下载文档原格式
细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班实验七植物染色体标本的制备与观察(一实验目的学习植物染色体标本的制备技术,掌握染色体的技术方法,了解染色体的生物学意义。
(二实验原理植物染色体标本的制备,常用分生组织,如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法,其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。
由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体(微管二聚体的形成,以至于不能拉动染色体分开向细胞两极,因此可以使细胞分裂停止在分裂中期,再经过染色,压片,镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。
(三实验用品一、材料:蚕豆二、试剂1.Carnoy固定液2.0.1%秋水仙素溶液3.1mol/L HCl4.Schiff试剂5.亚硫酸水溶液(漂洗液6.Carbor fuchsin (卡宝品红染液(四实验方法步骤1.取材:将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上,室温或28°C下发芽,待胚根长达1~2cm时,切取0.5cm长的根尖部分。
2.预处理:将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中,室温下处理3~4h。
3.水解:把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中,恒温条件下水解14~15min4.染色:倒去热HCl,滴加卡宝品红少许,染色5~10分钟。
5.洗涤:吸去卡宝品红试剂,用蒸馏水换洗2~3次,每次1~2min。
除去残留染色液后加几滴45%醋酸。
6.压片:用吸管从醋酸中吸取材料,置干净载玻片上,材料周围保留半滴45%醋酸,盖上盖玻片,其上放一片吸水纸。
左手指压住吸水纸的左边,右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去,再用铅笔擦头从盖玻片上轻轻敲打,使细胞均用散开。
7.镜检:把压好的片子放在显微镜下,先观察细胞分散状况和中期分裂相的多少,再检查分裂中期细胞中染色体是否完全散开。
如若染色体分散不好而难以分辨和计数,可取下片子,平放桌面上,用手指隔着吸水纸在盖玻片上稍施压力,如果操作细心,用力适度,便可很容易得到染色体分散良好的压片标本,供观察,计数和照相用。
常规压片法制作植物染色体玻片标本一、实验目的1、了解植物细胞周期中染色体的动态变化。
2、学习植物染色体常规压片技术。
二、实验原理植物染色体的常规压片技术是观察染色体常用的方法。
该技术以生长、分裂比较旺盛的植物根尖细胞为材料，经预处理、固定、解离、染色、压片等程序，就可以观察到较多的处于有丝分裂中期的细胞和染色体。
三、实验材料洋葱鳞茎或蚕豆种子。
四、实验器具及药品恒温培养箱，恒温水浴锅，显微镜，解剖器，载玻片及盖玻片，白瓷盘，秋水仙素，甲醇，冰醋酸，盐酸，乙醇，改良石炭酸品红（卡宝品红）。
卡宝品红染色液的配制：先配母液A 和B。
母液A：称取3 克碱性品红，溶解于100 毫升的70％酒精中（此液可长期保存）。
母液B：取母液A10 毫升，加入90 毫升的5％石碳酸水溶液，充分混匀，置37℃温箱温溶2-4小时（2 周内使用）。
母液C：取母液B55 毫升，加入6 毫升冰醋酸和6 毫升37％的甲醛。
充分混匀。
染色液：取母液C10—20 毫升，加入80—90 毫升45％的醋酸和1.0 克山梨醇（sorbitol）。
此染色液初配好时颜色较浅，放置二周后，染色能力显著增强，在室温下不产生沉淀而较稳定。
常温下可保存2年。
五、实验说明1.根尖由于取材方便，是观察植物染色体最常用的材料，有些植物种子难以发芽，或仅有植株而无种子，也可以用茎尖作为材料。
2.植物细胞分裂周期的长短不尽相同，通常在十到几十小时之间，温度明显地影响分裂周期，对于一个不太熟悉的实验材料，最好在特定温度下长根，掌握有丝分裂高峰期，以便得到更多的有丝分裂的细胞。
3.前处理的目的是降低细胞质的粘度，使染色体缩短分散，防止纺锤体形成，让更多的细胞处于分裂中期，一般在分裂高峰前，把根尖放到药剂中处理3—4 小时。
可处理的药剂很多，如秋水仙素、对二氯苯、8-羟基喹啉等。
