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用HPLC指纹图谱宏观全定性全定量评价天麻质量
孙国祥;王真
【期刊名称】《中南药学》
【年(卷),期】2009(7)3
【摘要】目的采用双定性双定量相似度为评价指标,建立宏观全定性全定量控制天麻质量的方法。
方法采用反相HPLC法,以色谱指纹图谱指数F为目标函数优化选择指纹图谱条件,测定12批不同产地天麻HPLC指纹图谱,以双定性相似度(SF与SF′)和双定量相似度(C与P)评价不同产地天麻质量。
结果以天麻素峰为参照物峰,确定26个指纹峰,通过聚类分析确定用8批天麻生成对照指纹图谱(RFP),以此评价12个产地的天麻药材质量。
结论所建立指纹图谱具有较好的精密度和重现性,可作为天麻药材质量控制和真伪鉴别的有效方法。
【总页数】4页(P216-219)
【关键词】天麻;HPLC指纹图谱;色谱指纹图谱指数F;双定性相似度;双定量相似度;系统聚类分析
【作者】孙国祥;王真
【作者单位】沈阳药科大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R284;O234
【相关文献】
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中药色谱指纹图谱研究及化学计量学方法的应用当前的中药现代化是在信息化时代,科学技术高度发展,人们重新崇尚回归自然及我国对外开放,面向全球的大环境下的又一次新的浪潮。
尽管中药所含物质群非常复杂,但联用仪器和相关化学计量学方法的快速发展为中药这一复杂体系的分析与质量控制提供了强有力的手段和广阔的前景。
近年来,指纹图谱技术在国际上已广泛达成共识,色谱指纹图谱质量控制是中药质量控制领域的热点和趋势。
本论文以实际中药体系为研究对象,利用HPLC-DAD和GC-MS联用技术,结合相关化学计量学方法,进行中药色谱指纹图谱研究,为中药质量控制及药理、药效研究提供基础数据和理论依据。
论文的第一部分即第一章,论述了近年来我国中药质量控制模式的发展状况,中药指纹图谱,现代分析技术以及化学计量学解析分辨技术和模式识别方法在中药质量控制中的应用等内容。
第二部分为HPLC-DAD联用技术和相关化学计量学方法用于中药枳实色谱指纹图谱的研究(第二章和第三章)。
其中,第二章详细地阐述了枳实中黄酮类成分的高效液相指纹图谱研究。
内容主要包括样品提取条件和色谱分离条件的优化；成分分析,尤其是活性化合物的定性定量分析；首次将直观推导式演进特征投影法(heuristic evolving latent projections, HELP)用于枳实二维液相色谱指纹图谱中重叠色谱峰的解析；相似度比较分析法(Similarity comparative analysis,SCA)用于12批枳实的分析等。
第三章在第二章的基础上将化学模式识别方法——主成分分析法(Principal component analysis, PCA)和聚类分析法(Hierarchical clustering analysis, HCA)用于不同来源的38个枳实样本的色谱指纹图谱研究,对两类样本的指纹图谱的共有模式及可疑样本的指纹图谱进行比较分析,对活性化合物进行定量分析。
中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行）说明：本实验研究规程指南为在原技术要求的基础上规范中药注射剂色谱指纹图谱试验研究而制订。
本指南未能概括的内容，通过实践可自行补充调整，但申报资料或复核资料中须有相应的说明和申述。
指南中的"色谱指纹图谱"指采用柱色谱及薄层色谱等各种色谱技术实验研究的指纹图谱。
光谱指纹图谱将另行规定。
一、供试品收集供试品收集是研究指纹图谱最初也是最关键的步骤，由于不可能对一个药材的所有样本进行试验，而且生长环境条件对药材代谢产物有影响，所以要收集有代表性的供试品。
收集不少于10批供试品的含义是指样本的数和量要有足够的代表性。
（一）原料药材：在药材的化学成分与中医临床疗效的之间的关联尚未能阐明的现阶段，基本上是在承认其传统的功能主治及临床验证的基础上进行指纹图谱的实验研究。
原料药材的指纹图谱主要是反映其自然状态的内在质量情况，研究其指纹图谱是以此作为选择原药材投料或混批提取的依据，同时作为研究注射剂成品指纹图谱相关性的基础。
由于自然条件的变化，药材个体之间指纹图谱的差异是正常的，在品种鉴定无误的基础上，力争药材有较为固定和稳定的来源，个体之间的指纹图谱主要特征大致相似即可，使成品指纹图谱特征的稳定有起码的保证。
药材的"批" 不是工业生产的"批"，是指相互独立的供试品，即不能将同一地点或同一渠道同一时间获得的供试品分成若干份供试品，以保证试验结果的代表性。
由于收集药材供试品受主观和客观的条件限制，供试验的供试品严格讲均没有统计学的意义，所以供试品数越多越好，10批是最低的要求。
