可溶性果胶检测试剂盒(咔唑比色法)

咔唑比色法测定掺假蜂蜜中果胶的含量任雪梅;胡梅;周传静;王文特;吴裕健【摘要】A method for determination of pectin content in honey was established by carbazole colorimetry. The pectin was extracted by 63 ％hot ethonal to remove the sugar in honey. The results showed that the top grade concentrated sulphurie acid should be used during the experience. And the ethonal, which was used to dilute carbazole, should be pured. The recovery of pectin was 88.2％～ 94.6％ with the detectable limit of 0.15 mg/kg.%建立了咔唑比色法测定蜂蜜中掺假果胶含量的方法.采用63%热乙醇溶液洗除蜂蜜中的糖分,提取试样中的果胶.结果表明,试验过程中试剂要采用优级纯浓硫酸,配制咔唑显色剂的乙醇使用前要进行精制.半乳糖醛酸的加标回收率为88.2%-94.6%,检出限为0.15 mg/kg.【期刊名称】《山东农业科学》【年(卷),期】2011(000)003【总页数】3页(P100-102)【关键词】蜂蜜;果胶;掺假【作者】任雪梅;胡梅;周传静;王文特;吴裕健【作者单位】山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东,济南,250100;山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东,济南,250100;山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东,济南,250100;山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东,济南,250100;山东省产品质量监督检验研究院/国家加工食品质量监督检验中心,山东,济南,250100【正文语种】中文【中图分类】O656.31;S896.1蜂蜜是一种营养丰富、组成复杂的天然食品，它不仅能为人类提供各种营养元素以满足正常的生理需要，还有增进食欲、改善肠胃功能、治疗贫血、保护肝脏、提高人体免疫能力等多种功能，因此蜂蜜成为消费者青睐的营养保健品。

3 果胶的检测技术在对果胶的研究中，通常以含量、酯化度、相对分子质量、凝胶度等作为评价指标。

3.1 果胶含量的测定目前，测定果胶含量的方法主要有：质量法、咔唑比色法、果胶酸钙滴定法和蒸馏滴定法。

果胶酸钙滴定法较适于纯果胶的测定，对于例如柑橘果皮这种有色样品，不易确定滴定终点；而蒸馏滴定法在蒸馏的时候部分糠醛会发生分解，影响回收率，故而运用较少。

所以，果胶含量的测定一般采用质量法和咔唑比色法。

近年来新的果胶含量检测方法——离子交换色谱法（Ion ex-change chromatogram，IEC）引起了人们的关注，其常用的色谱柱和检测器见表3。

吴玉萍等[1]研究了用高效液相色谱法测定烟草中果胶含量。

烟草中的果胶先采用盐酸水解，水解产生的半乳糖醛酸以Waters Sugar-Pak1钙型阳离子交换柱为固定相，0.05g/L EDTA钙钠水溶液为流动相，示差折光仪为检测器测定半乳糖醛酸含量，由半乳糖醛酸含量换算为果胶含量。

B.M. Yapo等[2]以高效阴离子色谱-脉冲安培检测（HPAEC-PAD）技术测定果胶含量。

采用脉冲安培检测器，离子色谱以CarboPacPA-100柱（250mm×4 mm i.d.）为固定相，流动相为0.1 mol/L NaOH 和0.17 M NaOAc，流速为1 mL/min；柱温30℃，测表3：检测果胶含量的离子交换色谱法3.2 果胶酯化度的测定自然界果实中天然存在的果胶都是高酯果胶，经酸或碱处理高酯果胶降低酯化度后可获得低酯果胶。

果胶中含甲氧基的最大理论值为16.3％，若该值以酯化度来表示是100％，则甲氧基含量与酯化度的转换计算式应是：酯化度= 甲氧基含量/16.3%。

果胶酯化度的检测技术由最早的比色法、滴定法发展到80年代的高效液相和气相、90年代的核磁共振和红外光谱等方法。

而近几年，拉曼光谱分析果胶的酯化度的方法也有报导。

Synytya等[4]用拉曼谱不仅可测定甲酯化程度，而且还可测定乙酰化程度。

果胶甲酯化程度试剂盒说明书 微量法100T/96S注　意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分，除了起结构支撑、物质运输等作用外，还具有抵抗逆境的作用。

果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。

测定原理：果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇，甲醇与2,4-戊二酮反应显色，在412nm 下测定吸光值；同时半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质，在450nm 下有最大吸光值。

以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体3mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂四：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入22mL 试剂六充分溶解待用，用不完的试剂4℃避光保存。

试剂六：液体25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂七：液体3mL×1 瓶，4℃保存。

试剂八：液体 2.5mL×1 瓶，4℃避光保存。

酶液提取：称取约0.1g 组织，加入1mL 蒸馏水，进行冰浴匀浆。

10000g 4℃离心10min，弃上清，留沉淀。

沉淀中加入1mL 提取液，混匀后90℃水浴2h，冷却至室温，10000g4℃离心10min，取上清待测。

测定操作表：1．甲醇生成量测定：试剂名称（μL）空白管测定管样本50提取液50试剂一25 25混匀，室温静置30min试剂二25 25试剂三20 20混匀，冰浴至紫色褪去，约需要15-30min试剂四20 20水60 60试剂五200 200混匀，60℃反应15min。

