钠有交叉反应而与青霉素、链霉素、 磺胺二甲嘧啶、甲砜霉素等抗生素无交叉反应，与各抗生素、类似物的交叉率均小于 0.01%，具有较高的特异性和亲和力。通过紫外分析和外观观察试验确定了胶体金标 记抗体的最适蛋白质浓度为 48µg/mL，最适 pH 在 8.2 左右。用制得的免疫层析试纸 条检测已知的含有氯霉素的样品，灵敏度为 100ng/mL，在其灵敏度范围内重现性为 100%，试纸条在 5min 左右出现清晰的条带。 结论：对制备的氯霉素的免疫胶体金层析试纸条的验证试验表明，该试纸条检测时间

FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法　李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。

近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。

本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。

最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。

氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。

大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。

它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。

但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。

检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。

然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。

其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。

由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。

依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。

浅谈水产品中氯霉素的快速测定
蒙君丽;刘阁兴
【期刊名称】《河北渔业》
【年(卷),期】2009(0)1
【摘要】氯霉素（Chloramphenicol，CAP），是一种有效的广谱抗生素，常用
于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，曾在水产养殖业中得到广泛应用，同时也带来了水产品中氯霉素残留的严重问题。

氯霉素存在严重的毒副作用，能抑制人体骨髓造血功能，引起人类的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿、早产儿灰色综合症等疾病，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性，因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视，【总页数】2页(P40-41)
【作者】蒙君丽;刘阁兴
【作者单位】唐山市水产技术推广站,河北,唐山,063000;丰南区发展改革局,河北,丰南,063300
【正文语种】中文
【中图分类】S9
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5.“水产品中砷的快速测定方法”和“食品中铅的快速测定方法”获国家发明专利授权 [J],
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应 即开 即用 。
性结果 ，表明不含氯霉素或者氯霉素残 留量低于检
出限 （ ４０ ． ３ ￣ ｔ ｇ ／ ｋ ｇ ） 。 ６ ． ３ 阳性结 果
（ ２ ） 用 塑 料 吸管 将无 气 泡 的待检 样 品垂直 滴 加 ３滴 （ 约 Ｉ Ｏ ０ ￣ Ｌ ） 于加样 孔 中 ， 具体 见 图 ｌ 。
０ ． ２ ｍＬ下 层溶 液 ， 为 待检样 品 。
５ ． ３ 测 定
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 且 颜 色 比控制 线 （ ｃ线 ） 深（ 如图 ４ ） 或一样 深 （ 如图 ５ ） ， 为 阴
（ １ ） 从包装袋中取出氯霉素胶体金免疫层析试
剂板 ， 置于平 整 的台面 上待测 。检 测试 剂板 取 出后 ，
试 样提 取液作 为 空 白对 照 ， 加 样方 法 同样 品 。 （ ４ ） 加样 后 开 始计 时 ， 结果应在 ３ ５ ｍｉ ｎ读 取 ， 其 他 时间判读 无效 。
４ 仪 器 设 备
氯霉素残留胶体金免疫层析法快速检测技术适
用的主要仪器设备为 ： 电子天平 （ 感量 ０ ． ０ １ ｇ ） 、 小型
２ ０ １ ６年 第 ６期 一
均质器 、 离心机 （ 最大转速 Ｉ ＞４ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ ） 、 氮 气 吹 干 仪 或空 气 吹干仪 。
待 检试 样 检 测 线 （ Ｔ线 ） 出现红 色 条 带 ， 但 颜 色 比控制 线 （ Ｃ线 ） 浅（ 如图 ６ ） ， 或 检测 线 （ Ｔ线 ） 未 出现 红 色 条带 （ 如图 ７ ） ， 为 阳性 结果 ， 表示 样 品 中氯霉 素
（ ３ ） 每批样品需做 １ 孑 Ｌ 空 白对照 ， 以复溶液代替

