HPLC法同时测定黄蒲通窍胶囊中3种蒽醌类成分的总含量

HPLC法同时测定银黄颗粒中三种黄酮类成分的含量图1 275 nm下的HPLC-DAD色谱图A.混合对照品，B.银黄颗粒样品；1.黄芩苷，2.汉黄芩苷，3.黄芩素2.5 线性关系的考察、检出限和定量限精密吸取混合对照品储备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，逐步稀释成一系列不同浓度的对照品溶液，进行测定。

以信噪比10∶1求得定量限（LOQ），以信噪比3∶1求得检出限对照品（LOD）。

按规定色谱条件测定。

结果表明三种化合物均有良好的线性关系，定量检出限（S/N=10）在1.08～1.55 μg/ml（表1）。

表1 三种化合物的回归方程、相关系数、线性范围和检出限（n=3）2.6 精密度试验称取上述实验已研细的银黄颗粒细粉1.0 g，精密称定，按规定方法制备供试品溶液，连续进样6次，测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的峰面积，结果上述3种黄芩黄酮类成分峰面积的RSD分别为0.68%、0.19%、0.85%，表明该测定方法批内精密度良好。

取上述实验已研细的银黄颗粒细粉1.0 g，精密称定，按规定的方法制备供试品溶液，连续进样6次样品3批，计算得黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素峰面积的RSD分别为1.35%、0.96%、1.59%，表明仪器的批间精密度良好。

2.7 稳定性试验精密称取银黄颗粒细粉1.0 g，制备成供试品溶液，按2.1同样色谱条件，分别于0、4、8、12、24 h进样20 μl测定。

通过计算黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素峰面积的RSD分别为1.77%、1.56%、1.81%。

表明供试品溶液在室温下放置24 h银黄颗粒中的三种被测成分均较稳定。

2.8 重复性试验精密称取银黄颗粒细粉1.0 g，平行制备6份供试品溶液，测定峰面积并计算得黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素平均含量分别为50.22、0.43、0.45 mg/g，RSD分别为0.71%、1.44%、1.48%。

表明该方法具有良好的重复性。

2.9 加样回收率试验取已测定含量的银黄颗粒细粉0.5 g共计9份，分别按样品含量：对照品加入量为（0.5～1.5）∶1的比例加入一定量的对照品溶液，按规定方法制备实验用供试品溶液，测定黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素的加样回收率及RSD。

HPLC法测定不同产地大黄中四种蒽醌类化合物含量
李元辉
【期刊名称】《中国现代中药》
【年(卷),期】2005(007)006
【摘要】目的:测定不同产地大黄中的蒽醌类化合物的含量.方法:以Kromasil ODS2-1(5μm,4.6mm×250mm)为色谱柱,甲醇-水-冰醋酸(92:8:0.4)为流动相,检测波长为254nm.结果:各组分得到良好分离,平均回收率为98.4%～100.6%,RSD 为2.1%～2.8%.测得正品中大黄芦荟大黄素0.28%～0.56%,大黄酸0.32%～
0.84%,大黄素0.16%～0.61%,大黄酚0.44%～1.3%,波叶大黄和圆叶大黄不含芦荟大黄素.
【总页数】2页(P17-18)
【作者】李元辉
【作者单位】广东东方新特药公司,广东,广州,510170
【正文语种】中文
【中图分类】R2
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HPLC同时测定盆炎净胶囊中3种有效成分含量DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.05.019Simultaneous Contents Determination of Three Active Ingredients in Penyanjing Capsules by HPLC YUAN Zhi-ying1， YANG Yan-tao1， LI Rong-dong1， LI Zhe1， OUYANG Ji-de2 （1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China； 2. Chenzhou Institute for Food and Drug Control， Chenzhou 423000，China）Abstract： Objective To establish an HPLC method for simultaneous contents determination of paeoniflorin，protocatechuic acid and chlorogenic acid in Penyanjing Capsule. Methods The chromatographic separation was performed on a SHIMADZU VP-ODS-C18 column （4.6 mm × 250 mm， 5 ?m）； the column temperature was maintained at 30 ℃； A gradient elution of acetonitrile-0.15% phosphoric acid aqueous solution was adopted at the flow rate of 1.0 mL/min； The UV detection wavelengths were at 231， 255， and 326 nm； The injection volume was 20 ?L. Results Paeoniflorin，protocatechuic acid and chlorogenic acid could be separated efficiently with this condition. The regression equation wasY=1546.412 8X+127.075 6 （r=0.999 9）， Y=2925.846 8X+2204.107 6 （r=0.999 8）， Y=893.904 5X-261.731 5 （r=0.999 4）， respectively. Paeoniflorin， protocatechuic acid and chlorogenic acid were linearin the range of 150.054?C1254.50 ng， 162.33?C1352.75 ng，11.43?C95.25 ng， and the average recoveries were 97.60%， 102.09% and 98.52%. Conclusion The method is simple， convenient and accurate， which can be used to the quality control of Penyanjing Capsule.盆炎净胶囊是在盆炎净颗粒（卫生部药品标准WS3-B-2387-97）的基础上改变剂型而成，由忍冬藤、蒲公英、鸡血藤、益母草、狗脊、车前草、赤芍、川芎共8味药组成，具有清热利湿、和血通络、调经止带之功效，适用于湿热下注、白带过多等妇科带下病，是临床常用中成药之一，疗效确切[1]，且未见明显不良反应。