咔唑比色法测定果胶含量-标准曲线的制作1方法原理方法基于果胶物质水解，生成半乳糖醛酸在强酸中与咔唑的缩合反应。

然后，对其紫红色呈色溶液进行比色定量。

2试剂(1)乙醇(化学纯)：无水乙醇和950mL·L-1乙醇。

(2)精制乙醇：取无水乙醇(化学纯)或950mL·L-1乙醇1000mL，加入Zn粉4g和硫酸(1∶1)4mL，置恒温水浴中回流10h后，用全玻璃仪器蒸馏。

馏出液每1000mL加入Zn粉和KOH各4g，进行重蒸馏。

(3) 1.5g·L-1咔唑乙醇溶液：称取化学纯咔唑0.150g，溶解于精制乙醇，并定容至100mL。

(4)标准半乳糖醛酸：以医药公司上海化学试剂采购供应站分装的L.Light出品α-D水解半乳糖醛酸作为标准半乳糖醛酸。

(5)浓硫酸(优级纯)(注2)。

(6)0.05mol·L-1HCl溶液。

3 操作步骤(1)半乳糖醛酸标准曲线的制作：准确称取α-D-水解半乳糖醛酸100mg，溶解于蒸馏水，并定容至100mL，混合后得1mg·mL-1的半乳糖醛酸原液。

移取上述原液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0mL，分别注入100mL容量瓶中，稀释至刻度，即得一系列浓度为10、20、30、40、50、60、70μg·mL-1的半乳糖醛酸标准溶液。

取30mm×200mm的硬质大试管7支，用吸管注入浓H2SO4各12mL。

置冰水浴中冷却，边冷却边分别沿壁徐徐加入上述不同浓度的半乳糖醛酸标准溶液各2mL，充分混合后，再置冰水浴中冷却。

然后，在沸水浴中加热10min，冷却至室温后，加入1.5g·L-1咔唑溶液各1mL，充分混和。

另以蒸馏水代替半乳糖醛酸标准溶液，依上法同样处理，作为试剂空白。

室温下放置30min后，用721型分光光度计，在波长530nm下，分别测定其吸光度(A)，以测得的吸光度(A)为纵座标，每mL标准溶液中半乳糖醛酸的含量为横座标，制作标准曲线。

原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)简介：天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。

原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶。

果胶(Pectin)又称多聚半乳糖醛酸，是由D-半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键连接形成的直链状聚合物，本质上是一种线形的多糖聚合物，含有数百个脱水半乳糖醛酸残基。

原果胶是一种非水溶性的物质，在未成熟的果实或植物组织中果胶物质大多与纤维素结合以原果胶的形式存在，原果胶能使果实或其他植物组织坚硬、变脆。

Leagene 原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)检测原理是果胶物质水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比，该化合物颜色在反应内呈色最深，当反应液颜色最深时在波长处测定吸光度，通过与标准曲线比较，计算出样品中原果胶或可溶性果胶含量。

该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中原果胶含量，亦可用于定量检测植物组织或果实中可溶性果胶含量，进而计算出总果胶含量(为原果胶含量与可溶性果胶含量之和)。

该25T试剂盒可以检测25-30左右个样本。

该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：编号名称TC212325TStorage试剂(A): 果胶标准(1mg/ml) 1ml 4℃避光试剂(B): SP Lysis buffer 2×500ml RT试剂(C): PP Lysis buffer 100ml RT使用说明书1份1、蒸馏水2、浓硫酸3、实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织4、研钵或匀浆器5、试管6、离心机7、水浴锅8、比色杯9、分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、可溶性及原果胶提取：①取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于研钵或匀浆器。

咔唑比色法测定剑麻果胶含量
丁建东;张雪红;姚先超;黄艳伟;林翠梧
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2010(031)011
【摘要】采用咔唑比色法测定剑麻果胶粉中果胶含量的方法,对其测定条件作了详细的试验,获得了较佳的测定条件:浓硫酸用量为6.0mL,水解温度为70℃,水解时间为20min,0.15%咔唑无水乙醇溶液用量为0.5 mL,在室温下显色,显色时间为
30min.用于实际样品的测定时,结果较为满意.
【总页数】3页(P138-140)
【作者】丁建东;张雪红;姚先超;黄艳伟;林翠梧
【作者单位】广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;广西师范学院,化学与生命科学学院,广西,南宁,530001;广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004;广西大学化学化工学院,广西,南宁,530004
【正文语种】中文
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比色法测定可溶性糖、果胶、半纤维素、纤维素含量标准液配制1、1.00mg/mL葡萄糖标准液：秤取干燥至恒重的葡萄糖100mg，加水溶解定容至100mL，混匀。

