第３５卷第６期 ２０１０年１２月 贵 阳 医 学 院 学报
ＪｏＵＲＮＡＬ ＯＦ ＧＵＩＹＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＣＯＬＬＥＧＥ ＶＯ１．３５ ＮＯ．６ ２０１０．１２
ＨＰＬＣ法测定六昧
合蒽醌的含量
许乾丽，茅向军，熊慧林
（贵州省药品检验所，贵州贵阳５５０００４） 安消 胶囊中游离蒽醌、总蒽醌和结
［摘 要］目的：建立用高效液相色谱法测定六味安？肖胶囊中游离蒽醌、总蒽醌和结合蒽醌含量（以大黄素和
大黄酚的总量计）的方法。方法：采用依利特Ｃ． 柱，流动相为甲醇一０．１％磷酸溶液（８Ｏ：２０），检测波长为 ２５４ ｎｍ。结果：大黄素、大黄酚分别在０．０１６ ２—０．３２３ ２ ｔｚｇ和０．０３５ ６～０．７１２ ８ ｇ范围内线性关系良好，游离 蒽醌中大黄素和大黄酚的平均回收率分别为１００．０８％、９９．１１％，ＲＳＤ分别为０．３７％、２．７０％；总蒽醌中大黄素和 大黄酚的平均回收率分别为１０１．６２％、１００．５４％，ＲＳＤ分别为２．４０％、１．３７％。结论：ＨＰＬＣ法简便，准确，可作 为六味安消胶囊的质量控制定量分析方法。
［关键词］色谱法，高压液相；蒽醌类；大黄素；大黄酚
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００—２７０７（２０１０）０６－０５７８－０３
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｒｅｅ，Ｔｏｔａｌ ａｎｄ Ｂｉｎｄｉｎｇ ＡｎｔｈｒａｑｕｉｎＯｎｅｓ
ｉｎ Ｌｉｕｗｅｉ Ａｎｘｉａｏ Ｃａｐｓｕｌｅｓ ｗｉｔｈ ＨＰＬＣ
ＸＵ Ｑｉａｎｌｉ，ＭＡＯ Ｘｉａｎｇｊｕｎ，ＸＩＯＮＧ Ｈｕｉｌｉｎ
（Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｇｕｉｙａｎｇ ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）
ｊ Ａｂｓｔｒａｃｔ ｌ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａｎ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｅｅ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ．ｔｏｔａｌ ａｎ—
ｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ ｉｎ Ｌｉｕｗｅｉ Ａｎｘｉａｏ ｃａｐｓｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ Ｃ１ ８ ｃｏｌｕｍｎ
（２００ ｍｍ×５．０ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈｎｏｌ一０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ ａｃｉｄ（８０
：２０）．Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １ ｍＬ・ｍｉｎ～ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ
ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｅｍｏｄｉｎ ａｎｄ ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ ｗｅｒｅ ０．０１６ ２～０．３２３ ２ｔｘｇ ａｎｄ ０．０３５６～０．７１２８ｔｘｇ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ ｗｅｒｅ １００．０８％（ＲＳＤ＝０．３７％）ｆｏｒ ｅｍｏｄｉｎ，ａｎｄ ９９．１１％（ＲＳＤ＝２．７０％）
ｆｏｒ ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ ｉｎ ｆｒｅｅ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ。ａｎｄ １０１．６２％（ＲＳＤ＝２．４０％）ｆｏｒ ｅｍｏｄｉｎ，ａｎｄ １００．５４％
