实验十二去壁低渗法制备植物染色体标本

植物细胞染色体标本的制作与观察-教案第一篇：植物细胞染色体标本的制作与观察-教案植物细胞染色体标本的制作与观察1.实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。

因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。

物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。

核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。

染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。

压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。

不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。

染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。

在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。

而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。

（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。

（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。

（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。

常用解离方法有酸解法和酶解法。

动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。

（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。

2.实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。

（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练掌握显微镜的使用。

（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。

3.实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。

实验十二染色体标本的制备一、实验目的1.了解利用动物骨髓进行细胞染色体制片的一般方法，2.掌握细胞收集、低渗、滴片等技术手段。

3.观察和了解小鼠染色体的数目及形态特征。

二、实验原理染色体上的基因决定了一个物种生长发育的全部信息。

因此通过染色体分析，可以了解某一物种最基本的遗传指标。

进行染色体标本的制备一般取自细胞分裂旺盛的组织，如骨髓、淋巴细胞以及通过人工培养的悬浮液。

将秋水仙素注射到动物的腹腔内，经肠系膜吸收可转运到骨髓，使正在分裂的细胞不能形成纺锤体，染色体停在中期状态，经过处理和制片后就可以清楚地观察到染色体。

这种制片方法是属于侵害性的，因此这种方法适用于动物来源丰富、动物个体较小的材料。

对于大型动物可以采取骨髓穿刺术获得红骨髓，在临床上用于一些血液疾病的研究分析。

对于一些珍稀的鸟类可采用羽髓来制片，方法基本一样。

人类的染色体分析可采用外周血培养的方法来获得大量的细胞材料。

骨髓细胞具有丰富的细胞质和高度分裂能力，因此不必经体外培养，也不需要植物血球凝集素（PHA）的刺激，可直接观察到分裂细胞。

经秋水仙素处理后，分裂的骨髓细胞被阻断在有丝分裂中期，再经离心、低渗、固定、滴片等步骤，便可制作出理想的染色体标本，是研究动物细胞遗传学的好材料。

骨髓细胞染色体标本的制备，具有取材容易，方法简单易行等优点，设备也简单，在一般的实验室均可进行。

三、实验仪器、材料和试剂：1.仪器、用具天平，离心机，光学显微镜，恒温水浴锅，试管架，烧杯，离心管，刀片，镊子，解剖盘，解剖剪，镊子，注射器，纱布，冰冻载玻片，吸水纸，吸管，镜头纸。

2.材料体重20克左右的小鼠。

3.试剂(1)0.075mol/L KCl低渗液(2)Carnoy固定液（甲醇：醋酸＝3:1）(3)0.1%秋水仙素(4)Giemsa染色液【方法与步骤】1. 秋水仙素处理：在做实验前3~4小时，按每克体重2-4μg的量，向小鼠腹腔注射0.1％的秋水仙素。

实验一植物根尖染色体压片法一、实验目的1. 学习并掌握根尖处理、染色、压片及制片观察的方法；2. 观察有丝分裂各时期染色体的形态变化，了解有丝分裂全过程。

二、实验原理高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎尖生长点及幼叶等器官的分生组织（分生区），其中根尖是最常用的材料：1. 根尖取材容易，操作和鉴定也比其它组织方便；2. 采用实验室内种子萌发后所长出的幼嫩根尖，不受植物生长季节的限制，并且可以大量获得；3. 对于某些珍贵而稀少的实验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；4. 采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。

三、实验材料•大蒜（Aillum sativum 2n=16）四、实验器具和药品1. 用具：染色板，载玻片，盖玻片，指管，温度计，试剂瓶，滴瓶，镊子，解剖针，毛边纸。

2. 药品：无水酒精，70%酒精，冰醋酸，对二氯苯或秋水仙素，醋酸钠，碱性品红，石炭酸，甲醛，山梨醇，纤维素酶，果胶酶，中性树胶或油派胶（Euparal），二甲苯。

五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。

2. 植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。

3. 有丝分裂期在整个细胞周期中所占的时间相对较短，有丝分裂制片的主要目的是进行染色体鉴定，希望观察到更多分裂相，尤其是分裂中期相，通常要对材料进行不同的预处理。