刘 欢 孙伟红 马兵 李兆新 李 强 程波 宋怿 ， ， ， ， ， ，
（ ．中国水产科 学研 究院 质量与标 准研 究 中心 北京 １０４ ；．国家水产 品质 量监督检验 中心 青岛 ２６ ７ １ ０ １ １２ ６ ０ １）
摘要： 为推动快速检测产 品在水产 品药物残留监管领域 的应用 ， 立 了一套 “ 样检测 式” 物残 留快速检测 产品筛 建 盲 药 选评价方法 ， ４种市售 的国产氯霉素胶体 金快 速检测产品 的假 阳性率 、 对 假阴性率 、 出率等指标进行 验证。验证结 检 果显示 ， 仅有 １ 种产 品能 １０ ０ ％准确检测出 ６ ８个鱼糜样 品中是否残 留氯霉素 ， １种产 品的假 阳性率 达 ３ ％ ， 有 ５ ２种产 品的最低检 测浓 度值与商标标识最低检 出限不相符 ， 明产 品的质量 参差不齐 。胶 体金快速 检测产 品作 为质量安全 说
监管工具 ， 投入使用前 ， 必要 对其 最低 检 出 限、 阳性 率 、 阴性率 等参 数进 行验 证 。［ 国渔业 质量 与标 准 ， 在 有 假 假 中
２ １ ，（ ） ５ ０ ２ ２ ３ ：５—６ ］ １
关键词 ： 氯霉素 ； 胶体 金快速检测产 品； 分析评价 ； 最低检 出限 ； 阳性率 ； 阴性率 假 假 中图分 类号 ：９ ￥４ 文献标 志码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ５—１３ （０ ２ ０ ０ ５ ０ ２９ ８３ ２ １ ）３— ０５— ７
要 卜 。 目前 ， Ｊ 国外 已经 有 相 当 成 熟 的 商 品 化 试 纸条 ， 如美 国 的 Ｃ ｒｍ Ｓｉ ｃ ｎ． 司研 发 的一 系 ｈａ ｃｅ ｅＩｃ 公 ｎ 列 用 于 检 测 牛 奶 中各 种 抗 生 素 的 免 疫 纸 层 析 胶 体
金 试 纸 条 Ｒ Ｓ 系列 ，但 用于 检测 水 产 品 中禁 用 兽 ＯＡ 药 及 有 毒有 害 物 质残 留的试 纸 条 产 品 尚不 多 见 。 由于 免 疫胶 体 金 快 速 检 测 产 品 尚属 新 兴 行 业 ， 于 用 检 测 水 产 品 中兽 药 及 有 毒 有 害 物 质 残 留 的 产 品 技

水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言：氯霉素是一种广谱抗生素，常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。

然而，由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症，因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。

针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试，现有许多不同的方法和技术。

本文将对其中一些常用的方法进行对比分析，并评估它们的优缺点。

方法一：高效液相色谱法（HPLC）检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法，可以快速准确地检测氯霉素残留量。

该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离，利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积，从而定量检测氯霉素的含量。

该方法的优点是操作简便、准确性高，可以同时检测多种氯霉素类药物。

然而，HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂，对操作人员的技术要求较高。

方法二：酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法，可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。

该方法操作简便，具有高通量性和准确性。

ELISA方法的优点是对样品处理较少，检测时间短，适用于大批量样品分析。

然而，ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果，对操作人员技术要求较高。

此外，ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量，不能提供准确的定量结果。

方法三：气相色谱质谱联用法（GC-MS）检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法，可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离，然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。

GC-MS方法准确性高，可以进行定量检测，具有良好的选择性和灵敏性。

然而，GC-MS方法的缺点是操作复杂，需要较长的分析时间，设备昂贵，对操作人员的技术要求较高。

综合对比分析：从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑，HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。

而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查，但不能提供准确的定量结果。

ICS67.050B 50 DB1301 石家庄市地方标准DB 1301/T 281—2018水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法Determination of chloramphenicol in aquatic products—Fluorescence immunochromatography2018-05-18发布2018-07-20实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由石家庄市农业畜牧局提出。

本标准起草单位：石家庄市畜产品质量监测中心。

本标准主要起草人: 李云、赵义良、宋瑞、刘松雁、张梦雪、张彩云、桂蕴、武治云。

水产品中氯霉素的快速检测荧光免疫层析法1 范围本标准规定了水产品中氯霉素（Chloroamphenicol，CAP）的荧光免疫层析快速检测方法。

本标准适用于水产品中氯霉素的快速筛选检测，本方法的检出限为0.1μg/kg。

2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理本法应用竞争抑制免疫层析原理。

样品中残留的氯霉素经乙酸乙酯提取、正己烷净化后，样品溶液中的氯霉素与铕乳胶标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上氯霉素-BSA 偶联物的结合，使检测线荧光强度低于控制线荧光强度或检测线无荧光。