（ＲＳＤ＝１．３７％）ｆｏｒ ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ ｉｎ ｔｏｔａｌ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｃｈｒｏｍａｔｒｏｇｒａｐｈｙ，ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ；ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ；ｅｍｏｄｉｎ；ｃｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ
六味安消胶囊由藏木香、大黄、山奈、北寒水石
（煅）、诃子和碱花六味药组成，具有和胃健脾、导
滞消积、行血止痛之功效，用于胃痛胀满、消化不
良、便秘、痛经等症＿】ｊ。方中大黄为君药，原标准
对方中大黄所含大黄素一种成分进行含量测定，为
更加有效的控制六味安消胶囊的质量，参考《中国
药典））２０１０年版一部及有关文献资料 一，２０１０年
２～３月采用高效液相色谱法，测定该制剂大黄中
游离蒽醌、总蒽醌和结合葸醌（以大黄素和大黄酚
的总量计）的含量，该法简便、准确、可靠，可作为
５７８ 六味安消胶囊的质量控制方法。
１仪器与试药
１．１仪器
岛津ＬＣ－２０Ａ高效液相色谱仪，ＬＣ－２０ＡＴ输液
泵，ＣＴＯ．２０Ａ柱温箱，ＳＩＬ－２０Ａ自动进样装置；ＳＰＤ．
２０Ａ紫外检测器，ＣＢＭ．２０Ａ通讯集成器及ＬＣ．ｓｏｌｕ．
ｔｉｏｎ色谱工作站，ＴＣＱ一２５０超声波清洗器（北京医
疗设备二厂）。
６期 许乾丽等ＨＰＬＣ法测定六味安消胶囊中游离蒽醌、总蒽醌和结合蒽醌的含量
１．２试药
大黄素、大黄酚对照品由中国药品生物制品检
定所提供，供含量测定用（大黄素批号１１０７５６—
２００５１０，大黄酚批号１１０７９６—２００６１５），甲醇为色
谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。六味
安消胶囊样品及阴性样品由贵州信邦药业有限公
司提供。
２方法与结果
２．１色谱条件
色谱柱：大连依利特Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ ２，Ｃ
（２００ ｍｌＹｌ×５．０ ｍｍ，５ Ｉｘｍ）；流动相：甲醇一０．１％
磷酸溶液（８０：２０），检测波长２５４ ｎｍ；流速
１．０ ｍｌ／ｍｉｎ，进样量１０ ｌ，理论塔板数以大黄素
峰计算，应不低于４ ５００。
２．２对照品溶液的制备
精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲
醇制成每１ ｍｌ各含大黄素０．００８ １ ｍｇ、大黄酚
０．０１７ ８ ｍｇ的对照品混合溶液，即得。
２．３供试品溶液的制备
２．３．１ 取本品装量差异项下内容物，混匀，取
０．６ ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇一
盐酸（１０：１）混合溶液２５ ｍｌ，置８０℃水浴中加热
回流３０ ｍｉｎ，取下，放冷，转移至５０ ｍｌ容量瓶中；
用适量甲醇洗涤锥形瓶数次并人５Ｏ ｍｌ量瓶中，加
甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用于测定总大 黄素和总大黄酚的含量，两者之和为总蒽醌的量。
２．３．２取本品装量差异项下的内容物、研细、混
匀，取约０．７ ｇ，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加
人甲醇２５ ｍｌ，称定重量，置８０℃水浴中加热回流
３０ ｒａｉｎ，取下，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失
的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用于测定游离大黄
素和游离大黄酚的含量，两者之和为游离蒽醌的
量。
２．３．３分别精密吸取对照品溶液与上述两种供试
品溶液各１０—２０ ，注入液相色谱仪，测定，计算
总大黄素和总大黄酚的总量（总蒽醌）与游离大黄
素和游离大黄酚的总量（游离蒽醌）；用总蒽醌量
与游离蒽醌量的差值，作为结合蒽醌的量，即得。
２．４阴性样品的制备
取缺大黄的阴性样品，分别按“２．３．１”总葸醌
和“２．３．２”游离蒽醌的供试品溶液的制备方法制
备，即得。
分别取大黄素、大黄酚混合对照品溶液、供试
品溶液和缺大黄药材的阴性样品溶液注入液相色
谱仪，见图１。从图中可见，大黄素、大黄酚的保留
时间分别约为：８ ｍｉｎ、１１ ｒａｉｎ，阴性样品色谱图在
大黄素、大黄酚位置处无吸收峰，大黄素、大黄酚和
其相近的其它峰分离完全（分离度大于１．５），即本
试验条件下大黄素、大黄酚与其他组分分离完全。
处方中其它药味对测定结果无影响。理论板数样