4.解离的目的是使分生组织细胞间的果胶质分解，细胞壁软化或部分分解，使细胞和染色体容易分散压平，解离方法有酸解法和酶解法。
实验四植物染色体标本的制备与观察一、实验目的1、掌握常规压片法制备植物染色体标本。
2、了解中期染色体的形态和结构以及染色体的生物学意义。
二、实验原理染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。
植物染色体标本的制备，常用分生组织如根尖、茎尖和嫩叶做材料。
常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。
三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具：显微镜、剪刀、镊子、刀片、培养皿、滤纸、吸水纸、青霉素瓶、染色缸、载玻片、盖玻片、玻璃板、酒精灯。
（二）材料：蚕豆(Vicia faba, 2n=2x=12)、黑麦(Secale cereale, 2n=2x=14)、大麦(Hordeum sativum, 2n=2x=14)、普通小麦(Triticum aestivum, 2n=2x=42)、玉米(Zea mays, 2n=2x=20)、豌豆(Pisum sativum, 2n=2x=14)、洋葱（Aillum cepa，2n＝16）等根尖。
（三）试剂1、Carnoy固定液、1%秋水仙素(或对二氯苯)。
2、苯酚品红染色液。
四、实验方法与步骤压片法制备染色体标本：(1) 取材：把蚕豆种子预先浸泡12h，然后转入垫有湿润滤纸的培养皿中上面蒙上湿纱布，置25℃温箱中暗培养发根，经过48h后幼根长至1—2cm左右，于上午9—11时剪下根尖。
(2) 预处理：将剪下的根尖置于对二氯苯饱和水溶液或0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h。
(3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液中固定2-4h，转入70％乙醇中，4℃保存备用。
(4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入l M HCl中60℃解离8－10min，再用蒸馏水洗净。
(5) 染色：改良苯酚品红染色5—10min。
细胞生物学实验报告染色体标本的制备及组型观察1.实验目的：掌握染色体标本制作的基本方法；认识不同生物的染色体的状态，学会做染色体组型图。
2.实验用品：（1）仪器及器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯（1）实验药品：蒸馏水、0.9% NaCl溶液、0.3% KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、秋水仙素（2）实验材料：小鼠3.实验原理：（1）制作染色体标本的意义：了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。
染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。
（2）染色体组型图的应用①鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64条②遗传病的诊断和研究：三体综合征（含三条21号染色体）、卵巢退化症（含45条染色体，比正常人缺少一条性染色体）、睾丸退化症（含47条染色体，比正常人多一条X或Y染色体）等因此，我们可以给孕妇抽取羊水检查器胎儿的染色体，做遗传病早期诊断。
（3）染色体标本的制作①观察：由于分裂期中期的染色体染色体凝集程度最高，因而我们应尽量使细胞停留在分裂期中期以便观察。
②细胞：为尽量看到多的染色体，我们应当选取具有旺盛分裂能力的细胞，这样的细胞可以来自:胸腺、骨髓、睾丸、小肠等。
我们在此实验中使用的是小鼠的精巢细胞。
在做人的染色体标本时，我们使用的是血液里的淋巴细胞。
③药物：PHA（植物细胞凝集素）：PHA具有促进细胞凝集和分裂的作用。
PHA可以使血液中的淋巴细胞还原至淋巴母细胞（只存在于骨髓中）秋水仙素：秋水仙素可以破坏微管的组装，纺锤体不能形成，细胞分裂停在中期。
与秋水仙素作用相同的药物还有长春花碱、鬼臼素、苯环己烯等。
可以促进胃管组装的药物有紫杉酚、重水等。
④空气干燥：使细胞与染色体易于分离⑤低渗作用：水进入细胞内，细胞内容空间变大，染色体距离变大，易于分离、展平。