4 试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。

4.1 浓盐酸(HCl)。

4.2 氯化钠（NaCl）。

4.3 氯化钾（KCl）。

4.4 磷酸氢二钠（Na2HPO4）。

4.5 磷酸二氢钾（KH2PO4）。

4.6 乙酸乙酯（C4H8O2）。

4.7 正己烷（C6H14）。

4.8 甲醇（CH4O）。

4.9 吐温-20（C58H114O26）。

水产品中氯霉素残留量的测定
氯霉素 简介
一
随着生活水平的提高，人们对食品安全要求更为严格， 尤其是各种药物在动物中的应用，因为药品残留已成为威 胁人体健康的重要因素。对水产品氯霉素药物残留进行检 测，是提高其食用安全性的重要措施，对保证人体健康具 有重要意义。就我国水产品行业发展现状来看，氯霉素已 成为禁用药物，如果不对其残留量进行检测，将会直接影 响水产品的食用性，一旦出现因为药物残留过量导致出现 安全事故，必定会造成市场萎缩，不利于行业的持续发展， 对我国渔业健康发展有重要影响。
检测原理
二
提取原理
样品中的氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在 碱性条件下,用乙酸乙酯提取，提取液旋 转蒸干后,残渣用水溶解,经正己烷液液分 配脱脂，
定量方法
1.液相色谱串联电喷雾质谱仪测定 2.内标峰面积法定量。
三
1.提取过程：
提取步骤
称取均质试样5g式样，加入内标
15mL乙酸乙酯 0.45mL氨水 5g硫酸 钠均质提取，4000r/min 离心5min
清洗刀头，重复提取两次，
合并全部上清液至50 mL比色管中， 用乙酸乙酯定容至50 mL
提取步骤
三
2.净化过程：
① 取10mL提取液与25mL鸡心瓶中 ② 45℃下旋转浓缩至干 ③ 3mL水复溶 ④ 3mL正己烷液液分配 ⑤ 水围：
范围
① 本标准规定了可食动物肌肉、肝脏、鱼和虾 中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的液 相色谱-串联质谱测定方法。
② 适用于可食动物肌肉、肝脏、鱼和虾中氯霉 素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定。
③ 其中标准方法的检出限：氯霉素为0.1 μg/kg， 甲砜霉素和氟甲砜霉素1.0 μg/kg
氯霉素 简介

水产品中氯霉素的检测标准水产品中氯霉素的检测标准氯霉素是一种广泛应用于畜禽养殖中的抗生素，也被用于水产养殖中。

然而，氯霉素对人体健康有一定的危害，因此被世界卫生组织列为二类致癌物质。

为了保障消费者的健康，各国都制定了严格的水产品中氯霉素的检测标准。

我国水产品中氯霉素的检测标准主要包括以下几个方面：1. 检测方法目前，我国常用的氯霉素检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光免疫分析法等。

这些方法不仅能够快速、准确地检测出氯霉素的含量，而且能够同时检测出多种抗生素残留物质，具有较高的检测灵敏度和准确性。

2. 检测对象我国水产品中氯霉素的检测对象主要包括鱼类、虾类、贝类等水产动物及其制品。

其中，对于进口水产品，我国要求检测对象范围更广，包括所有水产品及其制品。

3. 检测标准我国对于水产品中氯霉素的检测标准分为限量和禁止两种。

其中，限量标准是指在一定重量范围内允许残留的最高含量，而禁止标准则是指在任何情况下都不允许出现氯霉素残留。

目前，我国对于水产品中氯霉素的限量标准如下：鱼类及其制品：0.3mg/kg虾类及其制品：0.5mg/kg贝类及其制品：0.3mg/kg对于进口水产品，我国要求检测出氯霉素残留物质即视为不合格。

4. 监督管理为了保障水产品中氯霉素的检测质量，我国建立了完善的监督管理体系。

各级食品药品监管部门对于生产、经营、使用水产品的企业进行定期监督检查，并对不合格企业进行处罚。

同时，我国还建立了食品安全快速预警机制，一旦发现问题及时采取措施，确保消费者的健康安全。

总之，水产品中氯霉素的检测标准是保障消费者健康安全的重要措施。

我们应该加强监督管理，严格执行检测标准，切实保障人民群众的饮食安全。

水产品中氯霉素残留检测技术的研究进展摘要:介绍了水产品中氯霉素残留检测分析方法的研究进展,并阐述了各检测方法的特点及检出限,以期为水产品氯霉素残留检测提供参考。

关键词:氯霉素;检测;水产品氯霉素(chloramphenicol,CAP)于1947年从委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuela)的培养滤液中分离出的结晶性抗菌素,是第一个采用化学合成法生产的抗生素,它是一种有效的广谱抗生素,对多种病原菌有较强的抑制作用。