式及载体树脂的选择、偶合体系的选择、裂解体系的选择以及困难片段及杂质的研究等方面必然已经做过充分的研究论证，应该得到了最优的合成方案。

但转移至工业化生产后仍会产生问题，究其原因主要在于固相合成反应为非均相反应，随着反应体系的增大，必然导致反应的不完全。

虽然通过增加物料投料量，延长反应时间，适当提高反应温度，增加氮气鼓泡流量等方法能提高反应效率，但伴随而来的副反应的发生及成本的升高往往会使生产企业陷入两难境地。

这时需要综合成本收益进行综合判断，找出最佳平衡位置。

且工业合成中对氨基酸脱保护反应的监控多为茚三酮或二级胺检测，两种检测均为定性检测，是“全”或“无”的判断，并不能定量检测反应。

前文描述的带UV实时监测的全自动多肽合成仪均为进口品牌，设备昂贵且后期维护运营成本过高，因此亦不是公司首选方案。

针对于上述问题，目前可以考虑针对反应过程控制中增加紫外检测。

即进行茚三酮或二级胺检测的同时，取反应液使用紫外分光光度计对吸收值进行跟踪。

虽然会增加人力成本，但相比于全自动UV在线监测设备或放弃对吸收值进行监测来说，这种方法无疑是折中的可取之法。

随着药物研究的日渐深入，全新的化学小分子药物的开发已经越来越难，因此学者把目光转向多肽类药物，截至目前，全球多肽药物已经突破千种。

2019年全球销售额超过十亿美元的重磅肽类药物有十个，其中本文所述的亮丙瑞林上榜。

可以预见随着研究的不断深入，越来越多的多肽类 “重磅炸弹”将在医药市场展露手脚。

相关行业预测到2025年中国多肽类药物行业市场规模有望突破千亿大关。

因此，现阶段对于多肽类药物的工业化生产来说未来有两个方面工作需要去落实。

对于成熟产品来说，要不断寻求更加优化的反应条件，降低合成成本，不断提升产品的质量，增强产品核心竞争力。

另一方面要加强新产品的研究，通过对反应条件的摸索，反应设备的优化争取早日将只能在实验室合成的困难多肽化合物成功商业化。

参考文献[1] 王卫芳. DNase Ⅱ融合蛋白（PLTD）的表达及其对肿瘤细胞抑制作用的研究[D]. 吉林：吉林大学，2009.[2] 谢菲. 大鼠肝细胞GnRH受体的表达及其影响的研究[D]. 西安：第四军医大学，2008.[3] 顾秀瑛，郑荣寿，张思维，等. 2000-2014年中国肿瘤登记地区前列腺癌发病趋势及年龄变化分析[J].中华预防医学杂志， 2018，52（6）：586-592.[4] 郑荣寿，孙可欣，张思维，等. 2015年中国恶性肿瘤流行情况分析[J].中华肿瘤杂志，2019， 41（1）： 19-28.[5] 曹德宏，柳良仁，魏强，等. 前列腺癌的治疗研究进展[J].华西医学， 2017， 32（2）： 277-281.[6] 王克全，徐寒梅. 多肽类药物的研究进展[J]. 药学进展， 2015，39（9）： 642-650.[7] 李睿，吴宗好，陈卫东. 小分子多肽的来源新进展[J]. 中南药学，2016， 121（2）： 175-178.[8] 李婉琼，高艳峰. 抗肿瘤多肽药物研究进展[J].药学进展， 2019，43（10）： 759-766.[9] 马中刚，郭德文，曾德志，等. 一种合成阿巴瑞克的方法：中国专利．CN107778354A [P]．2018.03.09.[10] 闫雪峰，郭彦亮，游军辉，等. 一种合成醋酸地加瑞克的方法：中国专利．CN110218243A[P]．2019.09.10.[11] 彭雅丽，王锐，贺真，等. 片段缩合制备地加瑞克的方法：中国专利．CN109575109A [P]．2019.04.05.[12] Ponsati OBI，Canas PMI，Jodas FGI，et al. Solid phase peptide synthesis method： EP1179537A1[P]．2002.02.13.[13] 张利香，支钦，梁译丹，等. 亮丙瑞林新型缓释药物的制备[J]. 中国处方药， 2019，17（7）：56-59.[14] 李湘，徐琪. 一种醋酸亮丙瑞林的工业化制备方法：中国专利．CN106146622A [P]．2016.11.23.[15] Fujino Masahiko，Fukuda Tsunehiko，Shinagawa Susumu. Nonapeptide amide analogs of luteinizing releasing hormone：US4008209A[P]．1977.02.15.[16] 夏丹，王良友，孙锋. 戈舍瑞林的固相合成方法：中国专利．CN104910257A [P]．2015.09.16.[17] 徐红岩，张旭光. 一种组氨瑞林的合成方法：中国专利．CN102850437A [P]．2013.01.02.[18] 赵东明，张明义，张林，等. 一种曲普瑞林及其固相合成制备方法：中国专利．CN103012565A [P]．2013.04.03.HPLC法测定三黄肠溶胶囊中4种成分的含量及溶出度江慧 ，常金花，刘翠哲＊（河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000）【摘要】目的 建立HPLC法测定三黄肠溶胶囊中4种有效成分含量的方法，考察三黄肠溶胶囊溶出度。