染色体标本制作和观察实验报告染色体实验报告摘要：本次实验旨在制作和观察染色体标本，通过显微镜观察染色体的结构和数量。
实验过程中，我们成功制作了植物和动物染色体标本，并使用适当的显微镜对染色体进行了观察。
通过实验结果，我们可以清楚地了解染色体的结构和数量。
实验结果表明，植物细胞通常具有较大的数量和较小的染色体，而动物细胞通常具有较少的数量和较大的染色体。
引言：染色体是细胞内的遗传物质，它们包含了个体的遗传信息。
通过观察染色体的结构和数量，可以了解物种的特性和遗传模式。
本次实验通过制作染色体标本和使用显微镜观察染色体，以探究染色体的结构和数量对不同物种的差异性。
材料和方法：1.动物染色体标本制作：-从一个动物个体中取得组织样本。
-在显微镜盖玻片上加入一滴减数分裂阻滞剂。
-使用细针将细胞群收集到玻璃滴管中。
-在玻璃滴管中加入一滴适当的染料，例如鲭鱼绿。
-轻轻将标本放在显微镜盖玻片上。
-使用显微镜观察染色体的结构。
2.植物染色体标本制作：-从一个植物个体中取得组织样本。
-将组织样本切成细小片段。
-在细胞裂变诱导剂中浸泡组织片段。
-在显微镜盖玻片上加入一滴适当的染料，例如鲭鱼绿。
-轻轻将标本放在显微镜盖玻片上。
-使用显微镜观察染色体的结构。
结果：我们制作了多个动物和植物染色体标本，并使用显微镜观察了它们的结构和数量。
通过观察，我们发现植物细胞的染色体通常比较小，数量较大，而动物细胞的染色体通常比较大，数量较少。
染色体呈现出普遍的线状结构，但也有一些不规则的染色体存在。
讨论：根据实验结果，我们可以得出结论，植物和动物细胞的染色体在结构和数量上存在差异。
这可能与物种的特点和遗传模式相关。
植物细胞通常需要更多的遗传信息来适应复杂的环境，因此具有较大的数量和较小的染色体。
相比之下，动物细胞通常需要更少的遗传信息，因此具有较少的数量和较大的染色体。
然而，本实验的主要限制在于只使用了一种染色剂来染色染色体，可能无法获取所有染色体的完整信息。
植物染色体标本制备的注意事项
1. 取材可得选对咯！就像你去挑衣服，得选合适的呀。
可别随随便便拿个植物就开始，一定要找生长旺盛、细胞分裂活跃的部位，不然怎么能制备出好的标本呢？比如说洋葱根尖就很不错哟！
2. 预处理很重要哇！这就好比给植物来个“美容前奏”。
不处理好，后面的步骤可就难搞啦。
比如固定的时候，时间和试剂都得掌握好，不然效果会大打折扣呀！
3. 解离也得小心呐！这可不能乱来，就跟拆玩具一样，得有技巧。
要是解离过度或者不足，都会出问题的嘞，怎么能看清染色体呀！就像切菜，不能切得太碎或太粗嘛！
4. 染色也有讲究滴！染色剂可不能乱选乱涂呀，那可是染色体的“华服”呢。
要选对染色剂，均匀上色，不然怎么能让染色体美美的展示出来呢，你说是不是？
5. 制片的时候轻点哟！千万别毛手毛脚的，这就像对待宝贝一样得小心翼翼。
压片要是太用力，把细胞都弄破了咋办呀？那不等于白忙啦！
6. 观察得仔细呀！这可是关键时刻呢，你得瞪大眼睛好好找。
别找半天啥都没看到，那不就悲剧了嘛！就好像找你丢了的东西一样，得仔细点呀！
7. 保持环境清洁呀！这可不是小事哦，脏兮兮的怎么能做出好标本呢？难道你能在垃圾堆里找出宝贝不成？所以一定得注意环境哦！
8. 操作得规范呐！每一步都要严格按照要求来，不能偷懒也不能乱搞哟！这就像走钢丝，一步错步步错呀！
总之，植物染色体标本制备可不能马虎，每个环节都得认真对待，这样才能成功呀！。
普通生物学实验课须知1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。
2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。
3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。
如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。
4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。
5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。
6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。
7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。