在水产养殖业中,也常用氯霉素治疗各种传染性疾病。

但研究表明,氯霉素存在严重的毒副作用,能抑制人体骨髓造血功能,引起人类的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏症,新生儿、早产儿灰色综合症等疾病,低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性,因此氯霉素残留问题已引起国际组织和世界上许多国家和地区的高度重视,欧盟、美国等均在法规中规定CAP残留限量标准为“零允许量”。

我国是一个水产养殖大国,养殖规模不断扩大,但养殖过程中滥用抗生素,已成为一个严重的水产品安全问题[1]。

氯霉素残留检测方法的建立始于20世纪70年代,随着新技术的不断出现,氯霉素的检测方法有很多种,大致可分为3类,即微生物法、化学分析法、免疫学检测法。

1微生物法微生物检测氯霉素法可大体分为2种:一种是基于抗生素对微生物生长的抑制作用,主要有棉签法、杯碟法、纸片法、TTC法、戴尔沃检测、BY法等;另一种是由于微生物对氯霉素敏感而引起生化特性的变化,如氯霉素对鳆发光杆菌的抑光作用,通过检测发光强度的变化来检测氯霉素的含量。

(1)棉签法。

棉签法是检测动物体中抗生素残留的现场试验方法。

该方法是用棉签(拭子)采取动物体内的组织液,然后将其放置于涂满枯草杆菌的培养基中保温过夜。

根据棉签周围的抑菌圈有无以及大小来判断抗生素残留。

梅先之等(1997)曾用该法检测鲤鱼中的CAP残留含量,该方法的检测限是1mg/kg,但容易造成漏检。

(2)杯碟法。

养殖与饲料2021年第08期养殖生产水产品中氯霉素残留检测技术综述陈秋玲李仁焕*南宁学院，广西南宁530200摘要氯霉素是一种光谱杀菌的抗生素，之前广泛应用于渔业养殖中。

因其残留可在水产品中富集，食用时会对人体健康造成严重损害，已经被禁止使用，但在实际生产中还有不少养殖户违规使用。

为了有效检测和控制水产品中的氯霉素，本文综述了水产品中氯霉素的检测技术，包括免疫分析法、微生物法、色谱分析法等，并对多种技术的优缺点进行了分析，以期通过这些检测技术减少或杜绝水产品中氯霉素残留。

关键词水产品；氯霉素；检测技术氯霉素属于（CAPs ）药物属酰胺醇类广谱抗菌药，其抗菌效果好，价格低廉，被广泛用于预防水产动物细菌疾病，但氯霉素也存在着严重的毒副作用，人体食用含氯霉素的动物食品后，会在体内逐渐富集，诱发致病菌对其产生耐药性，同时骨髓的造血机能被抑制，造成障碍性贫血。

氯霉素于2002年被我国列入《食品动物禁用的兽药及其它化合物清单》。

欧盟、日本、美国、韩国也规定动物源性食品中氯霉素不得检出，但国内外每年都会在水产品中发现氯霉素残留，导致我国及部分国家水产品进出口企业损失巨大，且严重影响人类健康。

从2002年氯霉素被列入禁用兽药以来，中央和地方一直在打击违规添加氯霉素的行为。

但从各大电商平台、化工销售厂家均可以轻易买到氯霉素，导致养殖户或从事水产品加工人员轻而易举就可以将氯霉素使用在水产品生产流通环节。

造成水产品中氯霉素残留的环节主要包括养殖过程中对含氯霉素药物的滥用，违规使用饲料添加剂，运输、捕捞时为了保鲜而添加含有氯霉素的保鲜剂，加工水产品时对消毒剂等化学物品控制不严等。

为了有效检测和控制水产品中的氯霉素，国家投入大量人力物力研究并制定水产品中氯霉素药物残留的检测方法，主要包括微生物法、高效液相色谱法、免疫分析法、生物传感器法、气相色谱法、高效液相色谱-质谱串联法等[1]。

1水产品中氯霉素检测方法及其优缺点杨梅等[2]以氯霉素-D5为内标，先用乙酸乙酯提取样品氯霉素残留，再用正己烷进行脱脂净化，然后用UPLC-MS ／MS 方法进行氯霉素残留含量检测。