品和对照品中的大黄素、大黄酚分别均大于
１０ ０００。
ａ一大黄素、大黄酚对照品，ｂ一六味安消胶囊测游离蒽醌样品，ｃ．游离蒽醌阴性样品 ｄ一大黄素、大黄酚对照品，ｅ一六味安消胶囊测总蒽醌样品，ｆ＿总蒽醌阴性样品
图ｌ 高效液相色谱图
Ｆｉｇ．１ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ
５７９ 贵阳医学院学报 ３５卷
２．５线性关系的考察
精密称取大黄素、大黄酚对照品适量，加甲醇制
成每１ ｍｌ含大黄素０．０１６ ２ ｍｇ、大黄酚０．０３５ ６ ｍｇ
的对照品混合溶液。分别精密吸取上述对照品混
合溶液１、４、８、１２、１６、２０ ｌ，注入液相色谱仪，按上
述色谱条件进行测定。以进样量（Ｉｘｇ）为横坐标，
以峰面积为纵坐标，得回归方程为大黄素Ａ＝５．８４
×１０。Ｘ一６．０３×１０ ，ｒ＝０．９９９ ９８；大黄酚Ａ＝５．０２
×１０。Ｘ一６．１ １×１０ ，ｒ＝０．９９９ ９４。结果表明，大黄
素在０．０１６ ２—０．３２３ ２ ｔｘｇ范围内呈良好线性关
系，大黄酚在０．０３５ ６～０．７１２ ８ Ｉｘｇ范围内呈良好
线性关系。
２．６精密度试验
精密吸取大黄素、大黄酚对照品混合溶液
１０ ｌ，注入高效液相色谱仪，重复进样６次，测定
大黄素、大黄酚的峰面积，６次测定结果的ＲＳＤ分
别为０．５２％、０．５４％，说明仪器的精密度良好。
２．７稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液１０ ｌ，分别于０、１、
２、４、６、８ ｈ各测定一次。结果游离葸醌中大黄素、
大黄酚峰面积的ＲＳＤ分别为１．３１％和０．６９％，总
蒽醌中大黄素、大黄酚峰面积的ＲＳＤ分别为
１．２９％和０．４５％，表明测游离和总葸醌的供试品
溶液在８ ｈ内均稳定性良好。
２．８重复性试验
精密称取供试品（批号２００９０３０１）６份，按上述
供试品溶液制备方法制备，测定。结果游离蒽醌中
大黄素、大黄酚平均含量分别为０．３２６ ３ ｍｇ／ｇ和
０．５８１ ９ ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ分别为１．７１％、２．８１％，总葸醌
中大黄素、大黄酚平均含量分别为０．７９１ ３ ｍｇ／ｇ和
２．０６０ ６ ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ分别为１．ｏ４％、１．１１％。
２．９回收率试验
精密称取已知含量的六味安消胶囊供试品
（批号２００９０３０１）约０．３５ ｇ，精密加入大黄素
（０．０２０ ２２ ｇ／Ｌ）、大黄酚（０．０２９ ７０ ｇ／Ｌ）的对照品
混合溶液５．０ ｍｌ，再精密加入甲醇２０ ｍ１，按
“２．３．２”制备供试品溶液方法制备、测定，计算游
离蒽醌中大黄素和大黄酚的回收率，见表１、２。精
密称取已知含量的六味安消胶囊供试品（批号
２００９０３０１）约０．３ ｇ，精密加入大黄素（０．１５７ ２ ｇ／Ｌ）、
大黄酚（０．７４２ ５ ｇ／Ｌ）的对照品混合溶液１．０ ｍｌ，再
精密加入甲醇一盐酸（１０：１）混合溶液２５ ｍｌ，按
“２．３．１”制备供试品溶液方法制备、测定，计算总蒽
醌中大黄素和大黄酚的回收率。结果见表３、４。
５８０ 表１ 游离葸醌中大黄素的回收率
Ｔａｂ．１ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｍｏｄｉｎ
ｆｒｏｍ ｆｒｅｅ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ
表２ 游离蒽醌中大黄酚的回收率
Ｔａｂ．２ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ
ｆｒｏｍ ｆｒｅｅ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ
表３ 总蒽醌中大黄素的回收率
Ｔａｂ．３ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｍｏｄｉｎ
ｆｒｏｍ ｔｏｔａｌ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ
表４ 总葸醌中大黄酚的回收率
Ｔａｂ．４ Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｅｈｒｙｓｏｐｈａｎｏｌ
ｆｒｏｍ ｔｏｔａｌ ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ
２．１０样品含量测定
按上述含量测定项下方法测定１Ｏ批样品含
量，结果见表５。
（下转第５８３页）