8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。
9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。
10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。
植物细胞染色体标本的制作与观察上课地点：化学楼120 上课时间：选课时任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：课程要求：预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。
实验注意事项：1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；2、实验废物按实验室管理老师要求收集；3、实验结束后，经老师检查后方可离开。
实验纪律：1、按时上课2、穿实验服（白大衣）3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗4、手机静音实验成绩：预习报告： 20分实验操作： 40分报告内容：结果和讨论 40分植物细胞染色体标本的制作与观察1. 实验背景与原理染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
普通生物学实验课须知
1.新生进实验室之前要认真阅读实验室基本知识。
2.每次进入实验室的时间为以课表为准，提前10分钟进入实验室。
3.应严格按照实验平台上预约时间进入实验室进行实验，不来者，视为旷课。
如因特殊情况请假，需在实验开始前至少三天向指导教师说明，在选课平台系统中取消原预约时间，重新预约，一次不做实验或一次不交报告，即按不及格论处。
4.预习实验内容和有关知识，写好预习报告（手写）,前四部分内容（一、实验目的，二、实验原理，三、实验器材与试剂，四、实验步骤与操作方法），无预习报告者扣10分。
5. 实验过程中应认真操作，仔细观察实验现象，做好原始记录(三个实验需要用相机或手机拍照，DNA指纹图谱实验需用U盘拷贝实验结果，请自备拍照工具和U盘)。
6. 预习、课堂操作、课堂纪律、善后处理、实验报告是评分的依据。
7. 实验完毕，要将自己使用的仪器刷洗干净，药品按序恢复原位，台面擦净，把自己做实验的一套东西找齐，经指导老师检查合格并签字后方可离开。
8. 值日生要认真清扫地面、水槽、台面，检查水、电、门窗是否关好。
9. 实验讲义：实验预约系统中可以下载，也可到生命科学与技术学院网站下载。
10. 实验报告模板见附件，需注明姓名、学号、组号、做实验具体时间。
植物细胞染色体标本的制作与观察
上课地点：化学楼120 上课时间：选课时
任课教师：陈丽杰办公地点：生化楼215 电话：84706308
课程要求：
预习实验内容，掌握实验目的及原理、仪器和试剂、实验步骤；
手写完成预习报告（实验名称、实验目的、实验原理、实验器材与试剂、实验方法与步骤），课堂检查预习报告情况。
实验注意事项：
1、实验台上物品按实验室管理老师要求摆放整齐；
2、实验废物按实验室管理老师要求收集；
3、实验结束后，经老师检查后方可离开。
实验纪律：
1、按时上课
2、穿实验服（白大衣）
3、不许吃东西，课堂严禁大声喧哗
4、手机静音
实验成绩：
预习报告：20分
实验操作：40分
报告内容：结果和讨论40分
植物细胞染色体标本的制作与观察
1. 实验背景与原理
染色体的研究在生物进化、发育、遗传和变异中都有十分重要的作用。
因此，染色体标本的制备技术是遗传学、细胞生物学、染色体工程、分类学等众多学科的基本实验技术。
物种细胞内染色体数目、形态、长度等信息的总和根据实验的观察和测量绘制成的模式图称为核型（karyotype）。
核型分析在物种亲缘鉴定，染色体变异分析，杂种分析，细胞分裂过程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。
染色体标本的常规制片方法有切片法、涂片法、压片法、滴片法（空气干燥法）等。
压片法操作简单，是常用的植物染色体标本制备的方法。
不过，该法在制备中要注意避免压片所造成的染色体的扭曲、变形和丢失的现象。
染色体制备的重要环节如下：
（1）取材：应取分生旺盛的组织或细胞。
在植物中通常取根尖，在分裂高峰时取材，可得到大量分裂相细胞。