胶体金免疫层析法快速检测水产品中四环素类药物残留檀尊社;陆恒;邵伟;张少恩【摘要】为建立用于快速检测水产样品中四环素类药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,采用免疫竞争法,将抗四环素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的四环素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T 线),其残留药物与待测样品中四环素竞争结合胶体金标记的四环素单克隆抗体,最终能以颜色直观显示检测结果.检测水产品试样时,试剂灵敏度最低值可达100 ng/mL,仅需5～10 min,与金霉素、土霉素、强力霉素等四环素族抗生素有很强的交叉反应,故可同时检测四环素族中几种主要抗生素,而与沙丁胺醇、莱克多巴胺等其他兽药无交叉反应.试验证明检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为四环素残留现场监控的有效筛检手段.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2010(019)008【总页数】6页(P32-37)【关键词】四环素;半抗原;免疫测定;胶体金;免疫层析【作者】檀尊社;陆恒;邵伟;张少恩【作者单位】洛阳市农产品安全检测中心,河南洛阳,471002;洛阳市农产品安全检测中心,河南洛阳,471002;杭州南开日新生物技术有限公司,杭州,310022;杭州南开日新生物技术有限公司,杭州,310022【正文语种】中文【中图分类】TS201.6四环素类药物为广谱抑菌剂,高浓度时具杀菌作用。

其作用机制在于药物能特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位置结合,阻止氨基酰-tRNA在该位上的联结,从而抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。

由于四环素类的广泛应用,临床常见病原菌包括葡萄球菌等革兰氏阳性菌以及肠杆菌属等革兰氏阴性杆菌,对四环素大都有耐药性。

此外,四环素类药的滥用还引起该类药物在动物的肌肉、奶、肝脏等中残留,严重危害人类的健康。

近年来,四环素类药物在食物中的残留检测问题引起了广泛关注[1]。

四环素等半抗原的检测方法,通常采用酶联免疫吸附反应(ELISA)及高效液相色谱(HPLC)及气-质联用(GC-MS)等方法[2]。

分别取空白草鱼、鳙鱼、鲫鱼、南美白对虾、螃蟹、甲鱼、鳜鱼、黄鳝、鲶鱼 样本，添加氯霉素标准品到各种鱼的空白样本中，添加浓度分别为0、0.1、0.2、0.3、 0.5、1.0、2.0µg/kg；按快速检测方法进行处理，取免疫胶体金试剂条进行测试，每 个浓度测定3个重复，验证试剂条的最低检出限，结果见表1。
包括的主要内容和技术参数。 2013年4月：按GB/T1.1‐2000标准要求起草标准征求意见稿，撰写《编制说明》
及有关材料。 2013年5月，对主要技术内容进行实验室间试验验证。 2013年6月~8月，发给有关单位征求意见，总结意见，修改标准。 2013年9月，提交标准送审材料，根据审查意见，修改标准，提交标准报批稿。
表1 氯霉素免疫胶体金试剂条检出限判定 （单位：µg/kg，“＋”代表阳性，“—”代表阴性）
添加浓度
样本
0
0.1
0.2
0.3
0.5
1.0
2.0
草鱼
——— ——— ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
鳙鱼
— — — — — — ＋ —— ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
鲫鱼
——— ——— ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋
无交叉反应。
5.5 胶体金免疫层析法和仪器确证方法检测实际样品结果比较
随机抽取18份草鱼、鳙鱼、鲫鱼、南美白对虾、螃蟹、甲鱼、鳜鱼、黄鳝、鲶
鱼9个品种样品，分别用胶体金免疫层析方法和仪器方法GB/T 22338‐2008《动物源
性食品中氯霉素类药物残留量测定》进行检测，检测结果见表4。检测结果表明，胶
体金免疫层析方法和仪器方法测定结果一致，符合度达到100%，适用于样本中氯霉
素残留的检测。

文章编号：1006-3188（2016）05-0021-05胶体金免疫层析法快速检测水产品中氯霉素的应用与验证刘文珍1 王振国2 田飞焱1 谢世红1（1.江西省水产品质量安全检测中心，江西 南昌 330046；2.浙江杭州南开日新生物技术有限公司，浙江杭州 310022）摘要：应用胶体金免疫层析法快速检测水产品中残留的氯霉素。

实验结果表明，该快检法检出限为0.3μg/kg；方法具有良好的稳定性，假阳性率和假阴性率均为0%；对其他药物无交叉反应，特异性较好；重复性良好，对实际样品采用胶体金免疫层析法和国标方法进行检测，实验结果基本一致。