（预处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3-4小时。

常用的药剂，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。

）4.植物细胞的细胞壁对细胞形态和结构起支撑和保护作用，分生组织的细胞壁将分生细胞结合成一个整体，因此在压片之前需要采用适当方法软化或部分分解细胞壁使细胞间易于分离，称为解离。

去壁低渗法制备植物染色体标本实验方法步骤：1、材料培养：将高粱的种子充分浸种后，摆在铺有滤纸的培养皿内，在25℃温箱发芽培养2、预处理：待根长至0.5-1cm时,切取根尖立即放入盛有0.2%秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉水溶液等量混合液的小瓶中预处理2-3小时3、前低渗：切取分裂旺盛的部分根尖（1mm），放入0.075mol/L氯化钾低渗液中，在25℃条件下处理30分钟。

以下可分两种方法进行处理4、（1）吸去前低渗液，立即加入甲醇：冰醋酸（3：1）固定液固定不少于1h。

（2）水洗：将固定好的材料用蒸馏水洗三次，除去材料中的固定液，在1mol/L 的HCl于60℃处理15分钟。

（3）酶解去壁：在小瓶内加入混合酶液（酶液量以浸过材料为合适），在25℃下酶解30-60分钟（4）后低渗：吸去酶液，慢慢加入(25±0.5) ℃的双蒸水,轻轻洗一次,然后在双蒸水中浸泡10分钟。

5、悬液法：（1）制备细胞悬液：倒去双蒸水，用镊子立即将材料夹碎形成细胞悬液（2）固定：向细胞中加入新配制的甲醇：冰醋酸（3：1）固定液1-2ml，使成细胞悬液时间在10分钟到数小时不等。

（3）去沉淀：静置片刻使大块组织沉淀，然后取上层细胞悬液于另一个小瓶中。

（4）去上清夜：将上层细胞悬液静置30分钟左右，即可见细胞沉淀，用吸管轻轻吸去上清夜，留约0.5ml左右细胞悬液置备标本(5)标本制备:在一张经过充分洗净脱脂,并预先在蒸馏水中冷冻的清洁载玻片上,用吸管滴2-3滴细胞悬液,立即将载玻片一端抬起,并轻轻吹气，使细胞迅速分散，然后在酒精灯火焰上微微加热烤干。

（6）染色：经干燥的玻片标本，用Giemsa染色液染色30分钟，然后用自来水细流冲洗，甩干水珠空气干燥6、在显微镜下寻找典型的中期染色体，注意观察中期染色体的长臂、短臂和着丝粒位置，并尽可能找到具随体染色体。

低渗液处理细胞染色体标本制作过程下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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植物染色体标本制备的去壁、低渗法及其在细胞遗传学中的意
义
植物染色体标本制备的去壁、低渗法是通过去除细胞壁，使得细胞内的染色体能够在液态介质（通常是醋酸或者醋酸-乙醇混合液）中自由展开，并与染色剂染色，从而得到适合观察和分析的染色体标本。

这种制备方法在植物细胞遗传学中得到广泛应用。

首先，通过去除细胞壁，可使得染色体得以展开成线性或环形的形式，方便进行观察和分析。

其次，在去壁液中低渗透压下染色质水肿膨胀，使染色体的结构更加明晰，染色效果更佳。

同时，去壁液中还含有某些成分，如乙酸和染色剂，可促进染色体的凝聚和染色，从而也有助于染色体的分析和研究。

植物染色体标本制备的去壁、低渗法在植物细胞遗传学中有着重要的应用价值，可用于染色体数目和形态的分析、基因定位和标记、染色体变异的检测和研究等。

特别是在遗传改良中，该方法也被广泛应用于植物杂交和基因转移等研究领域。

植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。

因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。

物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。

核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。

染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。

压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。

不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。

染色体制备的重要环节如下：（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。

在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。

而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。

（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。

（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。

（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。

常用解离方法有酸解法和酶解法。

动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。

（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。

2. 实验目的（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。

（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点,熟练掌握显微镜的使用。

（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。

3. 实验材料与试剂（1）材料：市售大蒜、洋葱。

（2）设备与用品：普通光学显微镜，水浴锅，盖玻片，载玻片，异物针，镊子，平皿，滤纸等。

实验七植物染色体标本的制备与观察一、实验目的
学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。

二、实验用品
Carnoy固定液、0.1%秋水仙素溶液、1mol/HCL、Schiff溶液、亚硫酸水溶液（漂洗液）、混合酶液（纤维素酶、果胶酶各1%-2%）、Carbor fuchsin(卡宝品红)染液配方1、配方2
三、实验方法
1.取材：将大蒜培养，待胚根长达1-2cm时。