供试品应保证其真实性，应有完整采样原始记录，内容包括:药材名称供试品来源（真实记录供试品来自何处：传统产地收集或是资源丰富的产地收集，或者来自GAP基地供应；还是产地购买、市场购买或委托购买，等，以便于生产原料的采购选择和测试数据的可追溯）。
指纹图谱分析结合多指标成分定量用于六味五灵片的质量评价采用反相高效液相色谱法-二极管阵列检测器，以乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱，对20批六味五灵片中的6种成分进行同时分析测定，并对其指纹图谱进行研究。
结果表明6种成分（特女贞苷、连翘苷、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素）分离良好，加样回收率在98.96%～100.5%，RSD小于2.0%；在特征指纹图谱研究中，以五味子酯甲为参照峰，共标定了25个共有峰，采用夹角余弦法、相关系数法、等权比率法对指纹图谱进行了相似度分析，分析的20批六味五灵片与共有模式之间具有良好的相似性，相似度均在0.95以上。
G检验及聚类分析结果表明所建立的含量测定结合特征图谱分析方法可用于六味五灵片的质量控制。
标签：六味五灵片；HPLC；指纹图谱；质量评价六味五灵片由五味子、女贞子、连翘、莪术、苣荬菜、灵芝孢子粉组成，具有滋肾养肝、活血解毒的功能，主要用于治疗慢性乙型肝炎，获“中国肝类用药市场十大影响力品牌”称号，为山东世博金都药业有限公司独家品种。
六味五灵片中含有的多种成分都具有良好的抗炎、抗病毒、抗肝纤维化、保肝作用，如特女贞苷、连翘苷、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素[1-5]。
而原质量标准中只有五味子甲素的含量测定，测定成分单一，难以全面控制六味五灵片的质量。
中药指纹图谱方法已广泛用于中药的质量控制[6-8]，这种方法所提供的色谱指纹特征信息比目前沿用的其他方法更加丰富、全面。
中药复方制剂走向国际的前提条件之一就是需要应用色谱指纹图谱，控制中药复方制剂的质量[9]。
因此本研究在建立六味五灵片主要指标性成分特女贞苷、连翘苷、五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素含量分析方法的同时，还对20批六味五灵片进行了色谱特征谱的分析与探讨，为六味五灵片的内在质量控制提供了一种较为全面的分析手段。
1 材料高效液相色谱仪（Agilent 1100型），包括DAD检测器（美国Agilent 公司）；高效液相色谱仪（SHIMADZU），包括SHIMADZU LC-20ATVP 泵，SHIMADZU SPD-20A VP紫外检测器，CTO-20A 柱温箱，SIL-20A 自动进样器；分析天平（METTLER AE 240）；超声波清洗器（KS-300E）。
中药指纹图谱学号：m110613 姓名：范琦中药的现代化是中医药理论现代化的重要组成部分。
其中质量标准现代化是中药现代化的关键之一。
中药为多成分体系，其药效是众多单一的活性化学成分的协同综合作用，甚至某些“非活性成分”也起重要的协同作用，体现中医药理论“整体观念”和“辨证施治”之精髓。
因此，利用中药指纹图谱质量评价体系分析中药（复方）成分的整体特性是目前大家所关注的。
1.中药（复方）指纹图谱的概念和分类1.1 指纹图谱“指纹”（finger printing）鉴定来源于法医学，每个人的指纹在微小的细节构造中各有不同。
依据这些差异，通过“比对”方式，可以确定鉴别每个人的特征。
随着现代生物技术的发展，出现了DNA 指纹图谱。
通过DNA 指纹图谱分析，能对人、动物、植物等生物体进行鉴别鉴定，乃至亲子鉴定等［1］。
中药指纹图谱是借用DNA 指纹图谱发展而来的。
中药指纹图谱是指中药中的多成分借助于现代分析方法，以图、表、数据的形式表达的谱。
最先发展起来的是中药化学成分色谱指纹图谱，特别是高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。
HPLC 具有很高的分离度，可把复杂的化学成分进行分离而形成高低不同的峰组成一张色谱图，这些色谱峰的高度和峰面积分别代表了各种不同化学成分和其含量，和药效研究结果联系就会产生中药谱效学［2］。
1. 2 中药指纹图谱的分类狭义的中药指纹图谱是指中药化学（成分）指纹图谱。
广义的中药指纹图谱则可按应用对象、测定手段进行不同的分类。
（1）按应用对象分类：可分为中药材（原料药材）指纹图谱、中药原料药（包括饮片、配伍颗粒）指纹图谱和中药制剂指纹图谱。
如分得更细，还可包括用于工艺生产过程中间产物的指纹图谱。
中药材指纹图谱按测定手段又可分为中药材化学（成分）指纹图谱和中药材DNA 指纹图谱［2］。
（2）按测定手段分类：可分为中药化学（成分）指纹图谱和中药生物指纹图谱。
中药化学（成分）指纹图谱系指采用光谱、色谱和其他分析方法建立的用以表征中药化学成分的特征的指纹图谱。