而在动物细胞中通常选取骨髓等分裂活跃的细胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴细胞，也可选取分裂旺盛的体外培养的癌细胞或转化细胞等。
（2）预处理：使用秋水仙胺等药品破坏纺锤体形成，不但可得到大量分裂相细胞，而且可使染色体缩短变粗，有利于观察。
（3）固定：渗透力强的固定液将细胞迅速杀死，蛋白质沉淀，并可尽量保持细胞原有状态。
（4）解离或低渗：植物细胞要除去细胞间的果胶层，并使细胞壁软化，从而使细胞得以膨胀，为染色体的分散提供了空间。
常用解离方法有酸解法和酶解法。
动物细胞无细胞壁，通常不需解离，而是用低渗液使细胞膨胀。
（5）染色体分散：通过压片、滴片等机械力量使染色体分散, 有利于观察。
2. 实验目的
（1）掌握常规压片技术制作植物染色体标本的一般方法。
（2）了解显微镜下常规显色的植物细胞染色体的形态特点, 熟练掌握显微镜的使用。
（3）理解染色体与生命遗传的意义及染色体核型检查的应用。
3. 实验材料与试剂
（1）材料：市售大蒜。
（2）设备与用品：普通光学显微镜，水浴锅，盖玻片，载玻片，异物针，镊子，平皿，滤纸等。
（3）药品与试剂：秋水仙胺，甲醇，盐酸等。
●改良石炭酸品红染液：
是近年来观察植物染色体时使用的比较理想的染色剂，染色背景清晰，反差好，使用方便。
配制方法如下：
原液A：取3 g碱性品红溶于100 mL 70%的酒精中，此液可以长期保存。
原液B：取A液10 mL加入90 mL 体积分数为0.05的苯酚（即石炭酸）水溶液中（2周内使用）。
原液C：取B液55 mL加入6 mL的冰醋酸和6 mL 37%的甲醛（可长期保存）。
染色液：取C液10 mL，加入90 mL 体积分数为0.45的醋酸和1.8 g山梨醇。
放置2周后使用，染色效果显著，可普遍用于植物组织的压片法和涂片法，使用2～3年不变质。
山梨醇为助渗剂，兼有稳定染色液的作用。
如果没有山梨醇，也能染色，但效果稍差。
●卡诺固定液：甲醇-冰醋酸（体积比3：1），现用现配。
4. 实验方法与步骤
●实验内容：①压片法制备大蒜根尖细胞的染色体标本；
②观察男人和女人染色体、洋葱细胞有丝分裂的永久标本。
●实验学时：3学时。
（1）取材：保持大蒜根部湿润，使根发约1~1.5 cm即可，不能过长。
取大蒜0.5~1 cm的根尖。
（2）预处理：0.5~2 gL-1（用纯水配制）秋水仙胺处理3~4 h。
（3）固定：卡诺固定液4 ℃下固定30 min后，用蒸馏水洗净。
（4）解离：60 ℃水浴下1 mol/L HCl（浓盐酸稀释大约10倍）解离10 min。
（5）洗涤：用蒸馏水清洗根尖组织。
若洗不净，会影响染色。
（6）用改良的石炭酸品红染色5 min，可直接在载玻片上进行，染色前可用异物针去掉分生区以后部分，保留根尖0.2~0.3 cm即可。
染色时用针把组织拨散。
（7）压片，敲片：盖上盖玻片，上面垫上一张滤纸，先用手指轻轻均匀地按压
盖玻片，使组织初步压散，并且可使盖玻片压牢，防止敲片时盖玻片移动。
再用异物针的针柄一端垂直轻轻落下（为防敲碎玻片，可再在盖玻片上垫一张滤纸），进一步敲散组织，使染色体充分散开。
敲至组织在玻片上呈现雾状。
（8）观察结果：细胞核着色，而细胞质不着色。
大蒜有8对16条染色
体（2n=16）。
好的染色体标本染色体应该分散较好，不重叠，不缺失，染色体形态清晰。
20µm
大蒜根尖细胞的染色体制片（×400，箭头示染色体）
5. 实验注意事项
（1）若材料不易生根，可把材料在4 ℃低温处理促使其生根，不过注意低温有时也会诱导染色体数目加倍。
过长的根尖分裂相会大大减少，所以不要取长度超过1.5 cm的根尖。
（2）秋水仙胺，又名脱甲酰秋水仙碱，毒性比秋水仙碱（秋水仙素）小，作用却比秋水仙碱强约10倍。
（3）压片、敲片时力量要均匀合适，避免弄碎玻片；载玻片和盖玻片之间也不要移动。
（4）可随时镜检判断敲片进行的程度，但要注意整个过程要保持标本的湿润。
6. 思考题
若染色体标本结果不理想，请分析一下可能的原因有哪些？
附件2：大连理工大学实验报告封皮范本
大连理工大学
本科实验报告
课程名称：普通生物学实验
学院（系）：
专业：
班级：
学号：
学生姓名：
年月日
附件3：大连理工大学实验报告范本
大连理工大学实验报告
学院（系）：专业：班级：
姓名：学号：组：___ 实验时间：实验室：实验台：
指导教师签字：实验班级号：成绩：实验名称：植物细胞染色体标本的制作与观察
一、实验目的
二、实验原理
三、实验材料与试剂
四、实验步骤
五、实验结果
六、实验讨论
注：预习报告完成前四项即可。