窃取0.5cm
长的根尖部分。

2.预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下
处理3-4h
3.固定：取出根尖，投入Carnoy 液固定2-24h,换入70%
酒精，暂时保存
4.水解：把根尖投入预热的58-60℃1mol/HCL中，恒温下
水解14-15min.
5.染色：用配方2染5-10min
6.用蒸馏水西区多余染液
7.酶解:酶解20min左右
8.洗涤：用蒸馏水洗涤，除去残留酶液后加45%醋酸。

9.压片：将根尖置于载玻片上，滴半滴45%醋酸，盖上盖
玻片，压片
10.镜检
四、实验结果及分析
这是用大蒜根尖所制的玻片观察到的，只能看到被染色的核，但未能清晰观察搭配中期分裂相中染色体的排列。

分析实验失败原因如下：
1.处理时间不对，处理时细胞未处于分裂
中期
2.所用试剂配的有问题，导致最终只能看
到核被染色，但看不到中期染色体的清晰排布。

实验二植物常规染色体制片Ⅱ固定和低渗处--固定和低渗处理（综合性实验）遵义师范学院生命科学学院韦若勋一、实验目的1、掌握植物根尖染色体制片过程中固1掌握植物根尖染色体制片过程中固涂片；定和涂片的方法；2、掌握植物根尖染色体制片过程中低渗处理根尖细胞的方法；3、熟悉固定液、低渗溶液和酶液的配制。

二、实验原理、三、实验器具及试剂（一）实验器具指管、量筒、棕色瓶、烧杯、天平等。

指管量筒棕色瓶烧杯天平等三、实验器具及试剂(二)实验试剂1、0.075mol/L 氯化钾称取KCI 5.6g，少许鲜蒸馏水溶解，定溶1000 ml。

225%2、2.5% 纤维素酶和果胶酶酶解混合液纤维素酶、果胶酶各1g,鲜蒸馏水分别溶解,定溶20ml,再等量混合即可。

3、固定液甲醇：冰乙酸=3：1，现配现用。

4、45%醋酸溶液44%醋酸溶液四、实验材料、1、已预处理好的蚕豆、绿豆、洋葱和大蒜已预处理好的蚕豆绿豆洋葱和大蒜等植物的根尖。

五、实验方法与步骤五、实验方法与步骤2、酶解去壁（1）方法①第二次取材,放入管内；②加2.5%混合酶浸没全部材料；③25℃下处理2－3h；④触即破为度。

以一触即破为度。

（2）注意事项处理过程中防止酶液干燥，并摇动酶液，使其充分作用。

五、实验方法与步骤5、后低渗（1）方法①酶液回收：用平口吸管,排气后直插孔底,缓慢吸酶；②鲜蒸馏水清洗3次；③蒸馏水浸没全部材料，处理20min（2）注意事项酶解时冲酶解过度时不宜冲洗。

（3）作用①细胞吸水膨胀使染色体分散膜外；②降低胞质浓度，清洁染色体标本。

五实验方法与步骤4、固定（1）方法①吸干蒸馏水(平、直、慢)；②用固定液冲洗3次(平、直、慢)；③浸没全部材料，处理30min以上。

（2）注意事项①酶解过度时不冲洗；②固定液鲜配鲜用。

固定液鲜配鲜用（3）作用①杀死细胞，保留分裂相；②使细胞质蛋白变性和沉淀,清晰染色体图像；③促进染色体着色。

五、实验方法与步骤5、制片或涂片（1）方法①取冰冻玻片1张，放滤纸上；②取根尖材料放于玻片中央，滴1-2滴固定液；③用镊子迅速将材料压碎涂布，并去除大块组织残渣；④再加固定液，轻吹使染色体扩散，在酒精灯上干燥。