用胶体金免疫层析法检测氯霉素残留具有操作便捷、直观、低成本的特点，可用于水产品的初步筛查。

关键词：胶体金免疫层析法；水产品；氯霉素中图分类号：S94 文献标识码：A基金项目：江西省科技计划项目（20152ACG70006）作者简介：刘文珍，女，工程师，从事水产品质量安全、渔业病害方面研究。

E-mail：liuwenzhen518@ 通信作者：谢世红，女，高级工程师，从事水产品质量安全、环境监测方面研究。

E-mail：xsh-00@氯霉素（Chloramphenicol ，CAP ）是一种广谱抑菌性抗生素，对许多病原微生物有较强的抑制作用，可用于治疗水产品的各种传染性疾病。

但其残留对人体血液系统的毒性较大，能引起粒细胞及血小板减少、再生障碍性贫血等，低浓度的药物残留还会诱发致病菌的耐药性[1]。

研究表明，氯霉素在食品中的残留浓度高达1mg/kg 以上时对食用者有严重威胁[2]。

因此，美国食品与药品管理局（FDA）规定，在进口动物源性食品中禁止使用氯霉素。

而在欧盟理事会96/23/EC 号指令中，则将氯霉素列入动物性食品中禁用药物，禁止其在经济鱼类（观赏鱼除外）养殖过程中使用。

中国农业部于2002年12月24日发布235号公告《动物性食品中兽药残留最高限量》，公告中也将氯霉素列为禁用药物[3]。

2019年5月蜂业研究研究论文68胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留周萍£李樱红2尹志红勺吕泽田彳尹君’王静I徐初’(1杭州碧于天保健品有限公司，桐庐311500；2浙江省食品药品检验研究院，杭州310052；3中国蜂产品协会蜂胶专业委员会，北京100050)摘要：建立了胶体金免疫层析法快速测定蜂胶及蜂胶乙醇提取物中氯霉素残留的检测方法。

样品在碱性条件下溶解稀释，20%高氯酸溶液除杂过滤后，加入碱化剂适量，经乙酸乙酯提取，盐析净化后，再用乙酸乙酯提取吹干，加入正己烷和复溶液溶解后，用胶体金快速检测试剂板快速检测。

结果表明，胶体金免疫层析法对蜂胶及蜂胶提取物中氯霉素残留量的检测限分别为0.1pg/kg和0.2p,g/kg。

经高效液相色谱-串联质谱确证，假阳性率和假阴性率均为0%。

该方法操作简单、灵敏度高、准确可靠，可用于加工蜂胶及蜂胶乙醇提取物过程中对氯霉素残留量的质量控制。

关键词：蜂胶；蜂胶乙醇提取物；氯霉素；胶体金免疫层析法Rapid Determination of Chloramphenicol Residues in Propolis and Ethanol Extracts of Propolis by Colloidal Gold Immunochromatography Assay Zhou Ping1,Li Yinghong2,Yin Zhihong1,Lv Zetian3,Yin Jun1,Wang Jing1,Xu Chu1(1Hangzhou Biyutian Health Products Co.Ltd.,Tonglu311500,China;2Zhejiang Institute for Food and Drug Control,Hangzhou310052,China;3Chinese Bee Products Association Propolis Specialized Committee,Beijing100050,China) Abstract:A method for rapid determination of chloramphenicol residues in propolis and ethanol extracts of propolis by colloidal gold immunochromatography assay was established.The sample was dissolved and diluted under alkaline conditions.20%perchloric acid was used to remove the impurities.After being filtered,proper amount of alkalization agent was added subsequently.The residue was extracted with ethyl acetate.After salting out,the supernatant was extracted with ethyl acetate again.The extract was dried.The residue was redissolved with hexane and complex solution.Then,the solvent extract was analyzed by colloidal gold test strip for rapid detection.The results showed that the limits of detection for chloramphenicol residues in the propolis and ethanol extracts of propolis were0.1|ig/kg and0.2|ig/kg respectively by colloidal gold immunochromatography assay.It was confirmed by high performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,and both false positive rate and false negative rate was0%.This method is simple,effective and sensitive,which is suitable for the quality control of chloramphenicol residues during the processing of propolis and ethanol extracts of propolis.Key words:propolis;ethanol extracts of propolis;chloramphenicol;colloidal gold immunochromatography assay蜂胶是工蜂采集胶源植物树脂等分泌物与其上颛腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶黏性物质E。