2019年6月| 33酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均达到基线分离，理论板数按大黄素峰计算均不低于5000，拖尾因子均在0.95～1.05，阴性对照无干扰。

见图1。

A. 混合对照品溶液；B. 供试品溶液；C. 阴性供试品溶液1.芦荟大黄素；2.大黄酸；3.大黄素；4大黄酚；5大黄素甲醚图1 对照品、供试品及阴性供试品的色谱图2.6 线性关系考察按照2.2项下的方法，取各对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含芦荟大黄素58.78μg、大黄酸116.00μg、大黄酚67.93μg，大黄素41.40μg，大黄素甲醚22.06μg 的混合标准储备液。

再以甲醇对倍稀释，摇匀，即得系列混合对照品溶液。

吸取各浓度混合对照品溶液10μL，进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

回归方程及线性范围分别为芦荟大黄素Y=49.092x+2.0575，1.84～58.78μg ·mL -1，r=1；大黄酸Y=43.821x+4.6572，3.63～116.00μg ·mL -1，r=1；大黄素Y=35.906x+0.9923，1.29～41.40μg ·mL -1，r=1；大黄酚Y=52.149x+3.8537，2.12～67.93μg ·mL -1，r=1；大黄素甲醚Y=40.763x+0.5908，0.69～22.06μg ·mL -1，r=1。

2.7 定量限将对照品溶液稀释进行测定，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的定量限分别为0.92、1.59、1.48、0.71、0.78ng。

0 引言一种保健食品减肥片由制大黄、泽泻等有效成分组成，具有辅助减肥的保健功能。

其中制大黄含蒽醌类化合物，具有多种活性[1-3]。

本试验采用HPLC 法建立了总蒽醌5个成分的含测方法，结果表明此法专属性、重复性好，为大黄类保健食品的质量标准研究提供了依据。

1 仪器与试剂Agilent 1200液相色谱仪，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚均购自中国食品药品检定研究院，甲醇、乙腈为色谱纯。

RP—HPLC法同时测定胆石消胶囊中四种蒽醌类成分的含量目的建立以RP-HPLC法同时测定胆石消胶囊中大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定方法。

方法采用Waters SunFire C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-0.1%磷酸（85∶15）为流动相，流速：1.0 ml/min，柱温：28℃，检测波长：254 nm。

结果大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚进样量分别在0.132 08～0.792 48 μg、0.087 52～0.525 12 μg、0.111 84～0.671 04 μg、0.080 16～0.480 96 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数分别为0.9998、0.9996、0.9994、0.9997，平均加样回收率分别为99.32%、98.80%、99.05%、99.14%，RSD分别为0.76%（n=9）、1.31%（n=9）、1.41%（n=9）、0.94%（n=9）。

结论本方法简便易行，专属性强，准确度高，重现性好，可作为胆石消胶囊质量控制方法。

[Abstract]Objective To establish the content determination method of rhein，emodin，chrysophanol and physcion in Danshixiao capsules via RP-HPLC method.Methods Waters SunFire C18 column （250 mm×4.6 mm，5 μm）was adopted，and methanol-0.1% phosphate （85∶15）was selected as mobile phase，with flow rate：1.0 ml/min，column temperature：28℃，and determination wavelength：254 nm.Results Sample size of rhein，emodin，chrysophanol and physcion was within the range of 0.132 08-0.792 48 μg，0.087 52-0.525 12 μg，0.111 84-0.671 04 μg，and 0.080 16-0.480 96 μg respectively，which showed favorable linear relations with peak areas.The correlation coefficient was 0.9998，0.9996，0.9994 and 0.9997 respectively，the average recovery rate was 99.32%，98.80%，99.05%，99.14% respectively，and RSD was 0.76% （n=9），1.31% （n=9），1.41% （n =90），0.94% （n =9）respectively.Conclusion The method is easy to operate，with high specificity，high accuracy and good reproducibility，which is able to be taken as the quality control method of Danshixiao capsules.[Key words]Reversed phase high-performance liquid chromatography；Danshixiao capsules；Rhein；Emodin；Chrysophanol；Physcion胆石消胶囊为医院制剂，处方中含有大黄、茵陈、金钱草、黄芩等中药材，具有清热利湿、利胆排石的功效，临床用于胆道结石、胆道感染以及胆囊炎等，疗效显著。