2、1.00mg/mL木糖标准液：秤取干燥至恒重的木糖100mg，加水溶解定容至100mL，混匀。

3、1.00mg/mL半乳糖醛酸标准液：秤取干燥至恒重的半乳糖醛酸100mg，加水溶解定容至100mL，混匀。

试剂配制：1、0.5M 磷酸buffer（pH7）：7.01g K2HPO4·3H2O、2.61g KH2PO4溶于100mL 蒸馏水。

2、0.2% 蒽酮试剂：0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸。

3、A试剂：6g 苔黑酚（6.87g C7H8O2·H2O）溶于100mL 无水乙醇。

B试剂：0.1g FeCl3（0.17g FeCl3·6H2O）溶于100mL 37% 浓盐酸。

4、四硼酸钠/硫酸溶液：0.5g Na2B4O7溶（0.95g Na2B4O7·10H2O）于100mL 浓硫酸。

5、1.5mg/mL 间羟基联苯溶液：0.15g 间羟基联苯（3-phenylphenol）溶于100mL 5mg/mL NaOH。

6、氯仿-甲醇（1：1，v/v）7、DMSO-H2O（9：1，v/v）操作步骤样品65℃烘干3天，打碎。

1、磷酸buffer 提取可溶性糖(研磨)（1）将已过40目筛的样品在50°C 条件下烘干。

混匀，平行称取6 份0.1000g（左右）干重样品于15 ml离心管中。

（2）加入 5 ml pH=7的0.5M磷酸buffer，50°C 摇2 h, 2100 g 离心10 min,。

（3）收集上清于50 ml离心管中。

沉淀再用 5 ml buffer洗2 次，5 ml蒸馏水洗2 次。

收集所有上清于50 ml离心管中，定容测定C5、C6。

2. 氯仿-甲醇（Chloroform-methanol）提取脂类（1）于沉淀中加入5 ml氯仿-甲醇（1：1 v/v）, 用封口膜密封，在摇床中40°C（150转）振荡1 h,。

作者单位:哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生检验学教研室,哈尔滨150001作者简介:李春明(1977-),男,吉林九台人,硕士在读,主要从事膳食纤维营养学研究。

文章编号:1001-0580(2004)04-0490-01 中图分类号:R115 文献标识码:B检验技术咔唑比色法测定玉米种皮中的果胶含量李春明,管春梅果胶是半乳糖醛酸的聚合多糖,对其测定的方法主要有重量法、容量法和比色法 1 ,其中比色法是通过测定样品中半乳糖醛酸的含量,再换算成果胶的含量。

本实验对比色法进行优化,确定最佳实验条件。

1 仪器与试剂1 1 仪器 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);电动离心机;恒温水浴箱。

试剂半乳糖醛酸标准溶液:称取半乳糖醛酸(1个结晶水,理论分子量212 16)54 64mg ,用重蒸馏水溶解,加入0 25ml 1mol/L N aOH 并定容至50ml,其浓度为1mg/ml,用时逐级稀释;咔唑(试剂级):0 1%咔唑乙醇溶液,将0 1g 经升华提纯的咔唑溶解于精制乙醇中,并稀释至100ml;5% -荼酚溶液:1 5g -萘酚用精制乙醇溶解并定容至30ml 。

2 方法2 1 条件实验 取1ml 60 g/ml 半乳糖醛酸标准溶液于10ml 比色管中,加入0 5ml 0 1%咔唑乙醇溶液及6ml 浓硫酸,混匀,立刻放入85 水浴5min,再冷却15min,于525nm 处测量A 值。

2 2 样品处理 10g 玉米种皮原料与50ml pH =2的HCl 溶液混合,在87~90 水浴锅中水浴1h,真空抽滤,得滤液44ml,用氨水调至pH =5,取3ml 滤液于比色管中,加入75 的95%乙醇溶液5ml,在75~85 水浴中加热12min,充分搅拌,移入10ml 离心管中,再加入95%乙醇定容至10ml,离心15min,弃去上清波,用63%乙醇将离心管中的沉淀洗入比色管中,定容至10ml,在85 水浴中加热10min,移入离心管,离心15min,弃去上清液,用63%乙醇反复洗涤沉淀、加热、离心,直至上清液穆立虚反应阴性,然后将制备的果胶沉淀用蒸馏水洗入20ml 比色管中,加入1ml 1mol/L 的NaOH 溶液,并用蒸馏水稀释至刻度,混匀,至少放置15min,并不时振荡,过滤后,滤液用于比色测定。

可溶性果胶（WSP）检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号:BC4125规格：100T/48S产品内容：提取液一：80%乙醇200mL，即将160mL无水乙醇和40mL蒸馏水混合，自备。

提取液二：液体50mL×1瓶，4℃保存。

提取液三：液体120mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：浓硫酸25mL×1瓶，自备。

试剂二：液体2.5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体5mL×1支，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸，4℃保存。

临用前加入0.943mL提取液三，配成50μmol/mL 的标准液，4℃保存。

产品简介：果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。

果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。

可溶性果胶在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530nm处有最大吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式低温离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。

操作步骤：一、可溶性果胶的提取：取约0.1g样本，加入1mL提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g，25℃离心10min，弃上清。

沉淀加入1.5mL提取液一和丙酮交替各洗2遍（涡旋振荡2min左右，4000g，25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小时，4000g，25℃离心10min，弃上清，加入2mL提取液三，充分匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清液待测。